Name: preparation, characteristics, toxicity, and efficacy evaluation of the nasal self-assembled nanoemulsion tumor vaccine in vitro and in vivo
Uploaded: 2022-09-28T13:40:00
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इस अध्ययन को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन कार्यक्रम के नंबर 31670938, 32070924, 32000651, नंबर 2014 jcyja0107 और नंबर 2019jcyja-msxmx0159 द्वारा समर्थित किया गया 202090031035 202090031021 था।

पशु प्रयोगों को पशु कल्याण की नैतिक समीक्षा के लिए प्रयोगशाला पशु-दिशानिर्देश (जीबी / टी 35892-2018) के अनुसार आयोजित किया गया था और तीसरे सैन्य चिकित्सा विश्वविद्यालय की प्रयोगशाला पशु कल्याण और नैतिकता सम?...

<ol>
	<li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics+2020:+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries.">Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).</li><li>Mohammed, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficacy+and+effectiveness+of+the+COVID-19+vaccines+in+reducing+infection,+severity,+hospitalization,+and+mortality:+A+systematic+review.">The efficacy and effectiveness of the COVID-19 vaccines in reducing infection, severity, hospitalization, and mortality: A systematic review.</a> Human Vaccines &amp; Immunotherapeutics. 18 (1), 2027160 (2022).</li><li>Tsung, K., Norton, J. 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Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+nasal+omicron+vaccine+booster+elicits+potent+neutralizing+antibody+response+against+emerging+SARS-CoV-2+variants.">A nasal omicron vaccine booster elicits potent neutralizing antibody response against emerging SARS-CoV-2 variants.</a> Emerging Microbes &amp; Infections. 11 (1), 964-967 (2022).</li><li>Chai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+functional+recovery+of+rat+transected+spinal+cord+by+peptide-grafted+PNIPAM+based+hydrogel.">Improved functional recovery of rat transected spinal cord by peptide-grafted PNIPAM based hydrogel.</a> Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 210, 112220 (2022).</li><li>Paiva Dos Santos, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production,+purification+and+characterization+of+an+elastin-like+polypeptide+containing+the+Ile-Lys-Val-Ala-Val+(IKVAV)+peptide+for+tissue+engineering+applications.">Production, purification and characterization of an elastin-like polypeptide containing the Ile-Lys-Val-Ala-Val (IKVAV) peptide for tissue engineering applications.</a> Journal of Biotechnology. 298, 35-44 (2019).</li><li>Okur, A. C., Erkoc, P., Kizilel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+cancer+cells+via+tumor-homing+peptide+CREKA+functional+PEG+nanoparticles.">Targeting cancer cells via tumor-homing peptide CREKA functional PEG nanoparticles.</a> Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 147, 191-200 (2016).</li><li>Makidon, P. 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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranasal+nanoemulsion+vaccine+confers+long-lasting+immunomodulation+and+sustained+unresponsiveness+in+a+murine+model+of+milk+allergy.">Intranasal nanoemulsion vaccine confers long-lasting immunomodulation and sustained unresponsiveness in a murine model of milk allergy.</a> Allergy. 75 (4), 872-881 (2020).</li><li>Ahmed, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+nanoemulsion+vaccine+induces+mucosal+Interleukin-17+responses+and+confers+protection+upon+Mycobacterium+tuberculosis+challenge+in+mice.">A novel nanoemulsion vaccine induces mucosal Interleukin-17 responses and confers protection upon Mycobacterium tuberculosis challenge in mice.</a> Vaccine. 35 (37), 4983-4989 (2017).</li><li>Sun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+systemic+and+mucosal+immunity+against+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus+infection+by+a+novel+nanoemulsion+adjuvant+vaccine.">Induction of systemic and mucosal immunity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus infection by a novel nanoemulsion adjuvant vaccine.</a> International Journal of Nanomedicine. 10, 7275-7290 (2015).</li><li>Chen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-associated-macrophage-membrane-coated+nanoparticles+for+improved+photodynamic+immunotherapy.">Tumor-associated-macrophage-membrane-coated nanoparticles for improved photodynamic immunotherapy.</a> Nano Letters. 21 (13), 5522-5531 (2021).</li><li>Prasanna, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+of+nanoscale+drug+delivery+and+the+future+of+nano-vaccine+development+for+leishmaniasis+-+A+review.">Current status of nanoscale drug delivery and the future of nano-vaccine development for leishmaniasis - A review.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 141, 111920 (2021).</li><li>George, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+defects+on+plate-shaped+silver+nanoparticles+contribute+to+its+hazard+potential+in+a+fish+gill+cell+line+and+zebrafish+embryos.">Surface defects on plate-shaped silver nanoparticles contribute to its hazard potential in a fish gill cell line and zebrafish embryos.</a> ACS Nano. 6 (5), 3745-3759 (2012).</li><li>Jafari Eskandari, M., Gostariani, R., Asadi Asadabad, M., Singh, D., Condurache-Bota, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+Electron+Microscopy+of+Nanomaterials.">Transmission Electron Microscopy of Nanomaterials.</a> Electron Crystallography. , (2020).</li><li>Kontomaris, S. V., Stylianou, A., Malamou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic+force+microscopy+nanoindentation+method+on+collagen+fibrils.">Atomic force microscopy nanoindentation method on collagen fibrils.</a> Materials. 15 (7), 2477 (2022).</li><li>Zielinska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymeric+nanoparticles:+Production,+characterization,+toxicology+and+ecotoxicology.">Polymeric nanoparticles: Production, characterization, toxicology and ecotoxicology.</a> Molecules. 25 (16), 3731 (2020).</li><li>Doncom, K. E. B., Blackman, L. D., Wright, D. B., Gibson, M. I., O'Reilly, R. 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S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+toxicity+assessment+of+nanoparticles.">In vitro and in vivo toxicity assessment of nanoparticles.</a> International Nano Letters. 7 (4), 243-256 (2017).</li><li>Tong, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immunopotentiator,+ophiopogonin+D,+encapsulated+in+a+nanoemulsion+as+a+robust+adjuvant+to+improve+vaccine+efficacy.">An immunopotentiator, ophiopogonin D, encapsulated in a nanoemulsion as a robust adjuvant to improve vaccine efficacy.</a> Acta Biomaterialia. 77, 255-267 (2018).</li><li>Elliott, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confocal+microscopy:+Principles+and+modern+practices.">Confocal microscopy: Principles and modern practices.</a> Current Protocols in Cytometry. 92 (1), 68 (2020).</li><li>Huang, Y., Zou, Y., Lin, L., Zheng, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ginsenoside+Rg1+activates+dendritic+cells+and+acts+as+a+vaccine+adjuvant+inducing+protective+cellular+responses+against+lymphomas.">Ginsenoside Rg1 activates dendritic cells and acts as a vaccine adjuvant inducing protective cellular responses against lymphomas.</a> DNA and Cell Biology. 36 (12), 1168-1177 (2017).</li></ol>

