Name: a minimally invasive, accurate, and efficient technique for intrathymic injection in mice
Uploaded: 2022-08-23T14:00:00
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이 기술에 대한 통찰력 있고 포괄적 인 초기 작업에 대해 Raymond H. Thornton에게 감사드립니다. 이 연구는 국립 암 연구소 (NCI 1R37CA250661-01A1), 어린이 백혈병 연구 협회, Hackensack Meridian School of Medicine 및 HUMC Foundation / Tackle Kids Cancer의 보조금 지원으로 지원되었습니다.

모든 절차는 발견 및 혁신 센터 (IACUC 프로토콜 290)의 동물 관리 지침에 따라 수행되었습니다. 본 연구를 위해, C57BL/6 마우스 (암컷, 4-6주령), C57BL/6 마우스 (암컷, 6개월령), J:NU 암컷 마우스, NOD scid 감마 (NSG) 암컷 마우스, 및 B6; CAG-luc, -GFP 마우스를 각각 젊은 마우스 모델, 노화된 마우스 모델, 무흉선 누드 모델, 면역결핍 모델, 및 생물발광 세포 공급원으로서 사용하였다. 마우스는 상업적 공급원으?...

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	<li>Chinn, I. K., Blackburn, C. C., Manley, N. R., Sempowski, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+primary+lymphoid+organs+with+aging.">Changes in primary lymphoid organs with aging.</a> Seminars in Immunology. 24 (5), 309-320 (2012).</li><li>Gruver, A. L., Sempowski, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokines,+leptin,+and+stress-induced+thymic+atrophy.">Cytokines, leptin, and stress-induced thymic atrophy.</a> Journal of Leukocyte Biology. 84 (4), 915-923 (2008).</li><li>Masopust, D., Sivula, C. P., Jameson, S. 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A., Bhandoola, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+hematopoietic+progenitors+with+T+lineage+potential.">Circulating hematopoietic progenitors with T lineage potential.</a> Nature Immunology. 5 (9), 953-960 (2004).</li><li>Marodon, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+antigen-specific+tolerance+by+intrathymic+injection+of+lentiviral+vectors.">Induction of antigen-specific tolerance by intrathymic injection of lentiviral vectors.</a> Blood. 108 (9), 2972-2978 (2006).</li><li>Adjali, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+correction+of+ZAP-70+immunodeficiency+by+intrathymic+gene+transfer.">In vivo correction of ZAP-70 immunodeficiency by intrathymic gene transfer.</a> Journal of Clinical Investigation. 115 (8), 2287-2295 (2005).</li><li>Tuckett, A. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image-guided+intrathymic+injection+of+multipotent+stem+cells+supports+life-long+T+cell+immunity+and+facilitates+targeted+immunotherapy.">Image-guided intrathymic injection of multipotent stem cells supports life-long T cell immunity and facilitates targeted immunotherapy.</a> Blood. 123 (18), 2797-2805 (2014).</li><li>Tuckett, A. Z., Thornton, R. H., O'Reilly, R. J., vanden Brink, M. R. M., Zakrzewski, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrathymic+injection+of+hematopoietic+progenitor+cells+establishes+functional+T+cell+development+in+a+mouse+model+of+severe+combined+immunodeficiency.">Intrathymic injection of hematopoietic progenitor cells establishes functional T cell development in a mouse model of severe combined immunodeficiency.</a> Journal of Hematology &amp; Oncology. 10 (1), 109 (2017).</li><li>Hogan, B. V., Peter, M. B., Shenoy, H. G., Horgan, K., Hughes, T. 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H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free-hand+ultrasound+guidance+permits+safe+and+efficient+minimally+invasive+intrathymic+injections+in+both+young+and+aged+mice.">Free-hand ultrasound guidance permits safe and efficient minimally invasive intrathymic injections in both young and aged mice.</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 41 (4), 1105-1111 (2015).</li><li>K&#252;ker, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+value+of+necropsy+reports+for+animal+health+surveillance.">The value of necropsy reports for animal health surveillance.</a> BMC Veterinary Research. 14 (1), 191 (2018).</li><li>Sinclair, C., Bains, I., Yates, A. J., Seddon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+thymocyte+death+underlies+the+CD4:CD8+T-cell+ratio+in+the+adaptive+immune+system.">Asymmetric thymocyte death underlies the CD4:CD8 T-cell ratio in the adaptive immune system.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (31), 2905-2914 (2013).</li><li>Manna, S., Bhandoola, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrathymic+injection.">Intrathymic injection.</a> Methods in Molecular Biology. 1323, 203-209 (2016).</li><li>de la Cueva, T., Naranjo, A., de la Cueva, E., Rubio, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refinement+of+intrathymic+injection+in+mice.">Refinement of intrathymic injection in mice.</a> Laboratory Animals. 36 (5), 27-32 (2007).</li></ol>

