Name: development of a uterosacral ligament suspension rat model
Uploaded: 2022-08-17T14:30:00
Duration: 8 min 58 s
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Ringraziamo la Prof.ssa Silvia Blemker per l'uso del suo Instron e il Prof. George Christ per l'uso del suo spazio chirurgico, nonché il supporto e l'impugnatura stampati in 3D. Questo lavoro è stato supportato dalla UVA-Coulter Translational Research Partnership e dal DoD (W81XWH-19-1-0157).

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Il protocollo è notevole per diversi vantaggi. Per quanto ne sappiamo, è la prima descrizione pubblicata di USLS nel modello di ratto e fornirà ai futuri ricercatori passaggi riproducibili per eseguire questa procedura nel contesto della ricerca. In secondo luogo, includiamo un nuovo protocollo per i test di trazione dell'interfaccia nativa e chirurgica dell'USL. Il protocollo di test di trazione potrebbe essere utilizzato in studi simili che studiano nuovi approcci di ingegneria tissutale per aumentare le riparazioni dei tessuti nativi come USLS. Inoltre, il modello di ratto stesso è utile per lo studio dei disturbi del pavimento pelvico a causa della facilità di movimentazione / imbarco, della breve durata della vita e dell'efficienza dei costi rispetto ai modelli animali più grandi. I limiti del protocollo includono l'incapacità di valutare una delle principali complicanze dell'USLS, il kinking ureterale. Nonostante questo, non abbiamo avuto casi di presunta lesione ureterale in questo studio. Un'altra considerazione è che l'orientamento orizzontale del bacino, il piccolo rapporto testa-canale fetale e la mancanza di prolasso spontaneo nel modello di ratto limitano una certa applicabilità dei risultati agli esseri umani. Tuttavia, l'uso di ratti multipare è un punto di forza di questo studio poiché rappresenta il principale fattore di rischio nello sviluppo di POP3.
L'istituzione di un protocollo di successo per l'isterectomia e l'USLS nel ratto Lewis sarà uno strumento utile per i futuri ricercatori che studiano i componenti chirurgici del POP, riducendo al minimo la variabilità nel testare il comportamento meccanico dell'USL. I modelli animali chirurgici sono utili in quanto consentono ai ricercatori di progettare esperimenti clinicamente rilevanti che controllano la parità, la massa corporea, la malattia e la nutrizione34, mitigando al contempo il rischio etico dello studio iniziale negli esseri umani. Inoltre, i modelli standardizzati per POP consentono ai ricercatori di aggirare i limiti della raccolta di tessuti umani. In particolare, i metodi di prova di trazione descritti in questo protocollo consentiranno la coerenza tra gli studi. I precedenti modelli di roditori hanno testato le proprietà meccaniche dell'intera regione pelvica, che comprende la cervice, la vagina e i legamenti di supporto pelvico multipli29,42. I metodi qui descritti consentono la misurazione dell'USL in modo da mantenere gli attaccamenti spinali e cervicali nativi. Va notato che i metodi di prova di trazione non valutano solo l'USL, ma piuttosto l'USL in combinazione con la sua inserzione nel sacro e nella cervice. Questo è un punto di forza dello studio in quanto riflette le solite forze in situ a cui è sottoposto il legamento. Riconosciamo che il comportamento meccanico del legamento isolato sarebbe diverso se fosse testato ex vivo senza i suoi attacchi nativi. Ciò è particolarmente vero in quanto le strutture dei ratti sono piccole e limitano la fattibilità della raccolta di un campione adatto per i test ex vivo. Le USL sperimentano il caricamento in più direzioni in situ, quindi la natura uniassiale del test è una limitazione, ma l'uso di questo metodo consente confronti significativi tra studi precedenti sulla meccanica USL del ratto29,42. Sebbene attualmente non esista un protocollo di test meccanico standard ampiamente accettato, questo modello sarà uno strumento utile per futuri studi di ingegneria tissutale sul campo.
Diversi passaggi descritti in questo protocollo sono fondamentali per la salute e il benessere degli animali, nonché per la riproducibilità della chirurgia USLS e dei successivi test di trazione. In primo luogo, è essenziale ottenere sia i farmaci analgesici che quelli antinfiammatori descritti come analgesici da soli sono risultati inadeguati per la gestione del dolore. L'antibiotico profilattico riduce il rischio di infezione del sito chirurgico ed è lo standard di cura nella chirurgia umana. Per quanto riguarda la procedura chirurgica USLS, evitare danni alle ovaie e ridurre al minimo la perdita di sangue sono essenziali per un intervento chirurgico di successo. I passaggi 1.3.3 e 1.3.4 descrivono la separazione della parte superiore del corno uterino dall'ovaio adiacente; Bisogna fare attenzione a mantenere questa dissezione sul lato del corno uterino per prevenire la rottura dei vasi delicati intorno all'ovaio, che può causare un eccessivo sanguinamento. Da notare, altri ricercatori hanno dimostrato che la funzione ovarica è preservata dopo la rimozione delle corna uterine43. Inoltre, se le ovaie vengono interrotte o rimosse, l'architettura complessiva della fibrilla di collagene sarà disturbata, alterando le proprietà meccaniche dei suoi tessuti44,45. Una volta che il corno uterino è separato in modo sicuro dall'ovaio, c'è un chiaro piano di dissezione che consente l'isolamento del corno uterino dai cuscinetti adiposi circostanti e dal sistema vascolare. Nonostante il chiaro piano di dissezione, i peduncoli lungo il corno uterino devono essere fissati con un morsetto prima della transezione con micro forbici. Contrariamente alla pratica chirurgica nell'uomo, abbiamo scoperto che la legatura della sutura dei peduncoli dell'isterectomia non è necessaria, poiché il bloccaggio del peduncolo prima della transezione garantisce un'emostasi adeguata. Il passo 1.3.6 del protocollo descrive questo attento processo per ridurre al minimo la perdita di sangue. Durante l'esecuzione dell'isterectomia, è necessario prestare molta attenzione per identificare gli ureteri come menzionato nei passaggi 1.3.6 e 1.3.8. Comprendere la vicinanza anatomica dell'uretere è fondamentale, poiché una delle complicanze più comuni associate alle USL nell'uomo è la lesione ureterale46.
In conclusione, presentiamo un nuovo protocollo per l'esecuzione di isterectomia, sospensione del legamento uterosacrale e test di trazione dell'USL in un modello di ratto. Prevediamo che i nostri risultati aiuteranno i futuri ricercatori scientifici di base fornendo una descrizione chiara e riproducibile di queste procedure e quindi consentiranno il progresso della ricerca sul prolasso degli organi pelvici.