इम्यूनोसाइट झिल्ली के साथ कार्यात्मक नैनोवैक्सीन के रोग-लक्षित चिकित्सा में बहुत फायदे हैं, और साइड इफेक्ट्स को अद्वितीय ट्यूमर ट्रोपिज्म, विशिष्ट लक्ष्यों की पहचान, लंबे समय तक परिसंचरण, बढ़ी हुई इ?...

सबसे महत्वपूर्ण सार्वजनिक स्वास्थ्य नवाचारों में से एक के रूप में, टीकेमानव रोग के वैश्विक बोझ से लड़ने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। उदाहरण के लिए, वर्तमान में, कोविड-19 रोगों के लिए 120 से अधिक उम्मीदवार टीकों का परीक्षण किया जा रहा है, जिनमें से कुछ कोकई देशों में अनुमोदित किया गया है। हाल की रिपोर्टों में कहा गया है कि कैंसर के टीकों ने नैदानिक कैंसर उपचार की प्रगति में प्रभावी ढंग से सुधार किया है क्योंकि वे कैंसर रोगियों की प्रतिरक्षा प्रणालीको शरीर के लिए विदेशी के रूप में एंटीजन को पहचानने के लिए निर्देशित करते हैं। इसके अलावा, ट्यूमर कोशिकाओं के अंदर या बाहर स्थित कई टी सेल एपिटोप्स का उपयोग पेप्टाइड टीकों को डिजाइन करने के लिए किया जा सकता है, जिन्होंने रेडियोथेरेपी और कीमोथेरेपी 4,5 से जुड़े महत्वपूर्ण विषाक्तता की कमी के कारण मेटास्टैटिक कैंसर के उपचार में फायदे दिखाए हैं। 1990 के दशक के मध्य से, ट्यूमर उपचार के लिए प्रीक्लिनिकल और नैदानिक परीक्षण मुख्य रूप से एंटीजन पेप्टाइड टीकों का उपयोग करके आयोजित किए गए हैं, लेकिन कुछ टीकेकैंसर रोगियों पर पर्याप्त चिकित्सीय प्रभाव प्रदर्शित करते हैं। इसके अलावा, पेप्टाइड एपिटोप्स के साथ कैंसर के टीकों में खराब इम्युनोजेनेसिटी और अपर्याप्त वितरण दक्षता होती है, जो बाह्य पेप्टाइड्स के तेजी से क्षरण के कारण हो सकती है जो प्रशासन की साइट से तेजी से फैलती है, जिससेप्रतिरक्षा कोशिकाओं द्वारा अपर्याप्त एंटीजन अपटेक होता है। इसलिए वैक्सीन डिलीवरी तकनीक से इन बाधाओं को दूर करना जरूरी है।
ओवीए 257-264, एमएचसी वर्ग I-बाइंडिंग257-264 एपिटोप को संलयन प्रोटीन के रूप में व्यक्त किया जाता है, एक अक्सर इस्तेमाल किया जाने वाला मॉडल एपिटोप8 है। इसके अलावा, ओवीए257-264 ट्यूमर के खिलाफ अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के लिए महत्वपूर्ण है, जो साइटोटोक्सिक टी लिम्फोसाइट (सीटीएल) प्रतिक्रिया पर निर्भर करता है। यह ट्यूमर में एंटीजन-विशिष्ट सीडी 8 + टी कोशिकाओं द्वारा मध्यस्थ है, जो ओवीए257-264 पेप्टाइड द्वारा प्रेरित होते हैं। यह अपर्याप्त ग्रैनजाइम बी की विशेषता है, जो साइटोटोक्सिक टी कोशिकाओं द्वारा जारी किया जाता है, जिससे लक्ष्य कोशिकाओं8 के एपोप्टोसिस होते हैं। हालांकि, मुक्त ओवीए257-264 पेप्टाइड प्रशासन कम सीटीएल गतिविधि को प्रेरित कर सकता है क्योंकि इन एंटीजन का उत्थान एंटीजन-प्रेजेंटिंग कोशिकाओं (एपीसी) के बजाय निरर्थक कोशिकाओं में होता है। उचित प्रतिरक्षा उत्तेजना की कमी के परिणामस्वरूप सीटीएल गतिविधि5 होती है। इसलिए, प्रभावोत्पादक सीटीएल गतिविधि का प्रेरण काफी प्रगति की मांग करता है।
उपकला कोशिकाओं द्वारा प्रदान की गई बाधा और बलगम के निरंतर स्राव के कारण, वैक्सीन एंटीजन नाक श्लेष्म 9,10 से तेजी से हटा दिए जाते हैं। एक कुशल वैक्सीन वेक्टर विकसित करना जो म्यूकोसल ऊतक से गुजर सकता है, महत्वपूर्ण है क्योंकि एंटीजन-प्रेजेंटिंग कोशिकाएं म्यूकोसल एपिथेलियम9 के नीचे स्थित हैं। टीकों का इंट्रानेजल इंजेक्शन सैद्धांतिक रूप से म्यूकोसलसंक्रमण से लड़ने के लिए म्यूकोसल प्रतिरक्षा को प्रेरित करता है। इसके अलावा, नाक वितरण इसकी सुविधा, आंतों के प्रशासन से बचने और बेहतर रोगी अनुपालन के कारण टीकों के लिए एक प्रभावी और सुरक्षित प्रशासन विधिहै। इसलिए, नोवेल पेप्टाइड एपिटोप नैनोवैक्सीन के लिए नाक वितरण प्रशासन का एक अच्छा साधन है।
