Name: a minimally invasive, accurate, and efficient technique for intrathymic injection in mice
Uploaded: 2022-08-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Minimally Invasive, Accurate, and Efficient Technique for Intrathymic Injection in Mice at JoVE.com

हम इस तकनीक पर अपने व्यावहारिक और व्यापक प्रारंभिक काम के लिए रेमंड एच थॉर्नटन को धन्यवाद देना चाहते हैं। इस अध्ययन को राष्ट्रीय कैंसर संस्थान (एनसीआई 1 आर 37सीए 250661-01 ए 1), चिल्ड्रन ल्यूकेमिया रिसर्च एसोसिएशन, हैकेनसैक मेरिडियन स्कूल ऑफ मेडिसिन और एचयूएमसी फाउंडेशन / डील किड्स कैंसर से अनुदान सहायता द्वारा वित्त पोषित किया गया था।

सभी प्रक्रियाओं को सेंटर फॉर डिस्कवरी एंड इनोवेशन (आईएसीयूसी प्रोटोकॉल 290) में पशु देखभाल दिशानिर्देशों के अनुसार किया गया था। वर्तमान अध्ययन के लिए, सी 57बीएल / 6 चूहे (महिला, 4-6 सप्ताह की उम्र), सी 57बीएल / 6 च?...

<ol>
	<li>Chinn, I. K., Blackburn, C. C., Manley, N. R., Sempowski, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+primary+lymphoid+organs+with+aging.">Changes in primary lymphoid organs with aging.</a> Seminars in Immunology. 24 (5), 309-320 (2012).</li><li>Gruver, A. L., Sempowski, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokines,+leptin,+and+stress-induced+thymic+atrophy.">Cytokines, leptin, and stress-induced thymic atrophy.</a> Journal of Leukocyte Biology. 84 (4), 915-923 (2008).</li><li>Masopust, D., Sivula, C. P., Jameson, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice,+dirty+mice,+and+men:+Using+mice+to+understand+human+immunology.">Of mice, dirty mice, and men: Using mice to understand human immunology.</a> Journal of Immunology. 199 (2), 383-388 (2017).</li><li>Mukherjee, P., Roy, S., Ghosh, D., Nandi, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+animal+models+in+biomedical+research:+a+review.">Role of animal models in biomedical research: a review.</a> Laboratory Animals Research. 38 (1), 18 (2022).</li><li>McCaughtry, T. M., Hogquist, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+tolerance:+What+have+we+learned+from+mice.">Central tolerance: What have we learned from mice.</a> Seminars in Immunopathology. 30 (4), 399-409 (2008).</li><li>Zlotoff, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CCR7+and+CCR9+together+recruit+hematopoietic+progenitors+to+the+adult+thymus.">CCR7 and CCR9 together recruit hematopoietic progenitors to the adult thymus.</a> Blood. 115 (10), 1897-1905 (2010).</li><li>Vukmanovic, S., Grandea, A. G., Faas, S. J., Knowles, B. B., Bevan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positive+selection+of+T-lymphocytes+induced+by+intrathymic+injection+of+a+thymic+epithelial+cell+line.">Positive selection of T-lymphocytes induced by intrathymic injection of a thymic epithelial cell line.</a> Nature. 359 (6397), 729-732 (1992).</li><li>Schwarz, B. A., Bhandoola, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+hematopoietic+progenitors+with+T+lineage+potential.">Circulating hematopoietic progenitors with T lineage potential.</a> Nature Immunology. 5 (9), 953-960 (2004).</li><li>Marodon, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+antigen-specific+tolerance+by+intrathymic+injection+of+lentiviral+vectors.">Induction of antigen-specific tolerance by intrathymic injection of lentiviral vectors.</a> Blood. 108 (9), 2972-2978 (2006).</li><li>Adjali, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+correction+of+ZAP-70+immunodeficiency+by+intrathymic+gene+transfer.">In vivo correction of ZAP-70 immunodeficiency by intrathymic gene transfer.</a> Journal of Clinical Investigation. 115 (8), 2287-2295 (2005).</li><li>Tuckett, A. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image-guided+intrathymic+injection+of+multipotent+stem+cells+supports+life-long+T+cell+immunity+and+facilitates+targeted+immunotherapy.">Image-guided intrathymic injection of multipotent stem cells supports life-long T cell immunity and facilitates targeted immunotherapy.</a> Blood. 123 (18), 2797-2805 (2014).</li><li>Tuckett, A. Z., Thornton, R. H., O'Reilly, R. J., vanden Brink, M. R. M., Zakrzewski, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrathymic+injection+of+hematopoietic+progenitor+cells+establishes+functional+T+cell+development+in+a+mouse+model+of+severe+combined+immunodeficiency.">Intrathymic injection of hematopoietic progenitor cells establishes functional T cell development in a mouse model of severe combined immunodeficiency.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 10 (1), 109 (2017).</li><li>Hogan, B. V., Peter, M. B., Shenoy, H. G., Horgan, K., Hughes, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgery+induced+immunosuppression.">Surgery induced immunosuppression.</a> Surgeon. 9 (1), 38-43 (2011).</li><li>Blair-Handon, R., Mueller, K., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+method+for+intrathymic+injections+in+mice.">An alternative method for intrathymic injections in mice.</a> Laboratory Animals. 39 (8), 248-252 (2010).</li><li>Tuckett, A. Z., Zakrzewski, J. L., Li, D., vanden Brink, M. R., Thornton, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free-hand+ultrasound+guidance+permits+safe+and+efficient+minimally+invasive+intrathymic+injections+in+both+young+and+aged+mice.">Free-hand ultrasound guidance permits safe and efficient minimally invasive intrathymic injections in both young and aged mice.</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 41 (4), 1105-1111 (2015).</li><li>K&#252;ker, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+value+of+necropsy+reports+for+animal+health+surveillance.">The value of necropsy reports for animal health surveillance.</a> BMC Veterinary Research. 14 (1), 191 (2018).</li><li>Sinclair, C., Bains, I., Yates, A. J., Seddon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+thymocyte+death+underlies+the+CD4:CD8+T-cell+ratio+in+the+adaptive+immune+system.">Asymmetric thymocyte death underlies the CD4:CD8 T-cell ratio in the adaptive immune system.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (31), 2905-2914 (2013).</li><li>Manna, S., Bhandoola, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrathymic+injection.">Intrathymic injection.</a> Methods in Molecular Biology. 1323, 203-209 (2016).</li><li>de la Cueva, T., Naranjo, A., de la Cueva, E., Rubio, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refinement+of+intrathymic+injection+in+mice.">Refinement of intrathymic injection in mice.</a> Laboratory Animals. 36 (5), 27-32 (2007).</li></ol>

