Name: synovial fluid analysis to identify osteoarthritis
Uploaded: 2022-10-20T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis at JoVE.com

המחברים מבקשים להודות לפרופסור לאונרדו פונצי על חונכותו היקרה בתחום ניתוח נוזלים סינוביאליים ולבית החולים האוניברסיטאי פדובה על תמיכתו.

הפרוטוקול הנוכחי תואם את הנחיות ועדת האתיקה של בית החולים האוניברסיטאי פדובה. SF נאסף בהסכמת המטופל ממפרקי הברך של חולים שקיבלו ארתרוסנטזיס טיפולי לשיוף מפרקים בהצגתם הראשונית למרפאה או בתגובה להתלקחות דלקת פרקים. התוויות נגד להליך היו: קרישת דם, תרופות נוגדות קרישה, נגעים בעור, דרמטיטיס ?...

<ol>
	<li>Cui, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional+prevalence,+incidence+and+risk+factors+of+knee+osteoarthritis+in+population-based+studies.">Global, regional prevalence, incidence and risk factors of knee osteoarthritis in population-based studies.</a> EClinicalMedicine. 29, 100587 (2020).</li><li>Hunter, D. J., Bierma-Zeinstra, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoarthritis.">Osteoarthritis.</a> Lancet. 393 (10182), 1745-1759 (2019).</li><li>Mandell, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Synovial Fluid Analysis and the Evaluation of Patients with Arthritis. , (2022).</li><li>Schmerling, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+initial+evaluation+of+the+adult+patient+with+acute+musculoskeletal+symptoms.">Guidelines for the initial evaluation of the adult patient with acute musculoskeletal symptoms.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 39 (1), 1-8 (1996).</li><li>Coakley, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RCGP+and+BSAC+guidelines+for+management+of+the+hot+swollen+joint+in+adults.">RCGP and BSAC guidelines for management of the hot swollen joint in adults.</a> Rheumatology. 45 (8), 1039-1041 (2006).</li><li>Frallonardo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+calcium+phosphate+and+pyrophosphate+crystals+in+early+and+late+osteoarthritis:+relationship+with+clinical+indices+and+inflammation.">Basic calcium phosphate and pyrophosphate crystals in early and late osteoarthritis: relationship with clinical indices and inflammation.</a> Clinical Rheumatology. 37 (10), 2847-2853 (2018).</li><li>Nalbant, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synovial+fluid+features+and+their+relations+to+osteoarthritis+severity:+new+findings+from+sequential+studies.">Synovial fluid features and their relations to osteoarthritis severity: new findings from sequential studies.</a> Osteoarthritis Cartilage. 11 (1), 50-54 (2003).</li><li>Fuerst, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcification+of+articular+cartilage+in+human+osteoarthritis.">Calcification of articular cartilage in human osteoarthritis.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 60 (9), 2694-2703 (2009).</li><li>Campillo-Gimenez, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+potential+of+four+different+phases+of+calcium+pyrophosphate+relies+on+NF-&#954;B+activation+and+MAPK+pathways.">Inflammatory potential of four different phases of calcium pyrophosphate relies on NF-&#954;B activation and MAPK pathways.</a> Frontiers in Immunology. 9, 2248 (2018).</li><li>Paz&#225;r, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+calcium+phosphate+crystals+induce+monocyte/macrophage+IL-1&#946;+secretion+through+the+NLRP3+inflammasome+in+vitro.">Basic calcium phosphate crystals induce monocyte/macrophage IL-1&#946; secretion through the NLRP3 inflammasome in vitro.</a> The Journal of Immunology. 186 (4), 2495-2502 (2011).</li><li>Mart&#237;n, M. J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+cell+count+in+body+fluids:+a+review.">Automated cell count in body fluids: a review.</a> Advances in Laboratory Medicine. 2, 149-161 (2021).</li><li>Seghezzi, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+cellular+analysis+of+synovial+fluids+by+optical+microscopy+and+automated+count+using+the+Sysmex+XN+body+fluid+mode.">Optimization of cellular analysis of synovial fluids by optical microscopy and automated count using the Sysmex XN body fluid mode.