Name: aptamer-based target detection facilitated by a 3-stage g-quadruplex isothermal exponential amplification reaction
Uploaded: 2022-10-06T13:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Aptamer-Based Target Detection Facilitated by a 3-Stage G-Quadruplex Isothermal Exponential Amplification Reaction at JoVE.com

Esta pesquisa foi apoiada pelo Research and Development Funding da Aptagen LLC.

Ver quadro suplementar 1 (quadro de configuração das reacções) para a preparação dos tubos, incluindo os volumes e concentrações específicos dos componentes da reacção. O protocolo aqui demonstrado utiliza um kit de plataforma de detecção pré-montado, conforme descrito na Tabela de Materiais. Todos os componentes devem ser mantidos no gelo, salvo indicação em contrário.
1. Preparação da ribozima
NOT...

<ol>
	<li>Ellington, A. D., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+selection+of+RNA+molecules+that+bind+specific+ligands.">In vitro selection of RNA molecules that bind specific ligands.</a> Nature. 346 (6287), 818-822 (1990).</li><li>Tang, J., Breaker, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rational+design+of+allosteric+ribozymes.">Rational design of allosteric ribozymes.</a> Chemical Biology. 4 (6), 453-459 (1997).</li><li>Stoltenburg, R., Reinemann, C., Strehlitz, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SELEX--A+(r)evolutionary+method+to+generate+high-affinity+nucleic+acid+ligands.">SELEX--A (r)evolutionary method to generate high-affinity nucleic acid ligands.</a> Biomolecular Engineering. 24 (4), 381-403 (2007).</li><li>Liao, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+colorimetric+system+for+detecting+target+antigens+by+a+three-stage+signal+transformation-amplification+strategy.">A simple colorimetric system for detecting target antigens by a three-stage signal transformation-amplification strategy.</a> Biochemistry. 57 (34), 5117-5126 (2018).</li><li>Soukup, G. A., Emilsson, G. A., Breaker, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altering+molecular+recognition+of+RNA+aptamers+by+allosteric+selection.">Altering molecular recognition of RNA aptamers by allosteric selection.</a> Journal of Molecular Biology. 298 (4), 623-632 (2000).</li><li>Van Ness, J., Van Ness, L. K., Galas, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isothermal+reactions+for+the+amplification+of+oligonucleotides.">Isothermal reactions for the amplification of oligonucleotides.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (8), 4504-4509 (2003).</li><li>Cheng, X., Liu, X., Bing, T., Cao, Z., Shangguan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=General+peroxidase+activity+of+G-quadruplex-hemin+complexes+and+its+application+in+ligand+screening.">General peroxidase activity of G-quadruplex-hemin complexes and its application in ligand screening.</a> Biochemistry. 48 (33), 7817-7823 (2009).</li><li>Nie, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reporter-triggered+isothermal+exponential+amplification+strategy+in+ultrasensitive+homogeneous+label-free+electrochemical+nucleic+acid+biosensing.">Reporter-triggered isothermal exponential amplification strategy in ultrasensitive homogeneous label-free electrochemical nucleic acid biosensing.</a> Chemical Communications. 50 (47), 6211-6213 (2014).</li><li>Tabuchi, T., Yokobayashi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-free+riboswitches.">Cell-free riboswitches.</a> RSC Chemical Biology. 2 (5), 1430-1440 (2021).</li><li>Ao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+an+expression+platform+in+the+SELEX+cycle+to+select+DNA+aptamer+binding+to+a+disease+biomarker.">Integration of an expression platform in the SELEX cycle to select DNA aptamer binding to a disease biomarker.</a> ACS Omega. 7 (12), 10804-10811 (2022).</li></ol>

O método aqui apresentado aproveita a transição entre uma estrutura secundária inicialmente desordenada em uma ribozima alostérica e a estabilidade adicional conferida pela ligação do alvo ao domínio aptamérico para ativar a ribozima cis-cleave. A estabilidade da ribozima foi ajustada para minimizar a atividade catalítica na ausência do alvo, permitindo a ligação do alvo para restaurar a estrutura ativa. Além disso, deve-se tomar cuidado para equilibrar os tampões das múltiplas enzimas necessárias para f...

