Name: a minimally invasive, accurate, and efficient technique for intrathymic injection in mice
Uploaded: 2022-08-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Minimally Invasive, Accurate, and Efficient Technique for Intrathymic Injection in Mice at JoVE.com

نود أن نشكر ريموند ثورنتون على عمله المبكر الثاقب والشامل في هذه التقنية. تم تمويل هذه الدراسة من خلال دعم المنح من المعهد الوطني للسرطان (NCI 1R37CA250661-01A1) ، وجمعية أبحاث سرطان الدم للأطفال ، وكلية هاكنساك ميريديان للطب ، ومؤسسة HUMC / معالجة سرطان الأطفال.

تم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا لإرشادات رعاية الحيوان في مركز الاكتشاف والابتكار (بروتوكول IACUC 290). بالنسبة للدراسة الحالية ، C57BL / 6 فئران (أنثى ، 4-6 أسابيع) ، C57BL / 6 فئران (أنثى ، 6 أشهر من العمر) ، J: NU إناث الفئران ، أنثى الفئران NOD scid gamma (NSG) ، و B6 ؛ تم استخدام فئران CAG-luc و -GFP كنموذج للفأر الصغير ، ون?...

<ol>
	<li>Chinn, I. K., Blackburn, C. C., Manley, N. R., Sempowski, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+primary+lymphoid+organs+with+aging.">Changes in primary lymphoid organs with aging.</a> Seminars in Immunology. 24 (5), 309-320 (2012).</li><li>Gruver, A. L., Sempowski, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokines,+leptin,+and+stress-induced+thymic+atrophy.">Cytokines, leptin, and stress-induced thymic atrophy.</a> Journal of Leukocyte Biology. 84 (4), 915-923 (2008).</li><li>Masopust, D., Sivula, C. P., Jameson, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice,+dirty+mice,+and+men:+Using+mice+to+understand+human+immunology.">Of mice, dirty mice, and men: Using mice to understand human immunology.</a> Journal of Immunology. 199 (2), 383-388 (2017).</li><li>Mukherjee, P., Roy, S., Ghosh, D., Nandi, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+animal+models+in+biomedical+research:+a+review.">Role of animal models in biomedical research: a review.</a> Laboratory Animals Research. 38 (1), 18 (2022).</li><li>McCaughtry, T. M., Hogquist, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+tolerance:+What+have+we+learned+from+mice.">Central tolerance: What have we learned from mice.</a> Seminars in Immunopathology. 30 (4), 399-409 (2008).</li><li>Zlotoff, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CCR7+and+CCR9+together+recruit+hematopoietic+progenitors+to+the+adult+thymus.">CCR7 and CCR9 together recruit hematopoietic progenitors to the adult thymus.</a> Blood. 115 (10), 1897-1905 (2010).</li><li>Vukmanovic, S., Grandea, A. G., Faas, S. J., Knowles, B. B., Bevan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positive+selection+of+T-lymphocytes+induced+by+intrathymic+injection+of+a+thymic+epithelial+cell+line.">Positive selection of T-lymphocytes induced by intrathymic injection of a thymic epithelial cell line.</a> Nature. 359 (6397), 729-732 (1992).</li><li>Schwarz, B. A., Bhandoola, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+hematopoietic+progenitors+with+T+lineage+potential.">Circulating hematopoietic progenitors with T lineage potential.</a> Nature Immunology. 5 (9), 953-960 (2004).</li><li>Marodon, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+antigen-specific+tolerance+by+intrathymic+injection+of+lentiviral+vectors.">Induction of antigen-specific tolerance by intrathymic injection of lentiviral vectors.</a> Blood. 108 (9), 2972-2978 (2006).</li><li>Adjali, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+correction+of+ZAP-70+immunodeficiency+by+intrathymic+gene+transfer.">In vivo correction of ZAP-70 immunodeficiency by intrathymic gene transfer.</a> Journal of Clinical Investigation. 115 (8), 2287-2295 (2005).</li><li>Tuckett, A. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image-guided+intrathymic+injection+of+multipotent+stem+cells+supports+life-long+T+cell+immunity+and+facilitates+targeted+immunotherapy.">Image-guided intrathymic injection of multipotent stem cells supports life-long T cell immunity and facilitates targeted immunotherapy.</a> Blood. 123 (18), 2797-2805 (2014).</li><li>Tuckett, A. Z., Thornton, R. H., O'Reilly, R. J., vanden Brink, M. R. M., Zakrzewski, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrathymic+injection+of+hematopoietic+progenitor+cells+establishes+functional+T+cell+development+in+a+mouse+model+of+severe+combined+immunodeficiency.">Intrathymic injection of hematopoietic progenitor cells establishes functional T cell development in a mouse model of severe combined immunodeficiency.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 10 (1), 109 (2017).</li><li>Hogan, B. V., Peter, M. B., Shenoy, H. G., Horgan, K., Hughes, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgery+induced+immunosuppression.">Surgery induced immunosuppression.</a> Surgeon. 9 (1), 38-43 (2011).</li><li>Blair-Handon, R., Mueller, K., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+method+for+intrathymic+injections+in+mice.">An alternative method for intrathymic injections in mice.</a> Laboratory Animals. 39 (8), 248-252 (2010).</li><li>Tuckett, A. Z., Zakrzewski, J. L., Li, D., vanden Brink, M. R., Thornton, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free-hand+ultrasound+guidance+permits+safe+and+efficient+minimally+invasive+intrathymic+injections+in+both+young+and+aged+mice.">Free-hand ultrasound guidance permits safe and efficient minimally invasive intrathymic injections in both young and aged mice.</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 41 (4), 1105-1111 (2015).</li><li>K&#252;ker, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+value+of+necropsy+reports+for+animal+health+surveillance.">The value of necropsy reports for animal health surveillance.</a> BMC Veterinary Research. 14 (1), 191 (2018).</li><li>Sinclair, C., Bains, I., Yates, A. J., Seddon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+thymocyte+death+underlies+the+CD4:CD8+T-cell+ratio+in+the+adaptive+immune+system.">Asymmetric thymocyte death underlies the CD4:CD8 T-cell ratio in the adaptive immune system.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (31), 2905-2914 (2013).</li><li>Manna, S., Bhandoola, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrathymic+injection.">Intrathymic injection.</a> Methods in Molecular Biology. 1323, 203-209 (2016).</li><li>de la Cueva, T., Naranjo, A., de la Cueva, E., Rubio, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refinement+of+intrathymic+injection+in+mice.">Refinement of intrathymic injection in mice.</a> Laboratory Animals. 36 (5), 27-32 (2007).</li></ol>

