Name: development of a uterosacral ligament suspension rat model
Uploaded: 2022-08-17T14:30:00
Duration: 8 min 58 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model at JoVE.com

Prof. Silvia Blemker'e Instron'unu kullandığı için ve Prof. George Christ'a cerrahi alanının yanı sıra 3D baskılı tutucu ve tutacağı kullandığı için teşekkür ederiz. Bu çalışma UVA-Coulter Translasyonel Araştırma Ortaklığı ve DoD (W81XWH-19-1-0157) tarafından desteklenmiştir.

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Protokol çeşitli avantajlar için dikkate değerdir. Bildiğimiz kadarıyla, sıçan modelinde USLS'nin ilk yayınlanmış açıklamasıdır ve gelecekteki araştırmacılara bu prosedürü araştırma ortamında gerçekleştirmek için tekrarlanabilir adımlar sağlayacaktır. İkincisi, USL'nin doğal ve cerrahi arayüzünün çekme testi için yeni bir protokol ekliyoruz. Çekme testi protokolü, USLS gibi doğal doku onarımlarını arttırmak için yeni doku mühendisliği yaklaşımlarını araştıran benzer çalışmalarda kullanılabilir. Ayrıca, sıçan modelinin kendisi, daha büyük hayvan modellerine kıyasla kullanım / biniş kolaylığı, kısa ömür ve maliyet verimliliği nedeniyle pelvik taban bozukluklarının incelenmesi için yararlıdır. Protokolün sınırlamaları, USLS'nin ana komplikasyonlarından biri olan üreteral bükülmenin değerlendirilememesini içerir. Buna rağmen, bu çalışmada varsayılan üreter yaralanması vakası yoktu. Diğer bir husus, pelvisin yatay oryantasyonunun, küçük fetal baş-doğum kanal oranının ve sıçan modelinde spontan prolapsus eksikliğinin, sonuçların insanlara uygulanabilirliğini sınırlamasıdır. Bununla birlikte, multipar sıçanların kullanımı bu çalışmanın bir gücüdür, çünkü bu, POP3'ün gelişiminde önde gelen risk faktörünü oluşturmaktadır.
Lewis sıçanında histerektomi ve USLS için başarılı bir protokolün oluşturulması, USL'nin mekanik davranışını test etmedeki değişkenliği en aza indirirken, POP'un cerrahi bileşenlerini araştıran gelecekteki araştırmacılar için yararlı bir araç olacaktır. Cerrahi hayvan modelleri, araştırmacıların insanlarda ilk çalışmanın etik riskini azaltırken, parite, vücut kütlesi, hastalık ve beslenme34'ü kontrol eden klinik olarak ilgili deneyler tasarlamalarına izin vermeleri bakımından faydalıdır. Ayrıca, POP için standartlaştırılmış modeller, araştırmacıların insan dokusu toplamanın sınırlamalarını atlamalarına izin verir. Özellikle bu protokolde açıklanan çekme testi yöntemleri, çalışmalar arasında tutarlılık sağlayacaktır. Önceki kemirgen modelleri, serviks, vajina ve çoklu pelvik destek ligamentlerini içeren tüm pelvik bölgenin mekanik özelliklerini test etti29,42. Burada açıklanan yöntemler, USL'nin doğal spinal ve servikal ekleri koruyacak şekilde ölçülmesine izin verir. Çekme testi yöntemlerinin USL'yi tek başına değerlendirmediği, bunun yerine USL'yi sakrum ve servikse yerleştirilmesiyle birlikte değerlendirdiği belirtilmelidir. Bu, ligamentin maruz kaldığı olağan in situ kuvvetleri yansıttığı için çalışmanın bir gücüdür. İzole ligamentin mekanik davranışının, doğal ataşmanları olmadan ex vivo olarak test edilmesi durumunda farklı olacağını kabul ediyoruz. Bu özellikle doğrudur, çünkü sıçan yapıları küçüktür ve ex vivo test için uygun bir numune toplamanın fizibilitesini sınırlar. USL'ler in situ olarak çok yönlü yükleme deneyimi yaşarlar, bu nedenle testin tek eksenli doğası bir sınırlamadır, ancak bu yöntemi kullanmak, sıçan USL mekaniğinin önceki çalışmaları arasında anlamlı karşılaştırmalara izin verir29,42. Şu anda yaygın olarak kabul gören standart bir mekanik test protokolü bulunmamakla birlikte, bu model alandaki gelecekteki doku mühendisliği çalışmaları için yararlı bir araç olacaktır.
Bu protokolde açıklanan birkaç adım, hayvanların sağlığı ve refahının yanı sıra USLS ameliyatının tekrarlanabilirliği ve müteakip gerilme testleri için kritik öneme sahiptir. İlk olarak, hem analjezik hem de tek başına analjezik olarak tanımlanan anti-inflamatuar ilaçların ağrı yönetimi için yetersiz olduğu tespit edilmiştir. Profilaktik antibiyotik, cerrahi alan enfeksiyonu riskini azaltır ve insan cerrahisinde bakım standardıdır. USLS cerrahi prosedürü ile ilgili olarak, yumurtalıklara zarar vermekten kaçınmak ve kan kaybını en aza indirmek başarılı bir ameliyat için esastır. Adım 1.3.3 ve 1.3.4, uterus boynuzunun üst kısmını bitişik yumurtalıktan ayırmayı tanımlar; Yumurtalık çevresindeki hassas damarların bozulmasını önlemek için uterus boynuzunun yan tarafında bu diseksiyonun sürdürülmesine özen gösterilmelidir, bu da aşırı kanamaya neden olabilir. Not olarak, diğer araştırmacılar yumurtalık fonksiyonunun uterus boynuzlarının çıkarılmasından sonra korunduğunu göstermiştir43. Ayrıca, yumurtalıklar bozulur veya çıkarılırsa, genel kollajen fibril mimarisi bozulacak ve dokularının mekanik özelliklerini değiştirecektir44,45. Rahim boynuzu yumurtalıktan güvenli bir şekilde ayrıldıktan sonra, uterus boynuzunun çevredeki yağ yastıklarından ve vaskülatürden izole edilmesine izin veren net bir diseksiyon düzlemi vardır. Açık diseksiyon düzlemine rağmen, uterus boynuzu boyunca pediküller, mikro makasla transeksiyondan önce bir kelepçe ile sabitlenmelidir. İnsanlardaki cerrahi uygulamanın aksine, histerektomi pediküllerinin dikiş ligasyonunun gereksiz olduğunu bulduk, çünkü transeksiyondan önce pedikülün sıkıştırılması yeterli hemostaz sağlar. Protokolün 1.3.6 adımı, kan kaybını en aza indirmek için bu dikkatli süreci açıklar. Histerektomi yapılırken, 1.3.6 ve 1.3.8 adımlarında belirtildiği gibi üreterleri tanımlamak için büyük özen gösterilmelidir. Üreterin anatomik yakınlığını anlamak çok önemlidir, çünkü insanlarda USL'lerle ilişkili en yaygın komplikasyonlardan biri üreter yaralanmasıdır46.
Sonuç olarak, bir sıçan modelinde histerektomi, uterosakral ligament süspansiyonu ve USL'nin çekme testi için yeni bir protokol sunuyoruz. Bulgularımızın, bu prosedürlerin açık, tekrarlanabilir bir tanımını sağlayarak gelecekteki temel bilim araştırmacılarına yardımcı olacağını ve böylece pelvik organ prolapsusu araştırmalarının ilerlemesine izin vereceğini tahmin ediyoruz.

