Name: development of a uterosacral ligament suspension rat model
Uploaded: 2022-08-17T14:30:00
Duration: 8 min 58 s
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Agradecemos à Profª Silvia Blemker pelo uso de seu Instron e ao Prof. George Christ pelo uso de seu espaço cirúrgico, bem como ao suporte e pega impressos em 3D. Este trabalho foi apoiado pela UVA-Coulter Translational Research Partnership e pelo DoD (W81XWH-19-1-0157).

Os autores não têm nada a revelar.

O protocolo é notável por várias vantagens. Até onde sabemos, é a primeira descrição publicada de USLS no modelo de ratos e fornecerá aos futuros investigadores passos reprodutíveis para a realização deste procedimento no ambiente de pesquisa. Em segundo lugar, incluímos um novo protocolo para teste de tração da interface nativa e cirúrgica da USL. O protocolo de ensaio de tração pode ser utilizado em estudos semelhantes que investigam novas abordagens de engenharia tecidual para aumentar o reparo tecidual nativo, como a USLS. Além disso, o próprio modelo de rato é útil para o estudo de distúrbios do assoalho pélvico devido à facilidade de manuseio/embarque, vida útil curta e eficiência de custo em comparação com modelos animais maiores. As limitações do protocolo incluem a incapacidade de avaliar uma das principais complicações da USLS, o acotovelamento ureteral. Apesar disso, não tivemos nenhum caso de lesão ureteral presumida neste estudo. Outra consideração é que a orientação horizontal da pelve, a pequena relação cabeça-canal fetal/parto e a ausência de prolapso espontâneo no modelo de rato limitam alguma aplicabilidade dos resultados em humanos. No entanto, o uso de ratos multíparas é um ponto forte deste estudo, uma vez que este é o principal fator de risco no desenvolvimento de POP3.
O estabelecimento de um protocolo bem-sucedido para histerectomia e USLS na rata Lewis será uma ferramenta útil para futuros pesquisadores que investigam componentes cirúrgicos da POP, minimizando a variabilidade no teste do comportamento mecânico da USL. Os modelos animais cirúrgicos são benéficos na medida em que permitem aos pesquisadores projetar experimentos clinicamente relevantes que controlam a paridade, a massa corporal, a doença e a nutrição34, ao mesmo tempo em que mitigam o risco ético do estudo inicial em humanos. Além disso, modelos padronizados para POP permitem que os pesquisadores contornem as limitações da coleta de tecidos humanos. Em particular, os métodos de ensaio de tração descritos neste protocolo permitirão a consistência entre os estudos. Modelos anteriores de roedores testaram as propriedades mecânicas de toda a região pélvica, que inclui o colo uterino, a vagina e os múltiplos ligamentos de sustentação pélvica29,42. Os métodos aqui descritos permitem a mensuração da USL de forma a manter as fixações nativas da coluna vertebral e cervical. Deve-se notar que os métodos de ensaio de tração não avaliam a USL isoladamente, mas sim a USL em combinação com sua inserção no sacro e no colo uterino. Este é um ponto forte do estudo, pois reflete as forças in situ usuais às quais o ligamento é submetido. Reconhecemos que o comportamento mecânico do ligamento isolado seria diferente se ele fosse testado ex vivo sem seus anexos nativos. Isto é especialmente verdadeiro uma vez que as estruturas dos ratos são pequenas e limitam a viabilidade de coletar uma amostra adequada para testes ex vivo. As USLs experimentam carregamento em múltiplas direções in situ, de modo que a natureza uniaxial do teste é uma limitação, mas o uso desse método permite comparações significativas entre estudos anteriores de USL mecânica de ratos29,42. Embora atualmente não haja um protocolo de ensaio mecânico padrão amplamente aceito, este modelo será uma ferramenta útil para futuros estudos de engenharia de tecidos na área.
Várias etapas descritas neste protocolo são fundamentais para a saúde e bem-estar dos animais, bem como para a reprodutibilidade da cirurgia de USLS e subsequente teste de tração. Primeiramente, é fundamental a obtenção tanto do analgésico quanto dos anti-inflamatórios descritos como o analgésico isolado mostrou-se inadequado para o manejo da dor. O antibiótico profilático diminui o risco de infecção do sítio cirúrgico e é o padrão de tratamento em cirurgia humana. Em relação ao procedimento cirúrgico da USLS, evitar danos aos ovários e minimizar a perda sanguínea são essenciais para o sucesso da cirurgia. Os passos 1.3.3 e 1.3.4 descrevem a separação do topo do corno uterino do ovário adjacente; Deve-se tomar cuidado para manter essa dissecção no lado do corno uterino para evitar o rompimento de vasos delicados ao redor do ovário, o que pode resultar em sangramento excessivo. É importante ressaltar que outros pesquisadores demonstraram que a função ovariana está preservada após a remoção dos cornos uterinos43. Além disso, se os ovários forem rompidos ou removidos, a arquitetura global da fibrila colágena será perturbada, alterando as propriedades mecânicas de seus tecidos44,45. Uma vez que o corno uterino é separado com segurança do ovário, há um plano claro de dissecção que permite o isolamento do corno uterino dos coxins de gordura e da vasculatura circundantes. Apesar do plano claro de dissecção, os pedículos ao longo do corno uterino devem ser fixados com uma pinça antes da transecção com microtesoura. Ao contrário da prática cirúrgica em humanos, verificamos que a ligadura de sutura dos pedículos da histerectomia é desnecessária, pois o pinçamento do pedículo antes da transecção garante hemostasia adequada. O passo 1.3.6 do protocolo descreve esse processo cuidadoso para minimizar a perda sanguínea. À medida que a histerectomia está sendo realizada, muito cuidado deve ser tomado para identificar os ureteres como mencionado nos passos 1.3.6 e 1.3.8. O entendimento da proximidade anatômica do ureter é fundamental, pois uma das complicações mais comuns associadas às USLs em humanos é a lesão ureteral46.
Em conclusão, apresentamos um novo protocolo para a realização de histerectomia, suspensão do ligamento uterossacro e teste de tração do USL em um modelo de rata. Antecipamos que nossos achados auxiliarão futuros pesquisadores da ciência básica, fornecendo uma descrição clara e reprodutível desses procedimentos e, assim, permitindo o avanço da pesquisa de prolapso de órgãos pélvicos.

