Name: development of a uterosacral ligament suspension rat model
Uploaded: 2022-08-17T14:30:00
Duration: 8 min 58 s
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Agradecemos a la Prof. Silvia Blemker por el uso de su Instron y al Prof. George Christ por el uso de su espacio quirúrgico, así como al soporte y agarre impresos en 3D. Este trabajo fue apoyado por la Asociación de Investigación Traslacional UVA-Coulter y el Departamento de Defensa (W81XWH-19-1-0157).

Los autores no tienen nada que revelar.

El protocolo es notable por varias ventajas. Hasta donde sabemos, es la primera descripción publicada de USLS en el modelo de rata y proporcionará a los futuros investigadores pasos reproducibles para realizar este procedimiento en el entorno de investigación. En segundo lugar, incluimos un protocolo novedoso para la prueba de tracción de la interfaz nativa y quirúrgica de la USL. El protocolo de prueba de tracción podría utilizarse en estudios similares que investigan nuevos enfoques de ingeniería de tejidos para aumentar las reparaciones de tejidos nativos, como USLS. Además, el modelo de rata en sí es útil para el estudio de los trastornos del suelo pélvico debido a la facilidad de manejo / embarque, la corta vida útil y la rentabilidad en comparación con los modelos animales más grandes. Las limitaciones del protocolo incluyen la incapacidad de evaluar una de las principales complicaciones del USLS, el torcimiento ureteral. A pesar de esto, no tuvimos casos de presunta lesión ureteral en este estudio. Otra consideración es que la orientación horizontal de la pelvis, la pequeña proporción de canales de cabeza fetal a parto y la falta de prolapso espontáneo en el modelo de rata limitan cierta aplicabilidad de los resultados a los humanos. Sin embargo, el uso de ratas multíparas es una fortaleza de este estudio, ya que esto explica el principal factor de riesgo en el desarrollo de POP3.
El establecimiento de un protocolo exitoso para la histerectomía y el USLS en la rata Lewis será una herramienta útil para futuros investigadores que investiguen los componentes quirúrgicos del POP, al tiempo que minimiza la variabilidad en las pruebas del comportamiento mecánico del USL. Los modelos animales quirúrgicos son beneficiosos porque permiten a los investigadores diseñar experimentos clínicamente relevantes que controlan la paridad, la masa corporal, la enfermedad y la nutrición34 al tiempo que mitigan el riesgo ético del estudio inicial en humanos. Además, los modelos estandarizados para POP permiten a los investigadores eludir las limitaciones de la recolección de tejido humano. En particular, los métodos de ensayo de tracción descritos en este protocolo permitirán la coherencia entre los estudios. Los modelos anteriores de roedores probaron las propiedades mecánicas de toda la región pélvica, que incluye el cuello uterino, la vagina y los múltiples ligamentos de soporte pélvico29,42. Los métodos descritos aquí permiten medir el USL de una manera que mantiene las inserciones espinales y cervicales nativas. Cabe señalar que los métodos de prueba de tracción no evalúan el USL solo, sino el USL en combinación con su inserción en el sacro y el cuello uterino. Esta es una fortaleza del estudio, ya que refleja las fuerzas in situ habituales a las que se somete el ligamento. Reconocemos que el comportamiento mecánico del ligamento aislado sería diferente si se probara ex vivo sin sus uniones nativas. Esto es especialmente cierto ya que las estructuras de rata son pequeñas y limitan la viabilidad de recolectar una muestra adecuada para pruebas ex vivo. Las USL experimentan carga en múltiples direcciones in situ, por lo que la naturaleza uniaxial de la prueba es una limitación, pero el uso de este método permite comparaciones significativas entre estudios previos de mecánica de USL en ratas29,42. Si bien actualmente no existe un protocolo de prueba mecánica estándar ampliamente aceptado, este modelo será una herramienta útil para futuros estudios de ingeniería de tejidos en el campo.
Varios pasos descritos en este protocolo son críticos para la salud y el bienestar de los animales, así como para la reproducibilidad de la cirugía USLS y las posteriores pruebas de tracción. En primer lugar, es esencial obtener tanto el analgésico como los medicamentos antiinflamatorios descritos como el analgésico solo resultó ser inadecuado para el manejo del dolor. El antibiótico profiláctico disminuye el riesgo de infección del sitio quirúrgico y es el estándar de atención en la cirugía humana. Con respecto al procedimiento quirúrgico USLS, evitar el daño a los ovarios y minimizar la pérdida de sangre son esenciales para una cirugía exitosa. Los pasos 1.3.3 y 1.3.4 describen la separación de la parte superior del cuerno uterino del ovario adyacente; Se debe tener cuidado para mantener esta disección en el lado del cuerno uterino para evitar la interrupción de los vasos delicados alrededor del ovario, lo que puede provocar un sangrado excesivo. Cabe destacar que otros investigadores han demostrado que la función ovárica se conserva después de la extirpación de los cuernos uterinos43. Además, si los ovarios son alterados o eliminados, la arquitectura general de las fibrillas de colágeno se verá alterada, alterando las propiedades mecánicas de sus tejidos44,45. Una vez que el cuerno uterino se separa de forma segura del ovario, hay un plano claro de disección que permite el aislamiento del cuerno uterino de las almohadillas de grasa circundantes y la vasculatura. A pesar del plano claro de disección, los pedículos a lo largo del cuerno uterino deben asegurarse con una pinza antes de la transección con microtijeras. Contrariamente a la práctica quirúrgica en humanos, hemos encontrado que la ligadura de sutura de los pedículos de histerectomía es innecesaria, ya que el pinzamiento del pedículo antes de la transección asegura una hemostasia adecuada. El paso 1.3.6 del protocolo describe este proceso cuidadoso para minimizar la pérdida de sangre. A medida que se realiza la histerectomía, se debe tener mucho cuidado para identificar los uréteres como se menciona en los pasos 1.3.6 y 1.3.8. Comprender la proximidad anatómica del uréter es fundamental, ya que una de las complicaciones más comunes asociadas con las USL en humanos es la lesión ureteral46.
En conclusión, presentamos un protocolo novedoso para realizar histerectomía, suspensión del ligamento uterosacro y prueba de tracción de la USL en un modelo de rata. Anticipamos que nuestros hallazgos ayudarán a los futuros investigadores de ciencias básicas al proporcionar una descripción clara y reproducible de estos procedimientos y, por lo tanto, permitirán el avance de la investigación del prolapso de órganos pélvicos.

