Name: development of a uterosacral ligament suspension rat model
Uploaded: 2022-08-17T14:30:00
Duration: 8 min 58 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model at JoVE.com

Instron을 사용해 주신 Silvia Blemker 교수님과 수술 공간과 3D 프린팅 홀더 및 그립을 사용해주신 George Christ 교수님께 감사드립니다. 이 연구는 UVA-Coulter Translational Research Partnership과 DoD(W81XWH-19-1-0157)의 지원을 받았습니다.

저자는 공개 할 것이 없습니다.

이 프로토콜은 몇 가지 장점이 있습니다. 우리가 아는 한, 이것은 쥐 모델에서 USLS에 대한 첫 번째 발표된 설명이며, 미래의 연구자들에게 연구 환경에서 이 절차를 수행하기 위한 재현 가능한 단계를 제공할 것입니다. 둘째, USL의 기본 및 외과 인터페이스의 인장 시험을 위한 새로운 프로토콜을 포함합니다. 인장 시험 프로토콜은 USLS와 같은 천연 조직 복구를 보강하기 위한 새로운 조직공학적 접근법을 조사하는 유사한 연구에서 활용될 수 있습니다. 또한, 쥐 모델 자체는 대형 동물 모델에 비해 취급/탑승 용이성, 짧은 수명 및 비용 효율성으로 인해 골반저 질환 연구에 유용합니다. 프로토콜의 한계는 USLS의 주요 합병증 중 하나인 요관 꼬임을 평가할 수 없다는 것입니다. 그럼에도 불구하고 이 연구에서 추정되는 요관 손상 사례는 없었습니다. 또 다른 고려 사항은 골반의 수평 방향, 작은 태아 두두 대 산도 비율 및 쥐 모델에서 자발적인 탈출증의 부족이 인간에 대한 결과의 일부 적용 가능성을 제한한다는 것입니다. 그러나 다산 쥐의 사용은 POP3 발병의 주요 위험 요소를 설명하기 때문에 이 연구의 강점입니다.
루이스 쥐의 자궁적출술 및 USLS에 대한 성공적인 프로토콜의 확립은 USL의 기계적 거동을 테스트할 때 가변성을 최소화하면서 POP의 외과적 구성 요소를 조사하는 미래의 연구자들에게 유용한 도구가 될 것입니다. 수술용 동물 모델은 연구자들이 인간에 대한 초기 연구의 윤리적 위험을 완화하면서 동등성, 체질량, 질병 및 영양을 조절하는 임상적으로 관련된 실험을 설계할 수 있다는 점에서 유익하다.34 또한 POP에 대한 표준화된 모델을 통해 연구자는 인체 조직 수집의 한계를 우회할 수 있습니다. 특히, 이 프로토콜에 설명된 인장 시험 방법은 연구 간의 일관성을 가능하게 합니다. 이전의 설치류 모델은 자궁 경부, 질 및 다발성 골반 지지 인대를 포함하는 전체 골반 부위의 기계적 특성을 테스트하였다29,42. 여기에 설명된 방법을 사용하면 기본 척추 및 경추 부착물을 유지하는 방식으로 USL을 측정할 수 있습니다. 인장 시험 방법은 USL 단독으로 평가하는 것이 아니라 천골과 자궁경부에 삽입하는 것과 함께 USL을 평가한다는 점에 유의해야 합니다. 이것은 인대가 받는 일반적인 현장 힘을 반영하기 때문에 연구의 강점입니다. 우리는 분리된 인대의 기계적 거동이 기본 부착물 없이 생체 외에서 테스트되는 경우 다를 수 있음을 인정합니다. 쥐 구조가 작고 생체 외 테스트에 적합한 샘플을 수집할 수 있는 가능성을 제한하기 때문에 특히 그렇습니다. USL은 현장에서 여러 방향으로 하중을 가하는 것을 경험하므로 테스트의 일축 특성은 한계가 있지만 이 방법을 사용하면 쥐 USL 역학에 대한 이전 연구 간의 의미 있는 비교가 가능합니다29,42. 현재 널리 인정되는 표준 기계적 테스트 프로토콜은 없지만 이 모델은 해당 분야의 향후 조직 공학 연구에 유용한 도구가 될 것입니다.
이 프로토콜에 기술된 몇 가지 단계들은 동물들의 건강과 웰빙 뿐만 아니라 USLS 수술과 후속 인장 시험의 재현성에 매우 중요합니다. 첫째, 진통제와 진통제를 모두 얻는 것이 필수적이며 진통제만으로는 통증 관리에 부적합한 것으로 밝혀졌다. 예방적 항생제는 수술 부위 감염의 위험을 감소시키며 인간 수술의 표준 치료입니다. USLS 수술 절차와 관련하여, 난소 손상을 피하고 출혈을 최소화하는 것은 성공적인 수술을 위해 필수적입니다. 1.3.3 단계와 1.3.4 단계는 인접한 난소에서 자궁 뿔의 상단을 분리하는 것을 설명합니다. 과도한 출혈을 초래할 수 있는 난소 주변의 섬세한 혈관이 파괴되는 것을 방지하기 위해 자궁 뿔 측면에서 이 절개를 유지하도록 주의해야 합니다. 주목할 점은, 다른 연구자들은 난소 기능이 자궁 뿔을 제거한 후에도 보존된다는 것을 보여주었다43. 또한, 난소가 파괴되거나 제거되면 전체 콜라겐 원섬유 구조가 교란되어 조직의 기계적 특성이 변경됩니다44,45. 자궁 뿔이 난소에서 안전하게 분리되면 주변의 지방 패드 및 혈관 구조에서 자궁 뿔을 분리할 수 있는 명확한 해부면이 있습니다. 명확한 해부면에도 불구하고 자궁 뿔을 따라 있는 작은 꽃자루는 미세 가위로 절개하기 전에 클램프로 고정해야 합니다. 인간의 외과적 관행과 달리, 우리는 절개 전에 척추경을 조이면 적절한 지혈을 보장하기 때문에 자궁적출술 척추경의 봉합 결찰이 불필요하다는 것을 발견했습니다. 프로토콜의 1.3.6 단계는 혈액 손실을 최소화하기 위한 이 신중한 과정을 설명합니다. 자궁 적출술을 시행할 때 1.3.6 및 1.3.8 단계에서 언급한 대로 요관을 식별하는 데 세심한 주의를 기울여야 합니다. 인간의 USL과 관련된 가장 흔한 합병증 중 하나가 요관 손상이기 때문에 요관의 해부학적 근접성을 이해하는 것이 중요합니다46.
결론적으로, 우리는 쥐 모델에서 자궁적출술, 자궁천골 인대 서스펜션 및 USL의 인장 테스트를 수행하기 위한 새로운 프로토콜을 제시합니다. 우리는 우리의 연구 결과가 이러한 절차에 대한 명확하고 재현 가능한 설명을 제공함으로써 미래의 기초 과학 연구자들에게 도움이 될 것으로 기대하며, 이를 통해 골반 장기 탈출증 연구의 발전을 가능하게 할 것입니다.