सेल-ऊतक और सेल-सेल इंटरैक्शन के एपिटोप्स को संयोजित करने के लिए कई सिंथेटिक बायोमैटेरियल्स तैयार किए गए हैं। कुछ बायोएक्टिव प्रोटीन, जैसे कि इले-लिस-वैल-अला-वैल (आईकेवीएवी), को बायोएक्टिविटीप्रदान करने के लिए हाइड्रोगेल की संरचना के हिस्से के रूप में पेश किया गया है। यह पेप्टाइड संभवतः सेल अटैचमेंट, माइग्रेशन और आउटग्रोथ13 में योगदान देता है और विभिन्न कैंसर सेल प्रकारों के साथ बातचीत करने के लिए इंटीग्रिन α 3 : 1 और α6 : 1 को बांधता है। आईकेवीएवी एक सेल आसंजन पेप्टाइड है जो लैमिनिन बेसमेंट झिल्ली प्रोटीन α1 श्रृंखला से प्राप्त होता है जिसका उपयोग मूल रूप से तंत्रिका माइक्रोएन्वायरमेंट को मॉडल करने और न्यूरोनल भेदभाव14 का कारण बनने के लिए किया जाता था। इसलिए, इस नोवेल वैक्सीन के लिए एक कुशल वितरण वाहन खोजना रोग नियंत्रण के लिए महत्वपूर्ण है।
हाल ही में रिपोर्ट किए गए इमल्शन सिस्टम, जैसे कि W805EC और MF59, को निष्क्रिय इन्फ्लूएंजा वैक्सीन या पुनः संयोजक हेपेटाइटिस बी सतह एंटीजन के नाक गुहा वितरण के लिए भी जोड़ा गया है और म्यूकोसल और प्रणालीगत प्रतिरक्षादोनों को ट्रिगर करने के लिए चित्रित किया गया है। नैनोइमल्शन (एनई) में पार्टिकुलेट म्यूकोसलडिलीवरी सिस्टम की तुलना में प्रभावी सहायक दवाओं के साथ आसान प्रशासन और सुविधाजनक सह-गठन के फायदे हैं। नैनोइमल्शन टीकों को पारंपरिक डिसेन्सिटाइजेशन से अलग निरंतर तरीके से एलर्जी फेनोटाइप को बदलने की सूचना दी गई है, जिसके परिणामस्वरूप दीर्घकालिक दमनकारी प्रभावहोते हैं। दूसरों ने बताया कि एमटीबी-विशिष्ट इम्यूनोडोमिनेंट एंटीजन के साथ संयुक्त नैनोइमल्शन शक्तिशाली म्यूकोसल सेल प्रतिक्रियाओं को प्रेरित कर सकते हैं औरमहत्वपूर्ण सुरक्षा प्रदान कर सकते हैं। इसलिए, सिंथेटिक पेप्टाइड आईकेवीएवी-ओवीए 257-264 (आई-ओवीए, ओवीए257-264 से बंधे आईकेवीएवी से युक्त पेप्टाइड) के साथ एक नया इंट्रानेजलस्व-इकट्ठे नैनोवैक्सीन डिजाइन किया गया था। इस नोवेल नैनोवैक्सीन का व्यवस्थित रूप से आकलन करना महत्वपूर्ण है।
इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य नैनोवैक्सीन की भौतिक रासायनिक विशेषताओं, विषाक्तता और स्थिरता का व्यवस्थित रूप से मूल्यांकन करना है, यह पता लगाना है कि क्या एंटीजन अपटेक और सुरक्षात्मक और चिकित्सीय प्रभाव तकनीकी साधनों का उपयोग करके बढ़ाया जाता है, और मुख्य प्रयोगात्मक सामग्री पर विस्तृत है। इस अध्ययन में, हमने भौतिक रासायनिक विशेषताओं और स्थिरता का अध्ययन करने के लिए प्रोटोकॉल की एक श्रृंखला स्थापित की, सीसीके -8 द्वारा आई-ओवीए एनई से बीईएएस -2 बी कोशिकाओं की विषाक्तता के परिमाण का निर्धारण किया, और कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके वैक्सीन के लिए बीईएएस -2 बी कोशिकाओं की एंटीजन-प्रस्तुत करने की क्षमता का निरीक्षण किया, विवो और इन विट्रो में इस नए नैनोवैक्सीन के रिलीज प्रोफाइल का मूल्यांकन किया।और ई.जी7-ओवीए ट्यूमर-असर माउस मॉडल का उपयोग करके इस वैक्सीन के सुरक्षात्मक और चिकित्सीय प्रभाव का पता लगाएं।