El prolapso de órganos pélvicos (POP) es un trastorno común del suelo pélvico que afecta a millones de mujeres en todo el mundo con el potencial de afectar significativamente muchos aspectos de la vida de una mujer, particularmente con la edad de1 año. En particular, aproximadamente el 13% de las mujeres en los Estados Unidos se someterán a cirugía por prolapso o incontinencia urinaria2. Una condición más común después del embarazo y el parto, el prolapso se caracteriza por el descenso de los órganos pélvicos, predominantemente los diversos compartimentos de la vagina y / o el útero, más allá de su posición normal en la cavidad peritoneal. Esto conduce a síntomas molestos de protuberancia o presión vaginal, intestino, vejiga y disfunción sexual, y reducción general de la calidad de vida. Otros factores de riesgo para el POP incluyen obesidad, consumo de tabaco, tos crónica y estreñimiento3.
En mujeres sanas, los órganos del suelo pélvico están soportados por los músculos elevadores del ano, los ligamentos uterosacros (USL), los ligamentos cardinales, las uniones del tejido conectivo a la pared lateral pélvica y las estructuras distales del cuerpo perineal 4,5. Las USL se encuentran entre las estructuras de soporte apical más importantes tanto para el útero como para la vagina apical, y por lo tanto, se usan a menudo en la corrección quirúrgica del POP (Figura 1). El soporte estructural de la USL proviene del denso tejido conectivo colágeno en la región sacra que se transforma en músculo liso estrechamente empaquetado. Debido a este gradiente composicional, la USL se entrelaza con la musculatura uterina y vaginal para proporcionar un soporte robusto para los órganos pélvicos 6,7. En la suspensión del ligamento uterosacro (USLS), las USL se aseguran a la bóveda vaginal después de una histerectomía, restaurando la vagina y las estructuras circundantes a su posición anatómica en el compartimiento abdominal. Sin embargo, independientemente de la vía transvaginal o laparoscópica, el procedimiento USLS está plagado de una tasa de fracaso relativamente alta de hasta 40% en algunos estudios 8,9. La tasa de recurrencia de síntomas molestos de protuberancias vaginales a los 5 años después de la reparación para el prolapso del compartimiento apical, como las USL, fue de aproximadamente 40% en un gran ensayo controlado aleatorizado multicéntrico9. En el mismo ensayo, el retratamiento para el prolapso recurrente a los 5 años fue de aproximadamente 10%. El mecanismo de esta alta tasa de fracaso no se ha estudiado, pero restaurar la vagina y las estructuras circundantes a su posición anatómica requiere la colocación de suturas en la región densa de colágeno de la USL10,11 en lugar de la región del músculo liso. Por lo tanto, la alta tasa de fracaso podría deberse al desajuste mecánico y de composición de la interfaz vagina-USL formada quirúrgicamente en comparación con la integración completa observada en el accesorio cervical-USL nativo.
El impacto económico del tratamiento de estos trastornos también es notable, con aproximadamente $ 300 millones gastados anualmente en los Estados Unidos en atención ambulatoria12, y más de $ 1 mil millones gastados anualmente en costos directos para procedimientos quirúrgicos13. A pesar de los vastos recursos económicos dedicados al tratamiento de estas afecciones, las complicaciones derivadas de muchas cirugías de prolapso siguen siendo desalentadoras. Por ejemplo, las reparaciones del prolapso apical basadas en malla de polipropileno, como la sacrocolpopexia, ofrecen mayores tasas de éxito en comparación con las reparaciones de tejidos nativos14, pero a costa de complicaciones potenciales como la exposición a la malla o la erosión. La FDA recibió casi 3,000 quejas relacionadas con complicaciones de malla solo entre 2008 y 2010. Esto culminó en una orden de la FDA para detener la fabricación y venta de todos los productos de malla colocados transvaginalmente para POP en abril de 201915. Por lo tanto, existe una fuerte necesidad clínica de materiales distintos del polipropileno, y modelos con los que probarlos, que puedan aumentar las reparaciones del prolapso del tejido nativo y aumentar las tasas de éxito en comparación con las técnicas tradicionales con sutura sola.
Desde el anuncio de la FDA en 2019, la mayoría de los cirujanos pélvicos han dejado de usar malla colocada transvaginalmente para las reparaciones del prolapso, lo que llevó a los investigadores a buscar nuevos enfoques de ingeniería de tejidos para aumentar las reparaciones de tejidos nativos16,17,18 como con las células del estroma mesenquimal (MSC)9,20 . Con este cambio de enfoque, existe una necesidad urgente de refinar los modelos animales que puedan ayudar con el desarrollo de nuevos materiales; El desafío en este proceso es equilibrar la relevancia clínica con el costo. Con este fin, la ciencia básica y los investigadores clínicos que estudian el prolapso de órganos pélvicos han aprovechado varios modelos animales hasta el momento, incluyendo ratas, ratones, conejos, ovejas, cerdos y primates no humanos19. El proceso de identificación de un modelo animal óptimo es un desafío, ya que los humanos son bípedos, no tienen cola y tienen un proceso de nacimiento traumático en comparación con otras especies de mamíferos20. Los cerdos21 se han utilizado para simular la sacrocolpopexia robótica, mientras que las ovejas se han utilizado para simular reparaciones del prolapso vaginal22. Estos modelos animales, aunque clínicamente relevantes, están limitados en viabilidad por el costo y el mantenimiento. Se han utilizado primates no humanos para estudiar la patogénesis del prolapso; Los monos ardilla en particular son una de las únicas especies, aparte de los humanos, que pueden desarrollar prolapso espontáneo, lo que los convierte en uno de los modelos animales más relevantes20. Los primates no humanos también se han utilizado para estudiar procedimientos quirúrgicos ginecológicos como la sacrocolpopexia23 y el trasplante uterino24. Al igual que sus homólogos ovinos y porcinos, la principal limitación de los primates no humanos como modelo animal de prolapso es el costo de mantenimiento, cuidado y alojamiento19.