Il prolasso degli organi pelvici (POP) è un disturbo comune del pavimento pelvico che colpisce milioni di donne in tutto il mondo con il potenziale di avere un impatto significativo su molti aspetti della vita di una donna, in particolare con l'etàdi 1 anno. In particolare, circa il 13% delle donne negli Stati Uniti subirà un intervento chirurgico per prolasso o incontinenza urinaria2. Una condizione più comune dopo la gravidanza e il parto, il prolasso è caratterizzato dalla discesa degli organi pelvici, prevalentemente i vari compartimenti della vagina e / o dell'utero, oltre la loro normale posizione nella cavità peritoneale. Ciò porta a fastidiosi sintomi di rigonfiamento vaginale o pressione, intestino, vescica e disfunzione sessuale e una qualità della vita complessivamente ridotta. Altri fattori di rischio per POP includono obesità, uso del tabacco, tosse cronica e costipazione3.
Nelle donne sane, gli organi del pavimento pelvico sono supportati dai muscoli elevatori ani, dai legamenti uterosacrali (USL), dai legamenti cardinali, dagli attacchi del tessuto connettivo al fianco pelvico e dalle strutture distali del corpo perineale 4,5. Le USL sono tra le più importanti strutture di supporto apicale sia per l'utero che per la vagina apicale e, quindi, sono spesso utilizzate nella correzione chirurgica del POP (Figura 1). Il supporto strutturale dell'USL deriva dal denso tessuto connettivo collagenoso nella regione sacrale che passa alla muscolatura liscia strettamente imballata. A causa di questo gradiente compositivo, l'USL si intreccia con la muscolatura uterina e vaginale per fornire un supporto robusto agli organi pelvici 6,7. Nella sospensione del legamento uterosacrale (USLS), le USL sono fissate alla volta vaginale a seguito di un'isterectomia, ripristinando la vagina e le strutture circostanti nella loro posizione anatomica nel compartimento addominale. Tuttavia, indipendentemente da una via transvaginale o laparoscopica, la procedura USLS è afflitta da un tasso di fallimento relativamente alto fino al 40% in alcuni studi 8,9. Il tasso di recidiva dei fastidiosi sintomi del rigonfiamento vaginale a 5 anni dopo la riparazione per il prolasso del compartimento apicale, come gli USL, è stato di circa il 40% in un ampio studio multicentrico randomizzato controllato9. Nello stesso studio, il ritrattamento per prolasso ricorrente a 5 anni è stato di circa il 10%. Il meccanismo di questo alto tasso di fallimento non è stato studiato, ma il ripristino della vagina e delle strutture circostanti nella loro posizione anatomica richiede il posizionamento della sutura nella regione collagenosa densa dell'USL10,11 piuttosto che nella regione della muscolatura liscia. Pertanto, l'alto tasso di fallimento potrebbe essere dovuto alla mancata corrispondenza meccanica e compositiva dell'interfaccia vagina-USL formata chirurgicamente rispetto alla completa integrazione osservata nell'attacco nativo cervicale-USL.
Anche l'impatto economico del trattamento di questi disturbi è notevole, con circa 300 milioni di dollari spesi ogni anno negli Stati Uniti per l'assistenza ambulatoriale12 e oltre 1 miliardo di dollari spesi ogni anno in costi diretti per le procedure chirurgiche13. Nonostante le vaste risorse economiche dedicate al trattamento di queste condizioni, le complicanze derivanti da molti interventi chirurgici al prolasso rimangono scoraggianti. Ad esempio, le riparazioni di prolasso apicale a base di rete in polipropilene, come la sacrocolpopessi, offrono tassi di successo più elevati rispetto alle riparazioni di tessuti nativi14, ma al costo di potenziali complicazioni come l'esposizione alla rete o l'erosione. La FDA ha ricevuto quasi 3.000 reclami relativi a complicazioni della rete solo tra il 2008 e il 2010. Ciò è culminato in un ordine della FDA di interrompere la produzione e la vendita di tutti i prodotti a rete transvaginale per POP nell'aprile 201915. Pertanto, vi è una forte necessità clinica di materiali diversi dal polipropilene e modelli con cui testarli, che possono aumentare le riparazioni del prolasso dei tessuti nativi e aumentare le percentuali di successo rispetto alle tecniche tradizionali con la sola sutura.
Dall'annuncio della FDA nel 2019, la maggior parte dei chirurghi pelvici ha smesso di usare la rete transvaginale per le riparazioni del prolasso, spingendo i ricercatori a cercare nuovi approcci di ingegneria tissutale per aumentare le riparazioni dei tessuti nativi16,17,18 come con le cellule stromali mesenchimali (MSC)9,20 . Con questo spostamento di attenzione, c'è un urgente bisogno di perfezionare i modelli animali che possono aiutare con lo sviluppo di nuovi materiali; La sfida in questo processo è bilanciare la rilevanza clinica con i costi. A tal fine, la scienza di base e i ricercatori clinici che studiano il prolasso degli organi pelvici hanno finora sfruttato diversi modelli animali, tra cui ratti, topi, conigli, pecore, suini e primati non umani19. Il processo di identificazione di un modello animale ottimale è impegnativo, poiché gli esseri umani sono bipedi, non hanno coda e hanno un processo di nascita traumatico rispetto ad altre specie di mammiferi20. I suini21 sono stati utilizzati per simulare la sacrocolpopessi robotica, mentre le pecore sono state utilizzate per simulare le riparazioni del prolasso vaginale22. Questi modelli animali, sebbene clinicamente rilevanti, sono limitati in termini di fattibilità dai costi e dalla manutenzione. I primati non umani sono stati utilizzati per studiare la patogenesi del prolasso; Le scimmie scoiattolo in particolare sono una delle poche specie diverse dall'uomo che possono sviluppare prolasso spontaneo, rendendole uno dei modelli animali più rilevanti20. I primati non umani sono stati utilizzati anche per studiare procedure chirurgiche ginecologiche come la sacrocolpopessi23 e il trapianto uterino24. Analogamente alle loro controparti ovine e suine, la limitazione principale dei primati non umani come modello animale di prolasso è il costo di manutenzione, cura e imbarco19.
