Name: synovial fluid analysis to identify osteoarthritis
Uploaded: 2022-10-20T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis at JoVE.com

Forfatterne ønsker at anerkende professor Leonardo Punzi for hans dyrebare mentorskab inden for synovialvæskeanalyse og Padova Universitetshospital for dets støtte.

Denne protokol er i overensstemmelse med retningslinjerne fra den etiske komité på Padova Universitetshospital. SF blev indsamlet med patientens samtykke fra knæleddene hos patienter, der fik terapeutisk arthrocentese til ledeffusion ved deres første præsentation til klinikken eller som reaktion på en arthritisk opblussen. Kontraindikationer til proceduren var: koagulopati, antikoagulerende medicin, hudlæsioner, dermatitis eller cellulitis, der ligger over leddet. Alle SF-prøver blev afidentificeret.
<p class...

<ol>
	<li>Cui, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional+prevalence,+incidence+and+risk+factors+of+knee+osteoarthritis+in+population-based+studies.">Global, regional prevalence, incidence and risk factors of knee osteoarthritis in population-based studies.</a> EClinicalMedicine. 29, 100587 (2020).</li><li>Hunter, D. J., Bierma-Zeinstra, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoarthritis.">Osteoarthritis.</a> Lancet. 393 (10182), 1745-1759 (2019).</li><li>Mandell, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Synovial Fluid Analysis and the Evaluation of Patients with Arthritis. , (2022).</li><li>Schmerling, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+initial+evaluation+of+the+adult+patient+with+acute+musculoskeletal+symptoms.">Guidelines for the initial evaluation of the adult patient with acute musculoskeletal symptoms.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 39 (1), 1-8 (1996).</li><li>Coakley, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RCGP+and+BSAC+guidelines+for+management+of+the+hot+swollen+joint+in+adults.">RCGP and BSAC guidelines for management of the hot swollen joint in adults.</a> Rheumatology. 45 (8), 1039-1041 (2006).</li><li>Frallonardo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+calcium+phosphate+and+pyrophosphate+crystals+in+early+and+late+osteoarthritis:+relationship+with+clinical+indices+and+inflammation.">Basic calcium phosphate and pyrophosphate crystals in early and late osteoarthritis: relationship with clinical indices and inflammation.</a> Clinical Rheumatology. 37 (10), 2847-2853 (2018).</li><li>Nalbant, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synovial+fluid+features+and+their+relations+to+osteoarthritis+severity:+new+findings+from+sequential+studies.">Synovial fluid features and their relations to osteoarthritis severity: new findings from sequential studies.</a> Osteoarthritis Cartilage. 11 (1), 50-54 (2003).</li><li>Fuerst, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcification+of+articular+cartilage+in+human+osteoarthritis.">Calcification of articular cartilage in human osteoarthritis.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 60 (9), 2694-2703 (2009).</li><li>Campillo-Gimenez, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+potential+of+four+different+phases+of+calcium+pyrophosphate+relies+on+NF-&#954;B+activation+and+MAPK+pathways.">Inflammatory potential of four different phases of calcium pyrophosphate relies on NF-&#954;B activation and MAPK pathways.</a> Frontiers in Immunology. 9, 2248 (2018).</li><li>Paz&#225;r, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+calcium+phosphate+crystals+induce+monocyte/macrophage+IL-1&#946;+secretion+through+the+NLRP3+inflammasome+in+vitro.">Basic calcium phosphate crystals induce monocyte/macrophage IL-1&#946; secretion through the NLRP3 inflammasome in vitro.</a> The Journal of Immunology. 186 (4), 2495-2502 (2011).</li><li>Mart&#237;n, M. J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+cell+count+in+body+fluids:+a+review.">Automated cell count in body fluids: a review.</a> Advances in Laboratory Medicine. 2, 149-161 (2021).</li><li>Seghezzi, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+cellular+analysis+of+synovial+fluids+by+optical+microscopy+and+automated+count+using+the+Sysmex+XN+body+fluid+mode.">Optimization of cellular analysis of synovial fluids by optical microscopy and automated count using the Sysmex XN body fluid mode.</a> Clinica Chimica Acta. 462, 41-48 (2016).</li><li>Reginato, A. J., Maldonado, I., Reginato, A. M., Falasca, G. F., O'Connor, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supravital+staining+of+synovial+fluid+with+Testsimplets.">Supravital staining of synovial fluid with Testsimplets.</a> Diagnostic Cytopathology. 8 (2), 147-152 (1992).</li><li>Lumbreras, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+for+crystals+in+synovial+fluid:+training+of+the+analysts+results+in+high+consistency.">Analysis for crystals in synovial fluid: training of the analysts results in high consistency.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 64 (4), 612-615 (2005).</li><li>Tieng, A., Franchin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knee+arthrocentesis+in+adults.">Knee arthrocentesis in adults.</a> Journal of Visualized Experiments. , e63135 (2022).</li><li>Punzi, L., Oliviero, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arthrocentesis+and+synovial+fluid+analysis+in+clinical+practice:+value+of+sonography+in+difficult+cases.">Arthrocentesis and synovial fluid analysis in clinical practice: value of sonography in difficult cases.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1154 (1), 152-158 (2009).</li><li>Schumacher, H. R., Reginato, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Atlas of Synovial Fluid Analysis and Crystal Identification. , (1991).</li><li>Mopin, A., Driss, V., Brinster, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+protocol+for+characterizing+the+murine+C1498+cell+line+and+its+associated+leukemia+mouse+model.">Detailed protocol for characterizing the murine C1498 cell line and its associated leukemia mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments. (116), e54270 (2016).</li><li>Oliviero, F., Punzi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basics+of+Polarized+Light+Microscopy.">Basics of Polarized Light Microscopy.</a> Synovial Fluid Analysis and the Evaluation of Patients with Arthritis. , 79-90 (2022).</li><li>Paul, H., Reginato, A. J., Schumacher, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alizarin+red+S+staining+as+a+screening+test+to+detect+calcium+compounds+in+synovial+fluid.">Alizarin red S staining as a screening test to detect calcium compounds in synovial fluid.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 26 (2), 191-200 (1983).</li><li>Favero, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synovial+fluid+fetuin-A+levels+in+patients+affected+by+osteoarthritis+with+or+without+evidence+of+calcium+crystals.">Synovial fluid fetuin-A levels in patients affected by osteoarthritis with or without evidence of calcium crystals.</a> Rheumatology. 58 (4), 729-730 (2019).</li><li>Frallonardo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+calcium+crystals+in+knee+osteoarthritis+synovial+fluid:+a+comparison+between+polarized+light+and+scanning+electron+microscopy.">Detection of calcium crystals in knee osteoarthritis synovial fluid: a comparison between polarized light and scanning electron microscopy.</a> Journal of Clinical Rheumatology. 22 (7), 369-371 (2016).</li><li>Peffers, M. J., Smagul, A., Anderson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+analysis+of+synovial+fluid:+current+and+potential+uses+to+improve+clinical+outcomes.">Proteomic analysis of synovial fluid: current and potential uses to improve clinical outcomes.</a> Expert Review of Proteomics. 16 (4), 287-302 (2019).</li></ol>