الحقن اليدوي الموجه بالموجات فوق الصوتية هو تقنية دقيقة للغاية لتوصيل مواد الدراسة إلى الغدة الصعترية بطريقة فعالة ومعقمة. بعد التعقيم الأولي للجلد في موقع الحقن ، يتم الحفاظ على العقم أثناء الإجراء بسبب استخدام قفازات معقمة وأغطية مسبار الموجات فوق الصوتية المعقمة وهلام الموجات فوق ال?...

تلعب الغدة الصعترية دورا أساسيا في نمو الخلايا التائية والمناعة. يؤدي نقص الخلايا التائية ، الذي يمكن أن يحدث بسبب ارتداد الغدة الصعترية ، والاضطرابات الوراثية ، والالتهابات ، وعلاجات السرطان ، من بين عوامل أخرى ، إلى ارتفاع معدل الوفيات والمراضة 1,2. لا غنى عن نماذج الفئران في كل من أبحاث المناعة الأساسية والانتقالية وقد استخدمت لعقود لدراسة بيولوجيا الغدة الصعترية وتطور الخلايا التائية ، وكذلك لتطوير علاجات لأولئك الذين يعانون من ضعف الغدة الصعترية ونقص الخلايا التائية3،4،5.
كان الجزء المركزي من تحقيقات الغدة الصعترية هو الحقن داخل الغدة الصعترية للمواد البيولوجية مثل الخلايا أو الجينات أو البروتينات في نماذج الفئران6،7،8،9،10،11،12. تستخدم طرق الحقن التقليدية داخل الغدة الصعترية بضع الصدر متبوعا بالحقن داخل الثعترية تحت التصور المباشر أو عن طريق الحقن "الأعمى" عن طريق الجلد في المنصف. النهج الجراحي يزيد بشكل كبير من خطر استرواح الصدر، من بين أمور أخرى. علاوة على ذلك ، يؤدي الإجهاد المرتفع أثناء هذه الجراحة إلى كبت المناعة ، مما قد يضر بالبيانات المناعية13. يمكن للباحثين ذوي الخبرة ، بعد بعض الممارسة ، إجراء تقنية الحقن الأعمى ، ولكن هذا النهج أقل دقة ، وبالتالي ، يقصر الموضوعات التجريبية على الفئران الشابة ذات الغدة الصعترية الكبيرة.
تم تقديم استخدام إرشادات الموجات فوق الصوتية كبديل دقيق وطفيف التوغل لنهج الحقن التقليدي داخل الثعترية14. ومع ذلك ، فإن هذا الإجراء يستغرق وقتا طويلا للغاية عند استخدام نظام السكك الحديدية المتكامل بدلا من تقنية اليد الحرة. يتطلب إجراء الحقن باستخدام حامل الحقن تحسينا دقيقا للتصوير وتحديد موضع محول الطاقة بمساعدة الملحقات المختلفة مثل حامل وحامل محول الطاقة ، ونظام تحديد المواقع X و Y و Z ، بالإضافة إلى التشغيل المتقن لأدوات التحكم في التلاعب الدقيق وتمديدات نظام السكك الحديدية. يتم تقديم تقنية بديلة بسيطة ، حقن الغدة الصعترية الموجهة بالموجات فوق الصوتية ، هنا من قبل أخصائي الأشعة باستخدام نهج اليد الحرة15 ، وهو بديل سريع ودقيق طفيف التوغل للطرق الموصوفة أعلاه. الأهم من ذلك ، يمكن تنفيذ النهج الحالي مع أي نظام تصوير بالموجات فوق الصوتية عالي الدقة دون الحاجة إلى حامل حقن ونظام سكة حديد متكامل. إنه مفيد بشكل خاص للدراسات التي تتطلب حقن أعداد كبيرة من الفئران11 ، أو للتجارب التي تنطوي على حقن كل من فصوص الغدة الصعترية ، أو للحقن الدقيق للزعترات الصغيرة في الفئران المسنة أو المشععة أو التي تعاني من نقص المناعة12.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aquasonic 100 Ultrasound Gel</td>
			<td>Parker Laboratories (Fairfield, NJ, USA)</td>
			<td>01-01</td>
			<td>Sterile Ultrasound Transmission Gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6;CAG-luc, -GFP mouse</td>
			<td>The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA)</td>
			<td>025854</td>
			<td>Bioluminescence cell source</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Insulin Syringes with needle</td>
			<td>Becton Dickinson (Franklin Lakes, NJ, USA)</td>
			<td>328431</td>
			<td>Ultra-fine needle - 12.7 mm, 30 G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mouse - aged</td>
			<td>The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA)</td>
			<td>000664</td>
			<td>age 6 months old; aged model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mouse - young</td>
			<td>The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA)</td>
			<td>000664</td>
			<td>age 4-6 weeks; young model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloraprep One-step 0.67 mL</td>
			<td>CareFusion (El Paso, TX, USA)</td>
			<td>260449</td>