골반 장기 탈출증(POP)은 전 세계 수백만 명의 여성에게 영향을 미치는 흔한 골반저 장애로, 특히1세부터 여성의 삶의 여러 측면에 상당한 영향을 미칠 수 있습니다. 특히, 미국 여성의 약 13%가 탈출증 또는 요실금 수술을 받는다2. 임신과 출산 후 가장 흔한 상태인 탈출증은 골반 장기, 주로 질 및/또는 자궁의 다양한 구획이 복강의 정상 위치를 넘어서는 것이 특징입니다. 이것은 질 팽창 또는 압력, 장, 방광 및 성기능 장애의 성가신 증상과 전반적인 삶의 질 저하로 이어집니다. POP의 다른 위험 요소로는 비만, 흡연, 만성 기침, 변비등이 있다 3.
건강한 여성의 경우 골반저 장기는 거근, 자궁천골 인대(USL), 추기경 인대, 골반 측벽에 부착된 결합 조직 및 회음부의 원위 구조에 의해 지지됩니다 4,5. USL은 자궁과 질의 치근단 모두에서 가장 중요한 치근단 지지 구조 중 하나이며, 따라서 POP의 외과적 교정에 자주 사용됩니다(그림 1). USL의 구조적 지지는 천골 부위의 조밀한 콜라겐 결합 조직에서 비롯되며, 이 결합 조직은 밀집된 평활근으로 전환됩니다. 이러한 조성 구배로 인해, USL은 자궁 및 질 근육과 얽혀 골반 장기를 견고하게 지지한다 6,7. 자궁천추 인대 서스펜션(uterosacral ligament suspension, USLS)에서 USL은 자궁적출술 후 질 저장고에 고정되어 질과 주변 구조물을 복부 구획의 해부학적 위치로 복원합니다. 그러나, 경질 또는 복강경 경로와 상관없이, USLS 시술은 일부 연구에서 최대 40%의 비교적 높은 실패율로 어려움을 겪고 있다 8,9. USL과 같은 정점 구획 탈출증에 대한 수리 후 5년 후 성가신 질 팽창 증상의 재발률은 대규모 다기관 무작위 대조 시험에서 약 40%였다9. 같은 시험에서 5년 후 재발성 탈출증에 대한 재치료는 약 10%였다. 이 높은 실패율의 메커니즘은 연구되지 않았지만 질과 주변 구조를 해부학적 위치로 복원하려면 평활근 영역이 아닌 USL10,11의 조밀한 콜라겐 영역에 봉합사 배치가 필요합니다. 따라서 높은 실패율은 기본 자궁경부-USL 부착물에서 볼 수 있는 완전한 통합과 비교하여 외과적으로 형성된 질-USL 인터페이스의 기계적 및 구성적 불일치 때문일 수 있습니다.
이러한 질환 치료의 경제적 영향 또한 주목할 만한데, 미국에서는 외래 진료에 연간 약 3억 달러가 지출되고12, 수술 절차에 대한 직접 비용으로 연간 10억 달러 이상이 지출된다13. 이러한 상태를 치료하는 데 전념하는 막대한 경제적 자원에도 불구하고 많은 탈출증 수술로 인해 발생하는 합병증은 여전히 낙담합니다. 예를 들어, 천골질고정술(sacrocolpopexy)과 같은 폴리프로필렌 메쉬 기반 치근단 탈출증 복구는 천연 조직 복구에 비해 더 높은 성공률을 제공하지만14, 그물망 노출이나 침식과 같은 잠재적인 합병증을 희생시킨다. FDA는 2008 년과 2010 년 사이에만 메쉬 합병증과 관련된 거의 3,000 건의 불만을 접수했습니다. 이는 2019년 4월 FDA가 POP용으로 질식으로 배치된 모든 메쉬 제품의 제조 및 판매를 중단하라는 명령으로 절정에 달했습니다15. 따라서 폴리프로필렌 이외의 재료와 이를 테스트하는 모델에 대한 임상적 요구가 강하며, 이는 봉합사만 사용하는 기존 기술에 비해 천연 조직 탈출증 복구를 증가시키고 성공률을 높일 수 있습니다.
2019년 FDA 발표 이후, 대부분의 골반 외과 의사들은 탈출증 수리를 위해 질식으로 배치된 메쉬 사용을 중단했으며, 이에 따라 연구자들은 중간엽 기질 세포(MSC)9,20와 같은 천연 조직 복구를 보강하기 위한 새로운 조직 공학적 접근 방식을 모색하게 되었습니다 . 이러한 초점의 변화로 인해 신소재 개발을 지원할 수 있는 동물 모델의 개선이 시급합니다. 이 과정에서 과제는 임상적 관련성과 비용의 균형을 맞추는 것입니다. 이를 위해 골반 장기 탈출증을 연구하는 기초 과학 및 임상 연구자들은 지금까지 쥐, 생쥐, 토끼, 양, 돼지 및 비인간 영장류를 포함한 여러 동물 모델을 활용했습니다19. 최적의 동물 모델을 식별하는 과정은 다른 포유류 종에 비해 이족보행이고, 꼬리가 없으며, 외상성 출생 과정을 가지고 있기 때문에 도전적이다20. 돼지(Swine)21는 로봇 천골고정술(sacrocolpopexy)을 시뮬레이션하는 데 사용되었고, 양(sheep)은 질 탈출증 복구(22)를 시뮬레이션하는 데 사용되었다. 이러한 동물 모델은 임상적으로 관련이 있지만 비용 및 유지 관리로 인해 실현 가능성이 제한적입니다. 인간이 아닌 영장류는 탈출증의 발병 기전을 연구하는 데 사용되었습니다. 특히 다람쥐 원숭이는 인간을 제외하고 자발적인 탈출증이 발생할 수 있는 유일한 종 중 하나로, 가장 관련성이 높은 동물 모델 중 하나이다20. 인간이 아닌 영장류는 또한 천골질고정술(sacrocolpopexy)23 및 자궁 이식(uterine transplantation)24과 같은 부인과 수술 절차를 연구하는 데 사용되어 왔다. 양과 돼지의 경우와 마찬가지로, 탈출증의 동물 모델로서 인간이 아닌 영장류의 주요 한계는 유지, 관리 및 탑승 비용이다19.
설치류의 골반은 인간에 비해 훨씬 작은 두부 대 산도 크기 비율로 수평으로 배향되어 있지만19), 쥐는 인간 USL25에 비해 유사한 USL 해부학, 세포성, 조직학적 구조 및 기질 구성을 가지고 있기 때문에 USLS 수술에 대한 소동물 연구에 적합합니다. 또한 유지 보수 및 탑승 측면에서 유리합니다. 이러한 유익한 특성에도 불구하고, USLS 수리의 쥐 모델에 대한 발표된 보고서는 없습니다. 그러므로, 목표는 다태 Lewis 쥐에서 자궁적출술 및 USLS를 위한 프로토콜을 설명하는 것입니다. 이 프로토콜은 이 접근 가능한 동물 모델을 사용하여 POP의 병태생리학 및 외과적 구성 요소를 연구하는 것을 목표로 하는 연구자에게 유용할 것입니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64311/64311fig01.jpg"> 그림 1: 골반 장기 탈출증. (A) 복강 내 장기의 정상적인 방향 및 (B) 탈출이 발생할 때 극적인 장기 하강. 자궁적출술 후 (C) 자궁천골 인대 현탁액은 질과 주변 구조를 적절한 해부학적 위치로 복원합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64311/64311fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alcohol prep pad</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artificial Tear Ointment</td>
