Name: aptamer-based target detection facilitated by a 3-stage g-quadruplex isothermal exponential amplification reaction
Uploaded: 2022-10-06T13:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Aptamer-Based Target Detection Facilitated by a 3-Stage G-Quadruplex Isothermal Exponential Amplification Reaction at JoVE.com

تم دعم هذا البحث من خلال تمويل البحث والتطوير من Aptagen LLC.

انظر الجدول التكميلي 1 (جدول إعداد التفاعل) لتحضير الأنبوب، بما في ذلك الأحجام والتركيزات المحددة لمكونات التفاعل. يستخدم البروتوكول الموضح هنا مجموعة منصات الكشف المجمعة مسبقا كما هو موضح في جدول المواد. يجب حفظ جميع المكونات على الجليد ما لم يذكر خلاف ذلك.
<p class="jove_titl...

<ol>
	<li>Ellington, A. D., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+selection+of+RNA+molecules+that+bind+specific+ligands.">In vitro selection of RNA molecules that bind specific ligands.</a> Nature. 346 (6287), 818-822 (1990).</li><li>Tang, J., Breaker, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rational+design+of+allosteric+ribozymes.">Rational design of allosteric ribozymes.</a> Chemical Biology. 4 (6), 453-459 (1997).</li><li>Stoltenburg, R., Reinemann, C., Strehlitz, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SELEX--A+(r)evolutionary+method+to+generate+high-affinity+nucleic+acid+ligands.">SELEX--A (r)evolutionary method to generate high-affinity nucleic acid ligands.</a> Biomolecular Engineering. 24 (4), 381-403 (2007).</li><li>Liao, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+colorimetric+system+for+detecting+target+antigens+by+a+three-stage+signal+transformation-amplification+strategy.">A simple colorimetric system for detecting target antigens by a three-stage signal transformation-amplification strategy.</a> Biochemistry. 57 (34), 5117-5126 (2018).</li><li>Soukup, G. A., Emilsson, G. A., Breaker, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altering+molecular+recognition+of+RNA+aptamers+by+allosteric+selection.">Altering molecular recognition of RNA aptamers by allosteric selection.</a> Journal of Molecular Biology. 298 (4), 623-632 (2000).</li><li>Van Ness, J., Van Ness, L. K., Galas, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isothermal+reactions+for+the+amplification+of+oligonucleotides.">Isothermal reactions for the amplification of oligonucleotides.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (8), 4504-4509 (2003).</li><li>Cheng, X., Liu, X., Bing, T., Cao, Z., Shangguan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=General+peroxidase+activity+of+G-quadruplex-hemin+complexes+and+its+application+in+ligand+screening.">General peroxidase activity of G-quadruplex-hemin complexes and its application in ligand screening.</a> Biochemistry. 48 (33), 7817-7823 (2009).</li><li>Nie, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reporter-triggered+isothermal+exponential+amplification+strategy+in+ultrasensitive+homogeneous+label-free+electrochemical+nucleic+acid+biosensing.">Reporter-triggered isothermal exponential amplification strategy in ultrasensitive homogeneous label-free electrochemical nucleic acid biosensing.</a> Chemical Communications. 50 (47), 6211-6213 (2014).</li><li>Tabuchi, T., Yokobayashi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-free+riboswitches.">Cell-free riboswitches.</a> RSC Chemical Biology. 2 (5), 1430-1440 (2021).</li><li>Ao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+an+expression+platform+in+the+SELEX+cycle+to+select+DNA+aptamer+binding+to+a+disease+biomarker.">Integration of an expression platform in the SELEX cycle to select DNA aptamer binding to a disease biomarker.</a> ACS Omega. 7 (12), 10804-10811 (2022).</li></ol>

تستفيد الطريقة المعروضة هنا من الانتقال بين بنية ثانوية مضطربة في البداية في ريبوزيم خيفي والاستقرار الإضافي الممنوح من خلال ربط الهدف بالمجال الأبتاميري لتنشيط ريبوزيم رأس المطرقة المشقوق لرابطة الدول المستقلة. تم تعديل استقرار الريبوزيم لتقليل النشاط التحفيزي في غياب الهدف مع السماح...

