Name: synovial fluid analysis to identify osteoarthritis
Uploaded: 2022-10-20T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis at JoVE.com

De auteurs willen professor Leonardo Punzi bedanken voor zijn kostbare mentorschap op het gebied van synoviale vloeistofanalyse en het Padova University Hospital voor zijn steun.

Het huidige protocol voldoet aan de richtlijnen van de ethische commissie van het Universitair Ziekenhuis Padova. SF werd verzameld met toestemming van de patiënt van de kniegewrichten van patiënten die therapeutische artrocentese kregen voor gewrichtsuitvloeiing bij hun eerste presentatie aan de kliniek of als reactie op een artritische opflakkering. Contra-indicaties voor de procedure waren: coagulopathie, antistollingsmedicijnen, huidlaesies, dermatitis of cellulitis boven het gewricht. Alle SF-monsters werden gede?...

<ol>
	<li>Cui, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional+prevalence,+incidence+and+risk+factors+of+knee+osteoarthritis+in+population-based+studies.">Global, regional prevalence, incidence and risk factors of knee osteoarthritis in population-based studies.</a> EClinicalMedicine. 29, 100587 (2020).</li><li>Hunter, D. J., Bierma-Zeinstra, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoarthritis.">Osteoarthritis.</a> Lancet. 393 (10182), 1745-1759 (2019).</li><li>Mandell, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Synovial Fluid Analysis and the Evaluation of Patients with Arthritis. , (2022).</li><li>Schmerling, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+initial+evaluation+of+the+adult+patient+with+acute+musculoskeletal+symptoms.">Guidelines for the initial evaluation of the adult patient with acute musculoskeletal symptoms.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 39 (1), 1-8 (1996).</li><li>Coakley, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RCGP+and+BSAC+guidelines+for+management+of+the+hot+swollen+joint+in+adults.">RCGP and BSAC guidelines for management of the hot swollen joint in adults.</a> Rheumatology. 45 (8), 1039-1041 (2006).</li><li>Frallonardo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+calcium+phosphate+and+pyrophosphate+crystals+in+early+and+late+osteoarthritis:+relationship+with+clinical+indices+and+inflammation.">Basic calcium phosphate and pyrophosphate crystals in early and late osteoarthritis: relationship with clinical indices and inflammation.</a> Clinical Rheumatology. 37 (10), 2847-2853 (2018).</li><li>Nalbant, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synovial+fluid+features+and+their+relations+to+osteoarthritis+severity:+new+findings+from+sequential+studies.">Synovial fluid features and their relations to osteoarthritis severity: new findings from sequential studies.</a> Osteoarthritis Cartilage. 11 (1), 50-54 (2003).</li><li>Fuerst, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcification+of+articular+cartilage+in+human+osteoarthritis.">Calcification of articular cartilage in human osteoarthritis.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 60 (9), 2694-2703 (2009).</li><li>Campillo-Gimenez, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+potential+of+four+different+phases+of+calcium+pyrophosphate+relies+on+NF-&#954;B+activation+and+MAPK+pathways.">Inflammatory potential of four different phases of calcium pyrophosphate relies on NF-&#954;B activation and MAPK pathways.</a> Frontiers in Immunology. 9, 2248 (2018).</li><li>Paz&#225;r, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+calcium+phosphate+crystals+induce+monocyte/macrophage+IL-1&#946;+secretion+through+the+NLRP3+inflammasome+in+vitro.">Basic calcium phosphate crystals induce monocyte/macrophage IL-1&#946; secretion through the NLRP3 inflammasome in vitro.</a> The Journal of Immunology. 186 (4), 2495-2502 (2011).</li><li>Mart&#237;n, M. J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+cell+count+in+body+fluids:+a+review.">Automated cell count in body fluids: a review.