초음파 유도 자유 손 주사는 효율적이고 무균 방식으로 흉선에 연구 자료를 전달하는 매우 정확한 기술입니다. 주사 부위에서 피부의 초기 멸균 후, 멸균 장갑, 멸균 초음파 프로브 커버 및 멸균 초음파 젤의 사용으로 인해 절차 중에 멸균이 유지됩니다. 맹검 경피적 접근법 10,17 또는 마우스의 흉선 내 주사에 일반적으로 사용되는 방법 인 흉선18,19의 직접 시각화를위한 외과 적 ?...

흉선은 T 세포 발달과 면역에 필수적인 역할을합니다. 흉선 침범, 유전 질환, 감염 및 암 치료로 인해 발생할 수 있는 T 세포 결핍은 높은 사망률과 이환율을 유발합니다1,2. 마우스 모델은 기초 및 중개 면역학 연구 모두에서 없어서는 안될 필수 요소이며 흉선 생물학 및 T 세포 발달을 연구하고 흉선 기능 장애 및 T 세포 결핍으로 고통받는 사람들을위한 치료법을 개발하는 데 수십 년 동안 사용되어 왔습니다 3,4,5.
흉선 조사 의 중심 부분은 마우스 모델 6,7,8,9,10,11,12 에서 세포, 유전자 또는 단백질과 같은 생물학적 물질의 흉선 내 주입이었습니다. 기존의 흉강 내 주사 방법은 개흉술 후 직접 시각화 또는 종격동으로의 "맹검" 경피 주사를 사용하는 흉강내 주사를 사용합니다. 외과적 접근은 무엇보다도 기흉 위험을 크게 증가시킵니다. 더욱이, 이 수술 중 상승된 스트레스는 면역억제를 초래하여 잠재적으로 면역학적 데이터를 손상시킬 수 있다13. 숙련 된 연구자들은 약간의 연습을 한 후에 블라인드 주사 기술을 수행 할 수 있지만이 접근법은 정확도가 떨어지므로 실험 대상을 큰 흉선을 가진 어린 마우스로 제한합니다.
초음파 유도의 활용은 전통적인 흉강 내 주사 접근법14에 대한 정확하고 최소 침습적 대안으로 도입되었습니다. 그러나이 절차는 자유형 기술 대신 통합 레일 시스템을 사용할 때 매우 시간이 많이 걸립니다. 주입 마운트로 주입을 수행하려면 변환기 스탠드 및 마운트, X, Y 및 Z 위치 지정 시스템과 같은 다양한 부착물을 사용하여 변환기를 신중하게 이미징하고 위치를 지정해야 하며 미세 조작 제어 장치 및 레일 시스템 확장의 능숙한 작동이 필요합니다. 간단한 대체 기술인 초음파 유도 흉선 주사가 자유형 접근법(15)을 사용하여 방사선 전문의에 의해 수행되며, 이는 상술한 방법에 대한 신속하고 정확한 최소 침습적 대안이다. 중요한 것은 현재의 접근 방식은 주입 마운트 및 통합 레일 시스템 없이 모든 고해상도 초음파 이미징 시스템으로 수행할 수 있다는 것입니다. 이는 많은 수의 마우스(11)의 주사를 필요로 하는 연구, 양쪽 흉선엽의 주사를 포함하는 실험, 또는 노화, 방사선 조사 또는 면역이 저하된 마우스(12)에서 작은 흉선의 정확한 주사에 특히 유용하다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aquasonic 100 Ultrasound Gel</td>
			<td>Parker Laboratories (Fairfield, NJ, USA)</td>
			<td>01-01</td>
			<td>Sterile Ultrasound Transmission Gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6;CAG-luc, -GFP mouse</td>
			<td>The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA)</td>
			<td>025854</td>
			<td>Bioluminescence cell source</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Insulin Syringes with needle</td>
			<td>Becton Dickinson (Franklin Lakes, NJ, USA)</td>
			<td>328431</td>
			<td>Ultra-fine needle - 12.7 mm, 30 G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mouse - aged</td>
			<td>The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA)</td>
			<td>000664</td>
			<td>age 6 months old; aged model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mouse - young</td>
			<td>The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA)</td>
			<td>000664</td>
			<td>age 4-6 weeks; young model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloraprep One-step 0.67 mL</td>
			<td>CareFusion (El Paso, TX, USA)</td>
			<td>260449</td>
			<td>chlorhexidine gluconate applicator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curity Cotton Tipped Applicator</td>
			<td>Cardinal Health (Dublin, OH, USA)</td>
			<td>A5000-2</td>
			<td>Sterile, 6&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin</td>
			<td>Gold Biotechnology (St Louis, MO, USA)</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein (Melville, NY, USA)</td>
			<td>1182097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina X5</td>
			<td>PerkinElmer (Melville, NY, USA)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>In vivo bioluminescence imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>J:NU mouse</td>
			<td>The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA)</td>
			<td>007850</td>
			<td>Athymic nude model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kendall Hypoallergenic Paper Tape</td>
			<td>Cardinal Health (Dublin, OH, USA)</td>
			<td>1914C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimtech Surgical Nitrile Gloves</td>
			<td>Kimberly-Clark Professional (Irving, TX, USA)</td>
			<td>56892</td>
			<td>Sterile Gloves</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair Hair Remover Lotion</td>
			<td>Church and Dwight (Trenton, NJ, USA)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Depilatory agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD scid gamma (NSG) mouse</td>
			<td>The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME, USA)</td>
			<td>005557</td>
			<td>Immunodeficient model</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline (PBS), 1x</td>
			<td>Corning (Corning, NY, USA)</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Vet Ointment</td>
			<td>Med Vet International</td>
			<td>PH-PURALUBE-VET</td>
			<td>Eye ointment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sheathes</td>
			<td>Sheathing Technologies (Morgan Hill, CA, USA)</td>
			<td>10040</td>
			<td>Sterile Ultrasound Probe Covers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sure-Seal Induction Chamber</td>
			<td>Braintree Scientific (Braintree, MA, USA)</td>
			<td>EZ-17 85</td>
			<td>Anesthesia induction chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transducer MX550D</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics (Toronto, ON, Canada)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Vevo 3100 imaging probe (25-55 MHz, Centre Transmit: 40 MHz)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue, 0.4% solution in PBS</td>
			<td>MP Biomedicals (Solon, OH, USA)</td>
			<td>91691049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Imaging System</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics (Toronto, ON, Canada)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Ultrasound imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Lab Software</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics (Toronto, ON, Canada)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Version 3.2.7 for imaging and analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Compact Dual Anesthesia System</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics (Toronto, ON, Canada)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Tabletop isoflurane-based anesthesia unit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Imaging Station</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics (Toronto, ON, Canada)</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Procedural platform</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a minimally invasive, accurate, and efficient technique for intrathymic injection in mice