Sebbene il bacino del roditore sia orientato orizzontalmente con un rapporto dimensioni del canale testa-nascita molto più piccolo rispetto agli esseri umani19, i ratti sono adatti per studi su piccoli animali di chirurgia USLS poiché hanno anatomia, cellularità, architettura istologica e composizione della matrice USL simili rispetto all'USL25 umano. Inoltre, sono vantaggiosi in termini di manutenzione e imbarco. Nonostante questi attributi benefici, non ci sono rapporti pubblicati di un modello di ratto di riparazione USLS. Pertanto, l'obiettivo è quello di descrivere un protocollo per l'isterectomia e USLS nel ratto Lewis multipare. Questo protocollo sarà utile per i ricercatori che mirano a studiare la fisiopatologia e le componenti chirurgiche del POP utilizzando questo modello animale accessibile.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64311/64311fig01.jpg"> Figura 1: Prolasso degli organi pelvici . (A) Il normale orientamento degli organi nella cavità peritoneale e (B) la drammatica descenza degli organi quando si verifica il prolasso. Dopo l'isterectomia, la sospensione del legamento uterosacrale (C) ripristina la vagina e le strutture circostanti nella loro corretta posizione anatomica. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64311/64311fig01large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione ingrandita di questa figura.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alcohol prep pad</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artificial Tear Ointment</td>
			<td>American Health Service Sales Corp</td>
			<td>PH-PARALUBE-O</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluehill software</td>
			<td>Instron</td>
			<td>Bluehill 3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cavicide 1 disinfectant</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22 998 800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compression platean</td>
			<td>Instron</td>
			<td>2501-163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Puritan Medical</td>
			<td>806-WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Sponge, 8-Ply</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95038-728</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mosquito Forceps</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MMDS1222115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holder</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>DYND04045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Scissors, 5&#189;&#34;, Sharp</td>
			<td>American Health Service Sales Corp</td>
			<td>4-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opioid Analgesic (Buprenorphine XR)</td>
			<td>Fidelis Animal Health</td>
			<td>Ethiqa XR</td>
			<td>0.65&#160;mg/kg&#160;SC&#160;Q72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NSAID Analgesic (Meloxicam SR)</td>
			<td>Wildlife Pharmaceuticals, LLC</td>
			<td>Meloxicam SR</td>
			<td>1&#160;mg/kg&#160;SC&#160;q72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS II, 3-0 Polydioxanone Suture, SH-1</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z316H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS II, 5-0 P olydioxanone Suture, RB-1</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z303H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retractor</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MDS1862107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade Stainless Surgical #10</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>4-310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MDS15210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor, Micro, Curved, 4.5&#34;</td>
			<td>Westcott</td>
			<td>MDS0910311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Column Universal Testing System</td>
			<td>Instron</td>
			<td>5943 S3873</td>
			<td>1 kN force capacity, 10 N load cell</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Natural Rubber Latex Gloves</td>
			<td>Accutech</td>
			<td>91225075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture,Vicryl,6-0,P-3</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J492G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape,Umbilical,Cotton,1/8X18&#34;</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>U10T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tension and Compression Load Cell</td>
			<td>Instron</td>
			<td>2530-10N</td>
			<td>10N load cell (1 kgf, 2 lbf)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary surgical adhesive (skin glue)</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>31477</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of a uterosacral ligament suspension rat model