I OA hjælper SF-analyse med at definere sygdomskarakteristika gennem enkle trin: totale og differentielle leukocyttal og søgning efter krystaller, herunder CPP og BCP. Desuden kan påvisning af MSU-krystaller fremhæve vigtige comorbiditeter.
På trods af lave omkostninger og enkel udførelse kan testens følsomhed og pålideligheden af resultaterne blive påvirket på grund af uerfarne analytikere - hovedsageligt da det vedrører krystalidentifikation. Analytikerens uddannelse og erfaring e...

Slidgigt (OA) er en kompleks og multifaktoriel kronisk ledsygdom med en estimeret samlet global prævalens på 16% hos forsøgspersoner i alderen 15 år og derover og 23% hos forsøgspersoner i alderen 40 og derover1. Forekomsten af OA forventes at stige på grund af en aldrende befolkning og en stigning i risikofaktorer, såsom fedme og metabolisk syndrom2.
Blandt de største problemer forbundet med OA er vanskeligheden ved at diagnosticere sygdommen i sine tidlige stadier og aktuelt tilgængelige behandlinger begrænset til smertebehandling og symptomatiske langsomt virkende lægemidler (SYSADOA'er) såsom glycosaminoglycaner. Diagnosen OA er baseret på kliniske symptomer og billeddannelsesfund. Den manglende sammenhæng mellem de to vurderinger kan dog medføre flere års forsinkelse i OA-diagnose og behandlingsstart2. OA er kendetegnet ved degenerative processer og lavgradig inflammation, som let kan undersøges via synovialvæske (SF) analyse. SF er et tyktflydende plasmatisk dialysat rig på hyaluronsyre, som smører ledrummet, giver næringsstoffer og ilt til brusk og fjerner metabolisk affald. SF fungerer også som støddæmper og beskytter dermed leddene under belastning og belastning3.
SF-analyse er en enkel og pålidelig metode, der altid skal udføres under den indledende evaluering af patienter med muskuloskeletale symptomer og ledeffusioner3. Anbefalinger fra American College of Rheumatology, British Society for Rheumatology og andre inkluderer SF-analyse blandt de diagnostiske test for reumatiske sygdomme, der hovedsageligt skal udføres ved evaluering af akut monoarthritis 4,5. Totale og differentielle leukocyttællinger opnået ved SF-analyse giver et øjebliksbillede af den patologiske proces, der forekommer i leddet, og klassificerer således graden af inflammation. Identifikationen af patogene krystaller, såsom mononatriumurat (MSU) og calciumpyrophosphat (CPP) krystaller, under polariseret lys, er afgørende for diagnosticering og behandling af krystalgigt (fx gigt og pseudopodagra). Desuden antyder tilstedeværelsen af mikroorganismer en diagnose af septisk arthritis.
Calciumkrystaller er hyppige i prøver indsamlet fra patienter med OA6. Basiske calciumphosphatkrystaller (BCP) og CPP er blevet rapporteret i henholdsvis ca. 22% og 23% af SF-prøver fra patienter med OA6. Selvom deres rolle forbliver uklar, har disse krystaller været forbundet med mere alvorlige former for OA7 og betragtes som et epifænomen af selve den patologiske proces. Calciumkrystaller er blevet påvist i 100% af vævsprøver fra OA-patienter, der gennemgår knæalloplastik8. Desuden er det blevet antaget, at calciumkrystaller kan være involveret i patogenesen af OA på grund af deres inflammatoriske virkninger, påvist ved flere undersøgelser9 og medieret, i det mindste delvist, af NLRP3-inflammasom10.
For nylig er calciumkrystaller blevet beskrevet i både tidlige og senestadier 6 af OA, hvilket indikerer, at de kan spille en afgørende rolle i diagnosticering af forskellige kliniske undergrupper af OA og farmakologisk behandling.
Det overordnede mål med SF-analyse er todelt: at bestemme den inflammatoriske grad af SF og at diagnosticere krystal eller septisk arthritis ved at identificere specifikke krystaller eller mikroorganismer. Det er et særligt nyttigt, enkelt og pålideligt værktøj til diagnosticering af OA på grund af det typiske ikke-inflammatoriske mønster med en meget lav procentdel eller fravær af neutrofiler.