</a> Advances in Laboratory Medicine. 2, 149-161 (2021).</li><li>Seghezzi, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+cellular+analysis+of+synovial+fluids+by+optical+microscopy+and+automated+count+using+the+Sysmex+XN+body+fluid+mode.">Optimization of cellular analysis of synovial fluids by optical microscopy and automated count using the Sysmex XN body fluid mode.</a> Clinica Chimica Acta. 462, 41-48 (2016).</li><li>Reginato, A. J., Maldonado, I., Reginato, A. M., Falasca, G. F., O'Connor, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supravital+staining+of+synovial+fluid+with+Testsimplets.">Supravital staining of synovial fluid with Testsimplets.</a> Diagnostic Cytopathology. 8 (2), 147-152 (1992).</li><li>Lumbreras, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+for+crystals+in+synovial+fluid:+training+of+the+analysts+results+in+high+consistency.">Analysis for crystals in synovial fluid: training of the analysts results in high consistency.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 64 (4), 612-615 (2005).</li><li>Tieng, A., Franchin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knee+arthrocentesis+in+adults.">Knee arthrocentesis in adults.</a> Journal of Visualized Experiments. , e63135 (2022).</li><li>Punzi, L., Oliviero, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arthrocentesis+and+synovial+fluid+analysis+in+clinical+practice:+value+of+sonography+in+difficult+cases.">Arthrocentesis and synovial fluid analysis in clinical practice: value of sonography in difficult cases.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1154 (1), 152-158 (2009).</li><li>Schumacher, H. R., Reginato, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Atlas of Synovial Fluid Analysis and Crystal Identification. , (1991).</li><li>Mopin, A., Driss, V., Brinster, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+protocol+for+characterizing+the+murine+C1498+cell+line+and+its+associated+leukemia+mouse+model.">Detailed protocol for characterizing the murine C1498 cell line and its associated leukemia mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments. (116), e54270 (2016).</li><li>Oliviero, F., Punzi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basics+of+Polarized+Light+Microscopy.">Basics of Polarized Light Microscopy.</a> Synovial Fluid Analysis and the Evaluation of Patients with Arthritis. , 79-90 (2022).</li><li>Paul, H., Reginato, A. J., Schumacher, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alizarin+red+S+staining+as+a+screening+test+to+detect+calcium+compounds+in+synovial+fluid.">Alizarin red S staining as a screening test to detect calcium compounds in synovial fluid.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 26 (2), 191-200 (1983).</li><li>Favero, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synovial+fluid+fetuin-A+levels+in+patients+affected+by+osteoarthritis+with+or+without+evidence+of+calcium+crystals.">Synovial fluid fetuin-A levels in patients affected by osteoarthritis with or without evidence of calcium crystals.</a> Rheumatology. 58 (4), 729-730 (2019).</li><li>Frallonardo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+calcium+crystals+in+knee+osteoarthritis+synovial+fluid:+a+comparison+between+polarized+light+and+scanning+electron+microscopy.">Detection of calcium crystals in knee osteoarthritis synovial fluid: a comparison between polarized light and scanning electron microscopy.</a> Journal of Clinical Rheumatology. 22 (7), 369-371 (2016).</li><li>Peffers, M. J., Smagul, A., Anderson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+analysis+of+synovial+fluid:+current+and+potential+uses+to+improve+clinical+outcomes.">Proteomic analysis of synovial fluid: current and potential uses to improve clinical outcomes.</a> Expert Review of Proteomics. 16 (4), 287-302 (2019).</li></ol>

