Name: preparation, characteristics, toxicity, and efficacy evaluation of the nasal self-assembled nanoemulsion tumor vaccine in vitro and in vivo
Uploaded: 2022-09-28T13:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation, Characteristics, Toxicity, and Efficacy Evaluation of the Nasal Self-Assembled Nanoemulsion Tumor Vaccine In Vitro and In Vivo at JoVE.com

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Programı No. 31670938, 32070924, 32000651, Chongqing Doğa Bilimleri Vakfı Proje Programı'nın No. 2014jcyjA0107 ve No. 2019jcyjA-msxmx0159, Ordu Tıp Üniversitesi Özel projelerinin No. 2020XBK24 ve No. 2020XBK26 ve üniversite öğrencileri için Ulusal İnovasyon ve Girişimcilik Programı'nın No. 202090031021 ve No. 202090031035 tarafından desteklenmiştir.

Hayvan deneyleri, Laboratuvar Hayvanı - Hayvan refahının etik incelemesi için kılavuz (GB / T 35892-2018) uyarınca yürütülmüş ve Üçüncü Askeri Tıp Üniversitesi Laboratuvar Hayvanları Refahı ve Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır. Fareler, 100 mg / kg% 1 sodyum pentobarbital intraperitoneal enjeksiyonu ile ötenazi yapıldı.
1. I-OVA NE'nin hazırlanması
<ol><li>1 mg monofosforil lipid A'yı (MPLA) 100 μL DMSO ile karıştırın, 5 dakika boyunca...