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	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well plates</td>
			<td>Corning Incorporated, USA</td>
			<td>CLS3922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Rad 6.0 microplate reader</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories Incorporated Limited Co., CA, USA</td>
			<td>&#160;Bio-Rad 6.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CCK-8 kits</td>
			<td>Dojindo, Japan</td>
			<td>CK04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5810 R</td>
			<td>Eppendorf, Germany&#160;</td>
			<td>5811000398</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, USA</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Hyclone (Life Technology, USA)</td>
			<td>SH30088.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-labeled I-OVA</td>
			<td>Shanghai Botai 
			Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HF 90/240 Incubator</td>
			<td>Heal Force, Switzerland</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC&#160;</td>
			<td>Shanghai Botai Biotechology Co., Ltd.</td>
			<td>E2695</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Microscope</td>
			<td>Nikon,Japan</td>
			<td>DSZ5000X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IPC-208</td>
			<td>Chong Qing University, China</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS system&#160;</td>
			<td>Caliper Life Science Limited Company</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JEM-1230 TEM</td>
			<td>JEOL Limited Company of Japan</td>
			<td>1230 TEM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malvern NANO ZS</td>
			<td>Malvern Instruments Ltd., UK</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MPLA</td>
			<td>&#160;Invivogen 
			Lit. Co.</td>
			<td>tlrl-mpla</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neomycin Sulfate Ointment</td>
			<td>Shanghai CP General Pharmaceutical Co. , Ltd.</td>
			<td>H31022262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OVA257&#8211;264</td>
			<td>Shanghai Botai 
			Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 medium</td>
			<td>Hyclone (Life Technology, USA)</td>
			<td>SH30809.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synthetic peptide (I-OVA) conjugation of IKVAV-PA</td>
			<td>Shanghai Botai 
			Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM800 laser scanning confocal fluorescence microscope</td>
			<td>Zeiss, Germany</td>
			<td>Zeiss LSM800</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation, characteristics, toxicity, and efficacy evaluation of the nasal self-assembled nanoemulsion tumor vaccine in vitro and in vivo