O prolapso de órgãos pélvicos (POP) é uma doença comum do assoalho pélvico que afeta milhões de mulheres em todo o mundo com o potencial de impactar significativamente muitos aspectos da vida de uma mulher, particularmente com a idadede 1. Notadamente, aproximadamente 13% das mulheres nos Estados Unidos serão submetidas à cirurgia por prolapso ou incontinência urinária2. Condição mais comum após a gravidez e o parto, o prolapso é caracterizado pela descida de órgãos pélvicos, predominantemente dos diversos compartimentos da vagina e/ou útero, além de sua posição normal na cavidade peritoneal. Isso leva a sintomas incômodos de protuberância ou pressão vaginal, intestino, bexiga e disfunção sexual, e qualidade de vida geral reduzida. Outros fatores de risco para DPO incluem obesidade, tabagismo, tosse crônica e constipação3.
Em mulheres saudáveis, os órgãos do assoalho pélvico são sustentados pelos músculos elevadores do ânus, ligamentos uterossacrais (USLs), ligamentos cardinais, anexos do tecido conjuntivo à parede lateral pélvica e estruturas distais do corpo perineal 4,5. As USLs estão entre as estruturas de suporte apicais mais importantes tanto para o útero quanto para a vagina apical, sendo, portanto, frequentemente utilizadas na correção cirúrgica da DPO (Figura 1). O suporte estrutural da USL provém do tecido conjuntivo colágeno denso na região sacral que faz a transição para o músculo liso intimamente compactado. Devido a esse gradiente composicional, a USL se entrelaça com a musculatura uterina e vaginal para fornecer suporte robusto aos órgãos pélvicos 6,7. Na suspensão do ligamento uterossacro (USLS), as USLs são fixadas à abóbada vaginal após uma histerectomia, restaurando a vagina e as estruturas circundantes à sua posição anatômica no compartimento abdominal. No entanto, independentemente de uma via transvaginal ou laparoscópica, o procedimento de USLS é atormentado por uma taxa de falha relativamente alta, de até 40% em alguns estudos 8,9. A taxa de recorrência de sintomas incômodos de abaulamento vaginal em 5 anos após o reparo para prolapso do compartimento apical, como USLs, foi de aproximadamente 40% em um grande ensaio clínico randomizado e controlado multicêntrico9. No mesmo estudo, o retratamento para prolapso recorrente em 5 anos foi de aproximadamente 10%. O mecanismo dessa alta taxa de falha não foi estudado, mas restaurar a vagina e as estruturas adjacentes à sua posição anatômica requer a colocação de sutura na região colágena densa da USL10,11 e não na região da musculatura lisa. Portanto, a alta taxa de falha pode ser devida ao descompasso mecânico e composicional da interface vagina-USL cirurgicamente formada em comparação com a integração completa observada na fixação cervical-USL nativa.
O impacto econômico do tratamento desses distúrbios também é notável, com aproximadamente US$ 300 milhões gastos anualmente nos EUA em assistência ambulatorial12 e mais de US$ 1 bilhão gasto anualmente em custos diretos para procedimentos cirúrgicos13. Apesar dos vastos recursos econômicos dedicados ao tratamento dessas condições, as complicações decorrentes de muitas cirurgias de prolapso permanecem desanimadoras. Por exemplo, reparos de prolapso apical à base de tela de polipropileno, como a sacrocolpopexia, oferecem maiores taxas de sucesso em comparação com reparos de tecidos nativos14, mas à custa de complicações potenciais, como exposição ou erosão da tela. A FDA recebeu quase 3.000 queixas relacionadas a complicações da malha apenas entre 2008 e 2010. Isso culminou em uma ordem da FDA para interromper a fabricação e venda de todos os produtos de malha transvaginalmente colocados para POP em abril de 201915. Portanto, há uma forte necessidade clínica de outros materiais além do polipropileno e modelos com os quais testá-los, que possam aumentar o reparo do prolapso do tecido nativo e aumentar as taxas de sucesso em comparação com as técnicas tradicionais com sutura isolada.
Desde o anúncio da FDA em 2019, a maioria dos cirurgiões pélvicos parou de usar telas transvaginais para reparos de prolapso, levando os pesquisadores a buscar novas abordagens de engenharia de tecidos para aumentar os reparos de tecidos nativos16,17,18, como com células estromais mesenquimais (CTMs)9,20 . Com essa mudança de foco, há uma necessidade urgente de refinamento de modelos animais que possam auxiliar no desenvolvimento de novos materiais; O desafio nesse processo é equilibrar relevância clínica com custo. Para esse fim, a ciência básica e os investigadores clínicos que estudam o prolapso de órgãos pélvicos têm se aproveitado de vários modelos animais até o momento, incluindo ratos, camundongos, coelhos, ovinos, suínos e primatas não humanos19. O processo de identificação de um modelo animal ótimo é desafiador, pois os seres humanos são bípedes, não têm cauda e têm um processo de nascimento traumático em comparação com outras espécies de mamíferos20. Suínos21 têm sido utilizados para simular sacrocolpopexia robótica, enquanto ovinos têm sido utilizados para simular reparos de prolapso vaginal22. Esses modelos animais, embora clinicamente relevantes, são limitados em viabilidade pelo custo e manutenção. Primatas não humanos têm sido usados para estudar a patogênese do prolapso; Os macacos-de-cheiro, em particular, são uma das únicas espécies além do homem que podem desenvolver prolapso espontâneo, tornando-os um dos modelos animais mais relevantes20. Primatas não humanos também têm sido utilizados para estudar procedimentos cirúrgicos ginecológicos, como a sacrocolpopexia23 e o transplante uterino24. Semelhante aos seus homólogos ovinos e suínos, a principal limitação dos primatas não humanos como modelo animal de prolapso é o custo de manutenção, cuidados e embarque19.