Aunque la pelvis de los roedores está orientada horizontalmente con una relación mucho menor entre el tamaño del canal de cabeza a nacimiento en comparación con los humanos19, las ratas son adecuadas para estudios con animales pequeños de la cirugía USLS, ya que tienen anatomía, celularidad, arquitectura histológica y composición de matriz similares en comparación con la USL25 humana. Además, son beneficiosos en términos de mantenimiento y embarque. A pesar de estos atributos beneficiosos, no hay informes publicados de un modelo de rata de reparación de USLS. Por lo tanto, el objetivo es describir un protocolo para histerectomía y USLS en la rata Lewis multípara. Este protocolo será beneficioso para los investigadores que tienen como objetivo estudiar la fisiopatología y los componentes quirúrgicos de POP utilizando este modelo animal accesible.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64311/64311fig01.jpg"> Figura 1: Prolapso de órganos pélvicos . (A) La orientación normal de los órganos en la cavidad peritoneal y (B) la dramática descensión de órganos cuando ocurre el prolapso. Después de la histerectomía, (C) la suspensión del ligamento uterosacro restaura la vagina y las estructuras circundantes a su posición anatómica adecuada. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64311/64311fig01large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alcohol prep pad</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artificial Tear Ointment</td>
			<td>American Health Service Sales Corp</td>
			<td>PH-PARALUBE-O</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluehill software</td>
			<td>Instron</td>
			<td>Bluehill 3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cavicide 1 disinfectant</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22 998 800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compression platean</td>
			<td>Instron</td>
			<td>2501-163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Puritan Medical</td>
			<td>806-WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Sponge, 8-Ply</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95038-728</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mosquito Forceps</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MMDS1222115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holder</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>DYND04045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Scissors, 5&#189;&#34;, Sharp</td>
			<td>American Health Service Sales Corp</td>
			<td>4-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opioid Analgesic (Buprenorphine XR)</td>
			<td>Fidelis Animal Health</td>
			<td>Ethiqa XR</td>
			<td>0.65&#160;mg/kg&#160;SC&#160;Q72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NSAID Analgesic (Meloxicam SR)</td>
			<td>Wildlife Pharmaceuticals, LLC</td>
			<td>Meloxicam SR</td>
			<td>1&#160;mg/kg&#160;SC&#160;q72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS II, 3-0 Polydioxanone Suture, SH-1</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z316H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS II, 5-0 P olydioxanone Suture, RB-1</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z303H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retractor</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MDS1862107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade Stainless Surgical #10</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>4-310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MDS15210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor, Micro, Curved, 4.5&#34;</td>
			<td>Westcott</td>
			<td>MDS0910311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Column Universal Testing System</td>
			<td>Instron</td>
			<td>5943 S3873</td>
			<td>1 kN force capacity, 10 N load cell</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Natural Rubber Latex Gloves</td>
			<td>Accutech</td>
			<td>91225075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture,Vicryl,6-0,P-3</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J492G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape,Umbilical,Cotton,1/8X18&#34;</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>U10T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tension and Compression Load Cell</td>
			<td>Instron</td>
			<td>2530-10N</td>
			<td>10N load cell (1 kgf, 2 lbf)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary surgical adhesive (skin glue)</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>31477</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of a uterosacral ligament suspension rat model