Fordele i forhold til alternative teknikker SF-analyse består af enkle procedurer, der inkluderer totale og differentielle leukocyttællinger og krystalsøgning. Manuel celletælling udført af ekspertlaboranter 3,11 forbliver guldstandarden for cytologisk analyse af synoviale og andre kropsvæsker. På grund af den tidskrævende begrænsning og inter- og intraobservatørvariabiliteten af denne metode har automatiserede celletællere gradvist erstattet manuel tælling i store rutinemæssige kliniske laboratorier, hvor blod- og urinanalysatorer er blevet tilpasset for at muliggøre SF-analyse11,12. Ikke desto mindre giver manuel tælling nogle fordele i specifikke indstillinger: (1) i ambulatoriet for at opnå en total og differentiel WBC-værdi til tiden; (2) at identificere celletyper såsom cytofagocytiske mononukleære (Reiter) celler eller ikke-hæmatopoietiske celler såsom synoviocytter, som automatiserede tællere ikke kan genkende; 3) når prøven er for lille til at blive håndteret af instrumentet 4) at oprette lokale laboratorieregistre, der er let tilgængelige til forskningsformål. En anden fordel ved manuel tælling ses insupravital farvning, en metode, der tillader differentiering af celler meget hurtigt og umiddelbart efter glasglasforberedelse. I modsætning hertil kræver traditionelle farvninger, såsom Wright- og May-Grünwald-Giemsa-procedurerne, lufttørrede SF-udstrygninger og tid til at plette cellerne13. Selvom de ikke er egnede til tidsfølsomme rutineanalyser, afslører disse farvningsmetoder mere detaljerede cellepopulationer i prøven, herunder erythrocytter, basofiler, eosinofiler, polymorfonukleære leukocytter, lymfocytter og blodplader.
Endelig udføres rutinemæssig SF-analyse for krystaller ved hjælp af en simpel teknik baseret på polariseret lysmikroskopi, som giver hurtige resultater14. Alternative metoder, såsom scanning og elektronmikroskopi, giver mere nøjagtige og følsomme resultater, men deres anvendelse i daglig klinisk praksis er ikke mulig på grund af høje omkostninger og tidskrævende prøveforberedelse og analyse.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alizarin red S</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A5533</td>
			<td>For BCP crystal search</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Burker chamber</td>
			<td>Merck</td>
			<td>BR718905</td>
			<td>For total white blood cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glasses</td>
			<td>Merck</td>
			<td>C7931</td>
			<td>For microscopic examination&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA tubes</td>
			<td>BD</td>
			<td>368861</td>
			<td>For SF collection&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides&#160;</td>
			<td>Merck</td>
			<td>S8902</td>
			<td>For crystal search</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lambda filter (compensator)</td>
			<td>Any&#160;</td>
			<td>Refer to microscope company</td>
			<td>For crystal identification&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malassez-Potain pipette</td>
			<td>Artiglass</td>
			<td>54830000</td>
			<td>For dilution of synovial fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene blue solution</td>
			<td>Merck</td>
			<td>3978</td>
			<td>For total white blood cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarized microscope&#160;</td>
			<td>Leica, Nikon, others</td>
			<td>Depending on the model and company</td>
			<td>For complete synovial fluid analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarizing lens</td>
			<td>Any&#160;</td>
			<td>Refer to microscope company</td>
			<td>For crystal identification&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Testsimplet&#160;</td>
			<td>Waldeck</td>
			<td>14386</td>
			<td>Supravital staining for cell differentiation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