			<td>American Health Service Sales Corp</td>
			<td>PH-PARALUBE-O</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluehill software</td>
			<td>Instron</td>
			<td>Bluehill 3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cavicide 1 disinfectant</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22 998 800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compression platean</td>
			<td>Instron</td>
			<td>2501-163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Puritan Medical</td>
			<td>806-WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Sponge, 8-Ply</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95038-728</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mosquito Forceps</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MMDS1222115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holder</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>DYND04045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Scissors, 5&#189;&#34;, Sharp</td>
			<td>American Health Service Sales Corp</td>
			<td>4-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opioid Analgesic (Buprenorphine XR)</td>
			<td>Fidelis Animal Health</td>
			<td>Ethiqa XR</td>
			<td>0.65&#160;mg/kg&#160;SC&#160;Q72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NSAID Analgesic (Meloxicam SR)</td>
			<td>Wildlife Pharmaceuticals, LLC</td>
			<td>Meloxicam SR</td>
			<td>1&#160;mg/kg&#160;SC&#160;q72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS II, 3-0 Polydioxanone Suture, SH-1</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z316H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS II, 5-0 P olydioxanone Suture, RB-1</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z303H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retractor</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MDS1862107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade Stainless Surgical #10</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>4-310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MDS15210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor, Micro, Curved, 4.5&#34;</td>
			<td>Westcott</td>
			<td>MDS0910311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Column Universal Testing System</td>
			<td>Instron</td>
			<td>5943 S3873</td>
			<td>1 kN force capacity, 10 N load cell</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Natural Rubber Latex Gloves</td>
			<td>Accutech</td>
			<td>91225075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture,Vicryl,6-0,P-3</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J492G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape,Umbilical,Cotton,1/8X18&#34;</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>U10T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tension and Compression Load Cell</td>
			<td>Instron</td>
			<td>2530-10N</td>
			<td>10N load cell (1 kgf, 2 lbf)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary surgical adhesive (skin glue)</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>31477</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of a uterosacral ligament suspension rat model