El prolapso de órganos pélvicos (POP) es un trastorno común del suelo pélvico (PFD) con el potencial de afectar significativamente la calidad de vida de una mujer. Aproximadamente del 10% al 20% de las mujeres se someten a cirugía de reparación del piso pélvico para tratar el prolapso en los Estados Unidos. Los casos de PFD resultan en un costo anual total de $ 26.3 mil millones solo en los Estados Unidos. Esta condición multifactorial tiene un impacto negativo en la calidad de vida y, sin embargo, las opciones de tratamiento solo han disminuido en el pasado reciente. Una opción quirúrgica común es la suspensión del ligamento uterosacro (USLS), que generalmente se realiza fijando la bóveda vaginal al ligamento uterosacro en la pelvis. Esta reparación tiene una menor incidencia de complicaciones en comparación con aquellos con aumento de malla, pero es notable por una tasa de fracaso relativamente alta de hasta el 40%. Teniendo en cuenta la falta de modelos animales estándar para estudiar la disfunción del suelo pélvico, existe una necesidad clínica urgente de innovación en este campo con un enfoque en el desarrollo de modelos animales rentables y accesibles. En este manuscrito, describimos un modelo de rata de USLS que implica una histerectomía completa seguida de la fijación de la bóveda vaginal restante al ligamento uterosacro. El objetivo de este modelo es imitar el procedimiento realizado en mujeres para poder utilizar el modelo para luego investigar estrategias reparadoras que mejoren la integridad mecánica de la fijación del ligamento. Es importante destacar que también describimos el desarrollo de un procedimiento de prueba de tracción in situ para caracterizar la integridad de la interfaz en los puntos de tiempo elegidos después de la intervención quirúrgica. En general, este modelo será una herramienta útil para futuros estudios que investiguen las opciones de tratamiento para la reparación de POP a través de USLS.