एक अल्ट्रासाउंड-निर्देशित फ्री-हैंड इंजेक्शन एक कुशल और सड़न रोकनेवाला तरीके से थाइमस को अध्ययन सामग्री देने के लिए एक अत्यधिक सटीक तकनीक है। इंजेक्शन स्थल पर त्वचा की प्रारंभिक नसबंदी के बाद, बाँझ द?...

थाइमस की टी सेल के विकास और प्रतिरक्षा में एक आवश्यक भूमिका है। टी सेल की कमी, जो अन्य कारकों के बीच थाइमिक इनवोल्यूशन, आनुवंशिक विकार, संक्रमण और कैंसर उपचार के कारण हो सकती है, उच्च मृत्यु दर और रुग्णता 1,2 की ओर ले जाती है। माउस मॉडल बुनियादी और ट्रांसलेशनल इम्यूनोलॉजी अनुसंधान दोनों में अपरिहार्य हैं और दशकों से थाइमिक जीव विज्ञान और टी सेल विकास का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जाता है, साथ ही थाइमिक डिसफंक्शन और टी सेल की कमी से पीड़ित लोगों के लिए उपचार विकसित करने के लिए 3,4,5।
थाइमिक जांच का एक केंद्रीय हिस्सा माउस मॉडल 6,7,8,9,10,11,12 में कोशिकाओं, जीन या प्रोटीन जैसे जैविक सामग्रियों का इंट्राथिमिक इंजेक्शन रहा है। पारंपरिक इंट्राथिमिक इंजेक्शन विधियां थोराकोटॉमी का उपयोग करती हैं, जिसके बाद प्रत्यक्ष विज़ुअलाइज़ेशन के तहत इंट्राथिमिक इंजेक्शन या मीडियास्टिनम में "ब्लाइंड" परक्यूटेनियस इंजेक्शन द्वारा। सर्जिकल दृष्टिकोण दूसरों के बीच न्यूमोथोरैक्स जोखिम को काफी बढ़ाता है। इसके अलावा, इस सर्जरी के दौरान ऊंचा तनाव इम्यूनोसप्रेशन का परिणाम होता है, इस प्रकार संभावित रूप से इम्यूनोलॉजिकल डेटा13 से समझौता होता है। अनुभवी शोधकर्ता, कुछ अभ्यास के बाद, अंधे इंजेक्शन तकनीक का प्रदर्शन कर सकते हैं, लेकिन यह दृष्टिकोण कम सटीक है और इसलिए, प्रयोगात्मक विषयों को एक बड़े थाइमस के साथ युवा चूहों तक सीमित करता है।
अल्ट्रासाउंड मार्गदर्शन का उपयोग पारंपरिक इंट्राथिमिक इंजेक्शन दृष्टिकोण14 के लिए एक सटीक और न्यूनतम इनवेसिव विकल्प के रूप में पेश किया गया है। हालांकि, फ्री-हैंड तकनीक के बजाय एकीकृत रेल प्रणाली का उपयोग करते समय यह प्रक्रिया बहुत समय लेने वाली है। इंजेक्शन माउंट के साथ इंजेक्शन करने के लिए ट्रांसड्यूसर स्टैंड और माउंट, एक्स, वाई और जेड पोजिशनिंग सिस्टम जैसे विभिन्न अनुलग्नकों की मदद से ट्रांसड्यूसर के सावधानीपूर्वक इमेजिंग अनुकूलन और स्थिति की आवश्यकता होती है, साथ ही माइक्रो-मैनिपुलेशन नियंत्रण और रेल सिस्टम एक्सटेंशन के कुशल संचालन की आवश्यकता होती है। एक सरल वैकल्पिक तकनीक, अल्ट्रासाउंड-निर्देशित थाइमिक इंजेक्शन, यहां एक रेडियोलॉजिस्ट द्वारा फ्री-हैंड दृष्टिकोण15 का उपयोग करके प्रस्तुत किया गया है, जो उपरोक्त वर्णित विधियों के लिए एक तेज़ और सटीक न्यूनतम इनवेसिव विकल्प दोनों है। महत्वपूर्ण रूप से, वर्तमान दृष्टिकोण इंजेक्शन माउंट और एकीकृत रेल प्रणाली की आवश्यकता के बिना किसी भी उच्च-रिज़ॉल्यूशन अल्ट्रासाउंड इमेजिंग सिस्टम के साथ किया जा सकता है। यह विशेष रूप से चूहों की बड़ी संख्या के इंजेक्शन की आवश्यकता वाले अध्ययनों के लिए उपयोगी है, दोनों थाइमिक लोब के इंजेक्शन से जुड़े प्रयोगों के लिए, या वृद्ध, विकिरणित, या इम्यूनोकॉम्प्रोमाइज्ड चूहों12 में छोटे थाइमस के सटीक इंजेक्शन के लिए।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aquasonic 100 Ultrasound Gel</td>
			<td>Parker Laboratories (Fairfield, NJ, USA)</td>
			<td>01-01</td>
			<td>Sterile Ultrasound Transmission Gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6;CAG-luc, -GFP mouse</td>
			<td>The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA)</td>
			<td>025854</td>
			<td>Bioluminescence cell source</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Insulin Syringes with needle</td>
			<td>Becton Dickinson (Franklin Lakes, NJ, USA)</td>
			<td>328431</td>
			<td>Ultra-fine needle - 12.7 mm, 30 G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mouse - aged</td>
			<td>The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA)</td>
			<td>000664</td>
			<td>age 6 months old; aged model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mouse - young</td>
			<td>The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA)</td>
			<td>000664</td>
			<td>age 4-6 weeks; young model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloraprep One-step 0.67 mL</td>