Pelvik organ prolapsusu (POP), dünya çapında milyonlarca kadını etkileyen, özellikle1 yaşla birlikte bir kadının yaşamının birçok yönünü önemli ölçüde etkileme potansiyeline sahip yaygın bir pelvik taban bozukluğudur. Özellikle, Amerika Birleşik Devletleri'ndeki kadınların yaklaşık% 13'ü prolapsus veya idrar kaçırma 2 için ameliyatolacaktır. Hamilelik ve doğumdan sonra en sık görülen bir durum olan prolapsus, pelvik organların, ağırlıklı olarak vajinanın ve / veya uterusun çeşitli bölümlerinin, periton boşluğundaki normal konumlarının ötesine inmesi ile karakterizedir. Bu, vajinal şişkinlik veya basınç, bağırsak, mesane ve cinsel işlev bozukluğunun rahatsız edici semptomlarına ve genel olarak yaşam kalitesinin düşmesine neden olur. POP için diğer risk faktörleri obezite, tütün kullanımı, kronik öksürük ve kabızlık3'ü içerir.
Sağlıklı kadınlarda pelvik taban organları levator ani kasları, uterosakral ligamentler (USL'ler), kardinal bağlar, pelvik yanak duvarına bağ dokusu ataşmanları ve perineal cismin distal yapıları tarafından desteklenir 4,5. USL'ler hem uterus hem de apikal vajina için en önemli apikal destekleyici yapılar arasındadır ve bu nedenle sıklıkla POP'un cerrahi olarak düzeltilmesinde kullanılmaktadır (Şekil 1). USL'den yapısal destek, sakral bölgedeki yoğun kollajenöz bağ dokusundan kaynaklanır ve bu da yakından paketlenmiş düz kaslara dönüşür. Bu kompozisyonel gradyan nedeniyle, USL, pelvik organlara sağlam destek sağlamak için uterus ve vajinal kas sistemi ile iç içe geçer 6,7. Uterosakral ligament süspansiyonunda (USLS), USL'ler histerektomi sonrası vajinal tonoza sabitlenir ve vajina ve çevresindeki yapılar abdominal kompartmandaki anatomik konumlarına geri yüklenir. Bununla birlikte, transvajinal veya laparoskopik yoldan bağımsız olarak, USLS prosedürü bazı çalışmalarda% 40'a varan nispeten yüksek bir başarısızlık oranı ile uğraşmaktadır 8,9. USL'ler gibi apikal kompartman prolapsusu için onarımdan 5 yıl sonra rahatsız edici vajinal şişkinlik semptomlarının nüks oranı, çok merkezli randomize kontrollü büyük bir çalışmada yaklaşık% 40 idi9. Aynı çalışmada, 5 yılda tekrarlayan prolapsus için yeniden tedavi yaklaşık% 10 idi. Bu yüksek başarısızlık oranının mekanizması araştırılmamıştır, ancak vajina ve çevresindeki yapıların anatomik pozisyonlarına geri getirilmesi, düz kas bölgesi yerine USL10,11'in yoğun kollajenöz bölgesine dikiş yerleştirilmesini gerektirir. Bu nedenle, yüksek başarısızlık oranı, doğal servikal-USL bağlantısında görülen tam entegrasyona kıyasla, cerrahi olarak oluşturulmuş vajina-USL arayüzünün mekanik ve kompozisyonel uyumsuzluğundan kaynaklanabilir.
Bu bozuklukların tedavisinin ekonomik etkisi de dikkat çekicidir, ABD'de ayaktan bakım için yılda yaklaşık 300 milyon dolar harcanmaktadır12 ve cerrahi prosedürler için doğrudan maliyetlere yılda 1 milyar dolardan fazla harcanmaktadır13. Bu durumların tedavisine adanmış geniş ekonomik kaynaklara rağmen, birçok prolapsus ameliyatından kaynaklanan komplikasyonlar cesaret kırıcı olmaya devam etmektedir. Örneğin, sakrokolpopeksi gibi polipropilen ağ bazlı apikal prolapsus onarımları, doğal doku onarımlarına kıyasla daha yüksek başarı oranları sunar14, ancak ağa maruz kalma veya erozyon gibi potansiyel komplikasyonlar pahasına. FDA, yalnızca 2008 ve 2010 yılları arasında mesh komplikasyonlarıyla ilgili yaklaşık 3.000 şikayet aldı. Bu, FDA'nın Nisan 2019'da POP için transvajinal olarak yerleştirilmiş tüm örgü ürünlerinin üretimini ve satışını durdurma emriyle sonuçlandı15. Bu nedenle, polipropilen dışındaki materyallere ve bunları test etmek için modellere güçlü bir klinik ihtiyaç vardır, bu da doğal doku prolapsusu onarımlarını artırabilir ve tek başına dikiş ile geleneksel tekniklere kıyasla başarı oranlarını artırabilir.
FDA'nın 2019'daki duyurusundan bu yana, çoğu pelvik cerrah, prolapsus onarımları için transvajinal olarak yerleştirilmiş ağ kullanmayı bıraktı ve araştırmacıları, mezenkimal stromal hücreler (MSC'ler) gibi doğal doku onarımlarını 16,17,18 artırmak için yeni doku mühendisliği yaklaşımları aramaya teşvik etti9,20 . Odak noktasındaki bu değişimle birlikte, yeni malzemelerin geliştirilmesine yardımcı olabilecek hayvan modellerinin iyileştirilmesine acil bir ihtiyaç vardır; Bu süreçteki zorluk, klinik alaka düzeyini maliyetle dengelemektir. Bu amaçla, pelvik organ prolapsusunu inceleyen temel bilim ve klinik araştırmacılar, sıçanlar, fareler, tavşanlar, koyunlar, domuzlar ve insan olmayan primatlar19 dahil olmak üzere şimdiye kadar çeşitli hayvan modellerinden yararlanmışlardır. Optimal bir hayvan modeli belirleme süreci zordur, çünkü insanlar iki ayaklıdır, kuyrukları yoktur ve diğer memeli türlerine kıyasla travmatik bir doğum sürecine sahiptirler20. Domuz21, robotik sakrokolpopeksi simüle etmek için kullanılırken, koyunlar vajinal prolapsus onarımlarını simüle etmek için kullanılmıştır22. Bu hayvan modelleri, klinik olarak alakalı olsa da, maliyet ve bakım ile fizibilite bakımından sınırlıdır. İnsan olmayan primatlar prolapsusun patogenezini incelemek için kullanılmıştır; Özellikle sincap maymunları, insanlar dışında kendiliğinden prolapsus geliştirebilen tek türlerden biridir ve bu da onları en alakalı hayvan modellerinden biri haline getirir20. İnsan olmayan primatlar, sakrokolpopeksi23 ve uterus nakli24 gibi jinekolojik cerrahi prosedürleri incelemek için de kullanılmıştır. Koyun ve domuz meslektaşlarına benzer şekilde, insan olmayan primatların bir hayvan prolapsusu modeli olarak birincil sınırlaması, bakım, bakım ve yatılı maliyettir19.
