Name: development of a uterosacral ligament suspension rat model
Uploaded: 2022-08-17T14:30:00
Duration: 8 min 58 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model at JoVE.com

Vi tackar Prof. Silvia Blemker för användningen av hennes Instron och Prof. George Christ för användningen av hans kirurgiska utrymme samt den 3D-tryckta hållaren och greppet. Detta arbete stöddes av UVA-Coulter Translational Research Partnership och DoD (W81XWH-19-1-0157).

Författarna har inget att avslöja.

Protokollet är anmärkningsvärt för flera fördelar. Såvitt vi vet är det den första publicerade beskrivningen av USLS i råttmodellen och kommer att ge framtida utredare reproducerbara steg för att utföra denna procedur i forskningsinställningen. För det andra inkluderar vi ett nytt protokoll för dragprovning av USL: s ursprungliga och kirurgiska gränssnitt. Dragtestprotokollet kan användas i liknande studier som undersöker nya vävnadstekniska metoder för att öka inhemska vävnadsreparationer som USLS. Dessutom är råttmodellen i sig användbar för studier av bäckenbottenstörningar på grund av enkel hantering / ombordstigning, kort livslängd och kostnadseffektivitet jämfört med större djurmodeller. Begränsningar av protokollet inkluderar en oförmåga att bedöma en av de viktigaste komplikationerna av USLS, ureteral kinking. Trots detta hade vi inga fall av förmodad ureteral skada i denna studie. Ett annat övervägande är att bäckenets horisontella orientering, litet förhållande mellan fostrets huvud och födelsekanal och brist på spontan prolaps i råttmodellen begränsar viss tillämplighet av resultaten för människor. Användningen av multiparösa råttor är dock en styrka i denna studie eftersom detta står för den ledande riskfaktorn i utvecklingen av POP3.
Upprättandet av ett framgångsrikt protokoll för hysterektomi och USLS i Lewis-råttan kommer att vara ett användbart verktyg för framtida forskare som undersöker kirurgiska komponenter i POP, samtidigt som variationen i testning av USL: s mekaniska beteende minimeras. Kirurgiska djurmodeller är fördelaktiga eftersom de tillåter forskare att utforma kliniskt relevanta experiment som kontrollerar för paritet, kroppsmassa, sjukdom och näring34 samtidigt som de mildrar den etiska risken för initial studie på människor. Vidare tillåter standardiserade modeller för POP forskare att kringgå begränsningarna för mänsklig vävnadssamling. I synnerhet kommer de dragprovningsmetoder som beskrivs i detta protokoll att möjliggöra överensstämmelse mellan studierna. Tidigare gnagarmodeller testade de mekaniska egenskaperna hos hela bäckenregionen, vilket inkluderar livmoderhalsen, vagina och de multipla bäckenstödbanden29,42. De metoder som beskrivs här möjliggör mätning av USL på ett sätt som upprätthåller de inhemska ryggrads- och livmoderhalsfästena. Det bör noteras att dragprovningsmetoderna inte bedömer USL ensam, utan snarare USL i kombination med dess införande vid korsbenet och livmoderhalsen. Detta är en styrka i studien eftersom den återspeglar de vanliga in situ-krafterna som ligamentet utsätts för. Vi erkänner att det isolerade ligamentets mekaniska beteende skulle vara annorlunda om det testades ex vivo utan dess ursprungliga fästen. Detta gäller särskilt eftersom råttstrukturerna är små och begränsar möjligheten att samla in ett prov som är lämpligt för ex vivo-testning. USL: erna upplever belastning i flera riktningar på plats, så testets uniaxiella karaktär är en begränsning, men med hjälp av denna metod möjliggör meningsfulla jämförelser mellan tidigare studier av råtta USL-mekanik29,42. Även om det för närvarande inte finns något allmänt accepterat standardprotokoll för mekanisk testning, kommer denna modell att vara ett användbart verktyg för framtida vävnadstekniska studier inom området.
Flera steg som beskrivs i detta protokoll är avgörande för djurens hälsa och välbefinnande samt reproducerbarheten av USLS-operationen och efterföljande dragprovning. För det första är det viktigt att erhålla både smärtstillande och antiinflammatoriska läkemedel som beskrivs som smärtstillande medel ensam visade sig vara otillräckliga för smärtlindring. Det profylaktiska antibiotikumet minskar risken för infektion i operationsområdet och är standard för vård vid mänsklig kirurgi. När det gäller USLS-kirurgiska ingrepp är det viktigt att undvika skador på äggstockarna och minimera blodförlusten för en lyckad operation. Steg 1.3.3 och 1.3.4 beskriver hur toppen av livmoderhornet separeras från den intilliggande äggstocken. Försiktighet bör vidtas för att upprätthålla denna dissektion på sidan av livmoderhornet för att förhindra störningar av känsliga kärl runt äggstocken, vilket kan leda till överdriven blödning. Observera att andra utredare har visat att äggstocksfunktionen bevaras efter avlägsnande av livmoderhornen43. Dessutom, om äggstockarna störs eller avlägsnas, kommer den övergripande kollagenfibrillarkitekturen att störas, vilket förändrar de mekaniska egenskaperna hos dess vävnader44,45. När livmoderhornet är säkert separerat från äggstocken finns det ett tydligt dissektionsplan som möjliggör isolering av livmoderhornet från de omgivande fettkuddarna och vaskulaturen. Trots det tydliga dissektionsplanet bör pediklarna längs livmoderhornet säkras med en klämma före transektion med mikrosax. I motsats till kirurgisk praxis hos människor har vi funnit att suturligering av hysterektomipediklarna är onödig, eftersom klämning av pedikeln före transektion säkerställer adekvat hemostas. Steg 1.3.6 i protokollet beskriver denna noggranna process för att minimera blodförlusten. När hysterektomi utförs bör stor försiktighet vidtas för att identifiera urinledarna som nämns i steg 1.3.6 och 1.3.8. Att förstå urinledarens anatomiska närhet är kritisk, eftersom en av de vanligaste komplikationerna i samband med USL hos människor är ureteral skada46.
Sammanfattningsvis presenterar vi ett nytt protokoll för att utföra hysterektomi, uterosacral ligamentsuspension och dragprovning av USL i en råttmodell. Vi förväntar oss att våra resultat kommer att hjälpa framtida grundvetenskapliga utredare genom att ge en tydlig, reproducerbar beskrivning av dessa procedurer och därigenom möjliggöra framsteg av bäckenorganprolapsforskning.