			<td>CareFusion (El Paso, TX, USA)</td>
			<td>260449</td>
			<td>chlorhexidine gluconate applicator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curity Cotton Tipped Applicator</td>
			<td>Cardinal Health (Dublin, OH, USA)</td>
			<td>A5000-2</td>
			<td>Sterile, 6&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin</td>
			<td>Gold Biotechnology (St Louis, MO, USA)</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein (Melville, NY, USA)</td>
			<td>1182097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina X5</td>
			<td>PerkinElmer (Melville, NY, USA)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>In vivo bioluminescence imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>J:NU mouse</td>
			<td>The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA)</td>
			<td>007850</td>
			<td>Athymic nude model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kendall Hypoallergenic Paper Tape</td>
			<td>Cardinal Health (Dublin, OH, USA)</td>
			<td>1914C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimtech Surgical Nitrile Gloves</td>
			<td>Kimberly-Clark Professional (Irving, TX, USA)</td>
			<td>56892</td>
			<td>Sterile Gloves</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair Hair Remover Lotion</td>
			<td>Church and Dwight (Trenton, NJ, USA)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Depilatory agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD scid gamma (NSG) mouse</td>
			<td>The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA)</td>
			<td>005557</td>
			<td>Immunodeficient model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline (PBS), 1x</td>
			<td>Corning (Corning, NY, USA)</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Vet Ointment</td>
			<td>Med Vet International</td>
			<td>PH-PURALUBE-VET</td>
			<td>Eye ointment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sheathes</td>
			<td>Sheathing Technologies (Morgan Hill, CA, USA)</td>
			<td>10040</td>
			<td>Sterile Ultrasound Probe Covers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sure-Seal Induction Chamber</td>
			<td>Braintree Scientific (Braintree, MA, USA)</td>
			<td>EZ-17 85</td>
			<td>Anesthesia induction chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transducer MX550D</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics (Toronto, ON, Canada)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Vevo 3100 imaging probe (25-55 MHz, Centre Transmit: 40 MHz)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue, 0.4% solution in PBS</td>
			<td>MP Biomedicals (Solon, OH, USA)</td>
			<td>91691049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Imaging System</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics (Toronto, ON, Canada)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Ultrasound imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Lab Software</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics (Toronto, ON, Canada)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Version 3.2.7 for imaging and analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Compact Dual Anesthesia System</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics (Toronto, ON, Canada)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Tabletop isoflurane-based anesthesia unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Imaging Station</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics (Toronto, ON, Canada)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Procedural platform</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a minimally invasive, accurate, and efficient technique for intrathymic injection in mice