골반 장기 탈출증(POP)은 여성의 삶의 질에 상당한 영향을 미칠 가능성이 있는 일반적인 골반저 장애(PFD)입니다. 미국에서 약 10%-20%의 여성이 탈출증을 치료하기 위해 골반저 수리 수술을 받습니다. PFD 사례는 미국에서만 연간 총 263억 달러의 비용을 초래합니다. 이 다인성 상태는 삶의 질에 부정적인 영향을 미치지만 치료 옵션은 최근에 줄어들었습니다. 한 가지 일반적인 수술 옵션은 자궁천골 인대 서스펜션(uterosacral ligament suspension, USLS)으로, 일반적으로 골반의 자궁천골 인대에 질 금고를 부착하여 시행됩니다. 이 수리는 메쉬 확대술에 비해 합병증 발생률이 낮지만 최대 40%의 비교적 높은 실패율이 특징입니다. 골반저 기능 장애를 연구하기 위한 표준 동물 모델의 부족을 고려할 때, 비용 효율적이고 접근 가능한 동물 모델 개발에 중점을 둔 이 분야의 혁신에 대한 시급한 임상적 요구가 있습니다. 이 원고에서, 우리는 완전한 자궁적출술 후 나머지 질 저장고를 자궁천골 인대에 고정하는 USLS의 쥐 모델을 설명합니다. 이 모델의 목표는 모델을 사용하여 인대 부착의 기계적 무결성을 개선하는 회복 전략을 조사할 수 있도록 여성에게 수행되는 절차를 모방하는 것입니다. 중요한 것은 외과적 개입 후 선택한 시점에서 계면 무결성을 특성화하기 위한 현장 인장 시험 절차의 개발도 설명한다는 것입니다. 전반적으로, 이 모델은 USLS를 통한 POP 복구를 위한 치료 옵션을 조사하는 향후 연구에 유용한 도구가 될 것입니다.