Kemirgen pelvisi, insanlara kıyasla çok daha küçük bir baş-doğum kanalı boyut oranı ile yatay olarak yönlendirilmiş olmasına rağmen, sıçanlar, insan USL25'e kıyasla benzer USL anatomisine, hücreselliğe, histolojik mimariye ve matris kompozisyonuna sahip olduklarından, USLS cerrahisinin küçük hayvan çalışmaları için uygundur. Ayrıca, bakım ve biniş açısından faydalıdırlar. Bu yararlı özelliklere rağmen, USLS onarımının bir sıçan modelinin yayınlanmış bir raporu yoktur. Bu nedenle, amaç multipar Lewis sıçanında histerektomi ve USLS için bir protokol tanımlamaktır. Bu protokol, bu erişilebilir hayvan modelini kullanarak POP'un patofizyolojisini ve cerrahi bileşenlerini incelemeyi amaçlayan araştırmacılar için faydalı olacaktır.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64311/64311fig01.jpg"> Resim 1: Pelvik organ prolapsusu . (A) Periton boşluğundaki organların normal oryantasyonu ve (B) prolapsus meydana geldiğinde dramatik organ düşüşü. Histerektomiyi takiben, (C) uterosakral ligament süspansiyonu vajinayı ve çevresindeki yapıları uygun anatomik pozisyonlarına geri yükler. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64311/64311fig01large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alcohol prep pad</td>
			<td>BD</td>
			<td>326895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Artificial Tear Ointment</td>
			<td>American Health Service Sales Corp</td>
			<td>PH-PARALUBE-O</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluehill software</td>
			<td>Instron</td>
			<td>Bluehill 3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cavicide 1 disinfectant</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22 998 800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compression platean</td>
			<td>Instron</td>
			<td>2501-163</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Puritan Medical</td>
			<td>806-WC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Sponge, 8-Ply</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95038-728</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mosquito Forceps</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MMDS1222115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holder</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>DYND04045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Scissors, 5&#189;&#34;, Sharp</td>
			<td>American Health Service Sales Corp</td>
			<td>4-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opioid Analgesic (Buprenorphine XR)</td>
			<td>Fidelis Animal Health</td>
			<td>Ethiqa XR</td>
			<td>0.65&#160;mg/kg&#160;SC&#160;Q72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NSAID Analgesic (Meloxicam SR)</td>
			<td>Wildlife Pharmaceuticals, LLC</td>
			<td>Meloxicam SR</td>
			<td>1&#160;mg/kg&#160;SC&#160;q72</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS II, 3-0 Polydioxanone Suture, SH-1</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z316H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PDS II, 5-0 P olydioxanone Suture, RB-1</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Z303H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retractor</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MDS1862107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade Stainless Surgical #10</td>
			<td>Miltex</td>
			<td>4-310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle</td>
			<td>Medline Industries</td>
			<td>MDS15210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor, Micro, Curved, 4.5&#34;</td>
			<td>Westcott</td>
			<td>MDS0910311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Column Universal Testing System</td>
			<td>Instron</td>
			<td>5943 S3873</td>
			<td>1 kN force capacity, 10 N load cell</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Natural Rubber Latex Gloves</td>
			<td>Accutech</td>
			<td>91225075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture,Vicryl,6-0,P-3</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J492G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape,Umbilical,Cotton,1/8X18&#34;</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>U10T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tension and Compression Load Cell</td>
			<td>Instron</td>
			<td>2530-10N</td>
			<td>10N load cell (1 kgf, 2 lbf)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veterinary surgical adhesive (skin glue)</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>31477</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of a uterosacral ligament suspension rat model