<ol>
	<li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics+2020:+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries.">Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).</li><li>Mohammed, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficacy+and+effectiveness+of+the+COVID-19+vaccines+in+reducing+infection,+severity,+hospitalization,+and+mortality:+A+systematic+review.">The efficacy and effectiveness of the COVID-19 vaccines in reducing infection, severity, hospitalization, and mortality: A systematic review.</a> Human Vaccines &amp; Immunotherapeutics. 18 (1), 2027160 (2022).</li><li>Tsung, K., Norton, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+vaccine,+immunological+memory+and+cancer+cure.">In situ vaccine, immunological memory and cancer cure.</a> Human Vaccines &amp; Immunotherapeutics. 12 (1), 117-119 (2016).</li><li>Abd-Aziz, N., Poh, C. L., Ding, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+peptide-based+vaccines+for+cancer.">Development of peptide-based vaccines for cancer.</a> Journal of Oncology. 2022, 9749363 (2022).</li><li>Mochizuki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+antigenic+peptides+complexed+with+beta-glucan+induces+potent+cytotoxic+T-lymphocyte+activity+in+combination+with+CpG-ODNs.">Immunization with antigenic peptides complexed with beta-glucan induces potent cytotoxic T-lymphocyte activity in combination with CpG-ODNs.</a> Journal of Controlled Release. 220, 495-502 (2015).</li><li>Kalita, P., Tripathi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodological+advances+in+the+design+of+peptide-based+vaccines.">Methodological advances in the design of peptide-based vaccines.</a> Drug Discovery Today. 27 (5), 1367-1380 (2022).</li><li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+self-assembled+epitope+peptide+nanoemulsion+vaccine+targeting+nasal+mucosal+epithelial+cell+for+reinvigorating+CD8(+)+T+cell+immune+activity+and+inhibiting+tumor+progression.">A novel self-assembled epitope peptide nanoemulsion vaccine targeting nasal mucosal epithelial cell for reinvigorating CD8(+) T cell immune activity and inhibiting tumor progression.</a> International Journal of Biological Macromolecules. 183, 1891-1902 (2021).</li><li>Ren, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=OVA-specific+CD8++T+cells+do+not+express+granzyme+B+during+anterior+chamber+associated+immune+deviation.">OVA-specific CD8+ T cells do not express granzyme B during anterior chamber associated immune deviation.</a> Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 244 (10), 1315-1321 (2006).</li><li>Suzuki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+hyaluronic+acid-coated+polymeric+micelles+for+nasal+vaccine+delivery.">Preparation of hyaluronic acid-coated polymeric micelles for nasal vaccine delivery.</a> Biomaterials Science. 10 (8), 1920-1928 (2022).</li><li>Georas, S. N., Rezaee, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+barrier+function:+at+the+front+line+of+asthma+immunology+and+allergic+airway+inflammation.">Epithelial barrier function: at the front line of asthma immunology and allergic airway inflammation.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 134 (3), 509-520 (2014).</li><li>Lam, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+nasal+omicron+vaccine+booster+elicits+potent+neutralizing+antibody+response+against+emerging+SARS-CoV-2+variants.">A nasal omicron vaccine booster elicits potent neutralizing antibody response against emerging SARS-CoV-2 variants.</a> Emerging Microbes &amp; Infections. 11 (1), 964-967 (2022).</li><li>Chai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+functional+recovery+of+rat+transected+spinal+cord+by+peptide-grafted+PNIPAM+based+hydrogel.">Improved functional recovery of rat transected spinal cord by peptide-grafted PNIPAM based hydrogel.</a> Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 210, 112220 (2022).</li><li>Paiva Dos Santos, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production,+purification+and+characterization+of+an+elastin-like+polypeptide+containing+the+Ile-Lys-Val-Ala-Val+(IKVAV)+peptide+for+tissue+engineering+applications.">Production, purification and characterization of an elastin-like polypeptide containing the Ile-Lys-Val-Ala-Val (IKVAV) peptide for tissue engineering applications.</a> Journal of Biotechnology. 298, 35-44 (2019).</li><li>Okur, A. C., Erkoc, P., Kizilel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+cancer+cells+via+tumor-homing+peptide+CREKA+functional+PEG+nanoparticles.">Targeting cancer cells via tumor-homing peptide CREKA functional PEG nanoparticles.</a> Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 147, 191-200 (2016).</li><li>Makidon, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-clinical+evaluation+of+a+novel+nanoemulsion-based+hepatitis+B+mucosal+vaccine.">Pre-clinical evaluation of a novel nanoemulsion-based hepatitis B mucosal vaccine.</a> PLoS One. 3 (8), 2954 (2008).</li><li>Lin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oil-in-ionic+liquid+nanoemulsion-based+intranasal+delivery+system+for+influenza+split-virus+vaccine.">Oil-in-ionic liquid nanoemulsion-based intranasal delivery system for influenza split-virus vaccine.</a> Journal of Controlled Release. 346, 380-391 (2022).