Name: development of a uterosacral ligament suspension rat model
Uploaded: 2022-08-17T14:30:00
Duration: 8 min 58 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model at JoVE.com

Vi takker Prof. Silvia Blemker for brugen af hendes Instron og Prof. George Christ for brugen af hans kirurgiske rum samt den 3D-printede holder og greb. Dette arbejde blev støttet af UVA-Coulter Translational Research Partnership og DoD (W81XWH-19-1-0157).

Forfatterne har intet at afsløre.

Protokollen er kendt for flere fordele. Så vidt vi ved, er det den første offentliggjorte beskrivelse af USLS i rottemodellen og vil give fremtidige efterforskere reproducerbare trin til at udføre denne procedure i forskningsmiljøet. For det andet inkluderer vi en ny protokol til trækprøvning af USL's oprindelige og kirurgiske grænseflade. Trækprøvningsprotokollen kunne bruges i lignende undersøgelser, der undersøger nye vævstekniske tilgange til at øge indfødte vævsreparationer såsom USLS. Desuden er rottemodellen i sig selv nyttig til undersøgelse af bækkenbundslidelser på grund af nem håndtering / boarding, kort levetid og omkostningseffektivitet sammenlignet med større dyremodeller. Begrænsninger i protokollen inkluderer manglende evne til at vurdere en af de vigtigste komplikationer ved USLS, ureteral kinking. På trods af dette havde vi ingen tilfælde af formodet ureteral skade i denne undersøgelse. En anden overvejelse er, at bækkenets vandrette orientering, forholdet mellem det lille føtale hoved og fødselskanalforhold og manglen på spontan prolaps i rottemodellen begrænser en vis anvendelighed af resultaterne for mennesker. Brugen af multiparøse rotter er dog en styrke ved denne undersøgelse, da dette tegner sig for den førende risikofaktor i udviklingen af POP3.
Etableringen af en vellykket protokol for hysterektomi og USLS i Lewis-rotten vil være et nyttigt værktøj for fremtidige forskere, der undersøger kirurgiske komponenter i POP, samtidig med at variabiliteten i test af USL's mekaniske opførsel minimeres. Kirurgiske dyremodeller er gavnlige, fordi de giver forskere mulighed for at designe klinisk relevante eksperimenter, der kontrollerer paritet, kropsmasse, sygdom og ernæring34, samtidig med at den etiske risiko ved indledende undersøgelse hos mennesker mindskes. Desuden giver standardiserede modeller for POP forskere mulighed for at omgå begrænsningerne ved indsamling af humant væv. Navnlig vil de trækprøvningsmetoder, der er beskrevet i denne protokol, muliggøre overensstemmelse mellem undersøgelserne. Tidligere gnavermodeller testede de mekaniske egenskaber i hele bækkenområdet, som inkluderer livmoderhalsen, vagina og de mange bækkenstøttebånd29,42. De metoder, der er beskrevet her, giver mulighed for måling af USL på en måde, der opretholder de oprindelige rygmarvs- og livmoderhalsbindinger. Det skal bemærkes, at trækprøvningsmetoderne ikke vurderer USL alene, men snarere USL i kombination med dets indsættelse ved korsbenet og livmoderhalsen. Dette er en styrke ved undersøgelsen, da den afspejler de sædvanlige in situ-kræfter, som ledbåndet udsættes for. Vi anerkender, at den mekaniske opførsel af det isolerede ledbånd ville være anderledes, hvis det blev testet ex vivo uden dets oprindelige vedhæftede filer. Dette gælder især, da rottestrukturerne er små og begrænser muligheden for at indsamle en prøve, der er egnet til ex vivo-testning. USL'erne oplever belastning i flere retninger in situ, så testens uniaxiale karakter er en begrænsning, men ved hjælp af denne metode giver mulighed for meningsfulde sammenligninger mellem tidligere undersøgelser af rotte USL-mekanik29,42. Selvom der i øjeblikket ikke er nogen bredt accepteret standard mekanisk testprotokol, vil denne model være et nyttigt værktøj til fremtidige vævstekniske undersøgelser på området.
Flere trin beskrevet i denne protokol er kritiske for dyrenes sundhed og trivsel samt reproducerbarheden af USLS-operationen og efterfølgende trækprøvning. For det første er det vigtigt at opnå både smertestillende og antiinflammatoriske lægemidler beskrevet som smertestillende alene viste sig at være utilstrækkelige til smertebehandling. Det profylaktiske antibiotikum nedsætter risikoen for infektion på operationsstedet og er standardplejen i human kirurgi. Med hensyn til USLS kirurgiske procedure er det vigtigt at undgå skader på æggestokkene og minimere blodtab for en vellykket operation. Trin 1.3.3 og 1.3.4 beskriver adskillelse af toppen af livmoderhornet fra den tilstødende æggestok; Der skal udvises forsigtighed for at opretholde denne dissektion på siden af livmoderhornet for at forhindre forstyrrelse af sarte kar omkring æggestokken, hvilket kan resultere i overdreven blødning. Det skal bemærkes, at andre forskere har vist, at ovariefunktionen bevares efter fjernelse af livmoderhornene43. Desuden, hvis æggestokkene forstyrres eller fjernes, vil den samlede kollagenfibrilleret arkitektur blive forstyrret, hvilket ændrer de mekaniske egenskaber af dets væv44,45. Når livmoderhornet er sikkert adskilt fra æggestokken, er der et klart dissektionsplan, der tillader isolering af livmoderhornet fra de omgivende fedtpuder og vaskulatur. På trods af det klare dissektionsplan skal pediklerne langs livmoderhornet sikres med en klemme inden transsektion med mikrosaks. I modsætning til kirurgisk praksis hos mennesker har vi fundet ud af, at suturligering af hysterektomipediklerne er unødvendig, da fastspænding af pedicle før transsektion sikrer tilstrækkelig hæmostase. Trin 1.3.6 i protokollen beskriver denne omhyggelige proces for at minimere blodtab. Da hysterektomi udføres, skal der udvises stor omhu for at identificere urinlederne som nævnt i trin 1.3.6 og 1.3.8. Forståelse af urinlederens anatomiske nærhed er kritisk, da en af de mest almindelige komplikationer forbundet med USL'erne hos mennesker er ureteral skade46.
Afslutningsvis præsenterer vi en ny protokol til udførelse af hysterektomi, uterosacral ligamentsuspension og trækprøvning af USL i en rottemodel. Vi forventer, at vores resultater vil hjælpe fremtidige grundvidenskabelige forskere ved at give en klar, reproducerbar beskrivelse af disse procedurer og dermed give mulighed for fremskridt inden for bækkenorganprolapsforskning.