माउस मॉडल में इंट्राथिमिक इंजेक्शन थाइमिक और प्रतिरक्षा समारोह का अध्ययन करने के लिए एक महत्वपूर्ण तकनीक है, जिसमें आनुवंशिक और अधिग्रहित टी सेल विकार शामिल हैं। इसके लिए जीवित चूहों के थाइमस में अभिकर्मकों और / या कोशिकाओं के प्रत्यक्ष जमाव के तरीकों की आवश्यकता होती है। इंट्राथिमिक इंजेक्शन के पारंपरिक तरीकों में थोरैसिक सर्जरी या न्यूनतम इनवेसिव परक्यूटेनियस ब्लाइंड इंजेक्शन शामिल हैं, जिनमें से दोनों की महत्वपूर्ण सीमाएं हैं। अल्ट्रा-हाई फ्रीक्वेंसी अल्ट्रासाउंड इमेजिंग उपकरणों ने चूहों में छवि-निर्देशित पर्क्युटेनियस इंजेक्शन को संभव बना दिया है, जिससे परक्यूटेनियस इंजेक्शन दृष्टिकोण की इंजेक्शन सटीकता में काफी सुधार हुआ है और छोटे लक्ष्यों के इंजेक्शन को सक्षम किया गया है। हालांकि, छवि-निर्देशित इंजेक्शन एक एकीकृत रेल प्रणाली के उपयोग पर निर्भर करते हैं, जिससे यह एक कठोर और समय लेने वाली प्रक्रिया बन जाती है। चूहों में परक्यूटेनियस इंट्राथिमिक इंजेक्शन के लिए एक अनूठी, सुरक्षित और कुशल विधि यहां प्रस्तुत की गई है, जो इंजेक्शन के लिए रेल प्रणाली पर निर्भरता को समाप्त करती है। तकनीक माउस थाइमस को गैर-आक्रामक रूप से चित्रित करने के लिए एक उच्च-रिज़ॉल्यूशन माइक्रो-अल्ट्रासाउंड इकाई का उपयोग करने पर निर्भर करती है। एक फ्री-हैंड तकनीक का उपयोग करके, एक रेडियोलॉजिस्ट सोनोग्राफिक मार्गदर्शन के तहत माउस थाइमस में सीधे सुई की नोक रख सकता है। इमेजिंग से पहले चूहों को साफ और एनेस्थेटाइज किया जाता है। अल्ट्रासाउंड-निर्देशित प्रक्रियाओं में निपुण एक अनुभवी रेडियोलॉजिस्ट के लिए, बताई गई तकनीक के लिए सीखने की अवधि काफी कम है, आमतौर पर एक सत्र के भीतर। इस विधि में चूहों के लिए कम रुग्णता और मृत्यु दर है और पर्क्यूटेनियस इंजेक्शन के लिए वर्तमान यांत्रिक रूप से सहायता प्राप्त तकनीकों की तुलना में बहुत तेज है। यह अन्वेषक को जानवर पर न्यूनतम तनाव के साथ किसी भी आकार के थाइमस (वृद्ध या इम्यूनोडेफिशिएंट चूहों के थाइमस जैसे बहुत छोटे अंगों सहित) के सटीक और विश्वसनीय परक्यूटेनियस इंजेक्शन को कुशलतापूर्वक करने की अनुमति देता है। यह विधि वांछित होने पर व्यक्तिगत लोब के इंजेक्शन को सक्षम बनाती है और प्रक्रिया की समय-बचत प्रकृति के कारण बड़े पैमाने पर प्रयोगों की सुविधा प्रदान करती है।