Os aptâmeros são tipicamente DNA ou RNA de fita simples selecionados através de um processo evolutivo com alta afinidade e especificidade de ligação aos alvosdesejados 1. Além da capacidade de ligação, os aptâmeros podem ser ligados e controlar motivos com funções de saída de sinal2,3, amplificando o referido sinal e melhorando a sensibilidade do sistema. O sistema G-quadruplex isothermal exponencial amplification reaction (GQ-EXPAR) é um sistema de três partes (Figura 1) que desenvolve um sinal visual à medida que componentes sucessivos são adicionados a um único vaso de reação para produzir uma saída visual4. Este sistema permite a detecção de um alvo específico, aqui teofilina, em uma determinada amostra dentro de 15 min usando um fluxo de trabalho simplificado para permitir a detecção rápida e específica de um alvo de interesse. Este método deve ser considerado para amostras em que a quantificação específica da concentração-alvo é uma preocupação menor do que a elevada especificidade da resposta num curto período de tempo.
Um riboswitch alostérico, uma molécula de RNA de mudança de estrutura (ribozima) que sofre autoclivagem, produz o sinal inicial. Este construto é baseado na ribozima martelo, com um domínio aptamérico introduzido no Tronco II como regulador da atividade de clivagem. Sua função de autoclivagem é ativada quando seu domínio aptamérico é estabilizado ao se ligar ao seualvo5. Caso contrário, o switch ficará inativo em seu estado nativo.
A reação de amplificação exponencial subsequente (EXPAR) utiliza a liberação da fita de RNA autoclivada do primeiro estágio para desencadear uma reação de amplificação isotérmica6. O produto amplificador do EXPAR possui atividade peroxidase7, atuando como base para o último estágio do sistema. Quando alguns substratos são oxidados em conjunto com a quebra de peróxido, eles produzem uma saída fluorescente que pode ser medida em vários instrumentos. Outros substratos comuns podem ser substituídos para produzir um produto colorido para detecção visual. O EXPAR e a atividade peroxidase de seus produtos de amplificação atuam como um intensificador de sinal em 2 estágios, aumentando a sensibilidade a níveis maiores em comparação com as estratégias convencionais 7,8.
A detecção de teofilina versus cafeína é utilizada como exemplo da especificidade dessa plataforma de detecção, pois diferem por apenas um grupo metila (Figura 2). Esta demonstração do sistema produz uma saída colorimétrica para detecção visual de pelo menos 500 nM teofilina.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3,3&#39;,5,5&#39;-Tetramethylbenzidine dihydrochloride (TMB) solution with H2O2, &#34;MaxSignal TMB Microwell Substrate Solution&#34;</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>FOOD-1806-1000</td>
			<td>Color development reagent. Minimize exposure to light and atmosphere. Previously BIOO Scientific catalog number 1806. 
			Supplied in Apta-beacon Demonstration Kit as Tube 3-2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5&#8217;- TCC CTC CCT CCC TCC CAG TCC AGA CTC TTC CCT CCC TCC CTC CCA GA-Biotin-3&#8217;</td>
			<td>Integrated DNA Technologies (IDT)</td>
			<td>Custom</td>
			<td>Optimized QtQ47 DNA template for EXPAR to produce G-quadruplex, primed by G-quadruplex. This is used for the &#34;exponential&#34; part of EXPAR, to rapidly increase the amount of DNAzyme used for Step 3 color development. Template includes a 3&#39;-biotin to prevent unintended extension by Bst 2.0 DNA polymerase during EXPAR. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 2-2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5&#8217;-GGG AAC UAU ACA ACC UAG GGC GAC CCU GAU GAG CCU UAU ACC AGC CGA AAG GCC CUU GGC AGA CGU UGA AAC GGU GAA AGC CGU AGG UUG CCC UAG GUU GUA UAG UU-3&#8217;</td>
			<td>Integrated DNA Technologies (IDT)</td>
			<td>Custom</td>
			<td>Theophylline-recognizing allosteric ribozyme sequence (self-cleaving ribozyme regulated by RNA aptamer domain for theophylline) modified from Soukup et al. 
			Soukup, G. A., Emilsson, G. A., and Breaker, R. R. (2000) Altering molecular recognition of RNA aptamers by allosteric selection, Journal of molecular biology 298, 623-632. 
			Supplied in Apta-beacon Demonstration Kit as Tube 1-3.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5&#8217;-TCC CTC CCT CCC TCC CAG TCC AGA CTC TAC GGC TTT CAC CGT TTC AAC G-Biotin-3&#8217;</td>
			<td>Integrated DNA Technologies (IDT)</td>
			<td>Custom</td>
			<td>Optimized P3tQ49 DNA template for EXPAR to produce G-quadruplex, primed by P3 cleavage product. This is used in Step 2 to translate the cleavage product into DNAzyme used for Step 3 color development. Template includes a 3&#39;-biotin to prevent unintended extension by Bst 2.0 DNA polymerase during EXPAR. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 2-2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5x Ribozyme Buffer</td>
			<td>Aptagen, LLC</td>
			<td>N/A</td>
			<td>5x composition: 600 mM Tris-HCl (pH 7.5), 150 mM MgCl2, 25 mM DTT. Used in Step 1. 
			Supplied in Apta-beacon Demonstration Kit as Tube 1-4.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Apta-beaconTM (GQ-EXPAR, TMB) Demonstration Kit</td>