In OA helpt SF-analyse bij het definiëren van ziektekenmerken door middel van eenvoudige stappen: totale en differentiële leukocytentellingen en het zoeken naar kristallen, waaronder CPP en BCP. Bovendien kan de detectie van MSU-kristallen belangrijke comorbiditeiten aan het licht brengen.
Ondanks lage kosten en eenvoudige uitvoering, kunnen de gevoeligheid van de tests en de betrouwbaarheid van de resultaten worden beïnvloed door onervaren analisten, voornamelijk als het gaat om kristalide...

Artrose (OA) is een complexe en multifactoriële chronische gewrichtsaandoening, met een geschatte gepoolde wereldwijde prevalentie van 16% bij proefpersonen van 15 jaar en ouder, en 23% bij proefpersonen van 40 jaar en ouderdan 1. De incidentie van artrose zal naar verwachting toenemen als gevolg van een vergrijzende bevolking en een toename van risicofactoren, zoals obesitas en metabool syndroom2.
Een van de belangrijkste problemen in verband met artrose is de moeilijkheid bij het diagnosticeren van de ziekte in de vroege stadia en de momenteel beschikbare behandelingen die beperkt zijn tot pijnbestrijding en symptomatische langwerkende geneesmiddelen (SYSADO's) zoals glycosaminoglycanen. De diagnose artrose is gebaseerd op klinische symptomen en beeldvormingsbevindingen. Het ontbreken van correlatie tussen de twee beoordelingen kan echter leiden tot jarenlange vertraging bij de diagnose van artrose en het starten van de behandeling2. Artrose wordt gekenmerkt door degeneratieve processen en laaggradige ontsteking, die gemakkelijk kunnen worden onderzocht via synoviale vloeistof (SF) -analyse. SF is een viskeus plasmatisch dialysaat rijk aan hyaluronzuur, dat de gewrichtsruimte smeert, voedingsstoffen en zuurstof aan kraakbeen levert en metabolisch afval verwijdert. SF fungeert ook als een schokdemper en beschermt zo de gewrichten tijdens stress en spanning3.
SF-analyse is een eenvoudige en betrouwbare methode die altijd moet worden uitgevoerd tijdens de eerste evaluatie van patiënten met musculoskeletale symptomen en gewrichtsuitvloeiingen3. Aanbevelingen van het American College of Rheumatology, de British Society for Rheumatology en anderen omvatten SF-analyse onder de diagnostische tests voor reumatische aandoeningen die voornamelijk moeten worden uitgevoerd bij het evalueren van acute monoartritis 4,5. Totale en differentiële leukocytentellingen verkregen uit SF-analyse bieden een momentopname van het pathologische proces dat zich in het gewricht voordoet, waardoor de mate van ontsteking wordt geclassificeerd. De identificatie van pathogene kristallen, zoals mononatriumuraat (MSU) en calciumpyrofosfaat (CPP) kristallen, onder gepolariseerd licht, is van vitaal belang bij de diagnose en behandeling van kristalartritis (bijv. Jicht en pseudogout). Bovendien suggereert de aanwezigheid van micro-organismen een diagnose van septische artritis.
Calciumkristallen komen vaak voor in monsters die zijn verzameld bij patiënten met OA6. Basische calciumfosfaat (BCP) kristallen en CPP zijn gemeld in respectievelijk ongeveer 22% en 23% van de SF-monsters van patiënten met OA6. Hoewel hun rol onduidelijk blijft, zijn deze kristallen geassocieerd met ernstigere vormen van OA7 en worden ze beschouwd als een epifenomeen van het pathologische proces zelf. Calciumkristallen zijn gedetecteerd in 100% van de weefselmonsters van artrosepatiënten die een knieprothese ondergaan8. Bovendien is verondersteld dat calciumkristallen betrokken kunnen zijn bij de pathogenese van artrose vanwege hun ontstekingseffecten, aangetoond door verschillende studies9 en gemedieerd, althans gedeeltelijk, door het NLRP3-inflammasoom10.
Meer recent zijn calciumkristallen beschreven in zowel vroege als late stadia6 van artrose, wat aangeeft dat ze een vitale rol kunnen spelen bij het diagnosticeren van verschillende klinische subsets van artrose en farmacologische behandeling.
Het algemene doel van SF-analyse is tweeledig: het bepalen van de ontstekingsgraad van SF en het diagnosticeren van kristal- of septische artritis door specifieke kristallen of micro-organismen te identificeren. Het is een bijzonder nuttig, eenvoudig en betrouwbaar hulpmiddel bij het diagnosticeren van artrose, vanwege het typische niet-inflammatoire patroon met een zeer laag percentage of afwezigheid van neutrofielen.