Bækkenorganprolaps (POP) er en almindelig bækkenbundsforstyrrelse, der påvirker millioner af kvinder verden over med potentiale til at påvirke mange aspekter af en kvindes liv betydeligt, især medalderen 1. Især vil ca. 13% af kvinderne i USA blive opereret for prolaps eller urininkontinens2. En tilstand mest almindelig efter graviditet og fødsel, prolaps er karakteriseret ved nedstigning af bækkenorganer, overvejende de forskellige rum i vagina og / eller livmoder, ud over deres normale position i bughulen. Dette fører til generende symptomer på vaginal bule eller tryk, tarm, blære og seksuel dysfunktion og generelt nedsat livskvalitet. Andre risikofaktorer for POP omfatter fedme, tobaksbrug, kronisk hoste og forstoppelse3.
Hos raske kvinder understøttes bækkenbundsorganerne af levator ani-musklerne, uterosakrale ledbånd (USL'er), kardinalbånd, bindevævsfastgørelser til bækkenets sidevæg og perineallegemets distale strukturer 4,5. USL'erne er blandt de vigtigste apikale understøttende strukturer for både livmoderen og apikal vagina og bruges derfor ofte til kirurgisk korrektion af POP (figur 1). Strukturel støtte fra USL stammer fra det tætte kollagenøse bindevæv i det sakrale område, der overgår til tæt pakket glat muskel. På grund af denne sammensætningsgradient bliver USL sammenvævet med livmoder- og vaginalmuskulaturen for at give robust støtte til bækkenorganerne 6,7. I den uterosacral ligamentsuspension (USLS) er USL'erne fastgjort til vaginalhvelvet efter en hysterektomi, hvilket genopretter vagina og de omgivende strukturer til deres anatomiske position i abdominalrummet. Uanset en transvaginal eller laparoskopisk rute er USLS-proceduren imidlertid plaget af en relativt høj fejlrate på op til 40% i nogle undersøgelser 8,9. Gentagelseshastigheden af generende vaginale bulesymptomer 5 år efter reparation for apikal rumprolaps, såsom USL'er, var ca. 40% i et stort randomiseret kontrolleret multicenterforsøg9. I samme studie var genbehandling for recidiverende prolaps efter 5 år ca. 10%. Mekanismen bag denne høje fejlrate er ikke blevet undersøgt, men genopretning af vagina og de omgivende strukturer til deres anatomiske position kræver suturplacering i den tætte kollagenøse region af USL10,11 snarere end den glatte muskelregion. Derfor kan den høje fejlrate skyldes den mekaniske og sammensætningsmæssige uoverensstemmelse mellem den kirurgisk dannede vagina-USL-grænseflade sammenlignet med den komplette integration, der ses i den oprindelige cervikal-USL-vedhæftning.
Den økonomiske virkning af behandling af disse lidelser er også bemærkelsesværdig, med ca. 300 millioner dollars brugt årligt i USA på ambulant pleje12 og mere end 1 milliard dollars brugt årligt i direkte omkostninger til kirurgiske procedurer13. På trods af de enorme økonomiske ressourcer, der er afsat til behandling af disse tilstande, forbliver komplikationerne som følge af mange prolapsoperationer nedslående. For eksempel tilbyder polypropylennetbaserede apikale prolapsreparationer, såsom sacrocolpopexy, højere succesrater sammenlignet med indfødte vævsreparationer14, men på bekostning af potentielle komplikationer såsom maskeeksponering eller erosion. FDA modtog næsten 3.000 klager relateret til mesh komplikationer mellem 2008 og 2010 alene. Dette kulminerede i en ordre fra FDA om at standse fremstilling og salg af alle transvaginalt placerede mesh-produkter til POP i april 201915. Derfor er der et stærkt klinisk behov for andre materialer end polypropylen og modeller til at teste dem med, der kan øge reparationer af indfødt vævsprolaps og øge succesraten sammenlignet med traditionelle teknikker med sutur alene.
Siden FDA-meddelelsen i 2019 er de fleste bækkenkirurger stoppet med at bruge transvaginalt placeret mesh til prolapsreparationer, hvilket får efterforskere til at søge nye vævstekniske tilgange til at øge indfødte vævsreparationer16,17,18 såsom med mesenkymale stromale celler (MSC'er)9,20 . Med dette skift i fokus er der et presserende behov for forfining af dyremodeller, der kan hjælpe med udvikling af nye materialer; Udfordringen i denne proces er at afbalancere klinisk relevans med omkostninger. Til dette formål har grundvidenskab og kliniske efterforskere, der studerer bækkenorganprolaps, hidtil draget fordel af flere dyremodeller, herunder rotter, mus, kaniner, får, svin og ikke-menneskelige primater19. Processen med at identificere en optimal dyremodel er udfordrende, da mennesker er tobenede, ikke har nogen hale og har en traumatisk fødselsproces sammenlignet med andre pattedyrarter20. Svin21 er blevet brugt til at simulere robotsacrocolpopexy, mens får er blevet brugt til at simulere vaginale prolapsreparationer22. Disse dyremodeller, selvom de er klinisk relevante, er begrænset i gennemførlighed af omkostninger og vedligeholdelse. Ikke-menneskelige primater er blevet anvendt til at undersøge patogenesen af prolaps; Især egernaber, er en af de eneste andre arter end mennesker, der kan udvikle spontan prolaps, hvilket gør dem til en af de mest relevante dyremodeller20. Ikke-menneskelige primater er også blevet brugt til at studere gynækologiske kirurgiske procedurer såsom sacrocolpopexy23 og livmodertransplantation24. I lighed med deres fåre- og svinekolleger er den primære begrænsning af ikke-menneskelige primater som en dyremodel for prolaps omkostningerne ved vedligeholdelse, pleje og boarding19.