			<td>Aptagen, LLC</td>
			<td>GQ-EXPAR-TMB</td>
			<td>The demo kit showcases the specificity of the colorimetric assay by detecting difficult small molecule targets, theophylline versus caffeine, which only differ by a single methyl group.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bst 2.0 DNA polymerase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0537S</td>
			<td>Isothermal amplification polymerase with strand-displacement activity. Part of the Nickase-Polymerase Mix, prepared at 9.375 U/uL. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 2-1.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buffer 3.1</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>B6003SVIAL</td>
			<td>Combined with 2 uL of 10X Isothermal Amplification Buffer and 27.5 uL of nuclease-free water to produce 1.11X EXPAR Buffer in EXPAR Mix. This product replaces the previously-used B7203SVIAL that was part of the initial system development (same composition except non-recombinant BSA). 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 2-2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caffeine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C0750-100G</td>
			<td>Aptamer counter-target (control), prepared with nuclease-free water. 
			Supplied in Apta-beacon Demonstration Kit as Tube 1-1.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dNTPs</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>N0447S</td>
			<td>Part of the EXPAR reaction mixture. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 2-2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EXPAR reaction mixture</td>
			<td>Aptagen, LLC</td>
			<td>N/A</td>
			<td>0.44 mM dNTPs, 0.38 &#956;M P3tQ49, 0.38 &#956;M QtQ47, 44.44 mM Tris-HCl (pH 8.4), 63.5 mM NaCl, 31.5 mM KCl, 6.35 mM MgCl2, 1.27 mM MgSO4, 6.35 mM (NH4)2SO4, 63.5 &#956;g/ml BSA, 0.0635 % Tween 20. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 2-2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H9039</td>
			<td>Resuspended in DMF to a final concentration of 25 uM. 
			Supplied in Apta-beacon Demonstration Kit as Tube 3-1.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isothermal Amplification Buffer</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>B0537SVIAL</td>
			<td>Combined with 2 uL of 10x Buffer 3.1 and 27.5 &#181;L of nuclease-free water to produce 1.11x EXPAR Buffer in EXPAR Mix. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 2-2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Amresco (VWR)</td>
			<td>E525-500ML</td>
			<td>Hammerhead ribozyme cofactor, necessary for self-cleavage. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 1-3.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MJ PTC-100 Thermocycler</td>
			<td>MJ Research, Inc.</td>
			<td>PTC-100</td>
			<td>Thermocycler to control incubation temperatures. Any thermocycler or hot block can be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N, N-Dimethylformamide (DMF)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>227056-100ML</td>
			<td>Used to resuspend hemin and maximize shelf life in freezer. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 3-1.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nickase-polymerase Mix</td>
			<td>Aptagen, LLC</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Nt.BstNBI (9.375 units/&#956;L) and Bst 2.0 DNA polymerase (0.5 units/&#956;L). 
			Supplied in Apta-beacon Demonstration Kit as Tube 2-1.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nt.BstNBI</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R0607S</td>
			<td>Nicking enzyme to allow continued isothermal amplification. Part of the Nickase-Polymerase Mix, prepared at 0.5 U/uL. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 2-1.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 Kinase Buffer</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>B0201SVIAL</td>
			<td>Buffer for enzyme necessary to remove cyclic phosphate. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 1-4.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 polynucleotide kinase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0201S</td>
			<td>Removes cyclic phosphate post-cleavage to allow cleavage product to prime isothermal amplification reaction. 
			Supplied in Apta-beacon Demonstration Kit as PCR Tubes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tecan GENios FL</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>Genios-FL TWT</td>
			<td>Plate reader to measure absorbance signal from Step 3 results.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Theophylline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T1633-50G</td>
			<td>Aptamer target, prepared with nuclease-free water. 
			Supplied in Apta-beacon Demonstration Kit as Tube 1-2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl</td>
			<td>American Bioanalytical</td>
			<td>AB14043-01000</td>
			<td>Aptamer binding buffer. 
			Part of Apta-beacon Demonstration Kit Tube 1-4.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