Embora a pelve de roedores esteja orientada horizontalmente com uma proporção de tamanho do canal cabeça/parto muito menor em comparação com os seres humanos19, os ratos são adequados para estudos em pequenos animais de cirurgia de USLS porque têm anatomia de USL, celularidade, arquitetura histológica e composição de matriz semelhantes às USL25 humanas. Além disso, são benéficos em termos de manutenção e embarque. Apesar desses atributos benéficos, não há relatos publicados de um modelo de reparo de USLS em ratos. Portanto, o objetivo é descrever um protocolo para histerectomia e USLS em ratas Lewis multíparas. Este protocolo será benéfico para os investigadores que pretendem estudar a fisiopatologia e os componentes cirúrgicos da DPO utilizando este modelo animal acessível.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64311/64311fig01.jpg"> Figura 1: Prolapso de órgão pélvico. (A) A orientação normal dos órgãos na cavidade peritoneal e (B) a dramática descida do órgão quando ocorre prolapso. Após a histerectomia, (C) a suspensão do ligamento uterossacro restaura a vagina e as estruturas adjacentes à sua posição anatômica adequada. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64311/64311fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alcohol prep pad</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artificial Tear Ointment</td>
			<td>American Health Service Sales Corp</td>
			<td>PH-PARALUBE-O</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluehill software</td>
			<td>Instron</td>
			<td>Bluehill 3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cavicide 1 disinfectant</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22 998 800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compression platean</td>
			<td>Instron</td>
			<td>2501-163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Puritan Medical</td>
			<td>806-WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Sponge, 8-Ply</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95038-728</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mosquito Forceps</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MMDS1222115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holder</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>DYND04045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Scissors, 5&#189;&#34;, Sharp</td>
			<td>American Health Service Sales Corp</td>
			<td>4-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opioid Analgesic (Buprenorphine XR)</td>
			<td>Fidelis Animal Health</td>
			<td>Ethiqa XR</td>
			<td>0.65&#160;mg/kg&#160;SC&#160;Q72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NSAID Analgesic (Meloxicam SR)</td>
			<td>Wildlife Pharmaceuticals, LLC</td>
			<td>Meloxicam SR</td>
			<td>1&#160;mg/kg&#160;SC&#160;q72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS II, 3-0 Polydioxanone Suture, SH-1</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z316H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS II, 5-0 P olydioxanone Suture, RB-1</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z303H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retractor</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MDS1862107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade Stainless Surgical #10</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>4-310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MDS15210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor, Micro, Curved, 4.5&#34;</td>
			<td>Westcott</td>
			<td>MDS0910311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Column Universal Testing System</td>
			<td>Instron</td>
			<td>5943 S3873</td>
			<td>1 kN force capacity, 10 N load cell</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Natural Rubber Latex Gloves</td>
			<td>Accutech</td>
			<td>91225075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture,Vicryl,6-0,P-3</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J492G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape,Umbilical,Cotton,1/8X18&#34;</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>U10T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tension and Compression Load Cell</td>
			<td>Instron</td>
			<td>2530-10N</td>
			<td>10N load cell (1 kgf, 2 lbf)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary surgical adhesive (skin glue)</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>31477</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of a uterosacral ligament suspension rat model