마우스 모델에서 흉선내 주사는 유전 및 후천성 T 세포 장애를 포함한 흉선 및 면역 기능을 연구하는 중요한 기술입니다. 이를 위해서는 시약 및/또는 세포를 살아있는 마우스의 흉선에 직접 침착시키는 방법이 필요합니다. 흉강 내 주사의 전통적인 방법에는 흉부 수술 또는 최소 침습 경피적 맹검 주사가 포함되며 둘 다 상당한 한계가 있습니다. 초고주파 초음파 영상 장치는 마우스에서 이미지 유도 경피 주사를 가능하게 하여 경피적 주사 접근 방식의 주입 정확도를 크게 향상시키고 더 작은 표적의 주입을 가능하게 합니다. 그러나 이미지 유도 주입은 통합 레일 시스템의 활용에 의존하므로 엄격하고 시간이 많이 소요되는 절차입니다. 마우스에서 경피적 흉선 내 주사를 위한 독특하고 안전하며 효율적인 방법이 여기에 제시되어 주사를 위한 레일 시스템에 대한 의존도를 제거합니다. 이 기술은 고해상도 마이크로 초음파 장치를 사용하여 마우스 흉선을 비 침습적으로 이미지화하는 데 의존합니다. 자유형 기술을 사용하여 방사선 전문의는 초음파 안내에 따라 바늘 끝을 마우스 흉선에 직접 놓을 수 있습니다. 마우스는 이미징 전에 세척되고 마취됩니다. 초음파 유도 절차에 능숙한 숙련된 방사선 전문의의 경우 명시된 기술에 대한 학습 기간은 일반적으로 한 세션 내에서 매우 짧습니다. 이 방법은 마우스에 대한 이환율과 사망률이 낮고 경피 주사를위한 현재의 기계적 보조 기술보다 훨씬 빠릅니다. 이를 통해 조사자는 동물에 대한 스트레스를 최소화하면서 모든 크기의 흉선 (노화 또는 면역 결핍 마우스의 흉선과 같은 매우 작은 기관 포함)의 정확하고 신뢰할 수있는 경피 주사를 효율적으로 수행 할 수 있습니다. 이 방법은 원하는 경우 개별 로브를 주입할 수 있으며 절차의 시간 절약 특성으로 인해 대규모 실험을 용이하게 합니다.

이 기술을 성공적으로 구현하려면 따라야 할 몇 가지 주요 단계가 필요합니다. 첫째, 흉선 자체의 확실한 식별이 보장되어야합니다. 어린 생쥐의 경우 샘의 크기가 크기 때문에 간단합니다 (그림 3A). 나이가 많은 마우스나 면역 결핍 마우스에서는 더 어려울 수 있습니다. 그러나 최신 초음파 장비로는 여전히 매우 실현 가능합니다 (그림 3B, C</stron...

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A Minimally Invasive, Accurate, and Efficient Technique for Intrathymic Injection in Mice

본 프로토콜은 개복 수술의 위험을 피하고 맹검 경피 주사의 정확도를 향상시키기 위해 마우스에서 흉선 내 주사를 위해 확립 된 중재 적 방사선 절차를 설명합니다.

마우스에서 흉강내 주사를 위한 최소 침습적이고 정확하며 효율적인 기술

Intrathymic injection in mouse models is an important technique for studying thymic and immune function, including genetic and acquired T cell disorders. ...