Il prolasso degli organi pelvici (POP) è un disturbo comune del pavimento pelvico (PFD) con il potenziale di avere un impatto significativo sulla qualità della vita di una donna. Circa il 10% -20% delle donne subisce un intervento chirurgico di riparazione del pavimento pelvico per trattare il prolasso negli Stati Uniti. I casi di PFD comportano un costo annuale complessivo di 26,3 miliardi di dollari solo negli Stati Uniti. Questa condizione multifattoriale ha un impatto negativo sulla qualità della vita e tuttavia le opzioni di trattamento sono diminuite solo nel recente passato. Un'opzione chirurgica comune è la sospensione del legamento uterosacrale (USLS), che viene tipicamente eseguita fissando la volta vaginale al legamento uterosacrale nel bacino. Questa riparazione ha una minore incidenza di complicanze rispetto a quelle con aumento della rete, ma è notevole per un tasso di fallimento relativamente alto fino al 40%. Considerando la mancanza di modelli animali standard per studiare la disfunzione del pavimento pelvico, vi è un'urgente necessità clinica di innovazione in questo campo con particolare attenzione allo sviluppo di modelli animali economici e accessibili. In questo manoscritto, descriviamo un modello di ratto di USLS che coinvolge un'isterectomia completa seguita dalla fissazione della volta vaginale rimanente al legamento uterosacrale. L'obiettivo di questo modello è quello di imitare la procedura eseguita sulle donne per poter utilizzare il modello per poi indagare strategie riparative che migliorino l'integrità meccanica dell'attacco legamentoso. È importante sottolineare che descriviamo anche lo sviluppo di una procedura di prova di trazione in situ per caratterizzare l'integrità dell'interfaccia in punti temporali scelti dopo l'intervento chirurgico. Nel complesso, questo modello sarà uno strumento utile per studi futuri che studiano le opzioni di trattamento per la riparazione POP tramite USLS.