Bäckenorganprolaps (POP) är en vanlig bäckenbottenstörning som påverkar miljontals kvinnor över hela världen med potential att väsentligt påverka många aspekter av en kvinnas liv, särskilt medålder 1. I synnerhet kommer cirka 13% av kvinnorna i USA att genomgå operation för prolaps eller urininkontinens2. Ett tillstånd som är vanligast efter graviditet och förlossning, prolaps kännetecknas av nedstigning av bäckenorganen, främst de olika facken i slidan och / eller livmodern, bortom deras normala position i bukhålan. Detta leder till besvärande symtom på vaginal utbuktning eller tryck, tarm, urinblåsa och sexuell dysfunktion och övergripande minskad livskvalitet. Andra riskfaktorer för POP inkluderar fetma, tobaksbruk, kronisk hosta och förstoppning3.
Hos friska kvinnor stöds bäckenbottenorganen av levator ani-musklerna, uterosacral ligament (USL), kardinalligament, bindvävsfästen till bäckens sidovägg och perinealkroppens distala strukturer 4,5. USL: erna är bland de viktigaste apikala stödjande strukturerna för både livmodern och apikal vagina, och används därför ofta vid kirurgisk korrigering av POP (figur 1). Strukturellt stöd från USL härrör från den täta kollagenösa bindväven i sakralområdet som övergår till tätt packad glatt muskulatur. På grund av denna kompositionsgradient blir USL sammanvävd med livmoder- och vaginalmuskulaturen för att ge robust stöd för bäckenorganen 6,7. I uterosacral ligamentupphängning (USLS) säkras USL: erna till vaginalvalvet efter en hysterektomi, vilket återställer vagina och de omgivande strukturerna till deras anatomiska position i bukfacket. Oavsett transvaginal eller laparoskopisk väg plågas USLS-proceduren av en relativt hög felfrekvens på upp till 40% i vissa studier 8,9. Återfallsfrekvensen av besvärande vaginala utbuktningssymtom vid 5 år efter reparation för apikal kompartmentprolaps, såsom USL, var cirka 40% i en stor randomiserad kontrollerad multicenterstudie9. I samma studie var återbehandling för återkommande framfall vid 5 år cirka 10%. Mekanismen för denna höga felfrekvens har inte studerats, men att återställa vagina och de omgivande strukturerna till deras anatomiska position kräver suturplacering i den täta kollagenregionen i USL10,11 snarare än den glatta muskelregionen. Därför kan den höga felfrekvensen bero på den mekaniska och kompositionella matchningen av det kirurgiskt bildade vagina-USL-gränssnittet jämfört med den fullständiga integrationen som ses i den ursprungliga livmoderhals-USL-bilagan.
Den ekonomiska effekten av att behandla dessa sjukdomar är också anmärkningsvärd, med cirka 300 miljoner dollar spenderade årligen i USA på ambulatorisk vård12 och mer än 1 miljard dollar spenderas årligen i direkta kostnader för kirurgiska ingrepp13. Trots de stora ekonomiska resurser som ägnas åt att behandla dessa tillstånd är komplikationerna som uppstår vid många prolapsoperationer fortfarande nedslående. Till exempel erbjuder polypropennätbaserade apikala prolapsreparationer, såsom sacrocolpopexy, högre framgångsgrader jämfört med inhemska vävnadsreparationer14, men på bekostnad av potentiella komplikationer som nätexponering eller erosion. FDA mottog nästan 3000 klagomål relaterade till nätkomplikationer mellan 2008 och 2010 ensam. Detta kulminerade i en order från FDA att stoppa tillverkningen och försäljningen av alla transvaginalt placerade nätprodukter för POP i april 201915. Därför finns det ett starkt kliniskt behov av andra material än polypropen, och modeller för att testa dem, som kan öka reparationer av nativ vävnadsprolaps och öka framgångsgraden jämfört med traditionella tekniker med sutur ensam.
Sedan FDA-tillkännagivandet 2019 har de flesta bäckenkirurger slutat använda transvaginalt placerat nät för prolapsreparationer, vilket får utredare att söka nya vävnadstekniska metoder för att öka inhemska vävnadsreparationer16,17,18 såsom med mesenkymala stromaceller (MSC) 9,20 . Med detta skifte i fokus finns det ett akut behov av förfining av djurmodeller som kan hjälpa till med utveckling av nya material; Utmaningen i denna process är att balansera klinisk relevans med kostnad. För detta ändamål har grundvetenskapliga och kliniska utredare som studerar bäckenorganprolaps utnyttjat flera djurmodeller hittills, inklusive råttor, möss, kaniner, får, svin och icke-mänskliga primater19. Processen att identifiera en optimal djurmodell är utmanande, eftersom människor är tvåbenta, har ingen svans och har en traumatisk födelseprocess jämfört med andra däggdjursarter20. Svin21 har använts för att simulera robotisk sacrocolpopexy, medan får har använts för att simulera vaginala prolapsreparationer22. Dessa djurmodeller, även om de är kliniskt relevanta, är begränsade i genomförbarhet genom kostnad och underhåll. Icke-mänskliga primater har använts för att studera patogenesen av prolaps; I synnerhet ekorrar är en av de enda andra arterna än människor som kan utveckla spontan prolaps, vilket gör dem till en av de mest relevanta djurmodellerna20. Icke-mänskliga primater har också använts för att studera gynekologiska kirurgiska ingrepp såsom sacrocolpopexy23 och livmodertransplantation24. I likhet med deras motsvarigheter till får och svin är den primära begränsningen av icke-mänskliga primater som en djurmodell för framfall kostnaden för underhåll, vård och ombordstigning19.