इस तकनीक का सफल कार्यान्वयन कुछ प्रमुख चरणों पर निर्भर करता है। सबसे पहले, थाइमस ग्रंथि की विश्वसनीय पहचान सुनिश्चित की जानी चाहिए। युवा चूहों में, यह ग्रंथि के बड़े आकार (चित्रा 3 ए) के कारण ?...

Watch this Scientific Journal Video about A Minimally Invasive, Accurate, and Efficient Technique for Intrathymic Injection in Mice at JoVE.com

A Minimally Invasive, Accurate, and Efficient Technique for Intrathymic Injection in Mice

वर्तमान प्रोटोकॉल चूहों में इंट्राथिमिक इंजेक्शन के लिए स्थापित एक इंटरवेंशनल रेडियोलॉजी प्रक्रिया का वर्णन करता है ताकि खुली सर्जरी के जोखिम से बचा जा सके और अंधे परक्यूटेनियस इंजेक्शन की सटीकता में सुधार किया जा सके।

चूहों में इंट्राथिमिक इंजेक्शन के लिए एक न्यूनतम इनवेसिव, सटीक और कुशल तकनीक

Intrathymic injection in mouse models is an important technique for studying thymic and immune function, including genetic and acquired T cell disorders. ...

प्रोटोकॉल पारंपरिक सर्जिकल और अंधे इंजेक्शन विधियों के लिए एक सटीक, सुरक्षित और कुशल गैर-सर्जिकल विकल्प प्रदान करता है। यह वृद्ध या इम्यूनोडेफिशिएंट चूहों में शोष थाइमस के लिए सबसे सटीक इंजेक्शन तकनीक भी है। मुख्य लाभ एक न्यूनतम तनावपूर्ण इंजेक्शन प्रक्रिया है जो बहुत सुरक्षित और सटीक है, लेकिन तेजी से भी है, इस प्रकार सर्जिकल तनाव से संबंधित इम्यूनोसप्रेशन से डेटा समझौता किए बिना बड़े पैमाने पर प्रयोगों को सक्षम करता है।छाती की दीवार के माध्यम से आगे बढ़ते समय सुई और ट्रांसड्यूसर के संरेखण को बनाए रखने में कुछ अभ्यास लगता है। इसलिए हम इंजेक्शन करने या प्रशिक्षण प्रदान करने के लिए एक अनुभवी इंटरवेंशनल रेडियोलॉजिस्ट के साथ सहयोग करने की सलाह देते हैं। प्रक्रिया को प्रदर्शित करने में मदद करने वाली शाइना अनुन्सियो, मेरी प्रयोगशाला से एक तकनीशियन होगी।शुरू करने के लिए, फर को हटाने के लिए एक मिनट से भी कम समय के लिए चूहों के पूर्ववर्ती छाती क्षेत्र में डिपिलेटरी क्रीम की एक पतली परत लागू करें। क्रीम और ढीले फर को हटाने के लिए गीले पेपर तौलिया का उपयोग करें। पिछले पंजे की चुटकी के प्रति अनुक्रियाशीलता द्वारा उचित एनेस्थेटिक गहराई की पुष्टि करें।कॉर्नियल सुखाने से रोकने के लिए दोनों आंखों पर नेत्र मरहम लगाएं। नाक शंकु के साथ छोटे पशु अल्ट्रासाउंड इमेजिंग स्टेशन के गर्म मंच पर लापरवाह स्थिति में एक समय में एक माउस रखें। माउस को पीछे और सामने के अंगों पर चिकित्सा चिपकने वाले टेप के साथ मंच पर सुरक्षित करें।