이 프로토콜은 기존의 수술 및 맹검 주사 방법에 대한 정확하고 안전하며 효율적인 비수술적 대안을 제공합니다. 또한 노화 또는 면역 결핍 마우스의 위축 흉선에 대한 가장 정확한 주사 기술입니다. 주요 장점은 매우 안전하고 정확하지만 신속한 최소한의 스트레스 주사 절차이므로 외과 적 스트레스 관련 면역 억제로 인한 데이터 손상없이 대규모 실험이 가능합니다.바늘과 변환기의 정렬을 유지하면서 흉벽을 통해 전진하려면 약간의 연습이 필요합니다. 따라서 경험이 풍부한 중재적 방사선 전문의와 협력하여 주사를 수행하거나 교육을 제공하는 것이 좋습니다. 절차를 시연하는 데 도움이되는 것은 내 실험실의 기술자 인 Shaina Anuncio입니다.시작하려면 모피를 제거하기 위해 1 분 미만 동안 마우스의 앞쪽 가슴 부위에 얇은 제모 크림을 바르십시오. 젖은 종이 타월을 사용하여 크림과 느슨한 털을 제거하십시오. 뒷발 핀치에 반응하지 않아 적절한 마취 깊이를 확인하십시오.각막 건조를 방지하기 위해 양쪽 눈에 안과 연고를 바르십시오. 코 콘이 제자리에 있는 작은 동물 초음파 이미징 스테이션의 가열된 플랫폼의 앙와위 위치에 한 번에 한 마리의 마우스를 놓습니다. 뒷다리와 앞다리에 의료용 접착 테이프로 마우스를 무대에 고정합니다.클로르헥시딘 글루코 네이트 애플리케이터를 사용하여 털이없는 상부 흉부 피부를 소독하십시오. 사용 가능한 가장 높은 주파수 선형 프로브를 활성화합니다. 전형적으로, 프로브는 이미징되는 동물의 크기에 대해 가장 높은 공간 해상도를 갖는다.시작 화면 후 해당 버튼을 눌러 프로브를 활성화합니다. 이미징 및 주입을 위한 초음파 설정을 최적화하려면 화면 오른쪽에 있는 수직 방향 슬라이더를 조정하여 시야 깊이를 대상 동물에 적합한 크기로 조정합니다. 화면 하단의 수평 막대를 따라 버튼을 밀어 그레이 스케일 게인을 조정합니다.그런 다음 초점 영역을 흉선의 예상 수준으로 조정하십시오. 트랜스듀서 표면에 약 1밀리리터의 초음파 젤을 바르고 똑바로 서 있는 동안 초음파 기계 홀더에 놓거나 조수의 손에 놓습니다. 가열된 플랫폼 옆에 작은 멸균 필드를 준비하려면 멸균 프로브 커버, 고무 밴드, 멸균 장갑 및 멸균 초음파 젤을 멸균 필드에 비웁니다.그런 다음 멸균 장갑을 착용하십시오. 멸균 프로브 덮개를 초음파 변환기와 젤 위에 조심스럽게 놓습니다. 멸균 상태를 유지하려면 멸균 덮개 만 만지십시오.멸균 고무 밴드를 프로브 덮개 위로 밀어 제자리에 고정합니다. 2-3 밀리리터의 멸균 초음파 젤을 변환기에 놓습니다. 초음파 젤로 덮인 프로브를 초기 이미징을 위해 마우스 전방 흉벽의 소독 된 부분에 수직으로 놓고 무균 상태를 유지합니다.앞에서 설명한 대로 초음파 이미지를 보고 최적화합니다. 