O prolapso de órgãos pélvicos (POP) é um distúrbio comum do assoalho pélvico (DFP) com potencial para impactar significativamente a qualidade de vida da mulher. Aproximadamente 10%-20% das mulheres são submetidas à cirurgia de reparo do assoalho pélvico para tratar o prolapso nos Estados Unidos. Os casos de DFP resultam em um custo anual total de US$ 26,3 bilhões apenas nos Estados Unidos. Essa condição multifatorial tem um impacto negativo na qualidade de vida e, no entanto, as opções de tratamento só diminuíram no passado recente. Uma opção cirúrgica comum é a suspensão do ligamento uterossacro (USLS), que geralmente é realizada através da fixação da abóbada vaginal ao ligamento uterossacro na pelve. Esse reparo tem menor incidência de complicações em comparação com aqueles com aumento de tela, mas é notável por uma taxa de falha relativamente alta, de até 40%. Considerando a falta de modelos animais padronizados para estudar a disfunção do assoalho pélvico, há uma necessidade clínica urgente de inovação nesse campo, com foco no desenvolvimento de modelos animais acessíveis e custo-efetivos. Neste manuscrito, descrevemos um modelo de USLS em ratos envolvendo uma histerectomia completa seguida de fixação da abóbada vaginal remanescente ao ligamento uterossacro. O objetivo desse modelo é mimetizar o procedimento realizado em mulheres para poder usá-lo para, então, investigar estratégias reparadoras que melhorem a integridade mecânica da fixação ligamentar. É importante ressaltar que também descrevemos o desenvolvimento de um procedimento de ensaio de tração in situ para caracterizar a integridade da interface em momentos escolhidos após a intervenção cirúrgica. De modo geral, este modelo será uma ferramenta útil para estudos futuros que investiguem opções de tratamento para reparo de DPO via USLS.