एपिटोप पेप्टाइड्स ने अपनी सुरक्षा, उच्च विशिष्टता और सुविधाजनक उत्पादन के कारण ट्यूमर टीकों के क्षेत्र में व्यापक ध्यान आकर्षित किया है; विशेष रूप से, कुछ एमएचसी आई-प्रतिबंधित एपिटोप ट्यूमर कोशिकाओं को साफ करने के लिए प्रभावी साइटोटॉक्सिक टी लिम्फोसाइट गतिविधि को प्रेरित कर सकते हैं। इसके अतिरिक्त, नाक प्रशासन अपनी सुविधा और बेहतर रोगी अनुपालन के कारण ट्यूमर टीकों के लिए एक प्रभावी और सुरक्षित वितरण तकनीक है। हालांकि, एपिटोप पेप्टाइड्स उनकी खराब इम्युनोजेनेसिटी और प्रसव दक्षता की कमी के कारण नाक वितरण के लिए अनुपयुक्त हैं। नैनोइमल्शन (एनई) थर्मोडायनामिक रूप से स्थिर प्रणालियां हैं जिन्हें एंटीजन के साथ लोड किया जा सकता है और सीधे नाक की श्लैष्मिक सतह पर पहुंचाया जा सकता है। Ile-Lys-Val-Ala-Val (IKVAV) लैमिनिन का कोर पेंटापेप्टाइड है, जो मानव श्वसन उपकला कोशिकाओं द्वारा व्यक्त एक इंटीग्रिन-बाइंडिंग पेप्टाइड है। इस अध्ययन में, सिंथेटिक पेप्टाइड आईकेवीएवी-ओवीए257-264 (आई-ओवीए) युक्त एक इंट्रानेसल स्व-इकट्ठे एपिटोप पेप्टाइड एनई ट्यूमर वैक्सीन को कम ऊर्जा पायसीकरण विधि द्वारा तैयार किया गया था। आईकेवीएवी और ओवीए257-264 का संयोजन नाक म्यूकोसल उपकला कोशिकाओं द्वारा एंटीजन अपटेक को बढ़ा सकता है। यहां, हम ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (टीईएम), परमाणु बल माइक्रोस्कोपी (एएफएम), और गतिशील प्रकाश प्रकीर्णन (डीएलएस) द्वारा भौतिक रासायनिक विशेषताओं का अध्ययन करने के लिए एक प्रोटोकॉल स्थापित करते हैं; म्यूसिन प्रोटीन की उपस्थिति में स्थिरता; बीईएएस -2 बी कोशिकाओं और सी 57बीएल / 6 चूहों के नाक और फेफड़ों के ऊतकों की कोशिका व्यवहार्यता की जांच करके विषाक्तता; कॉन्फोकल लेजर स्कैनिंग माइक्रोस्कोपी (सीएलएसएम) द्वारा सेलुलर अपटेक; विवो में छोटे जानवरों की इमेजिंग द्वारा प्रोफाइल जारी करें; और ई.जी.7 ट्यूमर-असर मॉडल का उपयोग करके वैक्सीन का सुरक्षात्मक और चिकित्सीय प्रभाव। हम उम्मीद करते हैं कि प्रोटोकॉल नोवेल टी सेल एपिटोप पेप्टाइड म्यूकोसल टीकों के भविष्य के विकास के लिए तकनीकी और सैद्धांतिक सुराग प्रदान करेगा।

प्रोटोकॉल के अनुसार, हमने नाक ट्यूमर नैनोवैक्सीन डिलीवरी की तैयारी और इन विट्रो और विवो प्रयोगात्मक मूल्यांकन पूरा किया। टीईएम, एएफएम और डीएलएस सतह जेटा क्षमता की बुनियादी विशेषताओं और नैनोव?...