क्लोरहेक्सिडाइन ग्लूकोनेट एप्लिकेटर का उपयोग करके फर मुक्त ऊपरी वक्ष त्वचा को कीटाणुरहित करें। उपलब्ध उच्चतम आवृत्ति रैखिक जांच को सक्रिय करें। आमतौर पर, जानवर के आकार के लिए उच्चतम स्थानिक रिज़ॉल्यूशन वाली जांच को चित्रित किया जा रहा है।स्टार्ट अप स्क्रीन के बाद संबंधित बटन पर टैप करके जांच को सक्रिय करें। इमेजिंग और इंजेक्शन के लिए अल्ट्रासाउंड सेटिंग्स को अनुकूलित करने के लिए, स्क्रीन के दाईं ओर लंबवत उन्मुख स्लाइडर्स को समायोजित करके लक्ष्य जानवर के लिए उपयुक्त आकार में दृश्य क्षेत्र की गहराई को समायोजित करें। स्क्रीन के निचले भाग पर क्षैतिज पट्टी के साथ बटन को स्लाइड करके ग्रे स्केल लाभ समायोजित करें।फिर, फोकल ज़ोन को थाइमस के प्रत्याशित स्तर पर समायोजित करें। ट्रांसड्यूसर की सतह पर लगभग एक मिलीलीटर अल्ट्रासाउंड जेल लागू करें, जबकि यह सीधा है, या तो अल्ट्रासाउंड मशीन धारक में आराम कर रहा है या एक सहायक के हाथों में है। गर्म मंच के बगल में एक छोटा बाँझ क्षेत्र तैयार करने के लिए, बाँझ क्षेत्र पर एक बाँझ जांच कवर, रबर बैंड, बाँझ दस्ताने और बाँझ अल्ट्रासाउंड जेल खाली करें।फिर, बाँझ दस्ताने पहनें। अल्ट्रासाउंड ट्रांसड्यूसर और जेल पर बाँझ जांच कवर को सावधानीपूर्वक रखें। बाँझपन बनाए रखने के लिए, केवल बाँझ कवर को स्पर्श करें।इसे रखने के लिए प्रोब कवर पर बाँझ रबर बैंड को स्लाइड करें। ट्रांसड्यूसर पर बाँझ अल्ट्रासाउंड जेल के दो से तीन मिलीलीटर रखें। बाँझपन बनाए रखते हुए प्रारंभिक इमेजिंग के लिए माउस की पूर्ववर्ती छाती की दीवार के कीटाणुरहित हिस्से पर अल्ट्रासाउंड जेल-टॉप जांच को लंबवत रखें।अल्ट्रासाउंड छवि को देखें और अनुकूलित करें जैसा कि पहले दिखाया गया है। अनुप्रस्थ विमान में माउस की पूर्ववर्ती छाती को स्कैन करने के लिए, ट्रांसड्यूसर को लंबवत रूप से पकड़ें और इसे पेंटब्रश जैसी या स्वीपिंग गति में गर्दन से पेट तक ऊपर और नीचे ले जाएं। दृश्य के क्षेत्र में केंद्रित हृदय के साथ, ट्रांसड्यूसर को गर्दन की ओर थोड़ा सा घुमाएं।ऊपरी छाती के दोनों ओर दो गोल युग्मित काली संरचनाओं पर ध्यान दें। अल्ट्रासाउंड जांच का उपयोग करके, थाइमस के सबसे चौड़े हिस्से का पता लगाएं, जो आमतौर पर इंजेक्शन के लिए आदर्श लक्ष्य साइट है। चुने हुए स्थान में एक क्षैतिज सुई प्रक्षेपवक्र का अनुमान लगाएं, और ध्यान दें कि इस साइट पर प्रमुख रक्त वाहिकाएं कहां स्थित हैं।इंजेक्शन के दौरान इन वाहिकाओं से बचना चाहिए। रक्त वाहिकाएं हाइपोइकोइक पल्सटाइल संरचनाएं होंगी। यदि अनिश्चित है, तो जहाजों के भीतर प्रवाह की जांच करने के लिए स्क्रीन पर रंग बटन टैप करके रंग डॉपलर मोड को सक्रिय करें।