</li><li>O'Konek, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranasal+nanoemulsion+vaccine+confers+long-lasting+immunomodulation+and+sustained+unresponsiveness+in+a+murine+model+of+milk+allergy.">Intranasal nanoemulsion vaccine confers long-lasting immunomodulation and sustained unresponsiveness in a murine model of milk allergy.</a> Allergy. 75 (4), 872-881 (2020).</li><li>Ahmed, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+nanoemulsion+vaccine+induces+mucosal+Interleukin-17+responses+and+confers+protection+upon+Mycobacterium+tuberculosis+challenge+in+mice.">A novel nanoemulsion vaccine induces mucosal Interleukin-17 responses and confers protection upon Mycobacterium tuberculosis challenge in mice.</a> Vaccine. 35 (37), 4983-4989 (2017).</li><li>Sun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+systemic+and+mucosal+immunity+against+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus+infection+by+a+novel+nanoemulsion+adjuvant+vaccine.">Induction of systemic and mucosal immunity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus infection by a novel nanoemulsion adjuvant vaccine.</a> International Journal of Nanomedicine. 10, 7275-7290 (2015).</li><li>Chen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-associated-macrophage-membrane-coated+nanoparticles+for+improved+photodynamic+immunotherapy.">Tumor-associated-macrophage-membrane-coated nanoparticles for improved photodynamic immunotherapy.</a> Nano Letters. 21 (13), 5522-5531 (2021).</li><li>Prasanna, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+of+nanoscale+drug+delivery+and+the+future+of+nano-vaccine+development+for+leishmaniasis+-+A+review.">Current status of nanoscale drug delivery and the future of nano-vaccine development for leishmaniasis - A review.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 141, 111920 (2021).</li><li>George, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+defects+on+plate-shaped+silver+nanoparticles+contribute+to+its+hazard+potential+in+a+fish+gill+cell+line+and+zebrafish+embryos.">Surface defects on plate-shaped silver nanoparticles contribute to its hazard potential in a fish gill cell line and zebrafish embryos.</a> ACS Nano. 6 (5), 3745-3759 (2012).</li><li>Jafari Eskandari, M., Gostariani, R., Asadi Asadabad, M., Singh, D., Condurache-Bota, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+Electron+Microscopy+of+Nanomaterials.">Transmission Electron Microscopy of Nanomaterials.</a> Electron Crystallography. , (2020).</li><li>Kontomaris, S. V., Stylianou, A., Malamou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic+force+microscopy+nanoindentation+method+on+collagen+fibrils.">Atomic force microscopy nanoindentation method on collagen fibrils.</a> Materials. 15 (7), 2477 (2022).</li><li>Zielinska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymeric+nanoparticles:+Production,+characterization,+toxicology+and+ecotoxicology.">Polymeric nanoparticles: Production, characterization, toxicology and ecotoxicology.</a> Molecules. 25 (16), 3731 (2020).</li><li>Doncom, K. E. B., Blackman, L. D., Wright, D. B., Gibson, M. I., O'Reilly, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dispersity+effects+in+polymer+self-assemblies:+A+matter+of+hierarchical+control.">Dispersity effects in polymer self-assemblies: A matter of hierarchical control.</a> Chemical Society Reviews. 46 (14), 4119-4134 (2017).</li><li>Pei, M., Li, H., Zhu, Y., Lu, J., Zhang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+evidence+of+oncofetal+antigen+and+TLR-9+agonist+co-delivery+by+alginate+nanovaccines+for+liver+cancer+immunotherapy.">In vitro evidence of oncofetal antigen and TLR-9 agonist co-delivery by alginate nanovaccines for liver cancer immunotherapy.</a> Biomaterials Science. 10 (11), 2865-2876 (2022).</li><li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Titanium+dioxide+nanoparticles+induced+reactive+oxygen+species+(ROS)+related+changes+of+metabolomics+signatures+in+human+normal+bronchial+epithelial+(BEAS-2B)+cells.">Titanium dioxide nanoparticles induced reactive oxygen species (ROS) related changes of metabolomics signatures in human normal bronchial epithelial (BEAS-2B) cells.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. 444, 116020 (2022).</li><li>Kumar, V., Sharma, N., Maitra, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+toxicity+assessment+of+nanoparticles.">In vitro and in vivo toxicity assessment of nanoparticles.</a> International Nano Letters. 7 (4), 243-256 (2017).</li><li>Tong, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+immunopotentiator,+ophiopogonin+D,+encapsulated+in+a+nanoemulsion+as+a+robust+adjuvant+to+improve+vaccine+efficacy.">An immunopotentiator, ophiopogonin D, encapsulated in a nanoemulsion as a robust adjuvant to improve vaccine efficacy.</a> Acta Biomaterialia. 77, 255-267 (2018).</li><li>Elliott, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confocal+microscopy:+Principles+and+modern+practices.">Confocal microscopy: Principles and modern practices.</a> Current Protocols in Cytometry. 92 (1), 68 (2020).</li><li>Huang, Y., Zou, Y., Lin, L., Zheng, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ginsenoside+Rg1+activates+dendritic+cells+and+acts+as+a+vaccine+adjuvant+inducing+protective+cellular+responses+against+lymphomas.">Ginsenoside Rg1 activates dendritic cells and acts as a vaccine adjuvant inducing protective cellular responses against lymphomas.</a> DNA and Cell Biology. 36 (12), 1168-1177 (2017).</li></ol>

