Name: development of a uterosacral ligament suspension rat model
Uploaded: 2022-08-17T14:30:00
Duration: 8 min 58 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model at JoVE.com

نشكر البروفيسور سيلفيا بليمكر على استخدام Instron الخاص بها والبروفيسور جورج المسيح لاستخدام مساحته الجراحية بالإضافة إلى حامل وقبضة مطبوعة 3D. تم دعم هذا العمل من قبل شراكة الأبحاث الانتقالية UVA-Coulter ووزارة الدفاع (W81XWH-19-1-0157).

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

يتميز البروتوكول بالعديد من المزايا. على حد علمنا، هذا هو أول وصف منشور لمنتدى القيادة للمثقفين الجامعيين (USLS) في نموذج الفئران، وسوف يزود الباحثين المستقبليين بخطوات قابلة للتكرار لتنفيذ هذا الإجراء في بيئة البحث. ثانيا، قمنا بتضمين بروتوكول جديد لاختبار الشد للواجهة الأصلية والجراحية ل USL. يمكن استخدام بروتوكول اختبار الشد في دراسات مماثلة تبحث في مناهج هندسة الأنسجة الجديدة لزيادة إصلاحات الأنسجة الأصلية مثل USLS. علاوة على ذلك ، فإن نموذج الفئران نفسه مفيد لدراسة اضطرابات قاع الحوض بسبب سهولة التعامل / الصعود ، والعمر القصير ، وفعالية التكلفة مقارنة بالنماذج الحيوانية الأكبر. تشمل قيود البروتوكول عدم القدرة على تقييم أحد المضاعفات الرئيسية للمثقفين الجامعيين الجامعيين، وهو التواء الحالب. على الرغم من ذلك ، لم يكن لدينا أي حالات إصابة حالب مفترضة في هذه الدراسة. هناك اعتبار آخر هو أن الاتجاه الأفقي للحوض ، ونسبة قناة رأس الجنين إلى الولادة الصغيرة ، وعدم وجود هبوط تلقائي في نموذج الفئران يحد من بعض قابلية تطبيق النتائج على البشر. ومع ذلك، فإن استخدام الفئران متعددة الشقوق هو أحد نقاط قوة هذه الدراسة لأن هذا يمثل عامل الخطر الرئيسي في تطور الملوثات العضوية الثابتة3.
سيكون إنشاء بروتوكول ناجح لاستئصال الرحم ومنتدى القيادة للمثقفين الجامعيين (USLS) في فأر لويس أداة مفيدة للباحثين المستقبليين الذين يبحثون في المكونات الجراحية للملوثات العضوية الثابتة، مع تقليل التباين في اختبار السلوك الميكانيكي ل USL. النماذج الحيوانية الجراحية مفيدة من حيث أنها تسمح للباحثين بتصميم تجارب ذات صلة سريريا تتحكم في التكافؤ وكتلة الجسم والمرض والتغذية34 مع التخفيف من المخاطر الأخلاقية للدراسة الأولية على البشر. علاوة على ذلك ، تسمح النماذج الموحدة للملوثات العضوية الثابتة للباحثين بتجاوز قيود جمع الأنسجة البشرية. على وجه الخصوص ، ستمكن طرق اختبار الشد الموضحة في هذا البروتوكول من الاتساق بين الدراسات. اختبرت نماذج القوارض السابقة الخواص الميكانيكية لمنطقة الحوض بأكملها ، والتي تشمل عنق الرحم والمهبل وأربطة دعم الحوضالمتعددة 29,42. تسمح الطرق الموضحة هنا بقياس USL بطريقة تحافظ على مرفقات العمود الفقري وعنق الرحم الأصلية. وتجدر الإشارة إلى أن طرق اختبار الشد لا تقيم USL وحدها، بل تقيم USL بالاقتران مع إدخاله في العجز وعنق الرحم. هذه هي قوة الدراسة لأنها تعكس القوى المعتادة في الموقع التي يتعرض لها الرباط. نحن نقر بأن السلوك الميكانيكي للرباط المعزول سيكون مختلفا إذا تم اختباره خارج الجسم الحي بدون ملحقاته الأصلية. هذا صحيح بشكل خاص لأن هياكل الفئران صغيرة وتحد من جدوى جمع عينة مناسبة للاختبار خارج الجسم الحي. تواجه USLs التحميل في اتجاهات متعددة في الموقع، لذا فإن الطبيعة أحادية المحور للاختبار هي قيد، ولكن استخدام هذه الطريقة يسمح بإجراء مقارنات ذات مغزى بين الدراسات السابقة لميكانيكا USL للفئران29,42. على الرغم من عدم وجود بروتوكول اختبار ميكانيكي قياسي مقبول على نطاق واسع ، إلا أن هذا النموذج سيكون أداة مفيدة لدراسات هندسة الأنسجة المستقبلية في هذا المجال.
تعتبر العديد من الخطوات الموضحة في هذا البروتوكول ضرورية لصحة الحيوانات ورفاهيتها بالإضافة إلى إمكانية استنساخ جراحة USLS واختبارات الشد اللاحقة. أولا ، من الضروري الحصول على كل من الأدوية المسكنة والمضادة للالتهابات الموصوفة بأنها مسكن وحده وجد أنه غير كاف لإدارة الألم. يقلل المضاد الحيوي الوقائي من خطر الإصابة بعدوى موقع الجراحة وهو معيار الرعاية في الجراحة البشرية. فيما يتعلق بالإجراء الجراحي للمثقفين الجامعيين الجامعيين (USLS)، فإن تجنب تلف المبيضين وتقليل فقدان الدم أمران ضروريان لإجراء عملية جراحية ناجحة. تصف الخطوتان 1.3.3 و 1.3.4 فصل الجزء العلوي من قرن الرحم عن المبيض المجاور ؛ يجب توخي الحذر للحفاظ على هذا التشريح على جانب قرن الرحم لمنع تعطيل الأوعية الحساسة حول المبيض ، مما قد يؤدي إلى نزيف مفرط. وتجدر الإشارة إلى أن محققين آخرين أظهروا أن وظيفة المبيض يتم الحفاظ عليها بعد إزالة قرون الرحم43. علاوة على ذلك ، إذا تعطلت المبايض أو أزيلت ، فسوف تنزعج بنية ألياف الكولاجين الكلية ، مما يؤدي إلى تغيير الخواص الميكانيكية لأنسجتها44,45. بمجرد فصل قرن الرحم بأمان عن المبيض ، هناك مستوى واضح من التشريح يسمح بعزل قرن الرحم عن منصات الدهون والأوعية الدموية المحيطة. على الرغم من مستوى التشريح الواضح ، يجب تأمين عنيق على طول قرن الرحم بمشبك قبل الاستئصال بمقص صغير. على عكس الممارسة الجراحية في البشر ، وجدنا أن ربط خياطة عنيق استئصال الرحم غير ضروري ، لأن تثبيت عنيق قبل النقل يضمن الإرقاء المناسب. تصف الخطوة 1.3.6 من البروتوكول هذه العملية الدقيقة لتقليل فقدان الدم. أثناء إجراء استئصال الرحم ، يجب توخي الحذر الشديد لتحديد الحالب كما هو مذكور في الخطوتين 1.3.6 و 1.3.8. يعد فهم القرب التشريحي للحالب أمرا بالغ الأهمية، حيث أن إحدى المضاعفات الأكثر شيوعا المرتبطة ب USLs في البشر هي إصابة الحالب46.
في الختام ، نقدم بروتوكولا جديدا لإجراء استئصال الرحم ، وتعليق الرباط الرحمي العجزي ، واختبار الشد ل USL في نموذج الفئران. نتوقع أن تساعد النتائج التي توصلنا إليها الباحثين في العلوم الأساسية في المستقبل من خلال تقديم وصف واضح وقابل للتكرار لهذه الإجراءات وبالتالي السماح بتقدم أبحاث هبوط أعضاء الحوض.