Fattibilità chirurgica e posizionamento della sutura uterosacrale Non ci sono state complicanze intraoperatorie correlate all'isterectomia o alla sospensione del legamento uterosacrale in nessuno degli animali. C'era un sanguinamento minimo durante la rimozione delle corna uterine, a condizione che la vascolarizzazione adiacente fosse bloccata prima della rimozione. Il sanguinamento limitato ha permesso una buona visualizzazione dei legamenti uterosacrali per il posizionamento della sutura e ha impedito lesioni intraoperatorie intestinali, del retto, ureterali o della vescica. Dopo il posizionamento delle suture, la nuova giunzione USL-volta vaginale ha impedito il movimento del moncone cervicale/uterino come mostrato in Figura 5C. Durante i primi tre giorni postoperatori, gli animali sono stati controllati quotidianamente e poi bisettimanalmente fino alla fine dell'esperimento. Con gli analgesici oppioidi e FANS a rilascio prolungato somministrati al momento dell'intervento chirurgico, ulteriori analgesici sono risultati non necessari. Sulla base della nostra esperienza con 16 interventi chirurgici sugli animali (n = 8 sia per i gruppi di controllo che per quelli USLS), ci si dovrebbe aspettare un calo di peso nella prima settimana dopo l'intervento chirurgico con una perdita media del 5,7 ± dell'1,4% dal peso del giorno dell'intervento. Come previsto, i ratti hanno lentamente guadagnato peso nelle successive 23 settimane, con un aumento di peso medio del 15,1 ± del 4,5% nel corso dell'esperimento.
Collaudo meccanico della riparazione USLS Per dimostrare la funzionalità della riparazione USLS, è stato eseguito un test di trazione uniassiale. Dopo l'eutanasia dell'animale nel momento post-operatorio scelto, 24 settimane in questo studio, l'area chirurgica deve essere attentamente sezionata per visualizzare la giunzione USL-volta vaginale come mostrato in Figura 6A. Rispetto ad altre metodologie per testare le USL del ratto insieme ad altre strutture di supporto e organi pelvici29,42, il metodo qui descritto è il primo a testare l'USL del ratto in modo isolato. Il nastro ombelicale utilizzato in questo studio è stato scelto strategicamente per la sua flessibilità in quanto la conformità del nastro ha consentito una minima interruzione del tessuto durante la preparazione dei test di trazione. I dati di spostamento del carico, quindi, devono essere regolati per tenere conto della piccola quantità di allungamento apportato dal nastro ombelicale. La Figura 9 fornisce un esempio di dati ottenuti tramite prove di trazione e la Figura 9A fornisce un esempio di un tipico grafico sforzo-deformazione. Si raccomanda la segnalazione dei dati di tensione-deformazione in quanto queste informazioni sono normalizzate e indipendenti dalle dimensioni dei campioni34 e possono essere meglio confrontate tra gli studi. Per il legamento uterosacrale intatto, riportiamo proprietà strutturali come carico finale (2,9 ± 0,5 N) e rigidità (0,4 ± 0,1 N/mm), nonché proprietà normalizzate del materiale come sollecitazione finale (2,1 ± 0,4 MPa), deformazione finale (1,6 ± 0,5) e modulo tangente (4,0 ± 1,1 MPa). Nei test uniassiali eseguiti sugli organi riproduttivi del ratto e su tutte le loro connessioni tissutali di supporto da Moalli et al., hanno riportato un carico finale al fallimento (13,2 ± 1,1 N) e rigidità (2,9 ± 0,9 N / mm) superiore all'USL29 isolato. Il lavoro svolto da Moalli et al. e da altra letteratura34,35 menziona l'elevata variabilità tra i campioni testati, come mostrato nei dati qui presentati. Per la riparazione della sospensione del legamento uterosacrale, abbiamo trovato tutte le proprietà strutturali del materiale (rigidità, 0,33 ± 0,13 N/mm; carico finale, 2,6 ± 1,3 N) e le proprietà normalizzate del materiale (sollecitazione finale, 1,8 ± 0,7 MPa; sforzo finale 1,3 ± 0,3; modulo tangente, 3,0 ± 0,9 MPa) inferiori a quelle dell'USL nativo.