Pelvik organ prolapsusu (POP), bir kadının yaşam kalitesini önemli ölçüde etkileme potansiyeline sahip yaygın bir pelvik taban bozukluğudur (PFD). Kadınların yaklaşık% 10-20'si Amerika Birleşik Devletleri'nde prolapsusu tedavi etmek için pelvik taban onarım ameliyatı geçirmektedir. PFD vakaları, yalnızca Amerika Birleşik Devletleri'nde toplam 26,3 milyar dolarlık yıllık maliyetle sonuçlanmaktadır. Bu çok faktörlü durumun yaşam kalitesi üzerinde olumsuz bir etkisi vardır ve yine de tedavi seçenekleri yakın geçmişte sadece azalmıştır. Yaygın bir cerrahi seçenek, tipik olarak vajinal tonozun pelvisteki uterosakral ligamente yapıştırılmasıyla gerçekleştirilen uterosakral ligament süspansiyonudur (USLS). Bu onarım, ağ büyütme ile karşılaştırıldığında daha düşük bir komplikasyon insidansına sahiptir, ancak% 40'a varan nispeten yüksek bir başarısızlık oranı için dikkat çekicidir. Pelvik taban disfonksiyonunu incelemek için standart hayvan modellerinin eksikliği göz önüne alındığında, uygun maliyetli ve erişilebilir hayvan modelleri geliştirmeye odaklanarak bu alanda inovasyon için acil bir klinik ihtiyaç vardır. Bu yazıda, USLS'nin tam histerektomiyi ve ardından kalan vajinal tonozun uterosakral ligamente sabitlenmesini içeren bir sıçan modeli tanımlanmıştır. Bu modelin amacı, modeli daha sonra bağ bağlantısının mekanik bütünlüğünü geliştiren onarıcı stratejileri araştırmak için kullanabilmek için kadınlar üzerinde uygulanan prosedürü taklit etmektir. Önemli olarak, cerrahi müdahaleyi takiben seçilen zaman noktalarında arayüz bütünlüğünü karakterize etmek için bir in situ çekme testi prosedürünün geliştirilmesini de açıklıyoruz. Genel olarak, bu model USLS yoluyla POP onarımı için tedavi seçeneklerini araştıran gelecekteki çalışmalar için yararlı bir araç olacaktır.