Även om gnagarbäckenet är orienterat horisontellt med ett mycket mindre förhållande mellan huvud och födelsekanal jämfört med människor19, är råttor lämpliga för smådjurstudier av USLS-kirurgi eftersom de har liknande USL-anatomi, cellularitet, histologisk arkitektur och matrissammansättning jämfört med den mänskliga USL25. Dessutom är de fördelaktiga när det gäller underhåll och ombordstigning. Trots dessa fördelaktiga attribut finns det inga publicerade rapporter om en råttmodell av USLS-reparation. Därför är syftet att beskriva ett protokoll för hysterektomi och USLS i den multiparösa Lewis-råttan. Detta protokoll kommer att vara fördelaktigt för utredare som syftar till att studera patofysiologin och kirurgiska komponenter i POP med hjälp av denna tillgängliga djurmodell.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64311/64311fig01.jpg"> Figur 1: Bäckenorganprolaps . (A) organens normala orientering i bukhålan och (B) den dramatiska organnedstigningen när prolaps inträffar. Efter hysterektomi, (C) uterosacral ligament suspension återställer vagina och omgivande strukturer till sin rätta anatomiska position. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64311/64311fig01large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna figur.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alcohol prep pad</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artificial Tear Ointment</td>
			<td>American Health Service Sales Corp</td>
			<td>PH-PARALUBE-O</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluehill software</td>
			<td>Instron</td>
			<td>Bluehill 3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cavicide 1 disinfectant</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22 998 800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compression platean</td>
			<td>Instron</td>
			<td>2501-163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Puritan Medical</td>
			<td>806-WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Sponge, 8-Ply</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95038-728</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mosquito Forceps</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MMDS1222115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holder</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>DYND04045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Scissors, 5&#189;&#34;, Sharp</td>
			<td>American Health Service Sales Corp</td>
			<td>4-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opioid Analgesic (Buprenorphine XR)</td>
			<td>Fidelis Animal Health</td>
			<td>Ethiqa XR</td>
			<td>0.65&#160;mg/kg&#160;SC&#160;Q72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NSAID Analgesic (Meloxicam SR)</td>
			<td>Wildlife Pharmaceuticals, LLC</td>
			<td>Meloxicam SR</td>
			<td>1&#160;mg/kg&#160;SC&#160;q72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS II, 3-0 Polydioxanone Suture, SH-1</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z316H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS II, 5-0 P olydioxanone Suture, RB-1</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z303H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retractor</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MDS1862107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade Stainless Surgical #10</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>4-310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MDS15210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor, Micro, Curved, 4.5&#34;</td>
			<td>Westcott</td>
			<td>MDS0910311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Column Universal Testing System</td>
			<td>Instron</td>
			<td>5943 S3873</td>
			<td>1 kN force capacity, 10 N load cell</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Natural Rubber Latex Gloves</td>
			<td>Accutech</td>
			<td>91225075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture,Vicryl,6-0,P-3</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J492G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape,Umbilical,Cotton,1/8X18&#34;</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>U10T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tension and Compression Load Cell</td>
			<td>Instron</td>
			<td>2530-10N</td>
			<td>10N load cell (1 kgf, 2 lbf)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary surgical adhesive (skin glue)</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>31477</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of a uterosacral ligament suspension rat model