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Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model

Il prolasso degli organi pelvici colpisce milioni di donne in tutto il mondo e tuttavia alcuni interventi chirurgici comuni hanno tassi di fallimento fino al 40%. La mancanza di modelli animali standard per studiare questa condizione impedisce il progresso. Proponiamo il seguente protocollo come modello per la sospensione del legamento uterosacrale e il test di trazione in vivo .

Sviluppo di un modello di ratto di sospensione del legamento uterosacrale

Pelvic organ prolapse (POP) is a common pelvic floor disorder (PFD) with the potential to significantly impact a woman's quality of life. Approximately ...

Il nostro protocollo è uno dei primi che utilizza un modello di ratto per descrivere la chirurgia della sospensione del legamento uterosacrale, e quindi può davvero servire come modello per i futuri ricercatori per studiare i risultati preclinici e le modifiche dell'intervento chirurgico. Il legamento uterosacrale rad è simile in anatomia, cellularità, architettura istologica e composizione rispetto al legamento uterosacrale umano. Questi componenti combinati con i vantaggi in termini di costi e la fattibilità lo rendono un ottimo modello per studiare l'aumento e gli esiti della chirurgia della sospensione del legamento uterosacrale.Il metodo di prova di trazione potrebbe essere adattato per l'uso in altri modelli animali del pavimento pelvico. Inoltre, i futuri ricercatori potrebbero utilizzare una configurazione di chirurgia generale per informare altri interventi chirurgici di prolasso e roditori come la sacrocolpopessi. Per iniziare, indossa un camice chirurgico, un copricapo, una maschera e guanti sterili.Coprire l'animale con un campo sterile lasciando scoperto solo l'addome. Ci può essere qualche sanguinamento a causa di traumi da taglio intorno al paio caudale di capezzoli. Se necessario, questo può essere reso emostatico con pressione o nitrato d'argento.Fai un'incisione di sette centimetri lungo la linea alba da appena sotto il processo xifoideo alla linea inferiore del capezzolo usando una lama di bisturi. L'incisione dovrebbe terminare da 0,5 a un centimetro rostro dall'orifizio uretrale. Quindi fare un'incisione attraverso lo strato muscolare sottostante.Assemblare il divaricatore addominale e ispezionare la cavità addominale. Usando una pinza per iride, localizzare delicatamente il corno uterino sinistro. Sollevare delicatamente il corno uterino sinistro con una pinza o un morsetto per zanzare.Inizia l'isterectomia legando il corno sotto l'ovaio e l'ovidotto usando un morsetto per zanzare. Per continuare l'isterectomia, bloccare e tagliare la vascolarizzazione adiacente, il tessuto connettivo e il grasso dal corno uterino usando micro forbici. Ricordarsi di bloccare il tessuto connettivo prima della rimozione per ridurre il sanguinamento.Posizionare i morsetti il più vicino possibile all'interfaccia uterina e fino alla giunzione uterocervicale. Morsetto attraverso il corno uterino vicino al punto di biforcazione usando una pinza per zanzare. Accisare il corno omolaterale appena cefalato al morsetto per evitare sanguinamento.A causa del piccolo calibro dei vasi di ratto, la legatura dei monconi uterini con un morsetto temporaneo era sufficiente per questo intervento chirurgico. Tuttavia, questa tecnica può essere modificata secondo necessità sigillando i peduncoli con elettrocauterizzazione o legatura di sutura. Regolare il divaricatore addominale per esporre il bacino inferiore.Ispezionare la volta vaginale esposta e il pavimento pelvico supporta i tessuti legamentosi e connettivi attaccati alla vagina e alla cervice. Identificare l'uretere bilateralmente, che è solo mediale alle ovaie. Identificare i legamenti uterosacrali che possono essere trovati attaccati alla cervice appena sotto i monconi rimanenti delle corna uterine.Il legamento è tracciato nell'orientamento mediale cefalo verso l'osso sacro. Metti una sutura di polidiossanone a tre zeri su un piccolo ago affusolato e posiziona un punto attraverso il legamento uterosacrale sinistro situato in alto sul legamento e vicino all'osso sacro. Tirare il punto per assicurarsi che abbia catturato il legamento uterosacrale assicurando che la struttura del legamento si inserisca nella