Selvom gnaverbækkenet er orienteret vandret med et meget mindre forhold mellem hoved og fødselskanal sammenlignet med mennesker19, er rotter velegnede til smådyrsundersøgelser af USLS-kirurgi, da de har lignende USL-anatomi, cellularitet, histologisk arkitektur og matrixsammensætning sammenlignet med den menneskelige USL25. Desuden er de gavnlige med hensyn til vedligeholdelse og boarding. På trods af disse gavnlige egenskaber er der ingen offentliggjorte rapporter om en rottemodel af USLS-reparation. Derfor er målet at beskrive en protokol for hysterektomi og USLS i den multiparøse Lewis-rotte. Denne protokol vil være gavnlig for efterforskere, der sigter mod at studere patofysiologi og kirurgiske komponenter i POP ved hjælp af denne tilgængelige dyremodel.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64311/64311fig01.jpg"> Figur 1: Prolaps af bækkenorganer . (A) Den normale orientering af organer i bughulen og (B) den dramatiske organnedtrapning, når prolaps opstår. Efter hysterektomi, (C) uterosacral ligament suspension genopretter vagina og omgivende strukturer til deres rette anatomiske position. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64311/64311fig01large.jpg" target="_blank">Klik her for at se en større version af denne figur.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alcohol prep pad</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artificial Tear Ointment</td>
			<td>American Health Service Sales Corp</td>
			<td>PH-PARALUBE-O</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluehill software</td>
			<td>Instron</td>
			<td>Bluehill 3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cavicide 1 disinfectant</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22 998 800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compression platean</td>
			<td>Instron</td>
			<td>2501-163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Puritan Medical</td>
			<td>806-WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Sponge, 8-Ply</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95038-728</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mosquito Forceps</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MMDS1222115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holder</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>DYND04045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Scissors, 5&#189;&#34;, Sharp</td>
			<td>American Health Service Sales Corp</td>
			<td>4-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opioid Analgesic (Buprenorphine XR)</td>
			<td>Fidelis Animal Health</td>
			<td>Ethiqa XR</td>
			<td>0.65&#160;mg/kg&#160;SC&#160;Q72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NSAID Analgesic (Meloxicam SR)</td>
			<td>Wildlife Pharmaceuticals, LLC</td>
			<td>Meloxicam SR</td>
			<td>1&#160;mg/kg&#160;SC&#160;q72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS II, 3-0 Polydioxanone Suture, SH-1</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z316H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS II, 5-0 P olydioxanone Suture, RB-1</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z303H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retractor</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MDS1862107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade Stainless Surgical #10</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>4-310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MDS15210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor, Micro, Curved, 4.5&#34;</td>
			<td>Westcott</td>
			<td>MDS0910311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Column Universal Testing System</td>
			<td>Instron</td>
			<td>5943 S3873</td>
			<td>1 kN force capacity, 10 N load cell</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Natural Rubber Latex Gloves</td>
			<td>Accutech</td>
			<td>91225075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture,Vicryl,6-0,P-3</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J492G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape,Umbilical,Cotton,1/8X18&#34;</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>U10T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tension and Compression Load Cell</td>
			<td>Instron</td>
			<td>2530-10N</td>
			<td>10N load cell (1 kgf, 2 lbf)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary surgical adhesive (skin glue)</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>31477</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of a uterosacral ligament suspension rat model