هبوط أعضاء الحوض (POP) هو اضطراب شائع في قاع الحوض يؤثر على ملايين النساء في جميع أنحاء العالم مع إمكانية التأثير بشكل كبير على العديد من جوانب حياة المرأة ، خاصة مع سن1. والجدير بالذكر أن ما يقرب من 13٪ من النساء في الولايات المتحدة سيخضعن لعملية جراحية بسبب هبوط البول أو سلس البول2. حالة أكثر شيوعا بعد الحمل والولادة ، يتميز التدلي بنزول أعضاء الحوض ، في الغالب الأجزاء المختلفة من المهبل و / أو الرحم ، بما يتجاوز وضعها الطبيعي في التجويف البريتوني. هذا يؤدي إلى أعراض مزعجة من انتفاخ المهبل أو الضغط ، والأمعاء ، والمثانة ، والعجز الجنسي ، وانخفاض نوعية الحياة بشكل عام. وتشمل عوامل الخطر الأخرى للملوثات العضوية الثابتة السمنة، وتعاطي التبغ، والسعال المزمن، والإمساك3.
في النساء الأصحاء ، يتم دعم أعضاء قاع الحوض بواسطة عضلات الرافعة ، والأربطة الرحمية العجزية (USLs) ، والأربطة الأساسية ، ومرفقات النسيج الضام بالجدار الجانبي للحوض والهياكل البعيدة للجسم العجان 4,5. تعد USLs من بين أهم الهياكل الداعمة القمية لكل من الرحم والمهبل القمي ، وبالتالي ، غالبا ما تستخدم في التصحيح الجراحي للملوثات العضوية الثابتة (الشكل 1). ينبع الدعم الهيكلي من USL من النسيج الضام الكولاجيني الكثيف في المنطقة المقدسة التي تنتقل إلى عضلات ملساء مكتظة بشكل وثيق. بسبب هذا التدرج التركيبي، يصبح USL متشابكا مع عضلات الرحم والمهبل لتوفير دعم قوي لأعضاء الحوض 6,7. في معلق الرباط الرحمي العجزي (USLS)، يتم تثبيت USLs في قبو المهبل بعد استئصال الرحم، واستعادة المهبل والهياكل المحيطة إلى وضعها التشريحي في مقصورة البطن. ومع ذلك، وبغض النظر عن المسار عبر المهبل أو بالمنظار، فإن إجراء منتدى القيادة للمثقفين الجامعيين (USLS) يعاني من معدل فشل مرتفع نسبيا يصل إلى 40٪ في بعض الدراسات 8,9. كان معدل تكرار أعراض الانتفاخ المهبلي المزعجة بعد 5 سنوات من الإصلاح لهبوط الحيز القمي ، مثل USLs ، حوالي 40٪ في تجربة معشاة ذات شواهد كبيرة متعددة المراكز9. في نفس التجربة ، كانت إعادة العلاج للهبوط المتكرر في 5 سنوات حوالي 10 ٪. لم تتم دراسة آلية معدل الفشل المرتفع هذا، ولكن استعادة المهبل والهياكل المحيطة به إلى وضعها التشريحي يتطلب وضع خياطة في منطقة الكولاجين الكثيفة في USL10,11 بدلا من منطقة العضلات الملساء. لذلك، يمكن أن يكون معدل الفشل المرتفع ناتجا عن عدم التطابق الميكانيكي والتركيبي لواجهة USL المهبلية المشكلة جراحيا مقارنة بالتكامل الكامل الذي شوهد في ملحق عنق الرحم و USL الأصلي.
التأثير الاقتصادي لعلاج هذه الاضطرابات ملحوظ أيضا ، حيث يتم إنفاق ما يقرب من 300 مليون دولار سنويا في الولايات المتحدة على الرعاية الإسعافية12 ، وأكثر من مليار دولار يتم إنفاقها سنويا في التكاليف المباشرة للعمليات الجراحية13. على الرغم من الموارد الاقتصادية الهائلة المخصصة لعلاج هذه الحالات ، إلا أن المضاعفات الناشئة عن العديد من جراحات الهبوط لا تزال محبطة. على سبيل المثال ، تقدم إصلاحات التدلي القمي القائمة على شبكة البولي بروبلين ، مثل sacrocolpopexy ، معدلات نجاح أعلى مقارنة بإصلاحات الأنسجة الأصلية14 ، ولكن على حساب المضاعفات المحتملة مثل التعرض للشبكة أو التآكل. تلقت إدارة الغذاء والدواء ما يقرب من 3000 شكوى تتعلق بمضاعفات الشبكة بين عامي 2008 و 2010 وحدها. وبلغ هذا ذروته في أمر من إدارة الغذاء والدواء لوقف تصنيع وبيع جميع المنتجات الشبكية الموضوعة عبر المهبل للملوثات العضوية الثابتة في أبريل 201915. لذلك ، هناك حاجة سريرية قوية لمواد أخرى غير البولي بروبلين ، ونماذج لاختبارها ، والتي قد تزيد من إصلاحات هبوط الأنسجة الأصلية وتزيد من معدلات النجاح مقارنة بالتقنيات التقليدية مع الخياطة وحدها.
منذ إعلان إدارة الغذاء والدواء الأمريكية في عام 2019 ، توقف معظم جراحي الحوض عن استخدام الشبكة الموضوعة عبر المهبل لإصلاح التدلي ، مما دفع الباحثين إلى البحث عن مناهج جديدة لهندسة الأنسجة لزيادة إصلاحات الأنسجة الأصلية 16،17،18 مثل خلايا انسجة اللحمة المتوسطة (MSCs)9,20 . مع هذا التحول في التركيز ، هناك حاجة ملحة لتحسين النماذج الحيوانية التي يمكن أن تساعد في تطوير مواد جديدة. التحدي في هذه العملية هو تحقيق التوازن بين الأهمية السريرية والتكلفة. تحقيقا لهذه الغاية ، استفاد الباحثون الأساسيون والسريريون الذين يدرسون هبوط أعضاء الحوض من العديد من النماذج الحيوانية حتى الآن ، بما في ذلك الجرذان والفئران والأرانب والأغنام والخنازير والرئيسيات غير البشرية19. تعد عملية تحديد نموذج حيواني مثالي أمرا صعبا ، حيث أن البشر على قدمين ، وليس لديهم ذيل ، ولديهم عملية ولادة مؤلمة مقارنة بأنواع الثدييات الأخرى20. تم استخدام الخنازير21 لمحاكاة تثبيت العجزي الروبوتي ، بينما تم استخدام الأغنام لمحاكاة إصلاحات هبوط المهبل22. هذه النماذج الحيوانية ، على الرغم من أهميتها سريريا ، محدودة الجدوى من حيث التكلفة والصيانة. وقد استخدمت الرئيسيات غير البشرية لدراسة التسبب في هبوط. السنجاب على وجه الخصوص هي واحدة من الأنواع الوحيدة بخلاف البشر التي يمكن أن تتطور هبوطا تلقائيا ، مما يجعلها واحدة من أكثر النماذج الحيوانية ذات الصلة20. كما تم استخدام الرئيسيات غير البشرية لدراسة العمليات الجراحية النسائية مثل sacrocolpopexy23 وزرع الرحم24. على غرار نظرائهم من الأغنام والخنازير ، فإن القيد الأساسي للرئيسيات غير البشرية كنموذج حيواني للهبوط هو تكلفة الصيانة والرعاية والصعود19.