Cerrahi fizibilite ve uterosakral sütür yerleştirilmesi Hayvanların hiçbirinde histerektomi veya uterosakral ligament süspansiyonuna bağlı intraoperatif komplikasyon görülmedi. Rahim boynuzlarının çıkarılması sırasında, bitişik vaskülatürün çıkarılmadan önce kelepçelenmesi koşuluyla minimal kanama vardı. Sınırlı kanama, sütür yerleştirilmesi için uterosakral ligamentlerin iyi görüntülenmesine izin verdi ve intraoperatif bağırsak, rektum, üreteral veya mesane hasarını önledi. Dikişlerin yerleştirilmesini takiben, yeni oluşan USL-vajinal tonoz bileşkesi, Şekil 5C'de gösterildiği gibi servikal/uterin güdüğün hareketini engelledi. Ameliyat sonrası ilk üç gün boyunca, hayvanlar günlük olarak kontrol edildi ve daha sonra deneyin sonuna kadar iki haftada bir kontrol edildi. Ameliyat sırasında uygulanan uzatılmış salınımlı opioid ve NSAID analjezikleri ile ek analjeziklerin gereksiz olduğu tespit edildi. 16 hayvan ameliyatı ile ilgili deneyimlerimize dayanarak (hem kontrol hem de USLS grupları için n = 8), ameliyattan sonraki ilk haftada, ameliyat günü ağırlığından% 5.7 ± ortalama% 1.4'lük bir kayıpla ağırlıkta bir düşüş beklenmelidir. Beklendiği gibi, sıçanlar sonraki 23 hafta boyunca yavaşça kilo aldılar ve deney boyunca% 15.1 ± 4.5% ortalama kilo alımı oldu.
USLS onarımının mekanik testi USLS onarımının işlevselliğini göstermek için, tek eksenli çekme testi yapıldı. Hayvanın ameliyat sonrası seçilen zaman noktasında ötenazisinden sonra, bu çalışmada 24 hafta, cerrahi alan, Şekil 6A'da gösterildiği gibi USL-vajinal tonoz bileşkesini görselleştirmek için dikkatlice diseke edilmelidir. Sıçan USL'lerini diğer destekleyici yapılar ve pelvik organlarla birlikte test etmek için diğer metodolojilerle karşılaştırıldığında29,42, burada açıklanan yöntem, sıçan USL'sini izole bir şekilde test eden ilk yöntemdir. Bu çalışmada kullanılan göbek bandı, esnekliği için stratejik olarak seçilmiştir, çünkü bant uyumu, çekme testi hazırlığı sırasında dokunun minimum bozulmasına izin vermiştir. Bu nedenle, yük yer değiştirme verileri, göbek bandının katkıda bulunduğu az miktarda gerilmeyi hesaba katacak şekilde ayarlanmalıdır. Şekil 9, tipik bir gerilme-gerinim grafiğinin bir örneğini sağlayan Şekil 9A ile çekme testi yoluyla elde edilen verilere bir örnek sunmaktadır. Stres-gerinim verilerinin raporlanması tavsiye edilir, çünkü bu bilgiler normalleştirilmiştir ve numunelerin büyüklüğünden bağımsızdır34 ve çalışmalar arasında daha iyi karşılaştırılabilir. Sağlam uterosakral ligament için, nihai yük (2.9 ± 0.5 N) ve sertlik (0.4 ± 0.1 N/mm) gibi yapısal özelliklerin yanı sıra nihai gerilme (2.1 ± 0.4 MPa), nihai gerinim (1.6 ± 0.5) ve teğet modülü (4.0 ± 1.1 MPa) gibi normalleştirilmiş malzeme özelliklerini rapor ediyoruz. Moalli ve ark. tarafından sıçan üreme organları ve tüm destekleyici doku bağlantıları üzerinde yapılan tek eksenli testlerde, izole USL29'dan daha yüksek başarısızlık (13.2 ± 1.1 N) ve sertlikte (2.9 ± 0.9 N / mm) nihai bir yük bildirmişlerdir. Moalli ve ark. ve diğer literatür34,35 tarafından yapılan çalışma, burada sunulan verilerde gösterildiği gibi test edilen örnekler arasındaki yüksek değişkenlikten bahsetmektedir. Uterosakral ligament süspansiyon onarımı için, tüm yapısal malzeme özelliklerinin (sertlik, 0.33 ± 0.13 N / mm; nihai yük, 2.6 ± 1.3 N) ve normalleştirilmiş malzeme özelliklerinin (nihai gerilme, 1.8 ± 0.7 MPa; nihai gerinim 1.3 ± 0.3; teğet modül, 3.0 ± 0.9 MPa) doğal USL'ninkinden daha düşük olduğunu bulduk.