Viabilidad quirúrgica y colocación de sutura uterosacro No hubo complicaciones intraoperatorias relacionadas con la histerectomía o la suspensión del ligamento uterosacro en ninguno de los animales. Hubo un sangrado mínimo durante la extracción de los cuernos uterinos, siempre que la vasculatura adyacente se sujetara antes de la extracción. El sangrado limitado permitió una buena visualización de los ligamentos uterosacros para la colocación de suturas y evitó la lesión intraoperatoria del intestino, el recto, la ureteral o la vejiga. Después de la colocación de las suturas, la unión recién formada USL-bóveda vaginal impidió el movimiento del muñón cervical/uterino como se muestra en la Figura 5C. Durante los primeros tres días postoperatorios, los animales fueron revisados diariamente, y luego quincenalmente hasta el final del experimento. Con los analgésicos opioides de liberación prolongada y AINE administrados en el momento de la cirugía, se encontró que los analgésicos adicionales eran innecesarios. Según nuestra experiencia con 16 cirugías con animales (n = 8 para los grupos control y USLS), se debe esperar una caída de peso en la primera semana después de la cirugía con una pérdida promedio de 5.7 ± 1.4% del peso del día de la cirugía. Como se esperaba, las ratas ganaron peso lentamente durante las siguientes 23 semanas, con un aumento de peso promedio de 15.1 ± 4.5% en el transcurso del experimento.
Pruebas mecánicas de la reparación del USLS Para demostrar la funcionalidad de la reparación del USLS, se realizó una prueba de tracción uniaxial. Después de la eutanasia del animal en el punto de tiempo postoperatorio elegido, 24 semanas en este estudio, el área quirúrgica debe diseccionarse cuidadosamente para visualizar la unión USL-bóveda vaginal como se muestra en la Figura 6A. En comparación con otras metodologías para probar las USL de rata junto con otras estructuras de soporte y órganos pélvicos29,42, el método descrito aquí es el primero en probar el USL de rata de manera aislada. La cinta umbilical utilizada en este estudio se eligió estratégicamente por su flexibilidad, ya que el cumplimiento de la cinta permitió una interrupción mínima del tejido durante la preparación de la prueba de tracción. Los datos de desplazamiento de carga, por lo tanto, deben ajustarse para tener en cuenta la pequeña cantidad de estiramiento que aporta la cinta umbilical. La Figura 9 proporciona un ejemplo de los datos obtenidos a través de pruebas de tracción con la Figura 9A proporcionando un ejemplo de un gráfico típico de tensión-deformación. Se recomienda informar los datos sobre la tensión y la deformación, ya que esta información está normalizada e independiente del tamaño de las muestras34 y se puede comparar mejor entre los estudios. Para el ligamento uterosacro intacto, informamos propiedades estructurales como carga final (2.9 ± 0.5 N) y rigidez (0.4 ± 0.1 N / mm), así como propiedades de material normalizadas como tensión final (2.1 ± 0.4 MPa), deformación final (1.6 ± 0.5) y módulo tangente (4.0 ± 1.1 MPa). En las pruebas uniaxiales realizadas en los órganos reproductores de ratas y todas sus conexiones de tejido de soporte por Moalli et al., informaron una carga final en el fracaso (13,2 ± 1,1 N) y rigidez (2,9 ± 0,9 N/mm) mayor que el USL29 aislado. El trabajo realizado por Moalli et al. y otras publicaciones34,35 mencionan la alta variabilidad entre los especímenes probados, como se muestra en los datos presentados aquí. Para la reparación de la suspensión del ligamento uterosacro, encontramos que todas las propiedades estructurales del material (rigidez, 0.33 ± 0.13 N / mm; carga final, 2.6 ± 1.3 N) y propiedades normalizadas del material (tensión final, 1.8 ± 0.7 MPa; deformación final 1.3 ± 0.3; módulo tangente, 3.0 ± 0.9 MPa) son más bajas que las del USL nativo.