synovial fluid analysis to identify osteoarthritis

Synovialvæske (SF) analyse er vigtig ved diagnosticering af slidgigt (OA). Makroskopiske og mikroskopiske træk, herunder total og differentiel antal hvide blodlegemer (WBC), hjælper med at definere den ikke-inflammatoriske karakter af SF, som er et kendetegn ved OA. Hos patienter med OA overstiger WBC i SF-prøver normalt ikke 2000 celler pr. Mikroliter, og procentdelen af inflammatoriske celler, såsom neutrofiler, er meget lav eller fraværende. Calciumkrystaller er hyppige i SF indsamlet fra OA-patienter. Selvom deres rolle i patogenesen af OA forbliver uklar, har de været forbundet med en mild inflammatorisk proces og en mere alvorlig sygdomsprogression. For nylig er calciumkrystaller blevet beskrevet i både de tidlige og sene stadier af OA, hvilket indikerer, at de kan spille en afgørende rolle i diagnosticering af forskellige kliniske undergrupper af OA og farmakologisk behandling. Det overordnede mål med SF-analyse i OA er todelt: at fastslå den ikke-inflammatoriske grad af SF og at fremhæve tilstedeværelsen af calciumkrystaller.

Store led, der er påvirket af OA, er ofte hævede og producerer betydelige mængder SF, som drænes via arthrocentese15. De makroskopiske egenskaber ved SF evalueret umiddelbart efter arthrocentese indbefatter i det væsentlige mængde, farve, klarhed og viskositet17. På trods af deres lave specificitet giver de foreløbige data om graden af inflammation. Farven afhænger af SF-cellularitet og graden af fragmentering af ekstracellulære matrixmakromolekyler. SF i...

Watch this Scientific Journal Video about Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis at JoVE.com

Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis

Synovialvæskeanalyse under transmitteret, polariseret og kompenseret lysmikroskopi bruges til at evaluere den inflammatoriske eller ikke-inflammatoriske karakter af en prøve gennem enkle trin. Det er især nyttigt i slidgigt at detektere calciumkrystaller og identificere en mere alvorlig delmængde af slidgigt.

Synovialvæskeanalyse for at identificere slidgigt

Synovial fluid (SF) analysis is important in diagnosing osteoarthritis (OA). Macroscopic and microscopic features, including total and differential white ...