			<td>chlorhexidine gluconate applicator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curity Cotton Tipped Applicator</td>
			<td>Cardinal Health (Dublin, OH, USA)</td>
			<td>A5000-2</td>
			<td>Sterile, 6&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin</td>
			<td>Gold Biotechnology (St Louis, MO, USA)</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein (Melville, NY, USA)</td>
			<td>1182097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina X5</td>
			<td>PerkinElmer (Melville, NY, USA)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>In vivo bioluminescence imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>J:NU mouse</td>
			<td>The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA)</td>
			<td>007850</td>
			<td>Athymic nude model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kendall Hypoallergenic Paper Tape</td>
			<td>Cardinal Health (Dublin, OH, USA)</td>
			<td>1914C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimtech Surgical Nitrile Gloves</td>
			<td>Kimberly-Clark Professional (Irving, TX, USA)</td>
			<td>56892</td>
			<td>Sterile Gloves</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair Hair Remover Lotion</td>
			<td>Church and Dwight (Trenton, NJ, USA)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Depilatory agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD scid gamma (NSG) mouse</td>
			<td>The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA)</td>
			<td>005557</td>
			<td>Immunodeficient model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline (PBS), 1x</td>
			<td>Corning (Corning, NY, USA)</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Vet Ointment</td>
			<td>Med Vet International</td>
			<td>PH-PURALUBE-VET</td>
			<td>Eye ointment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sheathes</td>
			<td>Sheathing Technologies (Morgan Hill, CA, USA)</td>
			<td>10040</td>
			<td>Sterile Ultrasound Probe Covers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sure-Seal Induction Chamber</td>
			<td>Braintree Scientific (Braintree, MA, USA)</td>
			<td>EZ-17 85</td>
			<td>Anesthesia induction chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transducer MX550D</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics (Toronto, ON, Canada)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Vevo 3100 imaging probe (25-55 MHz, Centre Transmit: 40 MHz)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue, 0.4% solution in PBS</td>
			<td>MP Biomedicals (Solon, OH, USA)</td>
			<td>91691049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Imaging System</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics (Toronto, ON, Canada)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Ultrasound imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Lab Software</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics (Toronto, ON, Canada)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Version 3.2.7 for imaging and analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Compact Dual Anesthesia System</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics (Toronto, ON, Canada)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Tabletop isoflurane-based anesthesia unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Imaging Station</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics (Toronto, ON, Canada)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Procedural platform</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a minimally invasive, accurate, and efficient technique for intrathymic injection in mice