Bäckenorganprolaps (POP) är en vanlig bäckenbottenstörning (PFD) med potential att avsevärt påverka kvinnans livskvalitet. Cirka 10% -20% av kvinnorna genomgår bäckenbottenreparationskirurgi för att behandla prolaps i USA. PFD-fall resulterar i en total årlig kostnad på 26,3 miljarder dollar enbart i USA. Detta multifaktoriella tillstånd har en negativ inverkan på livskvaliteten och ändå har behandlingsalternativen bara minskat under det senaste förflutna. Ett vanligt kirurgiskt alternativ är uterosacral ligament suspension (USLS), som vanligtvis utförs genom att fästa vaginalvalvet på uterosacral ligament i bäckenet. Denna reparation har en lägre förekomst av komplikationer jämfört med dem med nätförstoring, men är anmärkningsvärd för en relativt hög felfrekvens på upp till 40%. Med tanke på bristen på standarddjurmodeller för att studera bäckenbottendysfunktion finns det ett akut kliniskt behov av innovation inom detta område med fokus på att utveckla kostnadseffektiva och tillgängliga djurmodeller. I detta manuskript beskriver vi en råttmodell av USLS som involverar en fullständig hysterektomi följt av fixering av det återstående vaginala valvet till uterosacral ligament. Målet med denna modell är att efterlikna proceduren som utförs på kvinnor för att kunna använda modellen för att sedan undersöka reparativa strategier som förbättrar ligamentfästets mekaniska integritet. Viktigt är att vi också beskriver utvecklingen av en in situ dragtestprocedur för att karakterisera gränssnittsintegritet vid valda tidpunkter efter kirurgisk ingrepp. Sammantaget kommer denna modell att vara ett användbart verktyg för framtida studier som undersöker behandlingsalternativ för POP-reparation via USLS.