Synovialvæskeanalyse kan afsløre graden af betændelse og tilstedeværelsen af patogene krystaller under den indledende evaluering af patient med muskuloskeletale symptomer og ledeffusioner. Den største fordel ved denne teknik er dens enkelhed og pålidelighed. I et par trin kan klinikeren få vigtige diagnostiske oplysninger om patientens sygdom.Identifikation af specifikke krystaller er afgørende for diagnose og behandling. Uratkrystaller indikerer gigt, mens calciumpyrophosphat og andre calciumkrystaller indikerer calciumrelaterede artropatier eller en mere alvorlig form for slidgigt. Til at begynde med skal du tage synovialvæskeprøven indsamlet under arthrocentese af hævede led hos patienter.Prøvens volumen anmeldes i milliliter og overføres separat til et rør indeholdende antikoagulerende EDTA og et andet rør uden tilsætningsstof. I de mistænkte tilfælde af infektion overføres aseptisk et par milliliter af synovialvæskeprøven til en kulturflaske til mikrobiologisk testning. For at undersøge prøven makroskopisk skal du tage et rør, der indeholder prøven, og definere prøvens farve, som kan variere fra lys til mørk gul.Optag tilstedeværelsen af blod, hvis nogen. Definer graden af klarhed af prøven ved at observere den i baggrundsbelysningen og ved at bestemme, hvor let det er at læse en trykt side gennem røret, der indeholder prøven. Vurder derefter prøvens viskositet ved at dryppe den fra en engangspipette.Mens udseendet af en lang væskestreng indikerer høj viskositet, er dannelsen af dråber tegn på lav viskositet. Prøven observeres gennem røret med lys i baggrunden for tilstedeværelse af eventuelle partikler, herunder vævsfragmenter eller fibrin. For at bestemme det totale antal hvide blodlegemer trækkes 0,5 mikroliter af prøven fra røret indeholdende EDTAA ved hjælp af en Malassez-Potain-pipette.Brug den samme pipette til at trække 9,5 mikroliter 0,1% methylenblåt opløsning. Prøven og opløsningen af methylenblåt blandes i pipetten ved forsigtig invertering. Kassér de første par dråber, før blandingen hældes i tællekammeret på et hæmocytometer.Tæl nu cellerne i to på hinanden følgende firkanter ud af ni og multiplicer det opnåede tal med 100. Angiv det totale antal hvide blodlegemer som antallet af leukocytter pr. Kubikmillimeter. Brug synovialvæskeprøven fra røret uden tilsætningsstof til at bestemme det differentielle antal hvide blodlegemer i synovialvæskeprøverne.For at bestemme differentialcelletællingen ved hjælp af supravital farvning skal du tage et brugsklart dias, der er forbelagt med krystalviolet og methylenblåt, og placere en lille dråbe prøve i midten af diaset. Dæk derefter prøvedråben med en dæksel og læg en dråbe mikroskopnedsænkningsolie på dæksedlen. For at bruge traditionel farvning til estimering af differentialcelletællingen skal du begynde med at lægge en lille dråbe af prøven i slutningen af et rent dias.Brug nu et andet dias eller et dæksel til at sprede dråben langs diaset med en fremadgående bevægelse. Lad udstrygningen tørre i luften. Undersøg diaset indeholdende lufttørret udtværing under 1.000X olienedsænkningsmål.Anslå differentialcelletællingen ved at tælle 100 på hinanden følgende celler, mens man skelner mellem de polymorfonukleære celler, monocytterne og lymfocytterne fra hinanden. Rengør et glasglas med optisk eller blødt papir fyldt med ethanol. Påfør en lille dråbe af prøven, der ikke er blandet med noget tilsætningsstof, på glasglasset og dæk det med et dæksel, inden objektglasset placeres under mikroskopet.Fokuser diaset under mikroskopet ved hjælp af et mål med lav effektforstørrelse, og undersøg det omhyggeligt under et lyst felt med et 40X-mål. Se inde i og uden for cellerne for at identificere krystallerne i henhold til deres størrelse og form, som kan være rhomboide, nåleformede eller stangformede. Indsæt derefter polariseringsfilteret mellem lyskilden og prøven.For at skabe en mørk baggrund skal du dreje polarisatoren, indtil dens optiske akse er vinkelret på analysatoren. Når en dobbeltbrydende krystal er blevet identificeret, indsættes kompensatoren mellem polarisatoren og prøven og flyttes parallelt eller vinkelret på krystallens optiske akse. Overhold farven afsløret af krystallen.Til Alizarin Red-farvning blandes en dråbe synovialvæskeprøven med et lige så stort volumen tidligere fremstillet Alizarin Red-opløsning på et rent dias. Dæk objektglasset med et dæksel, og undersøg ved 400X forstørrelse under et mikroskop for at identificere krystallerne. De makroskopiske egenskaber ved synovialvæskeprøver indikerede graden af inflammation.En prøve med lysegul farve og mere klarhed er generelt forbundet med ikke-inflammatoriske tilstande som slidgigt. På den anden side indikerer en prøve med mørk gul farve og et uklart udseende tilstedeværelsen af celler, snavs, hyaluronsyre og fibrinfragmenter, der er forbundet med inflammatoriske effusioner. Leukocytterne observeret i synovialvæskeprøver fra slidgigtpatienter var for det meste monocytter og andre mononukleære celler som synoviocytter.Calciumpyrophosphatkrystaller blev påvist i synovialvæskeprøver, hvilket indikerer relativt højere niveauer af inflammatoriske cytokiner. Desuden afslørede en positiv Alizarin Red-farvning tilstedeværelsen af basiske calciumphosphatkrystaller i prøverne. Det er meget vigtigt at omhyggeligt undersøge diaset under almindeligt lys, når du søger efter krystaller.Husk, at pyrophosphatkrystaller ofte er svagt dobbeltbrydende og kan gå glip af under polariseret lys. Tilstedeværelsen af calciumkrystaller i synovialvæske og deres tilknytning til mere alvorlig form for sygdom har fået forskere til at udforske nye mekanismer i patogenesen og progressionen af slidgigt.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation and Cellular Phenotyping of Mesenchymal Stem Cells Derived from Synovial Fluid and Bone Marrow of Minipigs