على الرغم من أن حوض القوارض موجه أفقيا مع نسبة أصغر بكثير من حجم قناة الرأس إلى الولادة مقارنة بالبشر19، إلا أن الفئران مناسبة للدراسات على الحيوانات الصغيرة لجراحة USLS نظرا لأن لها نفس تشريح USL والخلوية والبنية النسيجية وتكوين المصفوفة مقارنة ب USL25 البشري. علاوة على ذلك ، فهي مفيدة من حيث الصيانة والصعود. على الرغم من هذه السمات المفيدة، لا توجد تقارير منشورة عن نموذج فئران لإصلاح منتدى القيادة للمثقفين الجامعيين (USLS). لذلك ، فإن الهدف هو وصف بروتوكول لاستئصال الرحم و USLS في فأر لويس متعدد الأزواج. سيكون هذا البروتوكول مفيدا للباحثين الذين يهدفون إلى دراسة الفيزيولوجيا المرضية والمكونات الجراحية للملوثات العضوية الثابتة باستخدام هذا النموذج الحيواني الذي يمكن الوصول إليه.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64311/64311fig01.jpg"> الشكل 1: هبوط أعضاء الحوض. أ: الاتجاه الطبيعي للأعضاء في التجويف البريتوني، ب: النزول الدراماتيكي للعضو عند حدوث التدلي. بعد استئصال الرحم، يعيد معلق الرباط الرحمي العجزي المهبل والتراكيب المحيطة به إلى موضعها التشريحي الصحيح. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64311/64311fig01large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alcohol prep pad</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artificial Tear Ointment</td>
			<td>American Health Service Sales Corp</td>
			<td>PH-PARALUBE-O</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluehill software</td>
			<td>Instron</td>
			<td>Bluehill 3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cavicide 1 disinfectant</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22 998 800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compression platean</td>
			<td>Instron</td>
			<td>2501-163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Puritan Medical</td>
			<td>806-WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Sponge, 8-Ply</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95038-728</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mosquito Forceps</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MMDS1222115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holder</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>DYND04045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Scissors, 5&#189;&#34;, Sharp</td>
			<td>American Health Service Sales Corp</td>
			<td>4-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opioid Analgesic (Buprenorphine XR)</td>
			<td>Fidelis Animal Health</td>
			<td>Ethiqa XR</td>
			<td>0.65&#160;mg/kg&#160;SC&#160;Q72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NSAID Analgesic (Meloxicam SR)</td>
			<td>Wildlife Pharmaceuticals, LLC</td>
			<td>Meloxicam SR</td>
			<td>1&#160;mg/kg&#160;SC&#160;q72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS II, 3-0 Polydioxanone Suture, SH-1</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z316H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS II, 5-0 P olydioxanone Suture, RB-1</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z303H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retractor</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MDS1862107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade Stainless Surgical #10</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>4-310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MDS15210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor, Micro, Curved, 4.5&#34;</td>
			<td>Westcott</td>
			<td>MDS0910311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Column Universal Testing System</td>
			<td>Instron</td>
			<td>5943 S3873</td>
			<td>1 kN force capacity, 10 N load cell</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Natural Rubber Latex Gloves</td>
			<td>Accutech</td>
			<td>91225075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture,Vicryl,6-0,P-3</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J492G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape,Umbilical,Cotton,1/8X18&#34;</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>U10T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tension and Compression Load Cell</td>
			<td>Instron</td>
			<td>2530-10N</td>
			<td>10N load cell (1 kgf, 2 lbf)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary surgical adhesive (skin glue)</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>31477</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of a uterosacral ligament suspension rat model