İmmünosit membranlarla fonksiyonelleştirilen nanoaşılar, hastalığa yönelik tedavide büyük avantajlara sahiptir ve benzersiz tümör tropizmi, spesifik hedeflerin belirlenmesi, uzun süreli dolaşım, gelişmiş hücreler arası etkileşimler ve düşük sistemik toksisite gibi özelliklerle yan etkiler en aza indirilmektedir. Ayrıca kanserleri işbirliği içinde tedavi etmek için diğer tedavi modülleriyle kolayca entegre edilebilirler 16,20. İsten...

En kritik halk sağlığı yeniliklerinden biri olan aşılar, insan hastalıklarının küresel yüküyle mücadelede kilit bir rol oynamaktadır1. Örneğin, şu anda, COVID-19 hastalıkları için 120'den fazla aday aşı test edilmektedir ve bunlardan bazıları birçok ülkede onaylanmıştır2. Son raporlar, kanser aşılarının klinik kanser tedavilerinin ilerlemesini etkili bir şekilde iyileştirdiğini, çünkü kanser hastalarının bağışıklık sistemini antijenleri vücuda yabancı olarak tanımaya yönlendirdiğini belirtmektedir3. Ayrıca, tümör hücrelerinin içinde veya dışında bulunan çoklu T hücre epitopları, radyoterapi ve kemoterapi ile ilişkili önemli toksisitenin bulunmaması nedeniyle metastatik kanserlerin tedavisinde avantajlar gösteren peptid aşılarını tasarlamak için kullanılabilir 4,5. 1990'ların ortalarından bu yana, tümör tedavisi için klinik öncesi ve klinik çalışmalar esas olarak antijen peptid aşıları kullanılarak yürütülmüştür, ancak az sayıda aşı kanser hastaları üzerinde yeterli bir terapötik etki göstermektedir6. Ayrıca, peptit epitoplarına sahip kanser aşıları, zayıf immünojeniteye ve yetersiz dağıtım etkinliğine sahiptir, bu da uygulama bölgesinden hızla yayılan hücre dışı peptitlerin hızlı bir şekilde bozulmasından kaynaklanabilir ve bu da bağışıklık hücreleri tarafından yetersiz antijen alımına yol açabilir7. Dolayısıyla aşı dağıtım teknolojisi ile bu engelleri aşmak gerekmektedir.
Bir füzyon proteini olarak ifade edilen MHC sınıf I-bağlayıcı 257-264 epitopu olan OVA257-264, sıklıkla kullanılan bir model epitop8'dir. Ek olarak, OVA257-264, sitotoksik T lenfosit (CTL) yanıtına bağlı olan tümörlere karşı adaptif immün yanıt için çok önemlidir. Tümörde OVA257-264 peptidi tarafından indüklenen antijene özgü CD8 + T hücreleri aracılık eder. Sitotoksik T hücreleri tarafından salınan ve hedef hücrelerin apoptozuna yol açan yetersiz granzim B ile karakterizedir8. Bununla birlikte, serbest OVA257-264 peptid uygulaması, çok az CTL aktivitesine neden olabilir, çünkü bu antijenlerin alımı, antijen sunan hücrelerden (APC'ler) ziyade spesifik olmayan hücrelerde meydana gelir. Uygun immün stimülasyon eksikliği CTL aktivitesi5 ile sonuçlanır. Bu nedenle, etkili CTL aktivitesinin indüksiyonu önemli ölçüde ilerleme gerektirir.
Epitel hücrelerinin sağladığı bariyer ve sürekli mukus salgılanması nedeniyle, aşı antijenleri burun mukozasından hızla çıkarılır 9,10. Mukozal dokudan geçebilen etkili bir aşı vektörü geliştirmek çok önemlidir, çünkü antijen sunan hücreler mukozal epitel9'un altında bulunur. Aşıların intranazal enjeksiyonu teorik olarak mukozal enfeksiyonla savaşmak için mukozal bağışıklığı indükler11. Ek olarak, burun doğumu, kolaylığı, bağırsak uygulamasından kaçınması ve hasta uyumunun artması nedeniyle aşılar için etkili ve güvenli bir uygulama yöntemidir7. Bu nedenle, nazal doğum, yeni peptid epitop nanoaşısı için iyi bir uygulama aracıdır.
Hücre-doku ve hücre-hücre etkileşimlerinin epitoplarını birleştirmek için çeşitli sentetik biyomalzemeler geliştirilmiştir. Ile-Lys-Val-Ala-Val (IKVAV) gibi bazı biyoaktif proteinler, biyoaktivite12'yi sağlamak için hidrojelin yapısının bir parçası olarak tanıtılmıştır. Bu peptit muhtemelen hücre bağlanmasına, göçüne ve büyümesine katkıda bulunur13 ve farklı kanser hücresi tipleriyle etkileşime girmek için 3β1 ve α6β1 α integrinleri bağlar. IKVAV, başlangıçta nöral mikroçevreyi modellemek ve nöronal farklılaşmaya neden olmak için kullanılanlaminin bazal membran proteini α 1 zincirinden türetilen bir hücre yapışma peptididir14. Bu nedenle, bu yeni aşı için etkili bir dağıtım aracı bulmak hastalık kontrolü için önemlidir.
Son zamanlarda bildirilen W805EC ve MF59 gibi emülsiyon sistemleri, inaktive influenza aşısı veya rekombinant hepatit B yüzey antijeninin burun boşluğuna verilmesi için birleştirilmiştir ve hem mukozal hem de sistemik bağışıklığı tetiklediği gösterilmiştir15. Nanoemülsiyonlar (NE'ler), partikül mukozal dağıtım sistemlerine kıyasla etkili adjuvanlarla kolay uygulama ve uygun ko-oluşum avantajlarına sahiptir16. Nanoemülsiyon aşılarının, alerjik fenotipi, geleneksel duyarsızlaştırmadan farklı olarak sürekli bir şekilde değiştirdiği ve bunun da uzun süreli baskılayıcı etkilere neden olduğu bildirilmiştir17. Diğerleri, Mtb'ye özgü immünodominant antijenlerle kombine edilen nanoemülsiyonların güçlü mukozal hücre yanıtlarını indükleyebileceğini ve önemli koruma sağlayabileceğini bildirmiştir18. Bu nedenle, sentetik peptit IKVAV-OVA 257-264 (I-OVA, OVA 257-264'e bağlı IKVAV'dan oluşan peptit) ile yeni bir burun içi kendiliğinden monte edilmiş nanoaşı tasarlanmıştır. Bu yeni nanoaşıyı sistematik olarak değerlendirmek önemlidir.
Bu protokolün amacı, nanoaşının fizikokimyasal özelliklerini, toksisitesini ve stabilitesini sistematik olarak değerlendirmek, antijen alımının ve koruyucu ve terapötik etkilerin teknik araçlar kullanılarak arttırılıp arttırılmadığını tespit etmek ve ana deneysel içerikler üzerinde durmaktır. Bu çalışmada, fizikokimyasal özellikleri ve stabiliteyi incelemek, I-OVA NE'nin CCK-8 ile BEAS-2B hücrelerine toksisitesinin büyüklüğünü belirlemek ve konfokal mikroskopi kullanarak BEAS-2B hücrelerinin aşıya antijen sunma yeteneğini gözlemlemek, bu yeni nanoaşının salınım profillerini in vivo ve in vitro olarak değerlendirmek için bir dizi protokol oluşturdukve bu aşının koruyucu ve terapötik etkisini, bir E.G7-OVA tümör taşıyan fare modeli kullanarak tespit edin.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well plates</td>
			<td>Corning Incorporated, USA</td>
			<td>CLS3922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Rad 6.0 microplate reader</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories Incorporated Limited Co., CA, USA</td>
			<td>&#160;Bio-Rad 6.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CCK-8 kits</td>
			<td>Dojindo, Japan</td>
			<td>CK04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge 5810 R</td>
			<td>Eppendorf, Germany&#160;</td>
			<td>5811000398</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, USA</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Hyclone (Life Technology, USA)</td>
			<td>SH30088.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-labeled I-OVA</td>
			<td>Shanghai Botai 
			Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HF 90/240 Incubator</td>
			<td>Heal Force, Switzerland</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC&#160;</td>
			<td>Shanghai Botai Biotechology Co., Ltd.</td>
			<td>E2695</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Microscope</td>
			<td>Nikon,Japan</td>
			<td>DSZ5000X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IPC-208</td>
			<td>Chong Qing University, China</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS system&#160;</td>
			<td>Caliper Life Science Limited Company</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JEM-1230 TEM</td>
			<td>JEOL Limited Company of Japan</td>
			<td>1230 TEM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malvern NANO ZS</td>
			<td>Malvern Instruments Ltd., UK</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MPLA</td>
			<td>&#160;Invivogen 
			Lit. Co.</td>
			<td>tlrl-mpla</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neomycin Sulfate Ointment</td>
			<td>Shanghai CP General Pharmaceutical Co. , Ltd.</td>
			<td>H31022262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OVA257&#8211;264</td>
			<td>Shanghai Botai 
			Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 medium</td>
			<td>Hyclone (Life Technology, USA)</td>
			<td>SH30809.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synthetic peptide (I-OVA) conjugation of IKVAV-PA</td>
			<td>Shanghai Botai 
			Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM800 laser scanning confocal fluorescence microscope</td>
			<td>Zeiss, Germany</td>
			<td>Zeiss LSM800</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation, characteristics, toxicity, and efficacy evaluation of the nasal self-assembled nanoemulsion tumor vaccine in vitro and in vivo