Watch this Scientific Journal Video about Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model at JoVE.com

Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model

Pelvik organ prolapsusu dünya çapında milyonlarca kadını etkilemektedir ve yine de bazı yaygın cerrahi müdahalelerin başarısızlık oranları% 40'a kadar çıkmaktadır. Bu durumu araştırmak için standart hayvan modellerinin eksikliği ilerlemeyi engellemektedir. Aşağıdaki protokolü uterosakral ligament süspansiyonu ve in vivo gerilme testi için bir model olarak öneriyoruz.

Uterosakral Ligament Süspansiyon Sıçan Modelinin Geliştirilmesi

Pelvic organ prolapse (POP) is a common pelvic floor disorder (PFD) with the potential to significantly impact a woman's quality of life. Approximately ...

Protokolümüz, uterosakral ligament süspansiyon ameliyatını tanımlamak için bir sıçan modeli kullanan ilk kişilerden biridir ve bu nedenle gelecekteki araştırmacıların ameliyatın klinik öncesi sonuçlarını ve modifikasyonlarını incelemeleri için gerçekten bir plan görevi görebilir. Rad uterosakral ligament, anatomi, hücresellik, histolojik mimari ve kompozisyon açısından insan uterosakral ligamentine kıyasla benzerdir. Bu bileşenler, maliyet avantajları ve fizibilite ile birleştiğinde, uterosakral ligament süspansiyon cerrahisinin büyütme ve sonuçlarını incelemek için gerçekten harika bir model haline getirmektedir.Çekme testi yöntemi, diğer pelvik taban hayvan modellerinde kullanılmak üzere uyarlanabilir. Ek olarak, gelecekteki araştırmacılar diğer prolapsus ameliyatlarını ve sakrokolpopeksi gibi kemirgenleri bilgilendirmek için genel cerrahi kurulumunu kullanabilirler. Başlamak için cerrahi bir önlük, baş örtüsü, maske ve steril eldiven giyin.Hayvanı steril bir alanla örtün, sadece karnını açıkta bırakın. Kaudal meme uçlarının etrafında klipslenmeden kaynaklanan travma nedeniyle bir miktar kanama olabilir. Gerekirse, bu basınç veya gümüş nitrat ile hemostatik hale getirilebilir.Bir neşter bıçağı kullanarak ksifoid işlemin hemen altından alt meme ucu çizgisine kadar linea alba'dan yedi santimetrelik bir kesi yapın. Kesi üretral delikten 0,5 ila bir santimetre rostro ile bitmelidir. Daha sonra altındaki kas tabakasından bir kesi yapın.Karın retraktörünü monte edin ve karın boşluğunu inceleyin. İris forseps kullanarak, sol uterus boynuzunu yavaşça bulun. Sol uterus boynuzunu bir kavrayıcı veya sivrisinek kelepçesi ile yavaşça yükseltin.Bir sivrisinek kelepçesi kullanarak boynuzu yumurtalık ve yumurta kanalının altına bağlayarak histerektomiye başlayın. Histerektomiye devam etmek için, mikro makas kullanarak uterus boynuzundan bitişik vaskülatür, bağ dokusu ve yağı kelepçeleyin ve kesin. Kanamayı azaltmak için çıkarmadan önce bağ dokusunu sıkıştırmayı unutmayın.Kelepçeleri uterus arayüzüne mümkün olduğunca yakın ve uteroservikal kavşağa kadar yerleştirin. Sivrisinek forseps kullanarak bifurkasyon noktasına yakın uterus boynuzu boyunca kelepçeleyin. Kanamayı önlemek için ipsilateral boynuzu sadece sefaladı kelepçeye boşaltın.Sıçan damarlarının küçük kalibresi nedeniyle, uterus kütüklerinin geçici bir kelepçe ile bağlanması bu ameliyat için yeterliydi. Bununla birlikte, bu teknik, pediküllerin elektrokoter veya sütür ligasyonu ile kapatılmasıyla gerektiği gibi değiştirilebilir. Alt pelvisi açığa çıkarmak için abdominal retraktörü ayarlayın.Açıkta kalan vajinal tonozu ve pelvik tabanı kontrol edin, vajina ve servikse bağlı bağ ve bağ dokularını destekleyin. Üreteri iki taraflı olarak tanımlayın, bu da yumurtalıklar için sadece medialdir. Rahim boynuzlarının kalan kütüklerinin hemen altında servikse bağlı olarak bulunabilen uterosakral bağları tanımlayın.Ligament, sakruma doğru sefalad medial oryantasyonda izlenir. Küçük bir konik iğne üzerine üç sıfır polidioksanon sütürü koyun ve ligamentin üzerinde yüksek ve