هبوط أعضاء الحوض (POP) هو اضطراب شائع في قاع الحوض (PFD) مع إمكانية التأثير بشكل كبير على نوعية حياة المرأة. ما يقرب من 10 ٪ -20 ٪ من النساء يخضعن لجراحة إصلاح قاع الحوض لعلاج هبوط في الولايات المتحدة. تؤدي حالات PFD إلى تكلفة سنوية إجمالية تبلغ 26.3 مليار دولار في الولايات المتحدة وحدها. هذه الحالة متعددة العوامل لها تأثير سلبي على نوعية الحياة ، ومع ذلك فقد تضاءلت خيارات العلاج فقط في الماضي القريب. أحد الخيارات الجراحية الشائعة هو تعليق الرباط الرحمي العجزي (USLS)، والذي يتم إجراؤه عادة عن طريق تثبيت القبو المهبلي على الرباط الرحمي العجزي في الحوض. يحتوي هذا الإصلاح على نسبة أقل من المضاعفات مقارنة بتلك التي تعاني من زيادة الشبكة ، ولكنه ملحوظ لمعدل فشل مرتفع نسبيا يصل إلى 40٪. بالنظر إلى عدم وجود نماذج حيوانية قياسية لدراسة ضعف قاع الحوض ، هناك حاجة سريرية ملحة للابتكار في هذا المجال مع التركيز على تطوير نماذج حيوانية فعالة من حيث التكلفة ويمكن الوصول إليها. في هذه المخطوطة، نصف نموذجا للفئران من منتدى القيادة للمثقفين الجامعيين (USLS) يتضمن استئصال الرحم الكامل يليه تثبيت القبو المهبلي المتبقي في الرباط الرحمي العجزي. الهدف من هذا النموذج هو محاكاة الإجراء الذي يتم إجراؤه على النساء ليتمكن من استخدام النموذج ثم التحقيق في الاستراتيجيات التعويضية التي تعمل على تحسين السلامة الميكانيكية لربط الرباط. الأهم من ذلك ، أننا نصف أيضا تطوير إجراء اختبار الشد في الموقع لتوصيف سلامة الواجهة في نقاط زمنية مختارة بعد التدخل الجراحي. بشكل عام، سيكون هذا النموذج أداة مفيدة للدراسات المستقبلية التي تبحث في خيارات العلاج لإصلاح الملوثات العضوية الثابتة عبر منتدى القيادة للمثقفين الجامعيين (USLS).