Epitop peptitler, güvenlikleri, yüksek özgüllükleri ve uygun üretimleri nedeniyle tümör aşıları alanında yaygın ilgi görmüştür; Özellikle, bazı MHC I kısıtlı epitoplar, tümör hücrelerini temizlemek için etkili sitotoksik T lenfosit aktivitesini indükleyebilir. Ek olarak, nazal uygulama, kolaylığı ve iyileştirilmiş hasta uyumu nedeniyle tümör aşıları için etkili ve güvenli bir uygulama tekniğidir. Bununla birlikte, epitop peptitleri, zayıf immünojeniteleri ve doğum etkinliği eksikliği nedeniyle nazal doğum için uygun değildir. Nanoemülsiyonlar (NE'ler), antijenlerle yüklenebilen ve doğrudan burun mukozal yüzeyine verilebilen termodinamik olarak stabil sistemlerdir. Ile-Lys-Val-Ala-Val (IKVAV), insan solunum epitel hücreleri tarafından eksprese edilen integrin bağlayıcı bir peptid olan laminin'in çekirdek pentapeptididir. Bu çalışmada, sentetik peptid IKVAV-OVA257-264 (I-OVA )'yi içeren intranazal kendinden montajlı epitop peptid NE tümör aşısı düşük enerjili emülsifikasyon yöntemi ile hazırlanmıştır. IKVAV ve OVA257-264 kombinasyonu, nazal mukozal epitel hücreleri tarafından antijen alımını artırabilir. Burada, transmisyon elektron mikroskobu (TEM), atomik kuvvet mikroskobu (AFM) ve dinamik ışık saçılması (DLS) ile fizikokimyasal özellikleri incelemek için bir protokol oluşturuyoruz; müsin proteini varlığında stabilite; BEAS-2B hücrelerinin hücre canlılığını ve C57BL / 6 farelerinin burun ve akciğer dokularını inceleyerek toksisite; konfokal lazer tarama mikroskobu (CLSM) ile hücresel alım; küçük hayvanları in vivo olarak görüntüleyerek profilleri serbest bırakmak; ve bir E.G7 tümör taşıyan model kullanılarak aşının koruyucu ve terapötik etkisi. Protokolün, yeni T hücresi epitop peptid mukozal aşılarının gelecekteki gelişimi için teknik ve teorik ipuçları sağlayacağını öngörüyoruz.