Bækkenorganprolaps (POP) er en almindelig bækkenbundsforstyrrelse (PFD) med potentiale til at påvirke en kvindes livskvalitet betydeligt. Ca. 10% -20% af kvinderne gennemgår bækkenbundsreparationskirurgi til behandling af prolaps i USA. PFD-sager resulterer i en samlet årlig omkostning på 26,3 milliarder dollars alene i USA. Denne multifaktorielle tilstand har en negativ indvirkning på livskvaliteten, og alligevel er behandlingsmulighederne kun svundet ind i den seneste tid. En almindelig kirurgisk mulighed er uterosacral ligament suspension (USLS), som typisk udføres ved at fastgøre vaginal hvælving til uterosacral ligament i bækkenet. Denne reparation har en lavere forekomst af komplikationer sammenlignet med dem med mesh-forstørrelse, men er kendt for en relativt høj fejlrate på op til 40%. I betragtning af manglen på standard dyremodeller til at studere bækkenbundsdysfunktion er der et presserende klinisk behov for innovation på dette område med fokus på at udvikle omkostningseffektive og tilgængelige dyremodeller. I dette manuskript beskriver vi en rottemodel af USLS, der involverer en komplet hysterektomi efterfulgt af fiksering af den resterende vaginale hvælving til det uterosakrale ledbånd. Målet med denne model er at efterligne proceduren udført på kvinder for at kunne bruge modellen til derefter at undersøge reparative strategier, der forbedrer den mekaniske integritet af ledbåndfastgørelsen. Det er vigtigt, at vi også beskriver udviklingen af en in situ trækprøvningsprocedure for at karakterisere grænsefladeintegritet på valgte tidspunkter efter kirurgisk indgreb. Samlet set vil denne model være et nyttigt værktøj til fremtidige undersøgelser, der undersøger behandlingsmuligheder for POP-reparation via USLS.