الجدوى الجراحية ووضع خياطة الرحم العجزي لم تكن هناك مضاعفات أثناء العملية تتعلق باستئصال الرحم أو تعليق الرباط الرحمي العجزي في أي من الحيوانات. كان هناك نزيف ضئيل أثناء إزالة قرون الرحم ، بشرط أن يتم تثبيت الأوعية الدموية المجاورة قبل الإزالة. سمح النزيف المحدود بالتصور الجيد للأربطة الرحمية العجزية لوضع الخياطة ومنع إصابة الأمعاء أو المستقيم أو الحالب أو المثانة أثناء العملية. بعد وضع الغرز ، منع تقاطع القبو المهبلي USL المتشكل حديثا حركة جذع عنق الرحم / الرحم كما هو موضح في الشكل 5C. خلال الأيام الثلاثة الأولى بعد الجراحة ، تم فحص الحيوانات يوميا ، ثم كل أسبوعين حتى نهاية التجربة. مع إعطاء المسكنات الأفيونية طويلة المفعول ومضادات الالتهاب غير الستيروئيدية في وقت الجراحة ، وجد أن المسكنات الإضافية غير ضرورية. استنادا إلى تجربتنا مع 16 عملية جراحية على الحيوانات (ن = 8 لكل من مجموعتي التحكم ومنتدى القيادة للمثقفين الجامعيين (USLS)، يجب توقع انخفاض في الوزن في الأسبوع الأول بعد الجراحة بمتوسط خسارة 5.7 ± 1.4٪ من وزن يوم الجراحة. كما هو متوقع ، اكتسبت الفئران وزنا ببطء خلال الأسابيع ال 23 اللاحقة ، بمتوسط زيادة في الوزن يبلغ 15.1 ± 4.5٪ على مدار التجربة.
الاختبار الميكانيكي لإصلاح منتدى القيادة للمثقفين الجامعيين (USLS) لتوضيح وظائف إصلاح منتدى القيادة للمثقفين الجامعيين (USLS)، تم إجراء اختبار الشد أحادي المحور. بعد القتل الرحيم للحيوان في النقطة الزمنية المختارة بعد الجراحة ، 24 أسبوعا في هذه الدراسة ، يجب تشريح المنطقة الجراحية بعناية لتصور تقاطع قبو USL المهبلي كما هو موضح في الشكل 6 أ. بالمقارنة مع المنهجيات الأخرى لاختبار USLs للفئران جنبا إلى جنب مع الهياكل الداعمة الأخرى وأعضاء الحوض29,42 ، فإن الطريقة الموضحة هنا هي الأولى التي تختبر USL للفئران بطريقة معزولة. تم اختيار الشريط السري المستخدم في هذه الدراسة بشكل استراتيجي لمرونته حيث سمح امتثال الشريط بالحد الأدنى من تعطيل الأنسجة أثناء تحضير اختبار الشد. لذلك ، يجب تعديل بيانات إزاحة الحمل لمراعاة الكمية الصغيرة من التمدد التي يساهم بها الشريط السري. يقدم الشكل 9 مثالا على البيانات التي تم الحصول عليها عن طريق اختبار الشد مع الشكل 9 أ الذي يقدم مثالا على مخطط إجهاد إجهاد نموذجي. يوصى بالإبلاغ عن بيانات الإجهاد والإجهاد لأن هذه المعلومات طبيعية ومستقلة عن حجم العينات34 ويمكن مقارنتها بشكل أفضل عبر الدراسات. بالنسبة للرباط الرحمي العجزي السليم ، نبلغ عن الخصائص الهيكلية مثل الحمل النهائي (2.9 ± 0.5 نيوتن) والصلابة (0.4 ± 0.1 نيوتن / مم) بالإضافة إلى خصائص المواد الطبيعية مثل الإجهاد النهائي (2.1 ± 0.4 ميجا باسكال) ، الإجهاد النهائي (1.6 ± 0.5) ومعامل الظل (4.0 ± 1.1 ميجا باسكال). في الاختبارات أحادية المحور التي أجريت على الأعضاء التناسلية للفئران وجميع وصلات الأنسجة الداعمة لها من قبل Moalli et al. ، أبلغوا عن حمل نهائي عند الفشل (13.2 ± 1.1 نيوتن) وتصلب (2.9 ± 0.9 نيوتن / مم) أعلى من USL29 المعزول. يذكر العمل الذي قام به Moalli et al. والأدبيات الأخرى34,35 التباين العالي بين العينات المختبرة كما هو موضح في البيانات المقدمة هنا. بالنسبة لإصلاح تعليق الرباط الرحمي العجزي ، وجدنا أن جميع خصائص المواد الهيكلية (الصلابة ، 0.33 ± 0.13 نيوتن / مم ؛ الحمل النهائي ، 2.6 ± 1.3 نيوتن) وخصائص المواد الطبيعية (الإجهاد النهائي ، 1.8 ± 0.7 ميجا باسكال ؛ الإجهاد النهائي 1.3 ± 0.3 ؛ معامل الظل ، 3.0 ± 0.9 ميجا باسكال) أقل من خصائص USL الأصلي.