sakruma yakın bulunan sol uterosakral ligamentten bir dikiş yerleştirin. Uterosakral ligamenti yakaladığından emin olmak için dikişi çekin, bağ yapısının sakruma bağlandığı rektumun arkasına bölünen orijin ile servikse girmesini sağlayın.Yine, uterosakral dikişe dahil edilmediğinden veya bükülmediğinden emin olmak için üreteri tanımlayın. Daha sonra sol polidioksanon dikişini, vajinal manşetin hem ön hem de arka yönlerini birleştirirken vajinal tonozun sol yönünden geçirin. Sağ taraftaki uterosakral ligament süspansiyon prosedürünü tamamlamak için bu adımları tekrarlayın.Uterosakral dikişler iki taraflı olarak yerleştirildikten sonra, vajinal tonozun sakruma doğru sefalad yükseltilmesi için kare bir düğüm kullanarak dikişi güvenli bir şekilde bağlayın. İlk olarak, vajinal tonoz görünene kadar yağ dokusunu diseke edin. Sağlam uterosakral ligament açıkça görülebilene kadar veya uterosakral ligament ile vajinal tonoz arasındaki kavşakta görünene kadar abdominal yağ pedlerini çıkarmaya devam edin.Esnek bir cetvel kullanarak, dokunun orijinal uzunluğunu tahmin etmek için uterosakral yerleştirme ile vajinal tonoz arasındaki mesafeyi ölçün. Sağlam uterosakral ligamentin arkasındaki iplik göbek bandı veya uterosakral ligament süspansiyon kavşağı, doku göbek bandı üzerinde ortalanacak şekilde. Dijital kumpas kullanarak göbek bandı ile kesiştiği dokunun yüksekliğini ve genişliğini ölçün.Değerleri tahmin etmek için, kesit alanını hesaplamak için kullanılır. Çekme testi için, hayvanı, numune kavramanın altında ortalanacak şekilde konumlandırın. Hayvanı plakaya sabitleyerek örneği çevreleyen pelvik bölgeyi hareketsiz hale getirin.Yük hücrelerini, göbek bandının kuyrukları tutuşa kolayca ulaşacak şekilde indirdi. Numune manipülasyonunu önlemek için göbek bandını kavramada sabitleyin ve bandı gevşek bırakın. Ardından yazılım arayüzünde ön koşullandırma testini açın ve testi örnek adıyla etiketleyin.Ön koşullandırma yönteminin ön yükleme adımını içerdiğinden emin olun. Numuneyi 0,015 Newton'da önyükleyecek olan ön koşullandırma testini başlatmak için tıklayın. Ön yük kuvveti stabil hale geldiğinde, test numuneyi 30 saniye boyunca saniyede 0,1 milimetre uzama hızında ön koşullandıracaktır.30 saniye sonra, dokunun bir dakika dinlenmesine izin verin. Bu arada, çekme işlemini hata testi rejimine yükleyin. Testi örnek adıyla etiketleyin ve bir sonraki pencereye geçmek için İleri'ye tıklayın.Numunenin ölçer uzunluğunu girin ve ardından test sayfasına geçiş yapmak için yanındaki simgesine tıklayın. Tümünü dengeleyin ve Başlat'a tıklayın. Testin, doku başarısızlığa çekilene kadar saniyede 0,1 milimetre uzama hızında çalışmasına izin verin.Test, yük yer değiştirme verileri üretecektir. Bu protokol kullanılarak dikişlerin yerleştirilmesini takiben, uterosakral ligament ile vajinal tonoz arasında yeni oluşan bileşke sakruma doğru sefalad yükseltildi ve servikal güdüğün hareketi engellendi. Sağlam uterosakral ligament ve uterosakral ligament süspansiyon örneği için, çekme testi, yük yer değiştirme eğrisi, gerilme gerinim analizi ve çizgi eğrisi uyum denkleminin eğimi gibi grafiklerle değerlendirildi.Veriler, onarım örneğinin tüm yapısal malzeme özelliklerinin doğal uterosakral ligameninkinden daha düşük olduğunu göstermiştir. Yapılar küçüktür ve bu nedenle onları tanımlamak titiz diseksiyon pratiği gerektirir. Özellikle tiyatronun tanımlanması zor olabilir, bu nedenle diseksiyon kapsamı yararlı olabilir.Ayrıca hayatta kalma ameliyatlarından önce kadavra ameliyatları ile pratik yapmanızı öneririz. Uterosakral ligament süspansiyonunun güçlendirilmesi için bir yol ve ligamentin mekanik testi için yeni bir metodoloji tanımladık. Amaç, protokolümüzde açıklanan büyütmenin prolapsus ameliyatını gelecekte daha başarılı hale getirmesi ve dolayısıyla hastalar için daha iyi hale getirmesidir.