cervice con l'origine che si divide dietro il retto dove si attacca all'osso sacro.Ancora una volta, identificare l'uretere per assicurarsi che non sia stato incorporato o attorcigliato con il punto uterosacrale. Quindi passare il punto di polidiossanone sinistro attraverso l'aspetto sinistro della volta vaginale incorporando sia gli aspetti anteriori che posteriori del bracciale vaginale. Ripetere questi passaggi per completare la procedura di sospensione del legamento uterosacrale sul lato destro.Dopo che i punti uterosacrali sono stati posizionati bilateralmente, legare saldamente la sutura usando un nodo quadrato in modo tale che la volta vaginale sia elevata cefalade verso l'osso sacro. In primo luogo, sezionare il tessuto adiposo fino a quando la volta vaginale è visibile. Continuare a rimuovere i cuscinetti di grasso addominale fino a quando il legamento uterosacrale intatto è chiaramente visibile o alla giunzione tra il legamento uterosacrale e la volta vaginale è visibile.Utilizzando un righello flessibile, misurare la distanza tra l'inserimento uterosacrale e la volta vaginale per stimare la lunghezza originale del tessuto. Infilare il nastro ombelicale dietro il legamento uterosacrale intatto o la giunzione di sospensione del legamento uterosacrale in modo tale che il tessuto sia centrato sul nastro ombelicale. Misurare l'altezza e la larghezza del tessuto dove si interseca con il nastro ombelicale utilizzando il calibro digitale.Per stimare i valori, utilizzato per calcolare l'area della sezione trasversale. Per le prove di trazione, posizionare l'animale in modo tale che il campione sia centrato sotto l'impugnatura. Immobilizzare la regione pelvica che circonda il campione fissando l'animale al piatto.Abbassate le celle di carico in modo tale che le code del nastro ombelicale raggiungano facilmente la presa. Fissare il nastro ombelicale nell'impugnatura lasciando il nastro allentato per evitare la manipolazione del campione. Quindi aprire il test di precondizionamento nell'interfaccia del software ed etichettare il test con il nome del campione.Assicurarsi che il metodo di precondizionamento includa la fase di precaricamento. Fare clic per avviare il test di precondizionamento che precaricherà il campione a 0,015 Newton. Una volta che la forza di precarico è stabile, il test precondizionerà il campione a una velocità di allungamento di 0,1 millimetri al secondo per 30 secondi.Dopo 30 secondi, lasciare riposare il tessuto per un minuto. Nel frattempo, caricare il pull nel regime di test di errore. Etichettare il test con il nome del campione e fare clic su Avanti per accedere alla finestra successiva.Immettere la lunghezza del misuratore del campione e quindi fare clic su Avanti per passare alla pagina di test. Bilancia tutto e fai clic su Start. Lasciare che il test venga eseguito a una velocità di allungamento di 0,1 millimetri al secondo fino a quando il tessuto non è stato tirato al guasto.Il test produrrà dati di spostamento del carico. Dopo il posizionamento delle suture utilizzando questo protocollo, la giunzione appena formata tra il legamento uterosacrale e la volta vaginale è stata elevata cefalade verso l'osso sacro e ha impedito il movimento del moncone cervicale. Per il campione intatto di sospensione del legamento uterosacrale e del legamento uterosacrale, la prova di trazione è stata valutata mediante grafici quali la curva di spostamento del carico, l'analisi della deformazione sotto sforzo e l'equazione di adattamento della pendenza della curva di linea.I dati hanno mostrato che tutte le proprietà strutturali del materiale del campione di riparazione erano inferiori a quelle del legamento uterosacrale nativo. Le strutture sono piccole, e quindi identificarle richiede la pratica di una dissezione meticolosa. Il teatro in particolare può essere difficile da identificare, quindi un ambito di dissezione può essere utile.Vorremmo anche suggerire di esercitarsi con interventi chirurgici da cadavere prima di interventi chirurgici di sopravvivenza. Descriviamo un percorso per l'aumento della sospensione del legamento uterosacrale e una nuova metodologia per i test meccanici del legamento. L'obiettivo è che l'aumento descritto nel nostro protocollo renderà la chirurgia del prolasso più efficace in futuro, e quindi migliore per i pazienti.