Protokole göre, burun tümörü nanoaşı dağıtımının hazırlığını ve in vitro ve in vivo deneysel değerlendirmesini tamamladık. TEM, AFM ve DLS, yüzey zeta potansiyelinin temel özelliklerinin ve nanoaşının parçacık boyutunun değerlendirilmesinde etkili araçlardır (Şekil 1). BEAS-2B epitel hücreleri, nazal aşıların in vitro toksisite testi için yararlı bir tarama modelidir (Şekil 2A). H&E ile boyanmış mi...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation, Characteristics, Toxicity, and Efficacy Evaluation of the Nasal Self-Assembled Nanoemulsion Tumor Vaccine In Vitro and In Vivo at JoVE.com

Preparation, Characteristics, Toxicity, and Efficacy Evaluation of the Nasal Self-Assembled Nanoemulsion Tumor Vaccine In Vitro and In Vivo

Burada, nazal kendiliğinden monte edilmiş nanoemülsiyon tümör aşısının in vitro ve in vivo olarak hazırlanması ve değerlendirilmesi için ayrıntılı yöntemler sunuyoruz.

Nazal Kendi Kendine Toplanan Nanoemülsiyon Tümör Aşısının İn Vitro ve İn Vivo Hazırlanması, Özellikleri, Toksisitesi ve Etkinliğinin Değerlendirilmesi

Epitope peptides have attracted widespread attention in the field of tumor vaccines because of their safety, high specificity, and convenient production; ...