يعد الحقن داخل الثعترية في نماذج الفئران تقنية مهمة لدراسة وظيفة الغدة الصعترية والمناعة ، بما في ذلك اضطرابات الخلايا التائية الوراثية والمكتسبة. وهذا يتطلب طرقا للترسب المباشر للكواشف و / أو الخلايا في الغدة الصعترية للفئران الحية. تشمل الطرق التقليدية للحقن داخل الغدة الصعترية جراحة الصدر أو الحقن الأعمى عن طريق الجلد طفيف التوغل ، وكلاهما له قيود كبيرة. جعلت أجهزة التصوير بالموجات فوق الصوتية فائقة التردد الحقن عن طريق الجلد الموجهة بالصور ممكنة في الفئران ، مما أدى إلى تحسين دقة الحقن بشكل كبير لنهج الحقن عن طريق الجلد وتمكين حقن أهداف أصغر. ومع ذلك ، تعتمد الحقن الموجهة بالصور على استخدام نظام سكة حديد متكامل ، مما يجعل هذا الإجراء صارما ويستغرق وقتا طويلا. يتم تقديم طريقة فريدة وآمنة وفعالة للحقن داخل الغدة الصعترية عن طريق الجلد في الفئران هنا ، مما يلغي الاعتماد على نظام السكك الحديدية للحقن. تعتمد هذه التقنية على استخدام وحدة الموجات فوق الصوتية الدقيقة عالية الدقة لتصوير الغدة الصعترية للفأر بشكل غير جراحي. باستخدام تقنية اليد الحرة ، يمكن لأخصائي الأشعة وضع طرف إبرة مباشرة في الغدة الصعترية للفأر تحت توجيه التصوير بالموجات فوق الصوتية. يتم تنظيف الفئران وتخديرها قبل التصوير. بالنسبة لأخصائي الأشعة المتمرس الماهر في الإجراءات الموجهة بالموجات فوق الصوتية ، فإن فترة التعلم للتقنية المذكورة قصيرة جدا ، عادة في غضون جلسة واحدة. هذه الطريقة لديها معدل مراضة ووفيات منخفض للفئران وهي أسرع بكثير من التقنيات الحالية بمساعدة ميكانيكية للحقن عن طريق الجلد. يسمح للمحقق بإجراء حقن دقيقة وموثوقة عن طريق الجلد بكفاءة من الغدة الصعترية من أي حجم (بما في ذلك الأعضاء الصغيرة جدا مثل الغدة الصعترية للفئران المسنة أو التي تعاني من نقص المناعة) مع الحد الأدنى من الضغط على الحيوان. تتيح هذه الطريقة حقن الفصوص الفردية إذا رغبت في ذلك وتسهل التجارب واسعة النطاق بسبب طبيعة الإجراء الموفرة للوقت.