عادة ما تكون الأبتامير عبارة عن حمض نووي أو حمض نووي ريبوزي أحادي الشريط يتم اختياره من خلال عملية تطورية ذات تقارب ارتباط عالي وخصوصية للأهداف المرجوة1. بالإضافة إلى القدرة على الربط ، يمكن ربط aptamers بالزخارف والتحكم فيها باستخدام وظائف خرج الإشارة 2,3 ، مما يؤدي إلى تضخيم الإشارة المذكورة وتحسين حساسية النظام. نظام تفاعل التضخيم الأسي متساوي الحرارة G-quadruplex (GQ-EXPAR) هو نظام من ثلاثة أجزاء (الشكل 1) يطور إشارة مرئية حيث تتم إضافة مكونات متتالية إلى وعاء تفاعل واحد لإنتاج ناتج مرئي4. يسمح هذا النظام بالكشف عن هدف محدد ، هنا الثيوفيلين ، في عينة معينة في غضون 15 دقيقة باستخدام سير عمل مبسط للسماح بالكشف السريع والمحدد عن هدف الاهتمام. يجب النظر في هذه الطريقة للعينات التي يكون فيها التحديد الكمي المحدد للتركيز المستهدف أقل إثارة للقلق من الخصوصية العالية للاستجابة في فترة زمنية قصيرة.
ينتج الريبوسويتش الخيفي ، وهو جزيء RNA لتبديل البنية (ريبوزيم) يخضع للانقسام الذاتي ، الإشارة الأولية. يعتمد هذا البناء على ريبوزيم رأس المطرقة ، مع إدخال مجال أبتاميري في Stem II كمنظم لنشاط الانقسام. يتم تنشيط وظيفة الانقسام الذاتي عندما يستقر مجاله aptameric عند الارتباط بهدفه5. خلاف ذلك ، يكون المفتاح غير نشط في حالته الأصلية.
يستخدم تفاعل التضخيم الأسي اللاحق (EXPAR) إطلاق شريط الحمض النووي الريبي المشقوق ذاتيا من المرحلة الأولى لتجهيز تفاعل تضخيم متساوي الحرارة6. يحتوي منتج التضخيم الخاص ب EXPAR على نشاط البيروكسيديز7 ، حيث يعمل كأساس للمرحلة الأخيرة من النظام. عندما تتأكسد بعض الركائز بالتزامن مع انهيار البيروكسيد ، فإنها تنتج ناتج فلورسنت يمكن قياسه على أجهزة مختلفة. يمكن استبدال الركائز الشائعة الأخرى لإنتاج منتج ملون للكشف البصري. EXPAR ونشاط البيروكسيديز لمنتجات التضخيم الخاصة به بمثابة محسن إشارة 2-stage ، وزيادة الحساسية لمستويات أعلى مقارنة بالاستراتيجيات التقليدية 7,8.
يستخدم الكشف عن الثيوفيلين مقابل الكافيين كمثال على خصوصية منصة الكشف هذه ، حيث تختلف عن طريق مجموعة ميثيل واحدة فقط (الشكل 2). ينتج هذا العرض التوضيحي للنظام ناتجا لونيا للكشف البصري عن 500 نانومتر ثيوفيلين على الأقل.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3,3&#39;,5,5&#39;-Tetramethylbenzidine dihydrochloride (TMB) solution with H2O2, &#34;MaxSignal TMB Microwell Substrate Solution&#34;</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>FOOD-1806-1000</td>
			<td>Color development reagent. Minimize exposure to light and atmosphere. Previously BIOO Scientific catalog number 1806. 
			Supplied in Apta-beacon Demonstration Kit as Tube 3-2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5&#8217;- TCC CTC CCT CCC TCC CAG TCC AGA CTC TTC CCT CCC TCC CTC CCA GA-Biotin-3&#8217;</td>
			<td>Integrated DNA Technologies (IDT)</td>
			<td>Custom</td>
			<td>Optimized QtQ47 DNA template for EXPAR to produce G-quadruplex, primed by G-quadruplex. This is used for the &#34;exponential&#34; part of EXPAR, to rapidly increase the amount of DNAzyme used for Step 3 color development. Template includes a 3&#39;-biotin to prevent unintended extension by Bst 2.0 DNA polymerase during EXPAR. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 2-2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5&#8217;-GGG AAC UAU ACA ACC UAG GGC GAC CCU GAU GAG CCU UAU ACC AGC CGA AAG GCC CUU GGC AGA CGU UGA AAC GGU GAA AGC CGU AGG UUG CCC UAG GUU GUA UAG UU-3&#8217;</td>
			<td>Integrated DNA Technologies (IDT)</td>
			<td>Custom</td>
			<td>Theophylline-recognizing allosteric ribozyme sequence (self-cleaving ribozyme regulated by RNA aptamer domain for theophylline) modified from Soukup et al. 
			Soukup, G. A., Emilsson, G. A., and Breaker, R. R. (2000) Altering molecular recognition of RNA aptamers by allosteric selection, Journal of molecular biology 298, 623-632. 
			Supplied in Apta-beacon Demonstration Kit as Tube 1-3.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5&#8217;-TCC CTC CCT CCC TCC CAG TCC AGA CTC TAC GGC TTT CAC CGT TTC AAC G-Biotin-3&#8217;</td>
			<td>Integrated DNA Technologies (IDT)</td>
			<td>Custom</td>
			<td>Optimized P3tQ49 DNA template for EXPAR to produce G-quadruplex, primed by P3 cleavage product. This is used in Step 2 to translate the cleavage product into DNAzyme used for Step 3 color development. Template includes a 3&#39;-biotin to prevent unintended extension by Bst 2.0 DNA polymerase during EXPAR. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 2-2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5x Ribozyme Buffer</td>
			<td>Aptagen, LLC</td>
			<td>N/A</td>
			<td>5x composition: 600 mM Tris-HCl (pH 7.5), 150 mM MgCl2, 25 mM DTT. Used in Step 1. 
			Supplied in Apta-beacon Demonstration Kit as Tube 1-4.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Apta-beaconTM (GQ-EXPAR, TMB) Demonstration Kit</td>
			<td>Aptagen, LLC</td>
			<td>GQ-EXPAR-TMB</td>
			<td>The demo kit showcases the specificity of the colorimetric assay by detecting difficult small molecule targets, theophylline versus caffeine, which only differ by a single methyl group.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bst 2.0 DNA polymerase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0537S</td>