Voordelen ten opzichte van alternatieve technieken SF-analyse bestaat uit eenvoudige procedures die totale en differentiële leukocytentellingen en kristalonderzoek omvatten. Handmatige celtelling uitgevoerd door deskundige laboratoriumtechnici 3,11 blijft de gouden standaard voor de cytologische analyse van synoviale en andere lichaamsvloeistoffen. Vanwege de tijdrovende beperking en de inter- en intra-waarnemersvariabiliteit van deze methode, hebben geautomatiseerde celtellers echter geleidelijk het handmatig tellen vervangen in grote routinematige klinische laboratoria waar bloed- en urineanalysatoren zijn aangepast om SF-analyse11,12 mogelijk te maken. Niettemin biedt handmatig tellen enkele voordelen in specifieke omgevingen: (1) in de ambulante, om op tijd een totale en differentiële WBC-waarde te verkrijgen; (2) om celtypen te identificeren zoals cytofagocytische mononucleaire (Reiter) cellen of niet-hematopoëtische cellen zoals synoviocyten, die geautomatiseerde tellers niet kunnen herkennen; 3) wanneer het monster te klein is om door het instrument te worden gehanteerd; (4) het opzetten van lokale laboratoriumregisters die gemakkelijk toegankelijk zijn voor onderzoeksdoeleinden. Een ander voordeel van handmatig tellen is insupravitale kleuring, een methode die de differentiatie van cellen zeer snel en onmiddellijk na de voorbereiding van glasplaten mogelijk maakt. Traditionele kleuringen, zoals de Wright- en de May-Grünwald-Giemsa-procedures, vereisen daarentegen luchtgedroogde SF-uitstrijkjes en tijd om de cellen te kleuren13. Hoewel niet geschikt voor tijdgevoelige routineanalyses, onthullen deze kleuringsmethoden meer gedetailleerde celpopulaties in het monster, waaronder erytrocyten, basofielen, eosinofielen, polymorfonucleaire leukocyten, lymfocyten en bloedplaatjes.
Ten slotte wordt routinematige SF-analyse voor kristallen uitgevoerd met behulp van een eenvoudige techniek op basis van gepolariseerde lichtmicroscopie, die snelle resultaten oplevert14. Alternatieve methoden, zoals scanning en elektronenmicroscopie, leveren nauwkeurigere en gevoeligere resultaten op, maar het gebruik ervan in de dagelijkse klinische praktijk is niet haalbaar vanwege de hoge kosten en tijdrovende monstervoorbereiding en -analyse.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alizarin red S</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A5533</td>
			<td>For BCP crystal search</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Burker chamber</td>
			<td>Merck</td>
			<td>BR718905</td>
			<td>For total white blood cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glasses</td>
			<td>Merck</td>
			<td>C7931</td>
			<td>For microscopic examination&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA tubes</td>
			<td>BD</td>
			<td>368861</td>
			<td>For SF collection&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides&#160;</td>
			<td>Merck</td>
			<td>S8902</td>
			<td>For crystal search</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lambda filter (compensator)</td>
			<td>Any&#160;</td>
			<td>Refer to microscope company</td>
			<td>For crystal identification&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malassez-Potain pipette</td>
			<td>Artiglass</td>
			<td>54830000</td>
			<td>For dilution of synovial fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene blue solution</td>
			<td>Merck</td>
			<td>3978</td>
			<td>For total white blood cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarized microscope&#160;</td>
			<td>Leica, Nikon, others</td>
			<td>Depending on the model and company</td>
			<td>For complete synovial fluid analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarizing lens</td>
			<td>Any&#160;</td>
			<td>Refer to microscope company</td>
			<td>For crystal identification&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Testsimplet&#160;</td>
			<td>Waldeck</td>
			<td>14386</td>
			<td>Supravital staining for cell differentiation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