Kirurgisk gennemførlighed og placering af uterosacral sutur Der var ingen intraoperative komplikationer relateret til hysterektomi eller uterosacral ligamentsuspension hos nogen af dyrene. Der var minimal blødning under fjernelse af livmoderhornene, forudsat at den tilstødende vaskulatur blev fastspændt før fjernelse. Begrænset blødning tillod god visualisering af de uterosakrale ledbånd til suturplacering og forhindrede intraoperativ tarm-, endetarms-, ureteral- eller blæreskade. Efter placering af suturerne forhindrede det nydannede USL-vaginale hvælvingskryds bevægelse af livmoderhals-/livmoderstubben som vist i figur 5C. I løbet af de første tre postoperative dage blev dyrene kontrolleret dagligt og derefter hver anden uge indtil forsøgets afslutning. Med opioide og NSAID-analgetika med forlænget frigivelse administreret på operationstidspunktet blev yderligere analgetika fundet unødvendige. Baseret på vores erfaring med 16 dyreoperationer (n = 8 for både kontrol- og USLS-grupper) bør der forventes et vægttab i den første uge efter operationen med et gennemsnitligt vægttab på 5,7 ± 1,4% fra operationsdagsvægten. Som forventet tog rotterne langsomt på i vægt i løbet af de efterfølgende 23 uger med en gennemsnitlig vægtøgning på 15,1 ± 4,5% i løbet af forsøget.
Mekanisk test af USLS-reparationen For at demonstrere funktionaliteten af USLS-reparationen blev der udført uniaxial trækprøvning. Efter eutanasi af dyret på det valgte postoperative tidspunkt, 24 uger i denne undersøgelse, skal det kirurgiske område omhyggeligt dissekeres for at visualisere USL-vaginal hvælvingskrydset som vist i figur 6A. Sammenlignet med andre metoder til test af rottens USL'er sammen med andre understøttende strukturer og bækkenorganer29,42 er metoden beskrevet her den første til at teste rottens USL på en isoleret måde. Navlestrengen, der blev brugt i denne undersøgelse, blev strategisk valgt for sin fleksibilitet, da båndets overholdelse tillod minimal forstyrrelse af vævet under forberedelse af træktest. Belastningsforskydningsdata skal derfor justeres for at tage højde for den lille mængde strækning, som navlestrengen bidrager med. Figur 9 giver et eksempel på data opnået ved trækprøvning, hvor figur 9A giver et eksempel på et typisk spændingsbelastningsplot. Det anbefales at rapportere stressbelastningsdata, da disse oplysninger er normaliserede og uafhængige af prøvernes størrelse34 og bedre kan sammenlignes på tværs af undersøgelser. For det intakte uterosakrale ledbånd rapporterer vi strukturelle egenskaber såsom ultimativ belastning (2,9 ± 0,5 N) og stivhed (0,4 ± 0,1 N / mm) samt normaliserede materialeegenskaber såsom ultimativ spænding (2,1 ± 0,4 MPa), ultimativ belastning (1,6 ± 0,5) og tangentmodul (4,0 ± 1,1 MPa). I de uniaxiale tests udført på rotternes reproduktive organer og alle deres støttende vævsforbindelser af Moalli et al., rapporterede de en ultimativ belastning ved svigt (13,2 ± 1,1 N) og stivhed (2,9 ± 0,9 N/mm) højere end den isolerede USL29. Arbejdet udført af Moalli et al. og anden litteratur34,35 nævner den høje variabilitet mellem testede prøver som vist i de data, der præsenteres her. Til reparation af det uterosakrale ledbånd fandt vi, at alle strukturelle materialeegenskaber (stivhed, 0,33 ± 0,13 N/mm; ultimativ belastning, 2,6 ± 1,3 N) og normaliserede materialeegenskaber (ultimativ spænding, 1,8 ± 0,7 MPa; ultimativ belastning 1,3 ± 0,3; tangentmodul, 3,0 ± 0,9 MPa) var lavere end den oprindelige USL.