수술 타당성 및 자궁천골 봉합사 배치 어떤 동물에서도 자궁적출술 또는 자궁천골 인대 현탁액과 관련된 수술 중 합병증은 없었습니다. 자궁 뿔을 제거하는 동안 출혈이 최소화되었으며, 제거하기 전에 인접한 혈관 구조가 고정되었습니다. 제한된 출혈은 봉합사 배치를 위한 자궁천골 인대의 좋은 시각화를 허용하고 수술 중 장, 직장, 요관 또는 방광 손상을 예방했습니다. 봉합사를 배치한 후 새로 형성된 USL-질 볼트 접합부는 그림 5C와 같이 자궁경부/자궁 그루터기의 움직임을 방지했습니다. 수술 후 처음 3일 동안, 동물을 매일 검사한 다음, 실험이 끝날 때까지 격주로 검사하였다. 수술 시 연장 방출 오피오이드 및 NSAID 진통제를 투여하면 추가 진통제가 불필요한 것으로 밝혀졌습니다. 16건의 동물 수술에 대한 우리의 경험에 비추어 볼 때(대조군과 USLS 그룹 모두에서 n = 8), 수술 후 첫 주에 수술 당일 체중에서 평균 5.7% ± 1.4%의 체중 감소가 예상되어야 합니다. 예상대로, 쥐는 이후 23 주 동안 서서히 체중이 증가했으며 실험 과정에서 평균 체중이 15.1 ± 4.5 % 증가했습니다.
USLS 수리의 기계적 테스트 USLS 수리의 기능을 입증하기 위해, 단축 인장 시험이 수행되었습니다. 이 연구에서 선택한 수술 후 시점인 24주에 동물을 안락사시킨 후 그림 6A와 같이 USL-질 금고 접합부를 시각화하기 위해 수술 부위를 주의 깊게 해부해야 합니다. 다른 지지 구조 및 골반 장기와 함께 쥐 USL을 테스트하기 위한 다른 방법론과 비교하여29,42, 여기에 설명된 방법은 쥐 USL을 분리된 방식으로 테스트하는 최초의 방법입니다. 이 연구에 사용된 탯줄 테이프는 테이프 컴플라이언스로 인해 인장 시험 준비 중 조직의 파괴를 최소화할 수 있기 때문에 유연성을 위해 전략적으로 선택되었습니다. 따라서 하중 변위 데이터는 탯줄 테이프에 의해 기여되는 작은 양의 신축성을 고려하여 조정되어야 합니다. 그림 9는 인장 시험을 통해 얻은 데이터의 예를 제공하며, 그림 9A는 일반적인 응력-변형률 플롯의 예를 제공합니다. 응력-변형률 데이터의 보고는 이 정보가 정규화되고 시편(34)의 크기와 무관하며 연구 전반에 걸쳐 더 잘 비교될 수 있기 때문에 권장됩니다. 온전한 자궁천골 인대의 경우 극한 하중(2.9 ± 0.5 N) 및 강성(0.4 ± 0.1 N/mm)과 같은 구조적 특성과 극한 응력(2.1 ± 0.4 MPa), 극한 변형률(1.6 ± 0.5) 및 접선 계수(4.0 ± 1.1 MPa)와 같은 정규화된 재료 특성을 보고합니다. Moalli et al.이 쥐의 생식 기관과 모든 지지 조직 연결에 대해 수행한 단축 테스트에서 그들은 고립된 USL29보다 높은 고장 시 최종 하중(13.2 ± 1.1 N) 및 강성(2.9 ± 0.9 N/mm)을 보고했습니다. Moalli et al. 및 기타 문헌34,35는 여기에 제시된 데이터에서 볼 수 있듯이 테스트 된 표본 간의 높은 변동성을 언급합니다. 자궁천골 인대 서스펜션 수리의 경우 모든 구조적 재료 특성(강성, 0.33 ± 0.13N/mm, 극한 하중, 2.6 ± 1.3N) 및 정규화된 재료 특성(극한 응력, 1.8 ± 0.7MPa, 극한 변형률 1.3 ± 0.3, 접선 계수, 3.0 ± 0.9MPa)이 기본 USL보다 낮습니다.