synovial fluid analysis to identify osteoarthritis

Synoviale vloeistof (SF) analyse is belangrijk bij het diagnosticeren van artrose (OA). Macroscopische en microscopische kenmerken, waaronder het totale en differentiële aantal witte bloedcellen (WBC), helpen bij het definiëren van de niet-inflammatoire aard van SF, wat een kenmerk is van OA. Bij patiënten met artrose is WBC in SF-monsters meestal niet hoger dan 2000 cellen per microliter en is het percentage ontstekingscellen, zoals neutrofielen, zeer laag of afwezig. Calciumkristallen komen vaak voor in SF verzameld van OA-patiënten. Hoewel hun rol in de pathogenese van artrose onduidelijk blijft, zijn ze in verband gebracht met een mild ontstekingsproces en een ernstiger ziekteprogressie. Onlangs zijn calciumkristallen beschreven in zowel de vroege als de late stadia van artrose, wat aangeeft dat ze een vitale rol kunnen spelen bij het diagnosticeren van verschillende klinische subsets van artrose en farmacologische behandeling. Het algemene doel van SF-analyse bij artrose is tweeledig: het vaststellen van de niet-inflammatoire mate van SF en het benadrukken van de aanwezigheid van calciumkristallen.

Grote gewrichten die zijn aangetast door artrose zijn vaak gezwollen en produceren aanzienlijke hoeveelheden SF, die worden afgevoerd via artrocentese15. De macroscopische kenmerken van SF die onmiddellijk na artrocentese worden geëvalueerd, omvatten in wezen de hoeveelheid, kleur, helderheid en viscositeit17. Ondanks hun lage specificiteit bieden ze voorlopige gegevens over de mate van ontsteking. De kleur hangt af van SF-cellulariteit en de mate van fragmentatie...

Watch this Scientific Journal Video about Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis at JoVE.com

Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis

Synoviale vloeistofanalyse onder doorgegeven, gepolariseerde en gecompenseerde lichtmicroscopie wordt gebruikt om de inflammatoire of niet-inflammatoire aard van een monster te evalueren door middel van eenvoudige stappen. Het is vooral nuttig bij artrose om calciumkristallen te detecteren en een ernstigere subset van artrose te identificeren.

Synoviale vloeistofanalyse om artrose te identificeren

Synovial fluid (SF) analysis is important in diagnosing osteoarthritis (OA). Macroscopic and microscopic features, including total and differential white ...