Watch this Scientific Journal Video about Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model at JoVE.com

Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model

Bækkenorganprolaps påvirker millioner af kvinder verden over, og alligevel har nogle almindelige kirurgiske indgreb fejlrater så høje som 40%. Manglen på standarddyremodeller til at undersøge denne tilstand hindrer fremskridt. Vi foreslår følgende protokol som model for uterosacral ligamentsuspension og in vivo trækprøvning.

Udvikling af en uterosacral ligament suspension rottemodel

Pelvic organ prolapse (POP) is a common pelvic floor disorder (PFD) with the potential to significantly impact a woman's quality of life. Approximately ...

Vores protokol er en af de første, der bruger en rottemodel til at beskrive den uterosakrale ledbåndssuspensionskirurgi, og kan derfor virkelig tjene som en plan for fremtidige efterforskere til at studere prækliniske resultater og ændringer af operationen. Det rad uterosacral ligament er ens i anatomi, cellularitet, histologisk arkitektur og sammensætning sammenlignet med det menneskelige uterosacral ligament. Disse komponenter kombineret med omkostningsfordele og gennemførlighed gør det til en rigtig god model til at studere augmentation og resultater af uterosacral ligament suspension kirurgi.Trækprøvningsmetoden kunne tilpasses til brug i andre bækkenbundsdyremodeller. Derudover kan fremtidige efterforskere bruge en generel kirurgisk opsætning til at informere andre prolapsoperationer og gnavere som sacrocolpopexy. Til at begynde med skal du bære en kirurgisk kjole, hoveddæksel, maske og sterile handsker.Drape dyret med et sterilt felt, der kun efterlader maven udsat. Der kan være nogle blødninger på grund af traumer fra klipning omkring det kaudale par brystvorter. Om nødvendigt kan dette gøres hæmostatisk med tryk eller sølvnitrat.Lav et syv centimeter snit ned linea alba fra lige under xiphoid-processen til den nedre brystvortelinje ved hjælp af et skalpelblad. Snittet skal ende 0,5 til en centimeter rostro fra urinrørsåbningen. Lav derefter et snit gennem muskellaget nedenunder.Saml abdominal retraktoren og inspicere bukhulen. Brug iristang til forsigtigt at lokalisere det venstre livmoderhorn. Løft forsigtigt det venstre livmoderhorn med en gribe- eller mygklemme.Begynd hysterektomi ved at ligere hornet under æggestokken og ovidukten ved hjælp af en mygklemme. For at fortsætte hysterektomien skal du klemme og trimme den tilstødende vaskulatur, bindevæv og fedt fra livmoderhornet ved hjælp af mikrosaks. Husk at klemme bindevævet inden fjernelse for at reducere blødning.Placer klemmerne så tæt på livmodergrænsefladen som muligt og op til uterocervikal krydset. Klem over livmoderhornet nær bifurcationspunktet ved hjælp af mygtang. Punktafgifter det ipsilaterale horn bare cephalad til klemmen for at undgå blødning.På grund af rottekarrenes lille kaliber var ligering af livmoderstubben med en midlertidig klemme tilstrækkelig til denne operation. Denne teknik kan imidlertid ændres efter behov ved enten at forsegle pediklerne med elektrokauteri eller suturligering. Juster abdominal retractor for at udsætte det nedre bækken.Undersøg den udsatte vaginale hvælving og bækkenbunden understøtter ligamental og bindevæv fastgjort til vagina og livmoderhalsen. Identificer urinlederen bilateralt, hvilket kun er medialt for æggestokkene. Identificer de uterosakrale ledbånd, som kan findes fastgjort til livmoderhalsen lige under de resterende stubbe af livmoderhornene.Ledbåndet spores i cephalad medial orientering mod korsbenet. Sæt en tre nul polydioxanon sutur på en lille tilspidset nål og læg en søm gennem venstre uterosacral ligament placeret højt på ledbåndet og tæt på korsbenet. Træk