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Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model

골반 장기 탈출증은 전 세계 수백만 명의 여성에게 영향을 미치지만 일부 일반적인 외과 적 개입은 실패율이 40 %에 이릅니다. 이 상태를 조사하기 위한 표준 동물 모델의 부족은 진행을 방해합니다. 우리는 uterosacral ligament suspension 및 in vivo tensile testing의 모델로 다음 프로토콜을 제안합니다.

자궁천골 인대 서스펜션 쥐 모델 개발

Pelvic organ prolapse (POP) is a common pelvic floor disorder (PFD) with the potential to significantly impact a woman's quality of life. Approximately ...

우리의 프로토콜은 자궁천골 인대 서스펜션 수술을 설명하기 위해 쥐 모델을 사용하는 최초의 프로토콜 중 하나이며, 따라서 미래의 연구자가 수술의 전임상 결과 및 수정을 연구하기 위한 청사진 역할을 할 수 있습니다. rad uterosacral ligament는 인간의 uterosacral ligament와 비교하여 해부학, 세포성, 조직 학적 구조 및 구성이 유사합니다. 이러한 구성 요소는 비용 이점 및 타당성과 결합되어 자궁천골 인대 서스펜션 수술의 확대 및 결과를 연구하는 데 정말 훌륭한 모델입니다.인장 시험 방법은 다른 골반저 동물 모델에 사용하도록 조정할 수 있습니다. 또한 미래의 연구자들은 일반 수술 설정을 사용하여 다른 탈출증 수술 및 천골질 고정술과 같은 설치류에 정보를 제공할 수 있습니다. 시작하려면 수술 가운, 머리 덮개, 마스크 및 멸균 장갑을 착용하십시오.복부 만 노출 된 채로 멸균 된 필드로 동물을 덮으십시오. 꼬리 젖꼭지 주위를 자르는 외상으로 인해 약간의 출혈이있을 수 있습니다. 필요한 경우 압력 또는 질산은으로 지혈 할 수 있습니다.메스 칼날을 사용하여 xiphoid process 바로 아래에서 아래쪽 젖꼭지 라인까지 linea alba를 7cm 절개합니다. 절개는 요도 구멍에서 0.5-1 센티미터 로스트로로 끝나야합니다. 그런 다음 아래의 근육층을 통해 절개하십시오.복부 견인기를 조립하고 복강을 검사하십시오. 홍채 집게를 사용하여 왼쪽 자궁 뿔을 부드럽게 찾습니다. 집게나 모기 클램프로 왼쪽 자궁 뿔을 부드럽게 들어 올립니다.모기 클램프를 사용하여 난소와 난관 아래의 뿔을 결찰하여 자궁 적출술을 시작합니다. 자궁 적출술을 계속하려면 마이크로 가위를 사용하여 자궁 뿔에서 인접한 혈관 구조, 결합 조직 및 지방을 고정하고 다듬습니다. 출혈을 줄이기 위해 제거하기 전에 결합 조직을 고정하는 것을 잊지 마십시오.클램프를 가능한 한 자궁 경계면에 가깝게, 자궁 경부 접합부까지 배치하십시오. 모기 집게를 사용하여 분기점 근처의 자궁 뿔을 가로 질러 고정하십시오. 출혈을 피하기 위해 동측 뿔을 클램프에 두부로 절제하십시오.쥐 혈관의 구경이 작기 때문에 임시 클램프로 자궁 그루터기를 결찰하는 것이이 수술에 충분했습니다. 그러나 이 기술은 전기 소작 또는 봉합사 결찰로 척추경을 밀봉하여 필요에 따라 수정할 수 있습니다. 복부 견인기를 조정하여 하부 골반을 노출시킵니다.노출된 질 저장고와 골반저가 질과 자궁경부에 부착된 인대 및 결합 조직을 지지하는지 검사합니다. 난소의 내측인 양측으로 요관을 식별합니다. 자궁 뿔의 나머지 그루터기 바로 아래 자궁 경부에 붙어있는 자궁 천골 인대를 확인하십시오.인대는 천골을 향한 두부 내측 방향으로 추적됩니다. 