Yeni nanoemülsiyon aşısı, hastalık taktik tedavisinde büyük avantajlara sahiptir. Bu set etkileri, benzersiz tümör kopisizmi, spesifik taktiklerin tanımlanması ve düşük sistemik toksisite gibi özelliklerle en aza indirilir. Protokolün, yeni T hücresi ektipi peptid mukozal aşılarının gelecekteki gelişimi için teknik ve teorik ipuçları sağlayacağını tahmin ediyoruz.Bir miligram monofosforol lipit A'yı 100 mikrolitre DMSO ile karıştırarak başlayın. Beş dakika boyunca vorteks yapın ve oda sıcaklığında dört saat boyunca çözünmeye bırakın. Kantitatif olarak TWEEN 80 ve I-OVA'yı ekleyin.Bileşenleri karıştırın ve skualen ekleyin. Daha sonra, hazırlanan karışıma 100 mikrolitre MPLA çözeltisi ekleyin. Nano emülsiyon aşısını hazırlamak için, karışık çözeltiyi toplam hacmin yaklaşık% 70'inde su damlacıklarına ekleyin ve şeffaf ve kolay akan bir karışım elde etmek için hafifçe karıştırın.İn vitro testler için, BEAS2B epitel hücrelerini canlandırmakla başlayın. Su banyosunu açın ve sıcaklığı 37 santigrat dereceye ayarlayın. Dondurulmuş hücre şişelerini, 37 santigrat derecede temperlenmiş bir su banyosunda hızla çözün.Çözüldükten sonra, hücreleri hızlı bir şekilde 15 mililitrelik steril bir santrifüj tüpüne pipetleyin ve tam büyüme ortamının iki mililitresini ekleyin. Tüpü beş dakika boyunca 129 G'de santrifüjleyin. Supinatantı çıkarın ve hücreleri tam büyüme ortamının iki mililitresinde yeniden askıya alın.Hücreleri bir kez daha santrifüj ettikten sonra, supinantı çıkarın ve hücreleri yeniden askıya almak için altı mililitre tam büyüme ortamı ekleyin. Daha sonra hücreleri bir T25 kültür şişesine aktarın ve% 5'lik bir karbondioksit inkübatöründe 37 santigrat derecede inkübe edin. Hücre yoğunluğu% 80 ila% 90'a ulaştığında, kültür ortamını atın ve hücreleri iki mililitre PBS ile iki kez yıkayın.Hücreleri bir ila iki dakika boyunca sindirmek için bir mililitre% 0.25 tripsin ekleyin. Hücrelerin yuvarlanması gözlendiğinde, tripsini nötralize etmek için hemen dört mililitre tam büyüme ortamı ekleyin. Numuneleri 15 mililitrelik steril bir santrifüj tüpünde karıştırın ve aspire edin.Numuneleri beş dakika boyunca 129 G'de santrifüj edin. Supinatant'ı çıkarın ve hücreleri bir mililitre RPMI 1640 tam ortamda yeniden askıya alın. Hücre sayımı için hücre süspansiyonunun 20 mikrolitresini kullanın ve hücreleri mililitre başına 10 ila beşinci hücrelere bir kez seyreltin.Daha sonra BEAS2B hücrelerini, 100 mikrolitre RPMI 1640 tam ortamda 96 kuyucuk plakasında kuyu başına 10 ila dördüncü hücreler arasında bir kez daha bir yoğunlukta plakalayın ve plakaları daha önce gösterildiği gibi 24 saat boyunca önceden inkübe edin. Kuluçkanın sonunda, supinatantı atın ve 96 kuyucuk plakasının her bir kuyucuğuna 100 mikrolitre RPMI 1640 ekleyin. I-OVA nano emülsiyonunun her birine 100 mikrolitre, BNE ile karıştırılmış I-OVA ve kontrol olarak BNE ile çeşitli son konsantrasyonlarda tam bir büyüme ortamı ile önceden seyreltilmiş I-OVA ekleyin ve 37 santigrat derecede 24 saat boyunca inkübe edin.Kuluçka tamamlandığında, ortamı çıkarın ve plakayı karanlık bir yere aktarın. Plakanın her bir kuyucuğuna 90 mikrolitre tam büyüme ortamı ve 10 mikrolitre CCK8 çözeltisi ekleyin. Plakayı iki saat boyunca 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte inkübe edin.Her bir kuyucuğun emilimini 450 nanometrede bir enzim etiketli plaka okuyucu kullanarak ölçün. Üç gün boyunca I-OVA, I-OVA plus BNE ve I-OVA NE ile farelerin nazal bağışıklamasını gerçekleştirmek için 10 mikrolitrelik pipet ucu kullanın. Deneysel kontrol olarak BNE ve PBA'yı kullanın.Daha sonra, yaklaşık üç milimetre kalınlığında burun dokusu örneklerini makasla kesin ve% 4 paraformaldehit içine yerleştirin. Akciğer dokularını çıkarın ve burun ve tüm akciğer dokularını 24 saat boyunca% 4 paraformaldehit içinde sabitleyin. TEM ve AFM, yüzey zeta potansiyelinin temel özelliklerinin ve nano aşının partikül boyutunun değerlendirilmesinde kullanılır.Musin stabilite analizlerinde I-OVA NE'nin partikül boyutları, polidispersite indeksleri, zeta potansiyelleri ve elektroforez hareketliliği gösterilmiştir. BEAS2B hücrelerinin göreceli canlılığı, 24 saat boyunca farklı peptid konsantrasyonları I-OVA, BNE + I-OVA ve I-OVA NE'ye maruz kalan kültürlerde% 80'den fazladır. I-OVA EN grubunda belirgin bir mukozal toksisite, doku hasarı, kanama veya inflamatuar hücre infiltrasyonu yoktu.Epitelyal BEAS2B hücreleri, su çözeltisininkinden daha fazla I-OVA NE etiketli FITC yakaladı. I-OVA NE in vitro sürekli salınım etkisi IV-IS sistemi kullanılarak analiz edildi. I-OVA NE aşısı, I-OVA'nın sulu çözeltisine kıyasla sürekli bir salınım etkisine sahipti.I-OVA NE grubunda, yüzde sağkalım süresi diğer gruplara göre daha yüksektir ve tümör hacmi anlamlı derecede daha küçüktür, bu da diğer gruplardan daha iyi bir önleyici koruma etkisine sahip olduğunu düşündürmektedir. Terapötik modelde, medyan sağkalım süresi farklı gruplar arasında anlamlı olarak farklıydı. I-OVA NE grubunun tümör hacmi, I-OVA grubundakinden anlamlı olarak daha küçüktü.Karışımın eşit şekilde karıştırılması bu prosedürde önemlidir. Aksi takdirde nanoaşıların verimliliğini azaltacaktır.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Preparation, Characteristics, Toxicity, and Efficacy Evaluation of the Nasal Self-Assembled Nanoemulsion Tumor Vaccine In Vitro and In Vivo