i sømmen for at sikre, at den har fanget det uterosakrale ledbånd, hvilket sikrer, at ledbåndsstrukturen indsættes i livmoderhalsen med oprindelsen delt bag endetarmen, hvor den fastgøres til korsbenet.Igen skal du identificere urinlederen for at sikre, at den ikke er blevet inkorporeret i eller knækket med den uterosakrale søm. Før derefter den venstre polydioxanonsøm gennem det venstre aspekt af vaginalhvelvet, mens du inkorporerer både de forreste og bageste aspekter af vaginalmanchetten. Gentag disse trin for at fuldføre proceduren for suspension af det uterosacrale ledbånd på højre side.Når uterosacralstingene er placeret bilateralt, bindes suturen sikkert ved hjælp af en firkantet knude, således at vaginalhvelvet er forhøjet cephalad mod korsbenet. Først dissekeres fedtvævet, indtil vaginalhvelvet er synligt. Fortsæt med at fjerne de abdominale fedtpuder, indtil enten det intakte uterosacral ligament er tydeligt synligt eller ved krydset mellem det uterosacral ledbånd og vaginalhvelvet er synligt.Brug en fleksibel lineal til at måle afstanden mellem den uterosacral indsættelse og vaginalhvelvet for at estimere vævets oprindelige længde. Tråd navlestrengstape bag det intakte uterosacral ligament eller det uterosacral ligament suspension junction, således at vævet er centreret på navlestrengen. Mål højden og bredden af vævet, hvor det skærer navlestrengen ved hjælp af digital tykkelse.At estimere værdierne, der bruges til at beregne tværsnitsareal. Ved trækprøvning anbringes dyret således, at prøven er centreret under grebet. Immobiliser bækkenområdet omkring prøven ved at fastgøre dyret til pladen.Sænket vejecellerne, så navlestrengens haler let når grebet. Fastgør navlestrengen i grebet, så tapen bliver slap for at undgå prøvemanipulation. Åbn derefter prækonditioneringstesten i softwaregrænsefladen, og mærk testen med prøvenavnet.Sørg for, at forkonditioneringsmetoden omfatter forspændingstrinnet. Klik for at starte prækonditioneringstesten, som forudindlæser prøven ved 0,015 Newton. Når forspændingskraften er stabil, klargør testen prøven med en forlængelseshastighed på 0,1 millimeter pr. Sekund i 30 sekunder.Efter 30 sekunder skal du lade vævet hvile i et minut. I mellemtiden skal du indlæse pull-to-failure-testregimet. Mærk testen med prøvenavnet, og klik på Næste for at komme til næste vindue.Indtast målerlængden på prøven, og klik derefter på ved siden af overgangen til testsiden. Balance alle og klik på Start. Lad testen køre med en forlængelseshastighed på 0,1 millimeter pr. Sekund, indtil vævet er trukket til svigt.Testen vil producere belastningsforskydningsdata. Efter placering af suturerne ved hjælp af denne protokol blev det nydannede kryds mellem det uterosakrale ledbånd og vaginalhvelvet forhøjet cephalad mod korsbenet og forhindrede bevægelse af livmoderhalsstubben. For intakt uterosacral ligament og uterosacral ligament suspension prøve, trækprøvning blev evalueret ved plots såsom belastningsforskydningskurve, spændingsbelastningsanalyse og hældning af linjekurvetilpasningsligningen.Dataene viste, at alle strukturelle materialeegenskaber af reparationsprøven var lavere end for det oprindelige uterosacral ligament. Strukturerne er små, og derfor kræver identifikation af dem praksis med omhyggelig dissektion. Teater specifikt kan være udfordrende at identificere, så et dissekeromfang kan være nyttigt.Vi vil også foreslå at øve med kadaveroperationer før overlevelsesoperationer. Vi beskriver en vej til forstærkning af den uterosakrale ligamentsuspension samt en ny metode til mekanisk test af ledbåndet. Målet er, at den augmentation, der er beskrevet i vores protokol, vil gøre prolapskirurgi mere vellykket i fremtiden og derfor bedre for patienterne.