Watch this Scientific Journal Video about Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model at JoVE.com

Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model

يؤثر هبوط أعضاء الحوض على ملايين النساء في جميع أنحاء العالم ، ومع ذلك فإن بعض التدخلات الجراحية الشائعة لها معدلات فشل تصل إلى 40٪. عدم وجود نماذج حيوانية قياسية للتحقيق في هذه الحالة يعيق التقدم. نقترح البروتوكول التالي كنموذج لتعليق الرباط الرحمي العجزي واختبار الشد في الجسم الحي .

تطوير نموذج فأر معلق الرباط الرحمي العجزي

Pelvic organ prolapse (POP) is a common pelvic floor disorder (PFD) with the potential to significantly impact a woman's quality of life. Approximately ...

بروتوكولنا هو واحد من أوائل البروتوكولات التي تستخدم نموذج الفئران لوصف جراحة تعليق الرباط الرحمي العجزي ، وبالتالي يمكن أن تكون بمثابة مخطط للمحققين المستقبليين لدراسة النتائج قبل السريرية وتعديلات الجراحة. يتشابه الرباط الرحمي العجزي في التشريح والخلوية والبنية النسيجية والتكوين مقارنة بالرباط الرحمي العجزي البشري. هذه المكونات جنبا إلى جنب مع فوائد التكلفة والجدوى تجعله نموذجا رائعا حقا لدراسة زيادة ونتائج جراحة تعليق الرباط الرحمي العجزي.يمكن تكييف طريقة اختبار الشد لاستخدامها في نماذج حيوانية أخرى في قاع الحوض. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن للمحققين المستقبليين استخدام إعداد الجراحة العامة لإبلاغ جراحات الهبوط والقوارض الأخرى مثل sacrocolpopexy. للبدء ، ارتد ثوبا جراحيا وغطاء للرأس وقناعا وقفازات معقمة.ثنى الحيوان بحقل معقم تاركا البطن مكشوفا فقط. قد يكون هناك بعض النزيف بسبب الصدمة من القص حول زوج الحلمات الذيلي. إذا لزم الأمر ، يمكن جعل هذا مرقئ مع الضغط أو نترات الفضة.قم بعمل شق طوله سبعة سنتيمترات أسفل خط ألبا من أسفل عملية الخنجري مباشرة إلى خط الحلمة السفلي باستخدام شفرة مشرط. يجب أن ينتهي الشق من 0.5 إلى سنتيمتر واحد من فتحة مجرى البول. ثم قم بعمل شق عبر طبقة العضلات تحتها.تجميع البطن المبعدة وفحص تجويف البطن. باستخدام ملقط القزحية ، حدد موقع قرن الرحم الأيسر برفق. ارفع برفق قرن الرحم الأيسر باستخدام مشبك أو مشبك البعوض.ابدأ استئصال الرحم عن طريق ربط القرن أسفل المبيض وقناة البيض باستخدام مشبك البعوض. لمواصلة استئصال الرحم ، قم بتثبيت وتقليم الأوعية الدموية المجاورة والأنسجة الضامة والدهون من قرن الرحم باستخدام مقص صغير. تذكر أن تثبت النسيج الضام قبل الإزالة لتقليل النزيف.ضع المشابك بالقرب من واجهة الرحم قدر الإمكان ، وحتى تقاطع الرحم العنقي. المشبك عبر قرن الرحم بالقرب من نقطة التشعب باستخدام ملقط البعوض. استئصال القرن المماثل فقط cephalad إلى المشبك لتجنب النزيف.بسبب العيار الصغير لأوعية الفئران ، كان ربط جذوع الرحم بمشبك مؤقت كافيا لهذه الجراحة. ومع ذلك ، يمكن تعديل هذه التقنية حسب الحاجة إما عن طريق إغلاق عنيق مع الكي الكهربائي أو ربط خياطة. اضبط مبعثر البطن لكشف الحوض السفلي.افحصي قبو المهبل المكشوف ويدعم قاع الحوض الأنسجة الرباطية والضامة المتصلة بالمهبل وعنق الرحم. تحديد الحالب بشكل ثنائي ، وهو مجرد وسطي للمبيضين. تحديد الأربطة الرحمية العجزية التي يمكن العثور عليها متصلة بعنق الرحم أسفل جذوع الأشجار المتبقية من قرون الرحم.