Synoviale vloeistofanalyse kan de mate van ontsteking en de aanwezigheid van pathogene kristallen onthullen tijdens de eerste evaluatie van patiënten met musculoskeletale symptomen en gewrichtsuitvloeiingen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is de eenvoud en betrouwbaarheid. In een paar stappen kan de clinicus belangrijke diagnostische informatie over de ziekte van de patiënt verkrijgen.De identificatie van specifieke kristallen is van vitaal belang voor diagnose en behandeling. Uraatkristallen duiden op jicht, terwijl calciumpyrofosfaat en andere calciumkristallen wijzen op calciumgerelateerde artropathieën of een ernstigere vorm van artrose. Neem om te beginnen het synoviale vloeistofmonster dat is verzameld tijdens artrocentese van gezwollen gewrichten van patiënten.Annoteer het volume van het monster in milliliter en breng het afzonderlijk over in een buis met antistollingsmiddel EDTA en een andere buis zonder additief. In de vermoedelijke gevallen van infectie, breng aseptisch een paar milliliter van het synoviale vloeistofmonster over in een kweekfles voor microbiologisch onderzoek. Om het monster macroscopisch te onderzoeken, neemt u een buis met het monster en definieert u de kleur van het monster, die kan variëren van bleek tot donkergeel.Noteer de aanwezigheid van bloed, indien aanwezig. Bepaal de mate van helderheid van het monster door het te observeren in de achtergrondverlichting en door te bepalen hoe gemakkelijk het is om een afgedrukte pagina te lezen door de buis met het monster. Beoordeel vervolgens de viscositeit van het monster door het uit een wegwerppipet te druppelen.Terwijl het verschijnen van een lange sliert vloeistof duidt op een hoge viscositeit, is de vorming van druppels indicatief voor een lage viscositeit. Observeer het monster door de buis met licht op de achtergrond op de aanwezigheid van deeltjes, waaronder weefselfragmenten of fibrine. Om het totale aantal witte bloedcellen te bepalen, trekt u 0,5 microliter van het monster uit de buis met EDTAA met behulp van een Malassez-Potain-pipet.Gebruik dezelfde pipet om 9,5 microliter 0,1% methyleenblauwe oplossing te trekken. Meng het monster en de methyleenblauwe oplossing in de pipet door middel van zachte inversie. Gooi de eerste paar druppels weg voordat u het mengsel in de telkamer van een hemocytometer giet.Tel nu de cellen in twee opeenvolgende kwadraten van de negen en vermenigvuldig het verkregen getal met 100. Druk het totale aantal witte bloedcellen uit als het aantal leukocyten per kubieke millimeter. Gebruik het synoviale vloeistofmonster uit de buis zonder additief om het differentiële aantal witte bloedcellen van de synoviale vloeistofmonsters te bepalen.Om het differentiële celgetal te bepalen met behulp van supravitale kleuring, neemt u een kant-en-klare dia die vooraf is gecoat met kristalviolet en methyleenblauw en plaatst u een kleine druppel monster in het midden van de dia. Bedek vervolgens de monsterdruppel met een coverslip en plaats een druppel microscoop-onderdompelingsolie op de coverslip. Als u traditionele kleuring wilt gebruiken voor het schatten van het aantal differentiële cellen, begint u met het plaatsen van een kleine druppel van het monster aan het einde van een schone dia.Gebruik nu een tweede dia of een coverslip om de druppel met een voorwaartse beweging langs de dia te verspreiden. Laat het uitstrijkje drogen in de lucht. Onderzoek de dia met het luchtgedroogde uitstrijkje onder 1, 000X olie onderdompelingsobjectief.Schat het aantal differentiële cellen door 100 opeenvolgende cellen te tellen terwijl de polymorfonucleaire cellen, de monocyten en de lymfocyten van elkaar worden onderscheiden. Reinig een glasplaat met optisch of zacht papier dat is doordrenkt met ethanol. Breng een kleine druppel van het monster niet gemengd met een additief op de glazen plaat en bedek het met een coverslip voordat u de dia onder de microscoop plaatst.Stel de dia onder de microscoop scherp met behulp van een vergrotingsobjectief met een laag vermogen en onderzoek deze zorgvuldig onder een helder veld met een 40X-objectief. Kijk binnen en buiten de cellen om de kristallen te identificeren op basis van hun grootte en vorm, die ruitvormig, naaldvormig of staafvormig kunnen zijn. Plaats vervolgens het polarisatiefilter tussen de lichtbron en het monster.Als u een donkere achtergrond wilt maken, draait u de polarisator totdat de optische as loodrecht op de analysator staat. Zodra een birefringent kristal is geïdentificeerd, plaatst u de compensator tussen de polarisator en het monster en beweegt u het parallel of loodrecht op de optische as van het kristal. Observeer de kleur die door het kristal wordt onthuld.Voor Alizarin Red-kleuring, meng een druppel van het synoviale vloeistofmonster met een gelijk volume van eerder bereide Alizarin Red-oplossing op een schone dia. Bedek de dia met een coverslip en onderzoek met een vergroting van 400x onder een microscoop om de kristallen te identificeren. De macroscopische kenmerken van synoviale vloeistofmonsters gaven de mate van ontsteking aan.Een monster met lichtgele kleur en meer helderheid wordt over het algemeen geassocieerd met niet-inflammatoire aandoeningen zoals artrose. Aan de andere kant duidt een monster met een donkergele kleur en een troebel uiterlijk op de aanwezigheid van cellen, puin, hyaluronzuur en fibrinefragmenten die geassocieerd zijn met inflammatoire effusies. De leukocyten die werden waargenomen in synoviale vloeistofmonsters van artrosepatiënten waren meestal monocyten en andere mononucleaire cellen zoals synoviocyten.Calciumpyrofosfaatkristallen werden gedetecteerd in synoviale vloeistofmonsters, wat wijst op relatief hogere niveaus van inflammatoire cytokines. Bovendien onthulde een positieve Alizarin Red-kleuring de aanwezigheid van basische calciumfosfaatkristallen in de monsters. Het is erg belangrijk om de dia onder gewoon licht zorgvuldig te onderzoeken bij het zoeken naar kristallen.Vergeet niet dat pyrofosfaatkristallen vaak zwak birefringent zijn en kunnen worden gemist onder gepolariseerd licht. De aanwezigheid van calciumkristallen in synoviale vloeistof en hun associatie met een ernstigere vorm van ziekte hebben onderzoekers ertoe gebracht nieuwe mechanismen in de pathogenese en de progressie van artrose te onderzoeken.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation and Cellular Phenotyping of Mesenchymal Stem Cells Derived from Synovial Fluid and Bone Marrow of Minipigs