aptamer-based target detection facilitated by a 3-stage g-quadruplex isothermal exponential amplification reaction

Os aptâmeros são moléculas de reconhecimento de alvos que se ligam com alta afinidade e especificidade. Essas características podem ser aproveitadas para controlar outras moléculas com capacidade de geração de sinal. Para o sistema aqui descrito, o reconhecimento do alvo através de um domínio aptamérico, o Tronco II de uma ribozima de cabeça de martelo modificada, ativa a ribozima autoclivagante, estabilizando o construto inicialmente não estruturado. O RNA de clivagem cis atua na junção do Tronco III e do Tronco I, criando dois produtos de clivagem. O produto de clivagem mais longa prepara uma reação de amplificação exponencial isotérmica (EXPAR) dos dois G-quadruplexes cataliticamente ativos semelhantes. Esses produtos de amplificação resultantes catalisam a redução da peroxidase, que é acoplada à redução de um substrato colorimétrico com uma saída que o olho nu pode detectar. O sistema de 3 partes descrito no presente estudo melhora as modalidades de detecção, como ensaios imunoenzimáticos (ELISAs), produzindo um sinal visualmente detectável para indicar a presença de tão baixa quanto 0,5 μM de teofilina em apenas 15 minutos.

A plataforma de detecção representada na Figura 1 converte o reconhecimento do alvo aptamérico em diferenças visualmente distintas entre as preparações da amostra (alvo versus não-alvo, Figura 2) em um curto período de tempo. Uma ribozima alostérica identificada por Soukup et al.5 serviu como ponto de partida para a criação de uma sequência menos ruidosa com resposta ao alvo sobre as amostras controle e negativas. O construto ...

Watch this Scientific Journal Video about Aptamer-Based Target Detection Facilitated by a 3-Stage G-Quadruplex Isothermal Exponential Amplification Reaction at JoVE.com

Aptamer-Based Target Detection Facilitated by a 3-Stage G-Quadruplex Isothermal Exponential Amplification Reaction

O presente protocolo demonstra o uso de um ensaio rápido de amplificação exponencial baseado em aptâmeros de 3 estágios para detectar alvos. A preparação da amostra, a amplificação do sinal e o desenvolvimento da cor são abordados para implementar este sistema para reconhecer a presença de teofilina sobre a cafeína.

Detecção de alvos baseada em aptâmero facilitada por uma reação de amplificação exponencial isotérmica G-quadruplex de 3 estágios

Aptamers are target-recognition molecules that bind with high affinity and specificity. These characteristics can be leveraged to control other molecules ...

Este método oferece uma maneira de amplificar o sinal de eventos de ligação em uma forma que é detectável visualmente para baixo uso de recursos ou pode ser quantificada usando instrumentação baseada em absorbância. Este é um protocolo relativamente rápido, one-pot para determinar a presença do alvo do aptâmero em uma amostra de interesse. Os resultados podem ser comparados com uma curva de calibração padrão se a quantificação for desejada.Os indivíduos devem ser muito precisos ao transferir e misturar as soluções, pois a mistura insuficiente levará a resultados negativos. Além disso, certifique-se de que os reagentes e soluções sejam mantidos refrigerados até o uso para minimizar o sinal de fundo. Comece ativando os produtos de clivagem da ribozima adicionando cinco unidades de polinucleotídeo quinase T4 em um tubo de PCR.Em seguida, adicione um microlitro de tampão de ribozima 5X pré-preparado a cada tubo de amostra. Para demonstrar visualmente a especificidade, adicione 1,5 microlitros de teofilina milimolar ou cafeína milimolar a cada tubo de amostra como amostras de teste e misture cada amostra completamente pipetando cinco a 10 vezes. Em seguida, adicione dois microlitros de RNA nanomolar 600 contendo um domínio aptamérico alvo-específico a cada tubo de amostra, seguido de pipetagem para misturar os componentes rapidamente.Agora, coloque o tubo em um bloco frio para minimizar o sinal de fundo. Depois de preparar todos os tubos de reação, incubar cada amostra à temperatura ambiente por precisamente três minutos. No final da incubação, devolva os tubos de amostra ao gelo imediatamente.Adicione 3,5 microlitros de mistura enzimática nicase polimerase a cada tubo de amostra e misture bem. Em seguida, adicionar 31,5 microlitros de mistura de reação EXPAR contendo nucleotídeos molde e tampão de reação a cada tubo de amostra e misturar por pipetagem. Depois que todas as amostras estiverem preparadas, incube a amostra preparada a 55 graus Celsius por cinco minutos usando um temporizador.Devolver imediatamente os tubos de amostra ao gelo após a incubação. Adicione dois microlitros de solução de hemina a cada tubo de amostra para o desenvolvimento da cor e misture bem. Em seguida, adicione 58 microlitros da solução de TMB comercialmente disponível a cada tubo de amostra, misture bem e incube para o desenvolvimento de cores.Leia as amostras qualitativamente a olho perdido ou quantifique os resultados usando um leitor de placas de absorbância, conforme descrito no manuscrito. A construção otimizada foi capaz de reconhecer apenas 500 teofilina nanomolar em 30 minutos. As preparações de amostra expostas ao alvo produzem uma cor azul, enquanto as amostras que não contêm nenhum alvo permanecem incolores.Uma curva padrão foi preparada a partir do sinal medido em A450 após 30 minutos de desenvolvimento da cor. É importante manter as amostras no gelo quando não estiver realizando incubações, pois mesmo o RNA otimizado ainda exibirá um baixo nível de atividade de fundo.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biomolecular Detection employing the Interferometric Reflectance Imaging Sensor (IRIS)