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson's Disease

Udvikling af en ensidigt-læderede 6-OHDA-musemodellen af ​​Parkinsons sygdom

The unilaterally lesioned 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned rat model of Parkinson's disease (PD) has proved to be invaluable in advancing our ...

Rat Model of Blood-brain Barrier Disruption to Allow Targeted Neurovascular Therapeutics

Rottemodel af blod-hjerne barrieren Disruption at muliggøre målrettede neurovaskulær Therapeutics

Endothelial cells with tight junctions along with the basement membrane and astrocyte end feet surround cerebral blood vessels to form the blood-brain ...

A Model of Chronic Nutrient Infusion in the Rat

En model af kronisk Nutrient Infusion i Rat

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to  affect the function of several organs and tissues and to contribute to the  ...

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson's Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

Udvikling af en Alpha-synuclein Based rottemodel for Parkinsons sygdom via Stereotaktisk injektion af et Rekombinant adenoassocieret viral vektor

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on ...

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

Den dimethylnitrosamin induceret leverfibrose Model i Rat

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension

Shunt Surgery, Højre Heart kateterisation, og vaskulær Morfometri i en rotte model for Flow-induceret pulmonal arteriel hypertension

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Isometrisk kontraktilitet måling af musen mesenterica arterie ved hjælp af Wire blodkar

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Acupuncture in a Rat Model of Asthma

Akupunktur i en rotte model af astma

A high platform can fix rats without restriction and completely expose the acupoints on the back during acupuncture manipulation. This article describes ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

En ikke-invasiv metode til generering af den cykliske belastningsinducerede intraartikulære brusklæsionsmodel af rotteknæet

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...