ट्रांसड्यूसर को एक हाथ में पकड़ें और दूसरे में 10 माइक्रोलीटर इंजेक्शन के साथ 30-गेज इंसुलिन सुई रखें। इंजेक्शन प्रक्रिया शुरू करने के लिए, ट्रांसड्यूसर को पार्श्व रूप से स्थानांतरित करें ताकि थाइमस देखने के अल्ट्रासाउंड क्षेत्र में ऑफ-सेंटर हो। सुनिश्चित करें कि दृश्य के क्षेत्र के दूसरे पक्ष में ज्यादातर अल्ट्रासाउंड जेल होते हैं और कुछ नहीं।ट्रांसड्यूसर के नीचे जेल में सुई की नोक रखें, और धीरे-धीरे सुई को तब तक स्थानांतरित करें जब तक कि यह त्वचा की सतह से सटे न हो। अल्ट्रासाउंड के तहत सुई को लगातार इमेजिंग करते समय, सुई को रक्त वाहिकाओं से दूर पर्क्यूटेनियस प्रक्षेपवक्र के साथ थाइमस ग्रंथि में डालें। प्रवेश स्थल के विपरीत थाइमिक लोब में सुई की नोक रखने के लिए एक क्रॉस थाइमस क्षैतिज प्रक्षेपवक्र का उपयोग करें।एक बार जब सुई की नोक थाइमस के वांछित हिस्से के अंदर होती है, तो सोनोग्राफिक विज़ुअलाइज़ेशन का उपयोग करते हुए 30-गेज सिरिंज से सामग्री को जल्दी से इंजेक्ट करें। सुई सम्मिलन और इंजेक्शन के दौरान सिरिंज को स्थिर करने के लिए, अंगूठे और तीसरी उंगली के बीच सिरिंज को पकड़ें, और तर्जनी उंगली के साथ सिरिंज प्लंजर को नियंत्रित करें। सभी सामग्री जमा होने के बाद सुई को हटा दें।युवा चूहों में, ग्रंथि के बड़े आकार के कारण थाइमस ग्रंथि की पहचान करना सीधा था। यह पुराने या इम्यूनोडेफिशिएंसी चूहों में अधिक चुनौतीपूर्ण था। हालांकि, यह अभी भी आधुनिक अल्ट्रासाउंड उपकरणों के साथ बहुत संभव था।सफल इंजेक्शन का उल्लेख तब किया गया था जब सुई महत्वपूर्ण संरचनाओं को पार नहीं करती थी, जैसे कि हृदय, महाधमनी, या अवर वेना कैवे में से एक। इंजेक्शन के दौरान सुई की नोक को उसके लक्षित स्थान पर देखा गया था, जो इंट्राथिमिक जमाव की पुष्टि करता है। ल्यूसिफेरिन ट्रांसजेनिक चूहों में इंजेक्शन के रूप में लूसिफेरिन का उपयोग करके इंजेक्शन के इंट्राथिमिक स्थान की पुष्टि की गई थी।इनका मूल्यांकन बायोलुमिनेसेंस इमेजिंग के साथ तुरंत किया गया था, जो जानवर की बलि दिए बिना इंजेक्शन के सही स्थान की पुष्टि करता है। वैकल्पिक रूप से, ट्रिपैन ब्लू को इंजेक्शन साइट के दृश्य मार्कर के रूप में इंजेक्ट किया गया था और नेक्रोपसी के साथ एक्स विवो का उपयोग करके इंजेक्शन सटीकता थी। हमारा समूह आनुवंशिक रूप से संशोधित पूर्वज कोशिकाओं के इंजेक्शन के आधार पर और इम्यूनोडेफिशिएंसी चूहों में थाइमिक फ़ंक्शन में सुधार करने के लिए कैंसर इम्यूनोथेरेपी अनुसंधान सहित कई बड़े अध्ययनों के लिए इस तकनीक का उपयोग कर रहा है।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