Viabilidade cirúrgica e colocação da sutura uterossacral Não houve complicações intraoperatórias relacionadas à histerectomia ou suspensão do ligamento uterossacro em nenhum dos animais. Houve sangramento mínimo durante a remoção dos cornos uterinos, desde que a vasculatura adjacente fosse pinçada antes da remoção. O sangramento limitado permitiu boa visualização dos ligamentos uterossacrais para colocação de sutura e preveniu lesões intestinais, reto, ureterais ou vesicais intraoperatórias. Após a colocação das suturas, a junção recém-formada USL-cúpula-abóbada vaginal impediu a movimentação do coto cervical/uterino, como mostra a Figura 5C. Durante os três primeiros dias de pós-operatório, os animais foram submetidos a exames diários e quinzenais até o final do experimento. Com o opioide de liberação prolongada e os analgésicos AINEs administrados no momento da cirurgia, analgésicos adicionais foram considerados desnecessários. Com base em nossa experiência com 16 cirurgias em animais (n = 8 para ambos os grupos controle e USLS), uma queda de peso deve ser esperada na primeira semana após a cirurgia, com uma perda média de 5,7 ± 1,4% do peso do dia da cirurgia. Como esperado, os ratos ganharam peso lentamente nas 23 semanas subsequentes, com um ganho de peso médio de 15,1 ± 4,5% ao longo do experimento.
Teste mecânico do reparo USLS Para demonstrar a funcionalidade do reparo da USLS, foi realizado ensaio uniaxial de tração. Após a eutanásia do animal no momento pós-operatório escolhido, 24 semanas neste estudo, a área cirúrgica deve ser cuidadosamente dissecada para visualização da junção USL-abóbada vaginal, como mostra a Figura 6A. Comparado a outras metodologias para testar as USLs de ratos em conjunto com outras estruturas de suporte e órgãos pélvicos29,42, o método aqui descrito é o primeiro a testar a USL de ratos de forma isolada. A fita umbilical utilizada neste estudo foi estrategicamente escolhida por sua flexibilidade, uma vez que a complacência da fita permitiu o mínimo de ruptura do tecido durante o preparo do ensaio de tração. Os dados de deslocamento da carga, portanto, devem ser ajustados para levar em conta a pequena quantidade de estiramento contribuída pela fita umbilical. A Figura 9 fornece um exemplo de dados obtidos por meio de ensaios de tração, com a Figura 9A fornecendo um exemplo de um gráfico típico de tensão-deformação. O relato de dados de tensão-deformação é recomendado, pois essas informações são normalizadas e independentes do tamanho dos espécimes34 e podem ser melhor comparadas entre os estudos. Para o ligamento uterossacro íntegro, relatamos propriedades estruturais como carga máxima (2,9 ± 0,5 N) e rigidez (0,4 ± 0,1 N/mm), bem como propriedades do material normalizado, como tensão máxima (2,1 ± 0,4 MPa), deformação máxima (1,6 ± 0,5) e módulo tangente (4,0 ± 1,1 MPa). Nos testes uniaxiais realizados nos órgãos reprodutivos de ratos e em todas as suas conexões teciduais de suporte por Moalli et al., eles relataram uma carga máxima na falha (13,2 ± 1,1 N) e rigidez (2,9 ± 0,9 N/mm) maior do que a USL isolada29. O trabalho de Moalli et al., e outros daliteratura34,35, mencionam a alta variabilidade entre os corpos de prova testados, como mostram os dados aqui apresentados. Para o reparo da suspensão do ligamento uterossacro, todas as propriedades estruturais do material (rigidez, 0,33 ± 0,13 N/mm; carga máxima, 2,6 ± 1,3 N) e normalizadas do material (tensão máxima, 1,8 ± 0,7 MPa; deformação final 1,3 ± 0,3; módulo tangente, 3,0 ± 0,9 MPa) foram menores que as da USL nativa.