Biomolecular Detection employing the Interferometric Reflectance Imaging Sensor IRIS

Detecção de Biomolecular empregando o sensor de imagem Interferometric Reflectância (IRIS)

The sensitive measurement of biomolecular interactions has use in many fields and industries such as basic biology and microbiology, ...

Bioengenharia

Measurement of Aggregate Cohesion by Tissue Surface Tensiometry

Medição de Coesão agregados por tensiometria superfície do tecido

Rigorous measurement of intercellular binding energy can only be made using methods grounded in thermodynamic principles in systems at equilibrium.  We ...

Detection and Isolation of Circulating Melanoma Cells using Photoacoustic Flowmetry

Detecção e isolamento de células de melanoma circulantes usando Fluxometria Fotoacústica

Circulating tumor cells (CTCs) are those cells that have separated from a macroscopic tumor and spread through the blood and lymph systems to seed ...

Bacterial Detection &amp; Identification Using Electrochemical Sensors

Bacterial Detection & Identification Using Electrochemical Sensors

Bacteriana Detecção e Identificação Utilizando sensores eletroquímicos

Electrochemical  sensors are widely used for rapid and accurate measurement of blood glucose and  can be adapted for detection of a wide variety of ...

Optical Detection of E. coli Bacteria by Mesoporous Silicon Biosensors

Optical Detection of E. coli Bacteria by Mesoporous Silicon Biosensors

A detecção óptica de<em&gt; E. coli</em&gt; Bactérias por mesoporosos Silicon Biossensores

A label-free optical biosensor based on a nanostructured porous Si is designed for rapid capture and detection of Escherichia coli K12 bacteria, as a ...

Oscillation and Reaction Board Techniques for Estimating Inertial Properties of a Below-knee Prosthesis

Oscilação e Conselho Reação Técnicas para estimar as propriedades de inércia de uma prótese abaixo do joelho

The purpose of this study was two-fold: 1) demonstrate a technique that can be used to directly estimate the inertial properties of a below-knee ...

Detection of Exosomal Biomarker by Electric Field-induced Release and Measurement (EFIRM)

Detection of Exosomal Biomarker by Electric Field-induced Release and Measurement EFIRM

Detecção de Exosomal Biomarker por induzida pelo campo elétrico de lançamento e Mensuração (Efirm)

Exosomes are microvesicular structures that play a mediating role in intercellular communication. It is of interest to study the internal cargo of ...

Microfluidic Platform with Multiplexed Electronic Detection for Spatial Tracking of Particles

Plataforma microfluídico com multiplexada detecção electrónica do Ordenamento do Rastreamento de Partículas

Microfluidic processing of biological samples typically involves differential manipulations of suspended particles under various force fields in order to ...

Visual Detection of Multiple Nucleic Acids in a Capillary Array

Detecção visual de vários ácidos nucleicos em uma matriz capilar

Multi-target, short time, and resource-affordable methodologies for the detection of multiple nucleic acids in a single, easy to operate test are urgently ...

Large-area Scanning Probe Nanolithography Facilitated by Automated Alignment and Its Application to Substrate Fabrication for Cell Culture Studies

Grande área varredura sonda Nanolitografia facilitada pelo alinhamento automatizado e sua aplicação para fabricação de substrato para estudos de cultura celular