يعتمد التنفيذ الناجح لهذه التقنية على بعض الخطوات الرئيسية التي يجب اتباعها. أولا ، يجب ضمان تحديد موثوق للغدة الصعترية نفسها. في الفئران الصغيرة ، يكون هذا واضحا بسبب الحجم الكبير للغدة (الشكل 3 أ). في الفئران الأكبر سنا أو الفئران التي تعاني من نقص المناعة ، يمكن أن يكون ال...

Watch this Scientific Journal Video about A Minimally Invasive, Accurate, and Efficient Technique for Intrathymic Injection in Mice at JoVE.com

A Minimally Invasive, Accurate, and Efficient Technique for Intrathymic Injection in Mice

يصف هذا البروتوكول إجراء الأشعة التداخلية الذي تم إنشاؤه للحقن داخل الغدة الصعترية في الفئران لتجنب خطر الجراحة المفتوحة وتحسين دقة الحقن الأعمى عن طريق الجلد.

تقنية طفيفة التوغل ودقيقة وفعالة للحقن داخل الزعتر في الفئران

Intrathymic injection in mouse models is an important technique for studying thymic and immune function, including genetic and acquired T cell disorders. ...

يوفر البروتوكول بديلا غير جراحي دقيق وآمن وفعال لطرق الحقن الجراحية والعمياء التقليدية. كما أنها تقنية الحقن الأكثر دقة لضمور الغدة الصعترية في الفئران المسنة أو التي تعاني من نقص المناعة. الميزة الرئيسية هي إجراء الحقن المجهد بالحد الأدنى وهو آمن ودقيق للغاية ، ولكنه سريع أيضا ، مما يتيح إجراء تجارب واسعة النطاق دون المساومة على البيانات من كبت المناعة المرتبط بالإجهاد الجراحي.يتطلب الحفاظ على محاذاة الإبرة ومحول الطاقة أثناء تقدمه عبر جدار الصدر بعض الممارسة. لذلك نوصي بالتعاون مع أخصائي الأشعة التداخلية ذي الخبرة لإجراء الحقن أو توفير التدريب. ستساعد في إظهار الإجراء شاينا أنونسيو ، وهي فنية من مختبري.للبدء ، ضع طبقة رقيقة من كريم مزيل الشعر على منطقة الصدر الأمامية للفئران لمدة تقل عن دقيقة واحدة لإزالة الفراء. استخدم منشفة ورقية مبللة لإزالة الكريم والفراء السائب. تأكد من عمق التخدير المناسب عن طريق عدم الاستجابة لقرصة المخلب الخلفي.ضع مرهم العيون على كلتا العينين لمنع جفاف القرنية. ضع فأرا واحدا في كل مرة في وضع الاستلقاء على المنصة الساخنة لمحطة التصوير بالموجات فوق الصوتية للحيوانات الصغيرة مع مخروط الأنف في مكانه. ثبت الماوس على المسرح بشريط لاصق طبي عند الأطراف الخلفية والأمامية.تطهير الجلد الصدري العلوي الخالي من الفراء باستخدام قضيب غلوكونات الكلورهيكسيدين. قم بتنشيط المسبار الخطي الأعلى ترددا المتاح. عادة ، المسبار مع أعلى دقة مكانية لحجم الحيوان الذي يتم تصويره.قم بتنشيط المسبار من خلال النقر على الزر المقابل بعد شاشة البدء. لتحسين إعدادات الموجات فوق الصوتية للتصوير والحقن ، اضبط عمق مجال الرؤية على حجم مناسب للحيوان المستهدف عن طريق ضبط أشرطة التمرير الموجهة رأسيا على الجانب الأيمن من الشاشة. اضبط كسب المقياس الرمادي عن طريق تحريك الزر على طول الشريط الأفقي أسفل الشاشة.بعد ذلك ، اضبط المنطقة البؤرية على المستوى المتوقع للغدة الصعترية. ضع حوالي ملليلتر واحد من جل الموجات فوق الصوتية على سطح محول الطاقة بينما يكون في وضع مستقيم ، إما في حامل جهاز الموجات فوق الصوتية أو في يد مساعد. لتحضير حقل معقم صغير بجوار المنصة الساخنة ، أفرغ غطاء مسبار معقم وشريط مطاطي وقفازات معقمة وهلام معقم بالموجات فوق الصوتية على الحقل المعقم.ثم ارتد القفازات المعقمة. ضع غطاء المسبار المعقم بعناية فوق محول الموجات فوق الصوتية والهلام. للحفاظ على العقم ، المس الغطاء المعقم فقط.