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Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model

El prolapso de órganos pélvicos afecta a millones de mujeres en todo el mundo y, sin embargo, algunas intervenciones quirúrgicas comunes tienen tasas de fracaso de hasta el 40%. La falta de modelos animales estándar para investigar esta condición impide el progreso. Proponemos el siguiente protocolo como modelo para la suspensión del ligamento uterosacro y la prueba de tracción in vivo .

Desarrollo de un modelo de rata con suspensión del ligamento uterosacro

Pelvic organ prolapse (POP) is a common pelvic floor disorder (PFD) with the potential to significantly impact a woman's quality of life. Approximately ...

Nuestro protocolo es uno de los primeros que utiliza un modelo de rata para describir la cirugía de suspensión del ligamento uterosacro y, por lo tanto, realmente puede servir como modelo para que los futuros investigadores estudien los resultados preclínicos y las modificaciones de la cirugía. El ligamento uterosacro rad es similar en anatomía, celularidad, arquitectura histológica y composición en comparación con el ligamento uterosacro humano. Estos componentes combinados con los beneficios de costo y viabilidad lo convierten en un modelo realmente excelente para estudiar el aumento y los resultados de la cirugía de suspensión del ligamento uterosacro.El método de prueba de tracción podría adaptarse para su uso en otros modelos animales del suelo pélvico. Además, los futuros investigadores podrían usar una configuración de cirugía general para informar a otras cirugías de prolapso y roedores como la sacrocolpopexia. Para comenzar, use una bata quirúrgica, cubierta para la cabeza, máscara y guantes estériles.Cubra al animal con un campo estéril dejando solo el abdomen expuesto. Puede haber algo de sangrado debido a un traumatismo por el recorte alrededor del par caudal de pezones. Si es necesario, esto se puede hacer hemostático con presión o nitrato de plata.Haga una incisión de siete centímetros por la línea alba desde justo debajo del proceso xifoide hasta la línea inferior del pezón con una cuchilla de bisturí. La incisión debe terminar de 0,5 a un centímetro de rostro desde el orificio uretral. Luego haga una incisión a través de la capa muscular debajo.Ensamble el retractor abdominal e inspeccione la cavidad abdominal. Con pinzas para iris, localice suavemente el cuerno uterino izquierdo. Eleve suavemente el cuerno uterino izquierdo con una pinza o pinza para mosquitos.Comience la histerectomía ligando el cuerno debajo del ovario y el oviducto con una pinza de mosquito. Para continuar la histerectomía, sujete y recorte la vasculatura adyacente, el tejido conectivo y la grasa del cuerno uterino con microtijeras. Recuerde sujetar el tejido conectivo antes de retirarlo para reducir el sangrado.Coloque las pinzas lo más cerca posible de la interfaz uterina y hasta la unión uterocervical. Sujete el cuerno uterino cerca del punto de bifurcación con pinzas para mosquitos. Extirpe el cuerno ipsilateral justo cefalad a la pinza para evitar sangrado.Debido al pequeño calibre de los vasos de rata, la ligadura de los muñones uterinos con una pinza temporal fue suficiente para esta cirugía. Sin embargo, esta técnica se puede modificar según sea necesario sellando los pedículos con electrocauterio o ligadura de sutura. Ajuste el retractor abdominal para exponer la pelvis inferior.Inspeccione la bóveda vaginal expuesta y el piso pélvico que soporta los tejidos ligamentales y conectivos unidos a la vagina y el cuello uterino. Identifique el uréter bilateralmente, que es solo medial a los ovarios. Identifique los ligamentos uterosacros que se pueden encontrar unidos al cuello uterino justo debajo de los muñones restantes de los cuernos uterinos.El ligamento se traza en la orientación medial cefálica hacia el sacro. Coloque una sutura de polidioxanona de tres cero en una aguja cónica pequeña y coloque una puntada a través del ligamento uterosacro izquierdo ubicado en la parte superior del ligamento y cerca del sacro. Tire de la puntada para asegurarse de que ha capturado el ligamento uterosacro asegurando que la estructura del ligamento se inserte en el cuello uterino con el origen dividido detrás del recto donde se une al sacro.Una vez más, identifique el uréter para asegurarse de que no se haya incorporado o torcido con la puntada uterosacral. Luego pase la puntada de polidioxanona izquierda a través de la cara izquierda de la bóveda vaginal mientras incorpora los aspectos anterior y posterior del manguito vaginal. Repita estos pasos para completar el procedimiento de suspensión del ligamento uterosacro en el lado derecho.Después de que los puntos uterosacros se colocan