			<td>Isothermal amplification polymerase with strand-displacement activity. Part of the Nickase-Polymerase Mix, prepared at 9.375 U/uL. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 2-1.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buffer 3.1</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>B6003SVIAL</td>
			<td>Combined with 2 uL of 10X Isothermal Amplification Buffer and 27.5 uL of nuclease-free water to produce 1.11X EXPAR Buffer in EXPAR Mix. This product replaces the previously-used B7203SVIAL that was part of the initial system development (same composition except non-recombinant BSA). 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 2-2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caffeine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C0750-100G</td>
			<td>Aptamer counter-target (control), prepared with nuclease-free water. 
			Supplied in Apta-beacon Demonstration Kit as Tube 1-1.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dNTPs</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>N0447S</td>
			<td>Part of the EXPAR reaction mixture. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 2-2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EXPAR reaction mixture</td>
			<td>Aptagen, LLC</td>
			<td>N/A</td>
			<td>0.44 mM dNTPs, 0.38 &#956;M P3tQ49, 0.38 &#956;M QtQ47, 44.44 mM Tris-HCl (pH 8.4), 63.5 mM NaCl, 31.5 mM KCl, 6.35 mM MgCl2, 1.27 mM MgSO4, 6.35 mM (NH4)2SO4, 63.5 &#956;g/ml BSA, 0.0635 % Tween 20. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 2-2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H9039</td>
			<td>Resuspended in DMF to a final concentration of 25 uM. 
			Supplied in Apta-beacon Demonstration Kit as Tube 3-1.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isothermal Amplification Buffer</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>B0537SVIAL</td>
			<td>Combined with 2 uL of 10x Buffer 3.1 and 27.5 &#181;L of nuclease-free water to produce 1.11x EXPAR Buffer in EXPAR Mix. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 2-2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Amresco (VWR)</td>
			<td>E525-500ML</td>
			<td>Hammerhead ribozyme cofactor, necessary for self-cleavage. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 1-3.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MJ PTC-100 Thermocycler</td>
			<td>MJ Research, Inc.</td>
			<td>PTC-100</td>
			<td>Thermocycler to control incubation temperatures. Any thermocycler or hot block can be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N, N-Dimethylformamide (DMF)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>227056-100ML</td>
			<td>Used to resuspend hemin and maximize shelf life in freezer. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 3-1.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nickase-polymerase Mix</td>
			<td>Aptagen, LLC</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Nt.BstNBI (9.375 units/&#956;L) and Bst 2.0 DNA polymerase (0.5 units/&#956;L). 
			Supplied in Apta-beacon Demonstration Kit as Tube 2-1.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nt.BstNBI</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R0607S</td>
			<td>Nicking enzyme to allow continued isothermal amplification. Part of the Nickase-Polymerase Mix, prepared at 0.5 U/uL. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 2-1.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 Kinase Buffer</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>B0201SVIAL</td>
			<td>Buffer for enzyme necessary to remove cyclic phosphate. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 1-4.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 polynucleotide kinase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0201S</td>
			<td>Removes cyclic phosphate post-cleavage to allow cleavage product to prime isothermal amplification reaction. 
			Supplied in Apta-beacon Demonstration Kit as PCR Tubes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tecan GENios FL</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>Genios-FL TWT</td>
			<td>Plate reader to measure absorbance signal from Step 3 results.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Theophylline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T1633-50G</td>
			<td>Aptamer target, prepared with nuclease-free water. 
			Supplied in Apta-beacon Demonstration Kit as Tube 1-2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl</td>
			<td>American Bioanalytical</td>
			<td>AB14043-01000</td>
			<td>Aptamer binding buffer. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 1-4.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