حرك الشريط المطاطي المعقم فوق غطاء المسبار لإبقائه في مكانه. ضع اثنين إلى ثلاثة ملليلتر من هلام الموجات فوق الصوتية المعقم على الترجام. ضع مسبار الموجات فوق الصوتية المغطى بالهلام عموديا على الجزء المطهر من جدار الصدر الأمامي للفأر للتصوير الأولي ، مع الحفاظ على العقم.عرض وتحسين صورة الموجات فوق الصوتية كما هو موضح سابقا. لمسح الصدر الأمامي للماوس في مستوى عرضي ، أمسك الترجام عموديا وحركه لأعلى ولأسفل من الرقبة إلى البطن بحركة تشبه فرشاة الرسم أو حركة كاسحة. مع تمركز القلب في مجال الرؤية ، امسح الترجام قليلا نحو الرقبة.لاحظ الهيكلين الأسودين الدائريين المقترنين على جانبي الجزء العلوي من الصدر. باستخدام مسبار الموجات فوق الصوتية ، حدد موقع أوسع جزء من الغدة الصعترية ، والذي عادة ما يكون الموقع المستهدف المثالي للحقن. توقع مسار إبرة أفقي في الموقع المختار ، ولاحظ مكان الأوعية الدموية الرئيسية في هذا الموقع.يجب تجنب هذه الأوعية أثناء الحقن. ستكون الأوعية الدموية هياكل نابضة ناقصة الصدى. إذا لم تكن متأكدا ، فقم بتنشيط وضع دوبلر الملون عن طريق النقر على زر اللون على الشاشة للتحقق من التدفق داخل الأوعية.امسك محول الطاقة بيد واحدة وإبرة أنسولين قياس 30 مع 10 ميكرولتر من الحقن في اليد الأخرى. لبدء عملية الحقن ، حرك محول الطاقة بشكل جانبي بحيث تكون الغدة الصعترية خارج المركز في مجال رؤية الموجات فوق الصوتية. تأكد من أن الجانب الآخر من مجال الرؤية يتكون في الغالب من هلام الموجات فوق الصوتية ولا شيء آخر.ضع طرف الإبرة في الجل تحت الترجام ، وحرك الإبرة ببطء حتى يتم تصورها بجوار سطح الجلد. أثناء التصوير المستمر للإبرة تحت الموجات فوق الصوتية ، أدخل الإبرة في الغدة الصعترية بمسار عن طريق الجلد بعيدا عن الأوعية الدموية. استخدم مسارا أفقيا للغدة الصعترية لوضع طرف الإبرة في الفص الصعترية المقابل لموقع الدخول.بمجرد أن يكون طرف الإبرة داخل الجزء المطلوب من الغدة الصعترية ، قم بحقن المحتويات بسرعة من المحقنة ذات المقياس 30 أثناء استخدام التصور بالموجات فوق الصوتية. لتثبيت المحقنة أثناء إدخال الإبرة وحقنها ، أمسك المحقنة بين الإبهام والإصبع الثالث ، وتحكم في مكبس المحقنة بإصبع السبابة. قم بإزالة الإبرة بعد إيداع جميع المحتويات.في الفئران الصغيرة ، كان تحديد الغدة الصعترية واضحا بسبب الحجم الكبير للغدة. كان الأمر أكثر صعوبة في الفئران الأكبر سنا أو التي تعاني من نقص المناعة. ومع ذلك ، كان لا يزال ممكنا للغاية مع معدات الموجات فوق الصوتية الحديثة.لوحظ الحقن الناجح عندما لا تجتاز الإبرة الهياكل الحرجة ، مثل القلب أو الشريان الأورطي أو أحد الوريد الأجوف السفلي. تم تصور طرف الإبرة في موقعه المستهدف أثناء الحقن ، مما يؤكد ترسب الترسب داخل الثعتر. تم تأكيد موقع الحقن داخل التوتة باستخدام لوسيفيرين كحقن في الفئران المعدلة وراثيا لوسيفيراز.تم تقييمها على الفور باستخدام التصوير الحيوي ، مما يؤكد الموقع الصحيح للحقن دون التضحية بالحيوان. بدلا من ذلك ، تم حقن Trypan Blue كعلامة بصرية لموقع الحقن ودقة الحقن باستخدام خارج الجسم الحي مع التشريح. تستخدم مجموعتنا هذه التقنية في العديد من الدراسات الكبيرة ، بما في ذلك أبحاث العلاج المناعي للسرطان ، بناء على حقن الخلايا السلفية المعدلة وراثيا ، ولتحسين وظيفة الغدة الصعترية في الفئران التي تعاني من نقص المناعة.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