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Ortotopik Aort Nakli: Rat Modeli Kronik Vaskülopati Geliştirme Çalışması

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson's Disease

Parkinson Hastalığının tek taraflı lezyonlanmıştır 6-OHDA Mouse Model Geliştirme

The unilaterally lesioned 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesioned rat model of Parkinson's disease (PD) has proved to be invaluable in advancing our ...

Rat Model of Blood-brain Barrier Disruption to Allow Targeted Neurovascular Therapeutics

Kan-beyin bariyer bozulması arasında Rat Modeli Nörovasküler Therapeutics Hedefli izin ver için

Endothelial cells with tight junctions along with the basement membrane and astrocyte end feet surround cerebral blood vessels to form the blood-brain ...

A Model of Chronic Nutrient Infusion in the Rat

Sıçan Kronik Besin İnfüzyon Bir Model

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to  affect the function of several organs and tissues and to contribute to the  ...

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson's Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

Bir rekombinant adeno-ilişkili viral vektörün stereotaktik enjeksiyon yoluyla Parkinson Hastalığı için bir alfa-sinüklein Bazlı Fare Modeli Geliştirme

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on ...

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

Rat Dimethylnitrosamine Başlatılan Karaciğer Fibrozis Modeli

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension

Akış kaynaklı pulmoner hipertansiyon için bir Sıçan Modelinde Şant Cerrahisi, Sağ Kalp kateterizasyonu ve Damar Morfometri

In this protocol, PAH is induced by combining a 60 mg/kg monocrotalin (MCT) injection with increased pulmonary blood flow through an aorto-caval shunt ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Acupuncture in a Rat Model of Asthma

Astımın Sıçan Modelinde Akupunktur

A high platform can fix rats without restriction and completely expose the acupoints on the back during acupuncture manipulation. This article describes ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

Sıçan Dizinin Döngüsel Yüklemeye Bağlı Eklem İçi Kıkırdak Lezyon Modelini Oluşturmak için Non-İnvaziv Bir Yöntem

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...