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Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model

O prolapso de órgãos pélvicos afeta milhões de mulheres em todo o mundo e, no entanto, algumas intervenções cirúrgicas comuns têm taxas de falha de até 40%. A falta de modelos animais padronizados para investigar essa condição impede o progresso. Propomos o seguinte protocolo como modelo para suspensão do ligamento uterossacro e ensaio de tração in vivo .

Desenvolvimento de um modelo de rato de suspensão do ligamento uterossacro

Pelvic organ prolapse (POP) is a common pelvic floor disorder (PFD) with the potential to significantly impact a woman's quality of life. Approximately ...

Nosso protocolo é um dos primeiros que utiliza um modelo de rato para descrever a cirurgia de suspensão do ligamento uterossacro e, portanto, pode realmente servir como um modelo para futuros investigadores estudarem os resultados pré-clínicos e as modificações da cirurgia. O ligamento raduariossacro é semelhante em anatomia, celularidade, arquitetura histológica e composição em comparação com o ligamento uterossacro humano. Esses componentes combinados com o custo-benefício e a viabilidade o tornam um ótimo modelo para estudar o aumento e os resultados da cirurgia de suspensão do ligamento uterossacro.O método de ensaio de tração pode ser adaptado para uso em outros modelos animais do assoalho pélvico. Além disso, futuros investigadores poderiam usar uma configuração de cirurgia geral para informar outras cirurgias de prolapso e roedores, como a sacrocolpopexia. Para começar, use avental cirúrgico, capa para a cabeça, máscara e luvas estéreis.Escorra o animal com um campo estéril deixando apenas o abdômen exposto. Pode haver algum sangramento devido ao trauma do clipping ao redor do par caudal de mamilos. Se necessário, este pode ser feito hemostático com pressão ou nitrato de prata.Faça uma incisão de sete centímetros pela linha alba logo abaixo do processo xifoide até a linha inferior do mamilo usando uma lâmina de bisturi. A incisão deve terminar 0,5 a um centímetro do rostro do orifício uretral. Em seguida, faça uma incisão através da camada muscular abaixo.Monte o afastador abdominal e inspecione a cavidade abdominal. Usando pinça de íris, localize suavemente o corno uterino esquerdo. Eleve suavemente o chifre uterino esquerdo com um pinça ou pinça de mosquito.Comece a histerectomia ligando o chifre abaixo do ovário e oviduto usando uma braçadeira de mosquito. Para continuar a histerectomia, pinçar e aparar a vasculatura adjacente, o tecido conjuntivo e a gordura do corno uterino usando microtesoura. Lembre-se de apertar o tecido conjuntivo antes da remoção para reduzir o sangramento.Coloque as pinças o mais próximo possível da interface uterina e até a junção uterocervical. Aperte o chifre uterino perto do ponto de bifurcação usando pinças de mosquito. Excise o corno ipsilateral apenas cefálico à pinça para evitar sangramento.Devido ao pequeno calibre dos vasos das ratas, a ligadura dos cotos uterinos com pinça temporária foi suficiente para esta cirurgia. No entanto, essa técnica pode ser modificada conforme a necessidade, seja selando os pedículos com eletrocautério ou ligadura de sutura. Ajustar o afastador abdominal para expor a pelve inferior.Inspecione a abóbada vaginal exposta e os tecidos ligamentares e conjuntivos de suporte do assoalho pélvico ligados à vagina e ao colo do útero. Identificar o ureter bilateralmente, que é apenas medial aos ovários. Identificar os ligamentos uterossacrais que podem ser encontrados ligados ao colo do útero logo abaixo dos cotos restantes dos cornos uterinos.O ligamento é traçado na orientação medial cefálica em direção ao sacro. Coloque uma sutura de polidioxanona de três zero em uma pequena agulha cônica e coloque um ponto através do ligamento uterossacro esquerdo localizado no alto do ligamento e próximo ao sacro. Puxe o ponto para garantir que ele tenha capturado o ligamento uterossacro, garantindo que a estrutura ligamentar se insira no colo do útero com a origem se dividindo atrás do reto, onde se liga ao sacro.Novamente, identifique o ureter para garantir que ele não tenha sido incorporado ou torcido com o ponto uterossacral. Em seguida, passe o ponto de polidioxanona esquerda através da face esquerda da abóbada vaginal, incorporando os aspectos anterior e posterior do manguito vaginal. Repita estes passos para completar o procedimento de suspensão do ligamento uterossacro no lado direito.Após a colocação dos pontos uterossacrais bilateralmente, amarre firmemente a sutura com um nó quadrado de tal forma que a abóbada vaginal seja elevada em direção ao sacro. Primeiro, disseque o tecido adiposo até que a abóbada vaginal esteja visível. Continue a remover os coxins de