Isolering og Cellulær Fænotype af mesenchymal stamceller fra Synovialvæske og knoglemarv af minigrise

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been established after isolation from various tissue sources, including bone marrow and synovial fluid. Recently, ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cell Subsets within the Murine Spleen, Bone Marrow, Lymph Nodes and Synovial Tissue in an Osteoarthritis Model

Flow Cytometri Analyse af immuncelledelmængder i Murine Milten, Knoglemarv, Lymfeknuder og synovialvæv i en osteokhritis model

Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent musculoskeletal diseases, affecting patients suffering from pain and physical limitations. Recent ...

Evaluation of Fluid Overload by Bioelectrical Impedance Vectorial Analysis

Evaluering af væskeoverbelastning ved bioelektrisk impedans vektoranalyse

Early detection and management of fluid overload are critically important in acute illness, as the impact of therapeutic intervention can result in ...

Ameliorating Osteoarthritis in Mice Using Silver Nanoparticles

Forbedring af slidgigt hos mus ved hjælp af sølvnanopartikler

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most commonly encountered degenerative diseases of the joints in people over 45 years of age. Currently, there are ...

Standardized Tuina Manipulation for Knee Osteoarthritis in Rats

Tuina Manipulation to Reduce Inflammation and Cartilage Loss in Knee Osteoarthritis Rats

Understanding the Mechanism of Tuina Manipulation in Rats (Video) | JoVE

Tuina manipulation for at reducere betændelse og brusk tab i knæ slidgigt rotter

Clinical trials suggest that Tuina manipulation is effective in treating knee osteoarthritis (KOA), while further studies are required to discover its ...

Performing Fu's Subcutaneous Needling for Degenerative Knee Osteoarthritis

Performing Fu's Subcutaneous Needling for Degenerative Knee Osteoarthritis (Video) | JoVE 

Udførelse af Fu's subkutane nål til degenerativ knæartrose

Treating Knee Osteoarthritis with Tuina in a Rabbit Model

Tuina Intervention in Rabbit Model of Knee Osteoarthritis

Using a Rabbit Model to Explore the Efficacy of Tuina in Treating Knee Osteoarthritis (Video) | JoVE

Tuina intervention i kanin model af knæ slidgigt

Knee osteoarthritis (KOA) is mainly characterized by degenerative changes in the knee joint's cartilage and surrounding soft tissues. The efficacy of ...

Experimental Modeling of Knee Osteoarthritis in Rats

Experimental Modeling of Knee Osteoarthritis in Rats (Video) | JoVE 

Eksperimentel modellering af knæartrose hos rotter

A Reproducible Cartilage Impact Model to Generate Post-Traumatic Osteoarthritis in the Rabbit

En reproducerbar bruskpåvirkningsmodel til generering af posttraumatisk slidgigt hos kaninen

Post-traumatic osteoarthritis (PTOA) is responsible for 12% of all osteoarthritis cases in the United States. PTOA can be initiated by a single traumatic ...

Therapeutic Potential of Tuina Massage for Knee Osteoarthritis

Tuina Intervention in Sodium Monoiodoacetate Injection-Induced Rat Model of Knee Osteoarthritis

Treating Knee Osteoarthritis with Tuina - A New Perspective (Video) | JoVE

Tuina intervention i natriummonoiodoacetat injektionsinduceret rotte Model af knæartrose

Knee osteoarthritis (KOA), a common degenerative joint disorder, is characterized by chronic pain and disability, which can progress to irreparable ...