يتم تتبع الرباط في اتجاه الإنسي الرأسي نحو العجز. ضع ثلاثة خيوط بوليديوكسانون صفرية على إبرة صغيرة مدببة وضع غرزة من خلال الرباط الرحمي العجزي الأيسر الموجود في أعلى الرباط وبالقرب من العجز. قم بسحب الغرزة للتأكد من أنها استحوذت على الرباط الرحمي العجزي لضمان إدخال بنية الرباط في عنق الرحم مع تقسيم الأصل خلف المستقيم حيث يلتصق بالعجز.مرة أخرى ، حدد الحالب للتأكد من أنه لم يتم دمجه أو التواءه مع غرزة الرحم العجزية. ثم مرر غرزة polydioxanone اليسرى من خلال الجانب الأيسر من قبو المهبل مع دمج كل من الجانبين الأمامي والخلفي للصفعة المهبلية. كرر هذه الخطوات لإكمال إجراء تعليق الرباط الرحمي العجزي على الجانب الأيمن.بعد وضع غرز الرحم العجزية بشكل ثنائي ، اربط الخيط بإحكام باستخدام عقدة مربعة بحيث يكون القبو المهبلي مرتفعا نحو العجز. أولا ، تشريح الأنسجة الدهنية حتى يصبح القبو المهبلي مرئيا. استمر في إزالة ضمادات الدهون في البطن حتى يصبح الرباط الرحمي العجزي السليم مرئيا بوضوح أو عند التقاطع بين الرباط الرحمي العجزي والقبو المهبلي مرئيا.باستخدام مسطرة مرنة، قم بقياس المسافة بين إدخال الرحم العجزي والقبو المهبلي لتقدير الطول الأصلي للنسيج. خيط الشريط السري خلف الرباط الرحمي العجزي السليم أو تقاطع تعليق الرباط الرحمي العجزي بحيث يتركز النسيج على الشريط السري. قم بقياس ارتفاع وعرض الأنسجة حيث تتقاطع مع الشريط السري باستخدام الفرجار الرقمي.لتقدير القيم ، تستخدم لحساب مساحة المقطع العرضي. لاختبار الشد ، ضع الحيوان بحيث تتمركز العينة تحت المقبض. شل حركة منطقة الحوض المحيطة بالعينة عن طريق تأمين الحيوان على السطح الزجاجي.خفض خلايا التحميل بحيث تصل ذيول الشريط السري بسهولة إلى المقبض. قم بتأمين الشريط السري في القبضة مع ترك الشريط متراخيا لتجنب التلاعب بالعينة. ثم افتح اختبار التكييف المسبق في واجهة البرنامج وقم بتسمية الاختبار باسم العينة.تأكد من أن طريقة التكييف المسبق تتضمن خطوة التحميل المسبق. انقر لبدء اختبار التكييف المسبق الذي سيقوم بتحميل العينة مسبقا عند 0.015 نيوتن. بمجرد استقرار قوة التحميل المسبق ، سيقوم الاختبار بتهيئة العينة مسبقا بمعدل استطالة قدره 0.1 ملليمتر في الثانية لمدة 30 ثانية.بعد 30 ثانية ، اترك المنديل يرتاح لمدة دقيقة واحدة. في غضون ذلك ، قم بتحميل نظام اختبار السحب إلى الفشل. قم بتسمية الاختبار باسم العينة وانقر فوق التالي للوصول إلى النافذة التالية.أدخل طول المقياس للعينة ثم انقر فوق التالي للانتقال إلى صفحة الاختبار. وازن الكل وانقر على ابدأ. اسمح للاختبار بالعمل بمعدل استطالة يبلغ 0.1 ملليمتر في الثانية حتى يتم سحب الأنسجة إلى الفشل.سينتج الاختبار بيانات إزاحة الحمل. بعد وضع الغرز باستخدام هذا البروتوكول ، تم رفع الوصلة المشكلة حديثا بين الرباط الرحمي العجزي والقبو المهبلي نحو العجز ومنع حركة جذع عنق الرحم. بالنسبة للرباط الرحمي العجزي السليم وعينة تعليق الرباط الرحمي العجزي ، تم تقييم اختبار الشد من خلال مخططات مثل منحنى إزاحة الحمل ، وتحليل إجهاد الإجهاد ، وميل معادلة ملاءمة منحنى الخط.أظهرت البيانات أن جميع خصائص المواد الهيكلية لعينة الإصلاح كانت أقل من خصائص الرباط الرحمي العجزي الأصلي. الهياكل صغيرة ، وبالتالي فإن تحديدها يتطلب ممارسة التشريح الدقيق. قد يكون تحديد المسرح على وجه التحديد أمرا صعبا ، لذلك قد يكون نطاق التشريح مفيدا.نقترح أيضا التدرب على جراحات الجثث قبل جراحات البقاء على قيد الحياة. وصفنا مسارا لتكبير تعليق الرباط الرحمي العجزي بالإضافة إلى منهجية جديدة للاختبار الميكانيكي للرباط. الهدف هو أن التكبير الموصوف في بروتوكولنا سيجعل جراحة الهبوط أكثر نجاحا في المستقبل ، وبالتالي أفضل للمرضى.