Kirurgisk genomförbarhet och uterosacral suturplacering Det fanns inga intraoperativa komplikationer relaterade till hysterektomi eller uterosacral ligamentsuspension hos något av djuren. Det var minimal blödning under avlägsnandet av livmoderhornen, förutsatt att den intilliggande vaskulaturen klämdes fast före avlägsnandet. Begränsad blödning möjliggjorde god visualisering av uterosacral ligament för suturplacering och förhindrade intraoperativ tarm-, rektum-, ureteral- eller blåsskada. Efter placering av suturerna förhindrade den nybildade USL-vaginala valvkorsningen rörelse av livmoderhals-/livmoderstubben som visas i figur 5C. Under de tre första postoperativa dagarna kontrollerades djuren dagligen och sedan varannan vecka fram till försökets slut. Med opioid- och NSAID-analgetika med förlängd frisättning administrerade vid operationen visade sig ytterligare smärtstillande medel vara onödiga. Baserat på vår erfarenhet av 16 djuroperationer (n = 8 för både kontroll- och USLS-grupper) bör en viktminskning förväntas under den första veckan efter operationen med en genomsnittlig förlust på 5,7 ± 1,4% från operationsdagens vikt. Som förväntat gick råttorna långsamt upp i vikt under de följande 23 veckorna, med en genomsnittlig viktökning på 15,1 ± 4,5% under experimentets gång.
Mekanisk testning av USLS-reparationen För att demonstrera funktionaliteten hos USLS-reparationen utfördes enaxlig dragprovning. Efter avlivning av djuret vid den valda postoperativa tidpunkten, 24 veckor i denna studie, bör det kirurgiska området dissekeras noggrant för att visualisera USL-vaginalvalvkorsningen som visas i figur 6A. Jämfört med andra metoder för att testa USL hos råtta tillsammans med andra stödjande strukturer och bäckenorgan29,42, är metoden som beskrivs här den första som testar råtta USL på ett isolerat sätt. Naveltejpen som användes i denna studie valdes strategiskt för sin flexibilitet eftersom tejpens överensstämmelse möjliggjorde minimal störning av vävnaden under dragtestberedningen. Belastningsförskjutningsdata måste därför justeras för att ta hänsyn till den lilla mängd stretch som naveltejpen bidrar med. Figur 9 ger ett exempel på data som erhållits genom dragprovning med figur 9A som ett exempel på ett typiskt spännings-töjningsdiagram. Rapportering av spännings-töjningsdata rekommenderas eftersom denna information är normaliserad och oberoende av provernas storlek34 och bättre kan jämföras mellan studier. För det intakta uterosakrala ligamentet redovisar vi strukturella egenskaper som slutlast (2,9 ± 0,5 N) och styvhet (0,4 ± 0,1 N/mm) samt normaliserade materialegenskaper som slutspänning (2,1 ± 0,4 MPa), yttersta töjning (1,6 ± 0,5) och tangentmodul (4,0 ± 1,1 MPa). I de enaxliga tester som utfördes på råttans reproduktionsorgan och alla deras stödjande vävnadsanslutningar av Moalli et al., rapporterade de en ultimat belastning vid misslyckande (13,2 ± 1,1 N) och styvhet (2,9 ± 0,9 N / mm) högre än den isolerade USL29. Det arbete som utförts av Moalli et al. och annan litteratur34,35 nämner den höga variationen mellan testade prover som visas i de data som presenteras här. För reparationen av uterosacral ligamentupphängning fann vi att alla strukturella materialegenskaper (styvhet, 0,33 ± 0,13 N / mm; ultimat belastning, 2,6 ± 1,3 N) och normaliserade materialegenskaper (ultimat spänning, 1,8 ± 0,7 MPa; ultimat töjning 1,3 ± 0,3; tangentmodul, 3,0 ± 0,9 MPa) var lägre än den för den inhemska USL.