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Trapianto ortotopico aortica: un modello di ratto per studiare lo sviluppo di vasculopatia cronica

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Ricerca

Medicina

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson's Disease

Sviluppo di un unilateralmente lesionata 6-OHDA modello murino della malattia di Parkinson

The unilaterally lesioned 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned rat model of Parkinson's disease (PD) has proved to be invaluable in advancing our ...

Rat Model of Blood-brain Barrier Disruption to Allow Targeted Neurovascular Therapeutics

Modello Rat di emato-encefalica Turbativa Barriera per consentire mirato Therapeutics neurovascolare

Endothelial cells with tight junctions along with the basement membrane and astrocyte end feet surround cerebral blood vessels to form the blood-brain ...

A Model of Chronic Nutrient Infusion in the Rat

Un modello del Chronic Infusion nutrienti nel ratto

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to  affect the function of several organs and tissues and to contribute to the  ...

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson's Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

Sviluppo di un Rat modello Alfa-sinucleina per la malattia di Parkinson mediante iniezione stereotassica di un ricombinante vettore virale adeno-associato

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on ...

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

Il dimetilnitrosamina indotta fibrosi epatica modello nel ratto

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension

Chirurgia Shunt, Destra cuore cateterizzazione, e Vascolare Morfometria in un modello di ratto per Flow-indotta ipertensione arteriosa polmonare

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Misurazione di contrattilità isometrica dell'arteria mesenterica Mouse con filo Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Acupuncture in a Rat Model of Asthma

Agopuntura in un modello di ratto di asma

A high platform can fix rats without restriction and completely expose the acupoints on the back during acupuncture manipulation. This article describes ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

Un metodo non invasivo per generare il modello di lesione cartilaginea intra-articolare indotta dal carico ciclico del ginocchio di ratto

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...