aptamer-based target detection facilitated by a 3-stage g-quadruplex isothermal exponential amplification reaction

الأبتامير هي جزيئات التعرف على الهدف التي ترتبط بتقارب وخصوصية عالية. يمكن الاستفادة من هذه الخصائص للتحكم في الجزيئات الأخرى ذات القدرة على توليد الإشارة. بالنسبة للنظام الموصوف هنا ، فإن التعرف على الهدف من خلال مجال aptameric ، Stem II من ريبوزيم رأس المطرقة المعدل ، ينشط الريبوزيم ذاتي الشق عن طريق تثبيت البنية غير المنظمة في البداية. يعمل الحمض النووي الريبي المشقوق لرابطة الدول المستقلة عند تقاطع الجذع الثالث والجذع الأول ، مما يخلق منتجين للانقسام. يقوم منتج الانقسام الأطول بإعداد تفاعل تضخيم أسي متساوي الحرارة (EXPAR) لاثنين من رباعيات G النشطة تحفيزيا المتشابهة. تحفز منتجات التضخيم الناتجة عن ذلك تقليل البيروكسيديز ، والذي يقترن بتقليل الركيزة اللونية بإخراج يمكن للعين المجردة اكتشافه. يعمل النظام المكون من 3 أجزاء الموصوف في الدراسة الحالية على تحسين طرق الكشف مثل مقايسات الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISAs) من خلال إنتاج إشارة يمكن اكتشافها بصريا للإشارة إلى وجود ما يصل إلى 0.5 ميكرومتر من الثيوفيلين في أقل من 15 دقيقة.

تقوم منصة الكشف الموضحة في الشكل 1 بتحويل التعرف على الهدف aptameric إلى اختلافات متميزة بصريا بين مستحضرات العينة (الهدف مقابل غير الهدف ، الشكل 2) في فترة زمنية قصيرة. كان الريبوزيم الخيفي الذي حدده Soukup et al.5 بمثابة نقطة انطلاق لإنشاء تسلسل أقل ضوضا...