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Preparation, Characteristics, Toxicity, and Efficacy Evaluation of the Nasal Self-Assembled Nanoemulsion Tumor Vaccine In Vitro and In Vivo

यहां, हम विट्रो और विवो में नाक स्व-इकट्ठे नैनोइमल्शन ट्यूमर वैक्सीन की तैयारी और मूल्यांकन के लिए विस्तृत तरीके प्रस्तुत करते हैं।

विट्रो और विवो में नाक स्व-इकट्ठे नैनोइमल्शन ट्यूमर वैक्सीन की तैयारी, विशेषताएं, विषाक्तता और प्रभावकारिता मूल्यांकन

Epitope peptides have attracted widespread attention in the field of tumor vaccines because of their safety, high specificity, and convenient production; ...

नोवेल नैनोइमल्शन वैक्सीन के रोग रणनीति चिकित्सा में बहुत फायदे हैं। इन सेट प्रभावों को अद्वितीय ट्यूमर चॉपिज्म, विशिष्ट रणनीति की पहचान और कम प्रणालीगत विषाक्तता जैसे गुणों से कम किया जाता है। हम उम्मीद करते हैं कि प्रोटोकॉल नोवेल टी-सेल एकटाइप पेप्टाइड म्यूकोसल टीकों के भविष्य के विकास के लिए तकनीकी और सैद्धांतिक सुराग प्रदान करेगा।डीएमएसओ के 100 माइक्रोलीटर के साथ मोनोफॉस्फोरोल लिपिड ए के एक मिलीग्राम मिश्रण से शुरू करें। पांच मिनट के लिए भंवर और कमरे के तापमान पर चार घंटे के लिए इसे घुलने के लिए छोड़ दें। मात्रात्मक रूप से ट्वीन 80 और आई-ओवीए जोड़ें।घटकों को मिलाएं और स्क्वालेन जोड़ें। इसके बाद, तैयार मिश्रण में 100 माइक्रोलीटर एमपीएलए समाधान जोड़ें। नैनो इमल्शन वैक्सीन तैयार करने के लिए, कुल मात्रा के लगभग 70% पर पानी की बूंदों में मिश्रित घोल जोड़ें और पारदर्शी और आसानी से बहने वाले मिश्रण को प्राप्त करने के लिए धीरे से हिलाएं।इन विट्रो परख के लिए, बीईएएस 2 बी उपकला कोशिकाओं को पुनर्जीवित करने के साथ शुरू करें। पानी के स्नान को चालू करें और तापमान को 37 डिग्री सेल्सियस पर समायोजित करें। जमे हुए सेल शीशियों को पानी के स्नान में जल्दी से पिघलाएं, 37 डिग्री सेल्सियस पर टेम्पर्ड करें।पिघलने के बाद, जल्दी से कोशिकाओं को 15 मिलीलीटर बाँझ सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में पिपेट करें, और पूर्ण विकास माध्यम के दो मिलीलीटर जोड़ें। ट्यूब को पांच मिनट के लिए 129 ग्राम पर सेंट्रीफ्यूज करें। सुपिनेटेंट को हटा दें और पूर्ण विकास माध्यम के दो मिलीलीटर में कोशिकाओं को फिर से निलंबित करें।कोशिकाओं को एक बार फिर से सेंट्रीफ्यूज करने के बाद, सुपिनेटेंट को हटा दें और कोशिकाओं को फिर से निलंबित करने के लिए छह मिलीलीटर पूर्ण विकास माध्यम जोड़ें। फिर कोशिकाओं को टी 25 कल्चर फ्लास्क में स्थानांतरित करें और 5% कार्बन डाइऑक्साइड इनक्यूबेटर में 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें। एक बार जब सेल घनत्व 80% से 90% तक पहुंच जाता है, तो कल्चर माध्यम को त्याग दें और कोशिकाओं को दो मिलीलीटर पीबीएस के साथ दो बार धोएं।एक से दो मिनट के लिए कोशिकाओं को पचाने के लिए 0.25% ट्रिपिन का एक मिलीलीटर जोड़ें। जब कोशिकाओं की गोलाई देखी जाती है, तो ट्रिप्सिन को बेअसर करने के लिए तुरंत पूर्ण विकास माध्यम के चार मिलीलीटर जोड़ें। 15 मिलीलीटर बाँझ सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में नमूने मिलाएं और एस्पिरेट करें।पांच मिनट के लिए 129 ग्राम पर नमूने सेंट्रीफ्यूज करें। सुपिनेटेंट को निकालें और आरपीएमआई 1640 पूर्ण माध्यम के एक मिलीलीटर में कोशिकाओं को फिर से निलंबित करें। सेल गिनती के लिए सेल निलंबन के 20 माइक्रोलीटर का उपयोग करें और कोशिकाओं को प्रति मिलीलीटर 10 से पांचवें कोशिकाओं तक एक गुना पतला करें।