bilateralmente, ate firmemente la sutura con un nudo cuadrado de tal manera que la bóveda vaginal se eleve cefalada hacia el sacro. Primero, disecciona el tejido adiposo hasta que la bóveda vaginal sea visible. Continúe quitando las almohadillas de grasa abdominal hasta que el ligamento uterosacro intacto sea claramente visible o en la unión entre el ligamento uterosacro y la bóveda vaginal sea visible.Usando una regla flexible, mida la distancia entre la inserción uterosacro y la bóveda vaginal para estimar la longitud original del tejido. Coloque cinta umbilical detrás del ligamento uterosacro intacto o la unión de suspensión del ligamento uterosacro de tal manera que el tejido esté centrado en la cinta umbilical. Mida la altura y el ancho del tejido donde se cruza con la cinta umbilical utilizando un calibrador digital.Para estimar los valores, se utiliza para calcular el área de la sección transversal. Para la prueba de tracción, coloque el animal de tal manera que la muestra esté centrada debajo de la empuñadura. Inmovilizar la región pélvica que rodea la muestra asegurando el animal a la platina.Bajó las células de carga de tal manera que las colas de la cinta umbilical alcanzaran fácilmente la empuñadura. Asegure la cinta umbilical en la empuñadura dejando la cinta floja para evitar la manipulación de la muestra. A continuación, abra la prueba de preacondicionamiento en la interfaz del software y etiquete la prueba con el nombre de la muestra.Asegúrese de que el método de preacondicionamiento incluye el paso de precarga. Haga clic para iniciar la prueba de preacondicionamiento que precargará la muestra a 0,015 Newton. Una vez que la fuerza de precarga es estable, la prueba preacondicionará la muestra a una velocidad de elongación de 0,1 milímetros por segundo durante 30 segundos.Después de 30 segundos, deje que el tejido descanse durante un minuto. Mientras tanto, cargue el régimen de prueba pull to failure. Etiquete la prueba con el nombre de la muestra y haga clic en Siguiente para acceder a la siguiente ventana.Ingrese la longitud del medidor de la muestra y luego haga clic en siguiente para pasar a la página de prueba. Equilibre todo y haga clic en Inicio. Permita que la prueba se ejecute a una velocidad de elongación de 0,1 milímetros por segundo hasta que el tejido haya sido retirado hasta la falla.La prueba producirá datos de desplazamiento de carga. Después de la colocación de las suturas utilizando este protocolo, la unión recién formada entre el ligamento uterosacro y la bóveda vaginal se elevó cefalad hacia el sacro e impidió el movimiento del muñón cervical. Para la muestra intacta de suspensión del ligamento uterosacro y del ligamento uterosacro, las pruebas de tracción se evaluaron mediante gráficos como la curva de desplazamiento de carga, el análisis de deformación por tensión y la ecuación de ajuste de la pendiente de la curva de línea.Los datos mostraron que todas las propiedades del material estructural de la muestra de reparación fueron menores que las del ligamento uterosacro nativo. Las estructuras son pequeñas y, por lo tanto, identificarlas requiere la práctica de una disección meticulosa. El teatro específicamente puede ser difícil de identificar, por lo que un alcance de disección puede ser útil.También sugerimos practicar con cirugías de cadáveres antes de cirugías de supervivencia. Describimos una vía para el aumento de la suspensión del ligamento uterosacro, así como una metodología novedosa para las pruebas mecánicas del ligamento. El objetivo es que el aumento descrito en nuestro protocolo haga que la cirugía de prolapso sea más exitosa en el futuro y, por lo tanto, mejor para los pacientes.

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The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

La fibrosis hepática Modelo dimetilnitrosamina inducida en la rata

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension

La cirugía de derivación, un cateterismo derecho, y Vascular Morfometría en un modelo de rata de flujo inducido por la hipertensión arterial pulmonar

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Medición de la contractilidad isométrica de la arteria mesentérica de ratón con cable miografía

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Acupuncture in a Rat Model of Asthma

Acupuntura en un modelo de rata de asma

A high platform can fix rats without restriction and completely expose the acupoints on the back during acupuncture manipulation. This article describes ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

Un método no invasivo para generar el modelo de lesión de cartílago intraarticular inducida por carga cíclica de la rodilla de rata

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...