Watch this Scientific Journal Video about Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model at JoVE.com

Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model

Bäckenorganprolaps påverkar miljontals kvinnor över hela världen och ändå har vissa vanliga kirurgiska ingrepp misslyckanden så höga som 40%. Bristen på standarddjurmodeller för att undersöka detta tillstånd hindrar framsteg. Vi föreslår följande protokoll som modell för uterosakral ligamentsuspension och in vivo dragprovning.

Utveckling av en Uterosacral ligament suspension rat modell

Pelvic organ prolapse (POP) is a common pelvic floor disorder (PFD) with the potential to significantly impact a woman's quality of life. Approximately ...

Vårt protokoll är ett av de första som använder en råttmodell för att beskriva uterosacral ligamentsuspensionskirurgi och kan därför verkligen fungera som en ritning för framtida utredare att studera prekliniska resultat och modifieringar av operationen. Rad uterosacral ligament liknar anatomi, cellularitet, histologisk arkitektur och sammansättning jämfört med det mänskliga uterosacrala ligamentet. Dessa komponenter i kombination med kostnadsfördelarna och genomförbarheten gör det till en riktigt bra modell för att studera förstärkning och resultat av uterosacral ligamentsuspensionskirurgi.Dragprovningsmetoden kan anpassas för användning i andra djurmodeller på bäckenbotten. Dessutom kan framtida utredare använda en allmän kirurgisk inställning för att informera andra prolapsoperationer och gnagare som sacrocolpopexy. För att börja, bära en kirurgisk klänning, huvudskydd, mask och sterila handskar.Drapera djuret med ett sterilt fält och lämna endast buken utsatt. Det kan finnas en viss blödning på grund av trauma från klippning runt det kaudala paret bröstvårtor. Vid behov kan detta göras hemostatiskt med tryck eller silvernitrat.Gör ett sju centimeter snitt längs linea alba från strax under xiphoidprocessen till den nedre nippellinjen med ett skalpellblad. Snittet ska sluta 0,5 till en centimeter rostro från urinrörets öppning. Gör sedan ett snitt genom muskelskiktet under.Montera bukupprullaren och inspektera bukhålan. Använd iriscett, försiktigt lokalisera vänster livmoderhorn. Lyft försiktigt vänster livmoderhorn med en gripare eller myggklämma.Börja hysterektomi genom att ligera hornet under äggstocken och äggledaren med hjälp av en myggklämma. För att fortsätta hysterektomi, klämma och trimma den intilliggande vaskulaturen, bindväven och fettet från livmoderhornet med hjälp av mikrosax. Kom ihåg att klämma fast bindväven före borttagning för att minska blödningen.Placera klämmorna så nära livmodergränssnittet som möjligt och upp till den uterocervikala korsningen. Kläm över livmoderhornet nära bifurkationspunkten med myggpincett. Punktmarkera det ipsilaterala hornet bara cephalad till klämman för att undvika blödning.På grund av råttkärlens lilla kaliber var ligering av livmoderstubbarna med en tillfällig klämma tillräcklig för denna operation. Denna teknik kan emellertid modifieras efter behov genom att antingen försegla pediklarna med elektrocautery eller suturligering. Justera bukupprullaren för att exponera det nedre bäckenet.Inspektera det exponerade vaginala valvet och bäckenbottenstöd, ligamental och bindväv fäst vid slidan och livmoderhalsen. Identifiera urinledaren bilateralt, vilket bara är medialt för äggstockarna. Identifiera de uterosacrala ligamenten som kan hittas fästa vid livmoderhalsen strax under de återstående stubbarna i livmoderhornen.Ligamentet spåras i cephalad medial orientering mot korsbenet. Sätt en tre noll polydioxanonsutur på en liten avsmalnande nål och placera en söm genom vänster uterosacral ligament som ligger högt på ligamentet och nära korsbenet. Dra i sömmen för att säkerställa att den har fångat det uterosakrala ligamentet, vilket säkerställer att ligamentstrukturen sätts in i livmoderhalsen med ursprunget som delar sig bakom ändtarmen där den fäster vid korsbenet.Återigen, identifiera urinledaren för att säkerställa att den inte har införlivats i eller knäckts med uterosacral sömmen. För sedan den vänstra polydioxanonsömmen genom den vänstra aspekten av vaginalvalvet medan du införlivar både de främre och bakre aspekterna av vaginalmanschetten. Upprepa dessa steg för att slutföra proceduren för upphängning av uterosacral ligament på höger sida.Efter att uterosacral stygnen har placerats bilateralt, binda suturen säkert med en fyrkantig knut så att vaginalvalvet är förhöjt cephalad mot korsbenet. Dissekera först fettvävnaden tills vaginalvalvet är synligt. Fortsätt att ta bort bukfettkuddarna tills antingen det intakta uterosacrala ligamentet är tydligt synligt eller vid korsningen mellan uterosacral ligament och vaginalvalvet är synligt.Använd en flexibel linjal och mät avståndet mellan uterosacral insättning och vaginalvalvet för att uppskatta vävnadens ursprungliga längd. Trä naveltejpen bakom det intakta uterosakrala ligamentet eller den uterosakrala ligamentupphängningskorsningen så att vävnaden centreras på navelbandet. Mät höjden och bredden på vävnaden där den skär navelbandet med hjälp av digital bromsok.För att uppskatta värdena, som används för att beräkna tvärsnittsarea. För dragprovning, placera djuret så att provet centreras under greppet. Immobilisera bäckenregionen som omger provet genom att fästa djuret på plattan.Sänkte lastcellerna så att navelbandets svansar lätt når greppet. Fäst navelsträngstejpen i greppet så att tejpen slaknar för att undvika manipulering av prover. Öppna sedan konditioneringstestet i programvarugränssnittet och märk testet med provnamnet.Se till att förkonditioneringsmetoden inkluderar förspänningssteget. Klicka för att starta förkonditioneringstestet som förladdar provet vid 0,015 Newton. När förspänningskraften är stabil kommer testet att förkonditionera provet med en töjningshastighet på 0,1 millimeter per sekund i 30 sekunder.Efter 30 sekunder, låt vävnaden vila i en minut. Under tiden laddar du testregimen för drag till fel. Märk testet med exempelnamnet och klicka på Nästa för att komma till nästa fönster.Ange provets mätarlängd och klicka sedan på bredvid övergången till testsidan. Balansera alla och klicka på Start. Låt testet köras med en töjningshastighet på 0,1 millimeter per sekund tills vävnaden har dragits till misslyckande.Testet kommer att producera belastningsförskjutningsdata. Efter placering av suturerna med hjälp av detta protokoll höjdes den nybildade korsningen mellan uterosacral ligament och vaginalvalv cephalad mot korsbenet och förhindrade rörelse av livmoderhalsstubben. För intakt uterosacral ligament och uterosacral ligament suspension prov utvärderades dragprovning av diagram såsom belastningsförskjutningskurva, spänningstöjningsanalys och lutning av linjekurvan passande ekvation.Data visade att alla strukturella materialegenskaper hos reparationsprovet var lägre än för det inhemska uterosakrala ligamentet. Strukturerna är små, och därför kräver identifiering av dem övning av noggrann dissektion. Teater specifikt kan vara utmanande att identifiera, så en dissekeringsomfattning kan vara användbar.Vi föreslår också att du övar med kadaveroperationer före överlevnadsoperationer. Vi beskriver en väg för förstärkning av uterosacral ligamentupphängning samt en ny metod för mekanisk testning av ligamentet. Målet är att den förstärkning som beskrivs i vårt protokoll ska göra framfallskirurgi mer framgångsrik i framtiden, och därmed bättre för patienterna.