ल्युकोसैट घर वापस आना और प्रवासन की गैर इनवेसिव इमेजिंग Vivo में</em

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

भ्रूण चूहों में vasculature लेबल के लिए एक विधि

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

गैर इनवेसिव एक माउस के लसीका वाहिका संरचना के ऑप्टिकल इमेजिंग

The lymphatic  vascular system is an important component of the circulatory system that  maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

के 4D multimodality इमेजिंग<em&gt; Citrobacter rodentium</emचूहे में&gt; संक्रमण

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Systemic Injection of Neural Stem/Progenitor Cells in Mice with Chronic EAE

क्रोनिक EAE के साथ चूहों में तंत्रिका स्टेम / पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं के प्रणालीगत इंजेक्शन

Neural stem/precursor cells (NPCs) are a promising stem cell source for transplantation approaches aiming at brain repair or restoration in regenerative ...

An Efficient and High Yield Method for Isolation of Mouse Dendritic Cell Subsets

माउस वृक्ष के समान सेल सबसेट के अलगाव के लिए एक कुशल और उच्च उपज विधि

Dendritic cells (DCs) are professional antigen-presenting cells primarily responsible for acquiring, processing and presenting antigens on antigen ...

A Simple and Efficient Approach to Construct Mutant Vaccinia Virus Vectors

एक सरल और कुशल दृष्टिकोण उत्परिवर्ती चेचक वायरस वैक्टर का निर्माण करने के लिए

The CRISPR-associated endonuclease Cas9 can edit particular genomic loci directed by a single guide RNA (gRNA). The CRISPR/Cas9 system has been ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

चूहे में प्रेरण और प्रायोगिक बैक्टीरियल निमोनिया की phenotyping के लिए एक गैर-आक्रामक और तकनीकी तौर पर गैर-गहन विधि

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Neuromyelitis Optica के लिए विशिष्ट टी कोशिकाओं द्वारा चूहों में पक्षाघात और दृश्य प्रणाली चोट की प्रेरण Aquaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Highly Efficient Transfection of Primary Macrophages with In Vitro Transcribed mRNA

इन विट्रो लिखित एमआरएनए के साथ प्राथमिक मैक्रोफेज का अत्यधिक कुशल ट्रांसफेक्शन

Macrophages are phagocytic cells specialized in detecting molecules of non-self origin. To this end, they are equipped with a large array of pattern ...