फिर आरपीएमआई 1640 पूर्ण माध्यम के 100 माइक्रोलीटर में 96 वेल प्लेटों में एक गुना 10 से चौथी कोशिकाओं के घनत्व पर बीईएएस 2 बी कोशिकाओं को प्लेट करें, और 24 घंटे के लिए प्लेटों को प्रीक्यूबेट करें जैसा कि पहले दिखाया गया था। इनक्यूबेशन के अंत में, सुपिनेटेंट को छोड़ दें और 96 वेल प्लेट के प्रत्येक कुएं में आरपीएमआई 1640 के 100 माइक्रोलीटर जोड़ें। आई-ओवीए नैनो इमल्शन, आई-ओवीए को बीएनई के साथ मिश्रित और आई-ओवीए को नियंत्रण के रूप में बीएनई के साथ विभिन्न अंतिम सांद्रता में पूर्ण विकास माध्यम के साथ 100 माइक्रोलीटर जोड़ें और 37 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे के लिए इनक्यूबेट करें।एक बार इनक्यूबेशन पूरा हो जाने के बाद, माध्यम को हटा दें, और प्लेट को एक अंधेरी जगह पर स्थानांतरित करें। प्लेट के प्रत्येक कुएं में 90 माइक्रोलीटर पूर्ण विकास माध्यम और 10 माइक्रोलीटर सीसीके 8 समाधान जोड़ें। प्लेट को 37 डिग्री सेल्सियस और 5% कार्बन डाइऑक्साइड पर दो घंटे के लिए इनक्यूबेट करें।प्लेट रीडर नामक एंजाइम का उपयोग करके 450 नैनोमीटर पर प्रत्येक कुएं के अवशोषण को मापें। तीन दिनों के लिए I-OVA, I-OVA PLUS BNE, और I-OVA NE के साथ चूहों के नाक टीकाकरण करने के लिए 10 माइक्रोलीटर पिपेट युक्तियों का उपयोग करें। प्रयोगात्मक नियंत्रण के रूप में BNE और PBA का उपयोग करें।बाद में, कैंची के साथ नाक के ऊतकों के लगभग तीन मिलीमीटर मोटे नमूने काटें और उन्हें 4% पैराफॉर्मलडिहाइड में रखें। फेफड़ों के ऊतकों को हटा दें और नाक और पूरे फेफड़ों के ऊतकों को 24 घंटे के लिए 4% पैराफॉर्मलडिहाइड में ठीक करें। टीईएम और एएफएम का उपयोग सतह जीटा क्षमता की बुनियादी विशेषताओं और नैनो वैक्सीन के कण आकार के आकलन के लिए किया जाता है।म्यूसिन स्थिरता विश्लेषण में आई-ओवीए एनई के कण आकार, पॉलीडिस्पर्सिटी इंडेक्स, जेटा पोटेंशियल और वैद्युतकणसंचलन गतिशीलता दिखाई गई है। 24 घंटे के लिए आई-ओवीए, बीएनई + आई-ओवीए और आई-ओवीए एनई के विभिन्न पेप्टाइड सांद्रता के संपर्क में आने वाली संस्कृतियों में बीईएएस 2 बी कोशिकाओं की सापेक्ष व्यवहार्यता 80% से अधिक है। आई-ओवीए एन समूह में कोई स्पष्ट म्यूकोसल विषाक्तता, ऊतक क्षति, रक्तस्राव या भड़काऊ सेल घुसपैठ नहीं थी।उपकला बीईएएस 2 बी कोशिकाओं ने अपने पानी के घोल की तुलना में आई-ओवीए एनई लेबल वाले अधिक एफआईटीसी पर कब्जा कर लिया। आईवी-आईएस प्रणाली का उपयोग करके इन विट्रो में आई-ओवीए एनई के निरंतर रिलीज प्रभाव का विश्लेषण किया गया था। आई-ओवीए के जलीय घोल की तुलना में आई-ओवीए एनई वैक्सीन का निरंतर रिलीज प्रभाव था।आई-ओवीए एनई समूह में, प्रतिशत जीवित रहने का समय अन्य समूहों की तुलना में अधिक है, और ट्यूमर की मात्रा काफी कम थी, यह सुझाव देते हुए कि इसमें अन्य समूहों की तुलना में बेहतर निवारक सुरक्षा प्रभाव है। चिकित्सीय मॉडल में, विभिन्न समूहों के बीच औसत जीवित रहने का समय काफी भिन्न था। आई-ओवीए एनई समूह की ट्यूमर की मात्रा आई-ओवीए समूह की तुलना में काफी कम थी।इस प्रक्रिया में मिश्रण को समान रूप से हिलाना महत्वपूर्ण है। अन्यथा यह नैनोवैक्सीन की दक्षता को कम कर देगा।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Preparation, Characteristics, Toxicity, and Efficacy Evaluation of the Nasal Self-Assembled Nanoemulsion Tumor Vaccine In Vitro and In Vivo