작은 테이퍼 바늘에 3 개의 제로 폴리 디옥사논 봉합사를 넣고 인대에 높고 천골에 가까운 왼쪽 자궁 천골 인대를 통해 바늘을 꿰매십시오. 봉합을 잡아당겨 자궁천골 인대를 포착했는지 확인하고 인대 구조가 자궁경부에 삽입되도록 하고 원점이 천골에 부착되는 직장 뒤에서 갈라지도록 합니다.다시 말하지만, 요관이 자궁천골 봉합에 통합되거나 꼬이지 않았는지 확인하기 위해 요관을 식별합니다. 그런 다음 왼쪽 폴리디옥사논 스티치를 질 금고의 왼쪽 측면을 통해 통과시키면서 질 커프의 앞쪽과 뒤쪽 측면을 모두 통합합니다. 이 단계를 반복하여 오른쪽의 자궁천골 인대 정지 절차를 완료합니다.자궁천골 바늘을 양측으로 놓은 후 정사각형 매듭을 사용하여 봉합사를 단단히 묶어 질 금고가 천골 쪽으로 두부로 올라갑니다. 먼저 질 금고가 보일 때까지 지방 조직을 해부합니다. 손상되지 않은 자궁천골 인대가 명확하게 보이거나 자궁천골 인대와 질 금고 사이의 접합부가 보일 때까지 복부 지방 패드를 계속 제거합니다.유연한 자를 사용하여 자궁천골 삽입과 질 금고 사이의 거리를 측정하여 조직의 원래 길이를 추정합니다. 온전한 자궁천골 인대 또는 자궁천골 인대 현탁액 접합부 뒤에 탯줄 테이프를 끼워 조직이 탯줄 테이프의 중앙에 오도록 합니다. 디지털 캘리퍼스를 사용하여 탯줄 테이프와 교차하는 조직의 높이와 너비를 측정합니다.값을 추정하기 위해 단면적을 계산하는 데 사용됩니다. 인장 시험의 경우 시편이 그립 아래 중앙에 오도록 동물을 배치합니다. 동물을 플래튼에 고정하여 표본을 둘러싼 골반 부위를 고정합니다.탯줄 테이프의 꼬리가 그립에 쉽게 닿을 수 있도록로드 셀을 낮췄습니다. 표본 조작을 방지하기 위해 테이프를 느슨하게 남겨두고 그립에 탯줄 테이프를 고정합니다. 그런 다음 소프트웨어 인터페이스에서 전처리 테스트를 열고 샘플 이름으로 테스트에 레이블을 지정합니다.사전 컨디셔닝 방법에 사전 로드 단계가 포함되어 있는지 확인합니다. 0.015뉴턴에서 샘플을 미리 불러오는 사전 컨디셔닝 테스트를 시작하려면 클릭합니다. 예압력이 안정되면 테스트는 30초 동안 초당 0.1mm의 연신율로 샘플을 전처리합니다.30초 후 조직을 1분 동안 그대로 둡니다. 그 동안 풀 투 고장 테스트 체제를 로드합니다. 샘플 이름으로 테스트에 레이블을 지정하고 다음을 클릭하여 다음 창으로 이동합니다.샘플의 표점 거리를 입력하고 다음을 클릭하여 테스트 페이지로 전환합니다. 모두 균형을 맞추고 시작을 클릭하십시오. 조직이 파손될 때까지 초당 0.1mm의 연신율로 테스트를 실행합니다.이 테스트는 하중 변위 데이터를 생성합니다. 이 프로토콜을 사용하여 봉합사를 배치한 후 자궁천골 인대와 질 금고 사이에 새로 형성된 접합부가 두부 쪽으로 올라가 자궁경부 그루터기의 움직임을 방지했습니다. 온전한 자궁천골 인대 및 자궁천골 인대 현탁액 샘플의 경우, 하중 변위 곡선, 응력 변형률 분석 및 선 곡선 적합 방정식의 기울기와 같은 플롯으로 인장 시험을 평가했습니다.데이터는 복구 샘플의 모든 구조적 재료 특성이 천연 자궁천골 인대의 특성보다 낮다는 것을 보여주었습니다. 구조가 작기 때문에 식별하려면 세심한 해부 연습이 필요합니다. 극장은 특히 식별하기 어려울 수 있으므로 해부 범위가 유용 할 수 있습니다.또한 생존 수술 전에 사체 수술을 연습하는 것이 좋습니다. 우리는 자궁천골 인대 서스펜션의 증강을 위한 경로와 인대의 기계적 테스트를 위한 새로운 방법론을 설명합니다. 목표는 우리 프로토콜에 설명된 확대가 미래에 탈출증 수술을 더 성공적으로 만들어 환자에게 더 나은 결과를 가져다주는 것입니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Orthotopic 대동맥 이식 : 만성 Vasculopathy의 개발 연구에 생쥐 모델