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Orthotopic Aorta Transplantation: En Rat modell för att studera utvecklingen av kronisk vaskulopati

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson's Disease

Utvecklingen av en ensidigt-lesionerad 6-OHDA-musmodell av Parkinsons sjukdom

The unilaterally lesioned 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned rat model of Parkinson's disease (PD) has proved to be invaluable in advancing our ...

Rat Model of Blood-brain Barrier Disruption to Allow Targeted Neurovascular Therapeutics

Råttmodell av blod-hjärnbarriären avbrott Tillåt riktade Neurovaskulär Therapeutics

Endothelial cells with tight junctions along with the basement membrane and astrocyte end feet surround cerebral blood vessels to form the blood-brain ...

A Model of Chronic Nutrient Infusion in the Rat

En modell av kronisk Nutrient Infusion i Rat

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to  affect the function of several organs and tissues and to contribute to the  ...

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson's Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

Utveckling av en Alpha-synuklein Based råttmodell för Parkinsons sjukdom via stereotaktisk injektion av en rekombinant adeno-associerad viral vektor

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on ...

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

Den dimetylnitrosamin inducerad leverfibros modell i råtta

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension

Shunt Kirurgi, Höger hjärtkateterisering, och Vascular morfometri i en råttmodell för Flow-inducerad pulmonell arteriell hypertension

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Isometrisk kontraktilitet mätning av mus mesenterica artär med Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Acupuncture in a Rat Model of Asthma

Akupunktur i en råtta modell av astma

A high platform can fix rats without restriction and completely expose the acupoints on the back during acupuncture manipulation. This article describes ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

En icke-invasiv metod för att generera den cykliska belastningsinducerade intraartikulära brosklesionsmodellen i råttknäet

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...