Watch this Scientific Journal Video about Aptamer-Based Target Detection Facilitated by a 3-Stage G-Quadruplex Isothermal Exponential Amplification Reaction at JoVE.com

Aptamer-Based Target Detection Facilitated by a 3-Stage G-Quadruplex Isothermal Exponential Amplification Reaction

يوضح البروتوكول الحالي استخدام مقايسة تضخيم أسي سريعة من 3 مراحل قائمة على aptamer للكشف عن الأهداف. يتم تغطية تحضير العينة وتضخيم الإشارة وتطوير اللون لتنفيذ هذا النظام للتعرف على وجود الثيوفيلين على الكافيين.

يتم تسهيل الكشف عن الهدف القائم على Aptamer بواسطة تفاعل تضخيم أسي متساوي الحرارة G-quadruplex من 3 مراحل

Aptamers are target-recognition molecules that bind with high affinity and specificity. These characteristics can be leveraged to control other molecules ...

توفر هذه الطريقة طريقة لتضخيم الإشارة من أحداث الربط إلى شكل يمكن اكتشافه بصريا للاستخدام المنخفض للموارد أو يمكن قياسه كميا باستخدام الأجهزة القائمة على الامتصاص. هذا بروتوكول سريع نسبيا من وعاء واحد لتحديد وجود هدف aptamer في عينة من الاهتمام. يمكن مقارنة النتائج بمنحنى معايرة قياسي إذا كان القياس الكمي مطلوبا.يجب أن يكون الأفراد دقيقين للغاية عند نقل الحلول وخلطها ، لأن الخلط غير الكافي سيؤدي إلى نتائج سلبية. تأكد أيضا من الحفاظ على تبريد الكواشف والمحاليل حتى استخدامها لتقليل إشارة الخلفية. ابدأ بتنشيط منتجات انقسام الريبوزيم بإضافة خمس وحدات من كيناز متعدد النوكليوتيد T4 في أنبوب تفاعل البوليميراز المتسلسل.ثم أضف ميكرولترا واحدا من محلول الريبوزيم 5X المعد مسبقا إلى كل أنبوب عينة. لإثبات الخصوصية بصريا ، أضف 1.5 ميكرولتر من الثيوفيلين الملي أو اثنين من الكافيين المليمولي إلى كل أنبوب عينة كعينات اختبار واخلط كل عينة جيدا عن طريق سحب خمس إلى 10 مرات. بعد ذلك ، أضف ميكرولتر من 600 من الحمض النووي الريبي النانوي يحتوي على مجال أبتاميري محدد الهدف لكل أنبوب عينة ، متبوعا بسحب لخلط المكونات بسرعة.الآن ، ضع الأنبوب على كتلة باردة لتقليل إشارة الخلفية. بعد تحضير جميع أنابيب التفاعل ، احتضان كل عينة في درجة حرارة الغرفة لمدة ثلاث دقائق بالضبط. في نهاية الحضانة ، أعد أنابيب العينة إلى الجليد على الفور.أضف 3.5 ميكرولتر من خليط إنزيم نيكيس بوليميراز إلى كل أنبوب عينة واخلطه جيدا. بعد ذلك ، أضف 31.5 ميكرولترا من خليط تفاعل EXPAR الذي يحتوي على نيوكليوتيدات نموذجية ومخزن مؤقت للتفاعل إلى كل أنبوب عينة واخلطه عن طريق الماصة. بمجرد تحضير جميع العينات ، احتضن العينة المحضرة على حرارة 55 درجة مئوية لمدة خمس دقائق باستخدام جهاز توقيت.أعد أنابيب العينة على الفور إلى الجليد بعد الحضانة. أضف 2 ميكرولتر من محلول الهيمين إلى كل أنبوب عينة لتطوير اللون واخلطه جيدا. بعد ذلك ، أضف 58 ميكرولترا من محلول TMB المتاح تجاريا إلى كل أنبوب عينة ، واخلطه جيدا ، واحتضنه لتطوير اللون.اقرأ العينات نوعيا بالعين أو حدد النتائج باستخدام قارئ لوحة الامتصاص ، كما هو موضح في المخطوطة. يمكن للبنية المحسنة التعرف على أقل من 500 ثيوفيلين نانومولار في 30 دقيقة. تنتج مستحضرات العينات المعرضة للهدف لونا أزرق ، بينما تظل العينات التي لا تحتوي على هدف عديمة اللون.تم إعداد منحنى قياسي من الإشارة المقاسة عند A450 بعد 30 دقيقة من تطوير اللون. من المهم الاحتفاظ بالعينات على الجليد عند عدم إجراء عمليات الحضانة ، حيث سيظل حتى الحمض النووي الريبي المحسن يظهر مستوى نشاط منخفض في الخلفية.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biomolecular Detection employing the Interferometric Reflectance Imaging Sensor (IRIS)