횡단면에서 마우스의 앞쪽 가슴을 스캔하려면 변환기를 수직으로 잡고 붓 모양 또는 쓸어 넘기는 동작으로 목에서 복부까지 위아래로 움직입니다. 심장이 시야 중앙에 오도록 하여 변환기를 목 쪽으로 약간 쓸어넘깁니다.가슴 위쪽의 양쪽에 있는 두 개의 둥근 쌍을 이루는 검은색 구조를 주목하십시오. 초음파 프로브를 사용하여 일반적으로 주사에 이상적인 표적 부위 인 흉선의 가장 넓은 부분을 찾습니다. 선택한 위치에서 수평 바늘 궤적을 예상하고 이 위치에서 주요 혈관이 어디에 있는지 확인합니다.이 혈관은 주사하는 동안 피해야합니다. 혈관은 저 에코 박동성 구조가 될 것입니다. 확실하지 않은 경우 화면의 색상 버튼을 눌러 컬러 도플러 모드를 활성화하여 용기 내부의 흐름을 확인하십시오.한 손에는 변환기를 잡고 다른 한 손에는 30마이크로리터의 주사제가 있는 10게이지 인슐린 바늘을 잡습니다. 주입 과정을 시작하려면 흉선이 초음파 시야에서 중심에서 벗어나도록 변환기를 옆으로 움직입니다. 시야의 다른 쪽이 대부분 초음파 젤로 구성되어 있는지 확인하십시오.변환기 아래의 젤에 바늘 끝을 놓고 바늘이 피부 표면에 인접하여 시각화 될 때까지 바늘을 천천히 움직입니다. 초음파 하에서 바늘을 지속적으로 이미징하면서 혈관에서 떨어진 경피적 궤적으로 흉선에 바늘을 삽입하십시오. 교차 흉선 수평 궤적을 사용하여 바늘 끝을 진입 부위의 반대쪽 흉선 엽에 놓습니다.바늘 끝이 흉선의 원하는 부분 안에 있으면 초음파 시각화를 사용하면서 30게이지 주사기의 내용물을 빠르게 주입합니다. 바늘 삽입 및 주입 중에 주사기를 안정화하려면 엄지와 세 번째 손가락 사이에 주사기를 잡고 집게 손가락으로 주사기 플런저를 제어합니다. 모든 내용물이 입금 된 후 바늘을 제거하십시오.어린 생쥐에서는 흉선의 크기가 크기 때문에 흉선을 식별하는 것이 간단했습니다. 나이가 많거나 면역 결핍 마우스에서 더 어려웠습니다. 그러나 현대 초음파 장비로는 여전히 실현 가능했습니다.성공적인 주사는 바늘이 심장, 대동맥 또는 하대 정맥 중 하나와 같은 중요한 구조를 통과하지 않을 때 나타났습니다. 바늘 끝은 주사 동안 목표 위치에서 시각화되어 흉선 내 침착을 확인했습니다. 주사의 흉선 내 위치는 루시페린을 루시페라아제 형질전환 마우스에 주사액으로 사용하여 확인하였다.이들은 생물 발광 영상으로 즉시 평가되어 동물을 희생하지 않고 주사의 정확한 위치를 확인했습니다. 또는, Trypan Blue는 부검과 함께 ex vivo를 사용하여 주사 부위 및 주입 정확도의 시각적 마커로 주입되었습니다. 우리 그룹은 유전자 변형 전구 세포의 주입을 기반으로 한 암 면역 요법 연구를 포함한 여러 대규모 연구와 면역 결핍 마우스의 흉선 기능 개선에이 기술을 사용해 왔습니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