Isolatie en Cellulaire fenotypering van mesenchymale stamcellen afkomstig van de gewrichtsvloeistof en beenmerg van minivarkens

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been established after isolation from various tissue sources, including bone marrow and synovial fluid. Recently, ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cell Subsets within the Murine Spleen, Bone Marrow, Lymph Nodes and Synovial Tissue in an Osteoarthritis Model

Flow Cytometrie Analyse van immune cell subsets binnen de Murine Milt, Beenmerg, lymfeklieren en synoviale weefsel in een artrose model

Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent musculoskeletal diseases, affecting patients suffering from pain and physical limitations. Recent ...

Evaluation of Fluid Overload by Bioelectrical Impedance Vectorial Analysis

Evaluatie van vloeistofoverbelasting door bio-elektrische impedantie vectoriële analyse

Early detection and management of fluid overload are critically important in acute illness, as the impact of therapeutic intervention can result in ...

Ameliorating Osteoarthritis in Mice Using Silver Nanoparticles

Verbetering van artrose bij muizen met behulp van zilveren nanodeeltjes

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most commonly encountered degenerative diseases of the joints in people over 45 years of age. Currently, there are ...

Standardized Tuina Manipulation for Knee Osteoarthritis in Rats

Tuina Manipulation to Reduce Inflammation and Cartilage Loss in Knee Osteoarthritis Rats

Understanding the Mechanism of Tuina Manipulation in Rats (Video) | JoVE

Tuina-manipulatie om ontsteking en kraakbeenverlies bij knieartroseratten te verminderen

Clinical trials suggest that Tuina manipulation is effective in treating knee osteoarthritis (KOA), while further studies are required to discover its ...

Performing Fu's Subcutaneous Needling for Degenerative Knee Osteoarthritis

Performing Fu's Subcutaneous Needling for Degenerative Knee Osteoarthritis (Video) | JoVE 

Het uitvoeren van Fu's subcutane needling voor degeneratieve knieartrose

Treating Knee Osteoarthritis with Tuina in a Rabbit Model

Tuina Intervention in Rabbit Model of Knee Osteoarthritis

Using a Rabbit Model to Explore the Efficacy of Tuina in Treating Knee Osteoarthritis (Video) | JoVE

Tuina-interventie in konijnenmodel van knieartrose

Knee osteoarthritis (KOA) is mainly characterized by degenerative changes in the knee joint's cartilage and surrounding soft tissues. The efficacy of ...

Experimental Modeling of Knee Osteoarthritis in Rats

Experimental Modeling of Knee Osteoarthritis in Rats (Video) | JoVE 

Experimentele modellering van knieartrose bij ratten

A Reproducible Cartilage Impact Model to Generate Post-Traumatic Osteoarthritis in the Rabbit

Een reproduceerbaar kraakbeenimpactmodel om posttraumatische artrose bij het konijn te genereren

Post-traumatic osteoarthritis (PTOA) is responsible for 12% of all osteoarthritis cases in the United States. PTOA can be initiated by a single traumatic ...

Therapeutic Potential of Tuina Massage for Knee Osteoarthritis

Tuina Intervention in Sodium Monoiodoacetate Injection-Induced Rat Model of Knee Osteoarthritis

Treating Knee Osteoarthritis with Tuina - A New Perspective (Video) | JoVE

Tuina-interventie in natriummonojoodacetaat-injectie-geïnduceerd rattenmodel van knieartrose

Knee osteoarthritis (KOA), a common degenerative joint disorder, is characterized by chronic pain and disability, which can progress to irreparable ...