Biomolecular Detection employing the Interferometric Reflectance Imaging Sensor IRIS

اكتشاف الجزيئية البيولوجية توظيف الانعكاس التداخل التصوير الاستشعار (IRIS)

The sensitive measurement of biomolecular interactions has use in many fields and industries such as basic biology and microbiology, ...

Measurement of Aggregate Cohesion by Tissue Surface Tensiometry

قياس التماسك الحصى بواسطة Tensiometry الأنسجة السطحية

Rigorous measurement of intercellular binding energy can only be made using methods grounded in thermodynamic principles in systems at equilibrium.  We ...

Detection and Isolation of Circulating Melanoma Cells using Photoacoustic Flowmetry

كشف وعزل خلايا الميلانوما تعميم استخدام Flowmetry الضوئي

Circulating tumor cells (CTCs) are those cells that have separated from a macroscopic tumor and spread through the blood and lymph systems to seed ...

Bacterial Detection &amp; Identification Using Electrochemical Sensors

Bacterial Detection & Identification Using Electrochemical Sensors

كشف البكتيرية والاستدلال باستخدام مجسات الكهروكيميائية

Electrochemical  sensors are widely used for rapid and accurate measurement of blood glucose and  can be adapted for detection of a wide variety of ...

Optical Detection of E. coli Bacteria by Mesoporous Silicon Biosensors

Optical Detection of E. coli Bacteria by Mesoporous Silicon Biosensors

كشف البصري<em&gt; E. القولونية</em&gt; البكتيريا عن طريق أجهزة الاستشعار السيليكون Mesoporous

A label-free optical biosensor based on a nanostructured porous Si is designed for rapid capture and detection of Escherichia coli K12 bacteria, as a ...

Oscillation and Reaction Board Techniques for Estimating Inertial Properties of a Below-knee Prosthesis

التذبذب والتفاعل المجلس تقنيات لتقدير خصائص بالقصور الذاتي من تعويضات تحت الركبة

The purpose of this study was two-fold: 1) demonstrate a technique that can be used to directly estimate the inertial properties of a below-knee ...

Detection of Exosomal Biomarker by Electric Field-induced Release and Measurement (EFIRM)

Detection of Exosomal Biomarker by Electric Field-induced Release and Measurement EFIRM

الكشف عن Exosomal العلامات البيولوجية التي يسببها الميدانية الكهربائية الإصدار والقياس (EFIRM)

Exosomes are microvesicular structures that play a mediating role in intercellular communication. It is of interest to study the internal cargo of ...

Microfluidic Platform with Multiplexed Electronic Detection for Spatial Tracking of Particles

منصة ميكروفلويديك مع تعدد كشف الالكترونية لتتبع المكانية من الجسيمات

Microfluidic processing of biological samples typically involves differential manipulations of suspended particles under various force fields in order to ...

Visual Detection of Multiple Nucleic Acids in a Capillary Array

الكشف عن الأحماض النووية متعددة في صفيف شعرية البصرية

Multi-target, short time, and resource-affordable methodologies for the detection of multiple nucleic acids in a single, easy to operate test are urgently ...