غير الغازية تصوير الزاجل كريات بيضاء والهجرة في الجسم الحي</em

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

A طريقة لوصفها الأوعية الدموية في الفئران الجنينية

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

غير الغازية التصوير الضوئي من الأوعية الدموية اللمفية على فأرة الحاسوب

The lymphatic  vascular system is an important component of the circulatory system that  maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D التصوير تعدد الوسائط من<em&gt; الليمونية rodentium</em&gt; التهابات في الفئران

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Systemic Injection of Neural Stem/Progenitor Cells in Mice with Chronic EAE

حقن النظامية من الخلايا الجذعية العصبية / السلف في الفئران مع EAE المزمن

Neural stem/precursor cells (NPCs) are a promising stem cell source for transplantation approaches aiming at brain repair or restoration in regenerative ...

An Efficient and High Yield Method for Isolation of Mouse Dendritic Cell Subsets

على طريقة العائد فعالة وعالية لعزل مجموعات فرعية خلية الفأر الجذعية

Dendritic cells (DCs) are professional antigen-presenting cells primarily responsible for acquiring, processing and presenting antigens on antigen ...

A Simple and Efficient Approach to Construct Mutant Vaccinia Virus Vectors

مقاربة بسيطة وفعالة لبناء ناقلات الفيروسات المسخ الوقس

The CRISPR-associated endonuclease Cas9 can edit particular genomic loci directed by a single guide RNA (gRNA). The CRISPR/Cas9 system has been ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

والطريقة غير الغازية ومن الناحية الفنية غير كثيفة للتحريض وPhenotyping التجريبية البكتيرية والالتهاب الرئوي في الفئران

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

التعريفي للشلل وإصابة النظام المرئي في الفئران التي تي الخلايا المحددة للبصري المياليني أقوابورين أوتوانتيجين-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Highly Efficient Transfection of Primary Macrophages with In Vitro Transcribed mRNA

النقل عاليه الكفاءة من الضامة الابتدائية مع في المختبر كتب mRNA

Macrophages are phagocytic cells specialized in detecting molecules of non-self origin. To this end, they are equipped with a large array of pattern ...