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Göç İnsan T Lenfosit İzolasyon, Kültür ve Analiz In Vitro</em

The migration of T lymphocytes involves the adhesive interaction of cell surface integrins with ligands expressed on other cells or with extracellular ...

Quantitative Analyses of all Influenza Type A Viral Hemagglutinins and Neuraminidases using Universal Antibodies in Simple Slot Blot Assays

Tüm Influenza Kantitatif Analiz Basit Slot Blot Tahliller Evrensel Antikorlar kullanarak Viral Hemagglutinins ve nöraminidaz yazın

Hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) are two surface proteins of influenza viruses which are known to play important roles in the viral life cycle ...

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Karşı Antibiyotik Etkinlik Test Yapay Balgam Orta Kullanımı<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Kistik Fibrozis Akciğer Daha İlgili Koşullar

There  is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial  susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from  cystic ...

Generation of Recombinant Arenavirus for Vaccine Development in FDA-Approved Vero Cells

FDA onaylı Vero hücrelerinde Aşı Geliştirme için bir araya getiren Arenavirus üretimi

The development and implementation of arenavirus reverse genetics represents a significant breakthrough in the arenavirus field  4. The use of cell-based ...

A Restriction Enzyme Based Cloning Method to Assess the In vitro Replication Capacity of HIV-1 Subtype C Gag-MJ4 Chimeric Viruses

A Restriction Enzyme Based Cloning Method to Assess the In vitro Replication Capacity of HIV-1 Subtype C Gag-MJ4 Chimeric Viruses

Bir Kısıtlama Enzim Temelli Klonlama Yöntemi değerlendirin<em&gt; In vitro</em&gt; HIV-1 Tipi C Gag-MJ4 Kimerik Virüslerin Çoğaltma Kapasitesi

The protective effect of many HLA class I alleles on HIV-1 pathogenesis and disease progression is, in part, attributed to their ability to target ...

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

Batı Nil Virüsü Mutant Soy Enfeksiyon MyD88-aracılı Hücresel Bağışıklık Tepki Vitro Analizi

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in ...

Evaluation of the Efficacy And Toxicity of RNAs Targeting HIV-1 Production for Use in Gene or Drug Therapy

Bir gen ya da ilaç terapisinde kullanım için, HIV-1 üretim yapan RNA&#39;lar etkinlik ve toksisite Değerlendirilmesi

Small RNA therapies targeting post-integration steps in the HIV-1 replication cycle are among the top candidates for gene therapy and have the potential ...

Quantifying Human Monocyte Chemotaxis In Vitro and Murine Lymphocyte Trafficking In Vivo

Quantifying Human Monocyte Chemotaxis In Vitro and Murine Lymphocyte Trafficking In Vivo

İnsan monosit kemotaksisi Vitro ve In Vivo kaçakçılığı fare lenfosit miktarının

Chemotaxis is migration along a specific chemical gradient1. Chemokines are chemotactic cytokines that promote cellular trafficking with anatomic and ...

Evaluation of Host-Pathogen Responses and Vaccine Efficacy in Mice

Ana bilgisayar-patojen yanıt ve aşı etkinliği farelerde değerlendirilmesi

Vaccines are a 20th century medical marvel. They have dramatically reduced the morbidity and mortality caused by infectious diseases and contributed to a ...

In Vitro ELISA Test to Evaluate Rabies Vaccine Potency

In Vitro ELISA Testi Kuduz Aşısı Potens Değerlendirmek için

The growing global concern for the animal welfare is encouraging manufacturers and the National Control Laboratories (OMCLs) to follow the 3Rs strategy ...