백혈구 호밍 및 마이 그 레이션의 비침습 영상 생체내에</em

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

연구

면역학 및 감염병학

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

배아 마우스에 Vasculature을 라벨링하는 방법

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

마우스의 림프 Vasculature의 비 침습적 광학 이미징

The lymphatic  vascular system is an important component of the circulatory system that  maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

의 4D 좌석 Multimodality 이미징<em&gt; Citrobacter rodentium</em마우스에서&gt; 감염

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Systemic Injection of Neural Stem/Progenitor Cells in Mice with Chronic EAE

만성 EAE와 마우스의 신경 줄기 / 전구 세포의 전신 주입

Neural stem/precursor cells (NPCs) are a promising stem cell source for transplantation approaches aiming at brain repair or restoration in regenerative ...

An Efficient and High Yield Method for Isolation of Mouse Dendritic Cell Subsets

마우스 수지상 세포 하위 집합의 분리를위한 효율적이고 높은 수율 방법

Dendritic cells (DCs) are professional antigen-presenting cells primarily responsible for acquiring, processing and presenting antigens on antigen ...

A Simple and Efficient Approach to Construct Mutant Vaccinia Virus Vectors

간단하고 효율적인 접근 방법은 돌연변이 백시 니아 바이러스 벡터를 구축하기

The CRISPR-associated endonuclease Cas9 can edit particular genomic loci directed by a single guide RNA (gRNA). The CRISPR/Cas9 system has been ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

마우스의 실험 세균성 폐렴의 유도 및 표현형에 대한 비 침습적 및 기술적 비 집약적 인 방법

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

마비 및 비주얼 시스템 부상 Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4에 대 한 T 세포 관련 하 여 쥐에서의 유도

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Highly Efficient Transfection of Primary Macrophages with In Vitro Transcribed mRNA

체외 전사 mRNA를 가진 1 차적인 대식세포의 고효율 형질감염

Macrophages are phagocytic cells specialized in detecting molecules of non-self origin. To this end, they are equipped with a large array of pattern ...