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

연구

의학

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson's Disease

파킨슨병의 일방적-6-OHDA lesioned 마우스 모델의 개발

The unilaterally lesioned 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned rat model of Parkinson's disease (PD) has proved to be invaluable in advancing our ...

Rat Model of Blood-brain Barrier Disruption to Allow Targeted Neurovascular Therapeutics

혈액 - 뇌 장벽 장애의 쥐 모델 Neurovascular 치료학 타겟이 분명한 허용하려면

Endothelial cells with tight junctions along with the basement membrane and astrocyte end feet surround cerebral blood vessels to form the blood-brain ...

A Model of Chronic Nutrient Infusion in the Rat

쥐의 만성 영양 주입의 모델

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to  affect the function of several organs and tissues and to contribute to the  ...

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson's Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

재조합 아데노 - 관련 바이러스 성 벡터의 정위 주사를 통해 파킨슨 병에 대한 알파 - 시누 클레인 기반 쥐 모델 개발

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on ...

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

쥐에이 dimethylnitrosamine 유도 된 간 섬유화 모델

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension

흐름 유도 된 폐동맥 고혈압에 대한 쥐 모델에서 션트 수술, 오른쪽 심장 도관 및 혈관 형태 계측

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Acupuncture in a Rat Model of Asthma

천식의 쥐 모형에 있는 침술

A high platform can fix rats without restriction and completely expose the acupoints on the back during acupuncture manipulation. This article describes ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

래트 무릎의 순환 로딩 유도 관절내 연골 병변 모델을 생성하기 위한 비침습적 방법

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...