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

मानव टी लिम्फोसाइट अलगाव, और प्रवासन की संस्कृति विश्लेषण इन विट्रो में</em

The migration of T lymphocytes involves the adhesive interaction of cell surface integrins with ligands expressed on other cells or with extracellular ...

Quantitative Analyses of all Influenza Type A Viral Hemagglutinins and Neuraminidases using Universal Antibodies in Simple Slot Blot Assays

सभी इन्फ्लुएंजा के मात्रात्मक विश्लेषण सरल स्लॉट ब्लाट Assays में एक वायरल Hemagglutinins और यूनिवर्सल एंटीबॉडी का उपयोग कर Neuraminidases प्रकार

Hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) are two surface proteins of influenza viruses which are known to play important roles in the viral life cycle ...

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

कृत्रिम थूक मध्यम का प्रयोग खिलाफ टेस्ट एंटीबायोटिक प्रभावकारिता<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; सिस्टिक फाइब्रोसिस फेफड़े अधिक प्रासंगिक शर्तों में

There  is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial  susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from  cystic ...

Generation of Recombinant Arenavirus for Vaccine Development in FDA-Approved Vero Cells

एफडीए को मंजूरी दी वेरो कोशिकाओं में टीके के विकास के लिए संयोजक arenavirus की पीढ़ी

The development and implementation of arenavirus reverse genetics represents a significant breakthrough in the arenavirus field  4. The use of cell-based ...

A Restriction Enzyme Based Cloning Method to Assess the In vitro Replication Capacity of HIV-1 Subtype C Gag-MJ4 Chimeric Viruses

A Restriction Enzyme Based Cloning Method to Assess the In vitro Replication Capacity of HIV-1 Subtype C Gag-MJ4 Chimeric Viruses

एक प्रतिबंध एंजाइम आधारित क्लोनिंग विधि का आकलन करने के लिए<em&gt; इन विट्रो</em&gt; एचआईवी -1 उपप्रकार सी चुप-MJ4 काइमेरिक वायरस की प्रतिकृति क्षमता

The protective effect of many HLA class I alleles on HIV-1 pathogenesis and disease progression is, in part, attributed to their ability to target ...

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

वेस्ट नील वायरस उत्परिवर्ती तनाव संक्रमण को Myd88 की मध्यस्थता सेलुलर प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के इन विट्रो विश्लेषण में

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in ...

Evaluation of the Efficacy And Toxicity of RNAs Targeting HIV-1 Production for Use in Gene or Drug Therapy

जीन या ड्रग थेरेपी में उपयोग के लिए लक्ष्य निर्धारण एचआईवी -1 उत्पादन प्रभावकारिता और आरएनए की विषाक्तता का मूल्यांकन

Small RNA therapies targeting post-integration steps in the HIV-1 replication cycle are among the top candidates for gene therapy and have the potential ...

Quantifying Human Monocyte Chemotaxis In Vitro and Murine Lymphocyte Trafficking In Vivo

Quantifying Human Monocyte Chemotaxis In Vitro and Murine Lymphocyte Trafficking In Vivo

बढ़ाता मानव Monocyte Chemotaxis इन विट्रो और Murine लिम्फोसाइट ्े में Vivo

Chemotaxis is migration along a specific chemical gradient1. Chemokines are chemotactic cytokines that promote cellular trafficking with anatomic and ...

Evaluation of Host-Pathogen Responses and Vaccine Efficacy in Mice

चूहों में मेजबान-रोगज़नक़ प्रतिक्रियाओं और वैक्सीन प्रभावकारिता का मूल्यांकन

Vaccines are a 20th century medical marvel. They have dramatically reduced the morbidity and mortality caused by infectious diseases and contributed to a ...

In Vitro ELISA Test to Evaluate Rabies Vaccine Potency

रेबीज वैक्सीन शक्ति का मूल्यांकन करने के लिए विट्रो एलिसा टेस्ट में

The growing global concern for the animal welfare is encouraging manufacturers and the National Control Laboratories (OMCLs) to follow the 3Rs strategy ...