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

زرع مثلي الأورطي : نموذج الفأر لدراسة تطوير المزمنة اعتلال وعائي

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson's Disease

تطوير نموذج من جانب واحد lesioned الفأر 6 OHDA من مرض باركنسون

The unilaterally lesioned 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned rat model of Parkinson's disease (PD) has proved to be invaluable in advancing our ...

Rat Model of Blood-brain Barrier Disruption to Allow Targeted Neurovascular Therapeutics

للسماح المستهدفة نموذج الفئران من تعطيل حاجز الدم في الدماغ التداوي عائي عصبي

Endothelial cells with tight junctions along with the basement membrane and astrocyte end feet surround cerebral blood vessels to form the blood-brain ...

A Model of Chronic Nutrient Infusion in the Rat

نموذج من تسريب المغذيات المزمنة في الفئران

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to  affect the function of several organs and tissues and to contribute to the  ...

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson's Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

تطوير وبناء الجرذ نموذج ألفا synuclein لمرض باركنسون عن طريق حقن المجسم من النواقل الفيروسية المؤتلف المرتبطة الغدة

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on ...

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

وDimethylnitrosamine المستحثة الكبد تليف النموذجي في الجرذ

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension

جراحة التحويلة، الحق القلب قسطرة، والأوعية الدموية القياس الشكلي في الفأر نموذج لالناجم عن تدفق-الرئوي الشرياني ارتفاع ضغط الدم

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

متساوي القياس كونتراكتيليتي القياس الشريان المساريقي العلوي الماوس باستخدام أسلاك ميوجرافي

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Acupuncture in a Rat Model of Asthma

الوخز بالإبر في نموذج الفئران من الربو

A high platform can fix rats without restriction and completely expose the acupoints on the back during acupuncture manipulation. This article describes ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

طريقة غير جراحية لتوليد نموذج آفة الغضروف داخل المفصل الناجم عن التحميل الدوري لركبة الجرذ

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...