gordura abdominal até que o ligamento uterossacro intacto seja claramente visível ou na junção entre o ligamento uterossacro e a abóbada vaginal seja visível.Usando uma régua flexível, meça a distância entre a inserção uterossacra e a abóbada vaginal para estimar o comprimento original do tecido. Rosqueie a fita umbilical atrás do ligamento uterossacro intacto ou da junção de suspensão do ligamento uterossacro de tal forma que o tecido esteja centrado na fita umbilical. Medir a altura e a largura do tecido onde este se cruza com a fita umbilical utilizando paquímetro digital.Para estimar os valores, utilizado para calcular a área de secção transversal. Para o ensaio de tração, posicione o animal de tal forma que o espécime fique centralizado sob a pega. Imobilizar a região pélvica ao redor do espécime, prendendo o animal à placa.Abaixado as células de carga de tal forma que as caudas da fita umbilical alcançam facilmente a aderência. Fixe a fita umbilical no punho deixando a fita frouxa para evitar a manipulação do espécime. Em seguida, abra o teste de pré-condicionamento na interface do software e rotule o teste com o nome da amostra.Certifique-se de que o método de pré-condicionamento inclua a etapa de pré-carga. Clique para iniciar o teste de pré-condicionamento que irá pré-carregar a amostra a 0,015 Newton. Uma vez que a força de pré-carga esteja estável, o teste pré-condicionará a amostra a uma taxa de alongamento de 0,1 milímetros por segundo durante 30 segundos.Após 30 segundos, deixe o tecido descansar por um minuto. Enquanto isso, carregue o regime de teste pull to failure. Rotule o teste com o nome da amostra e clique em Avançar para ir para a próxima janela.Insira o comprimento do medidor da amostra e, em seguida, clique em ao lado de fazer a transição para a página de teste. Salve tudo e clique em Iniciar. Permitir que o teste seja executado a uma taxa de alongamento de 0,1 milímetros por segundo até que o tecido tenha sido puxado até a falha.O teste produzirá dados de deslocamento de carga. Após a colocação das suturas com esse protocolo, a junção neoformada entre o ligamento uterossacro e a abóbada vaginal foi elevada cefálica em direção ao sacro e impediu a movimentação do coto cervical. Para a amostra de suspensão do ligamento uterossacro intacto e do ligamento uterossacro, o ensaio de tração foi avaliado por gráficos como curva de deslocamento de carga, análise de tensão e equação de ajuste da curva de reta inclinação da reta.Os dados mostraram que todas as propriedades estruturais do material da amostra de reparo foram menores do que as do ligamento uterossacro nativo. As estruturas são pequenas e, portanto, identificá-las requer a prática de dissecção meticulosa. O teatro especificamente pode ser difícil de identificar, então um escopo de dissecação pode ser útil.Também sugerimos a prática com cirurgias em cadáveres antes de cirurgias de sobrevivência. Descrevemos uma via para o aumento da suspensão do ligamento uterossacro, bem como uma nova metodologia para o teste mecânico do ligamento. O objetivo é que o aumento descrito em nosso protocolo torne a cirurgia de prolapso mais bem-sucedida no futuro e, portanto, melhor para os pacientes.

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Um Modelo de Infusão Crónica de nutrientes no Rato

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to  affect the function of several organs and tissues and to contribute to the  ...

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson's Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

Desenvolvimento de um modelo de rato baseada alfa-sinucleína para a doença de Parkinson por meio de injecção estereotáxica de um vector viral recombinante adeno-associado

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on ...

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

A fibrose do fígado Modelo dimetilnitrosamina induzida no Rato

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension

A cirurgia de derivação, coração direito Cateterismo e Vascular morfometria em um modelo de rato para induzida Fluxo de Hipertensão Arterial Pulmonar

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Medição de contratilidade isométrica da artéria mesentérica Mouse usando fio miografia

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Acupuncture in a Rat Model of Asthma

Acupuntura em um modelo de rato de asma

A high platform can fix rats without restriction and completely expose the acupoints on the back during acupuncture manipulation. This article describes ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

Um Método Não Invasivo para Gerar o Modelo de Lesão da Cartilagem Intra-Articular Induzida por Carga Cíclica do Joelho de Rato

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...