</a> Clinica Chimica Acta. 462, 41-48 (2016).</li><li>Reginato, A. J., Maldonado, I., Reginato, A. M., Falasca, G. F., O'Connor, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supravital+staining+of+synovial+fluid+with+Testsimplets.">Supravital staining of synovial fluid with Testsimplets.</a> Diagnostic Cytopathology. 8 (2), 147-152 (1992).</li><li>Lumbreras, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+for+crystals+in+synovial+fluid:+training+of+the+analysts+results+in+high+consistency.">Analysis for crystals in synovial fluid: training of the analysts results in high consistency.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 64 (4), 612-615 (2005).</li><li>Tieng, A., Franchin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knee+arthrocentesis+in+adults.">Knee arthrocentesis in adults.</a> Journal of Visualized Experiments. , e63135 (2022).</li><li>Punzi, L., Oliviero, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arthrocentesis+and+synovial+fluid+analysis+in+clinical+practice:+value+of+sonography+in+difficult+cases.">Arthrocentesis and synovial fluid analysis in clinical practice: value of sonography in difficult cases.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1154 (1), 152-158 (2009).</li><li>Schumacher, H. R., Reginato, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Atlas of Synovial Fluid Analysis and Crystal Identification. , (1991).</li><li>Mopin, A., Driss, V., Brinster, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+protocol+for+characterizing+the+murine+C1498+cell+line+and+its+associated+leukemia+mouse+model.">Detailed protocol for characterizing the murine C1498 cell line and its associated leukemia mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments. (116), e54270 (2016).</li><li>Oliviero, F., Punzi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basics+of+Polarized+Light+Microscopy.">Basics of Polarized Light Microscopy.</a> Synovial Fluid Analysis and the Evaluation of Patients with Arthritis. , 79-90 (2022).</li><li>Paul, H., Reginato, A. J., Schumacher, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alizarin+red+S+staining+as+a+screening+test+to+detect+calcium+compounds+in+synovial+fluid.">Alizarin red S staining as a screening test to detect calcium compounds in synovial fluid.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 26 (2), 191-200 (1983).</li><li>Favero, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synovial+fluid+fetuin-A+levels+in+patients+affected+by+osteoarthritis+with+or+without+evidence+of+calcium+crystals.">Synovial fluid fetuin-A levels in patients affected by osteoarthritis with or without evidence of calcium crystals.</a> Rheumatology. 58 (4), 729-730 (2019).</li><li>Frallonardo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+calcium+crystals+in+knee+osteoarthritis+synovial+fluid:+a+comparison+between+polarized+light+and+scanning+electron+microscopy.">Detection of calcium crystals in knee osteoarthritis synovial fluid: a comparison between polarized light and scanning electron microscopy.</a> Journal of Clinical Rheumatology. 22 (7), 369-371 (2016).</li><li>Peffers, M. J., Smagul, A., Anderson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+analysis+of+synovial+fluid:+current+and+potential+uses+to+improve+clinical+outcomes.">Proteomic analysis of synovial fluid: current and potential uses to improve clinical outcomes.</a> Expert Review of Proteomics. 16 (4), 287-302 (2019).</li></ol>

ב- OA, ניתוח SF מסייע להגדיר מאפייני מחלה באמצעות צעדים פשוטים: ספירת לויקוציטים כוללת ודיפרנציאלית וחיפוש גבישים, כולל CPP ו- BCP. יתר על כן, זיהוי של גבישי MSU עשוי להדגיש תחלואה נלווית חשובה.
למרות עלויות נמוכות וביצוע פשוט, רגישות הבדיקות ואמינות התוצאות עשויות להיפגע בשל אנליס?...

דלקת מפרקים ניוונית (OA) היא מחלת מפרקים כרונית מורכבת ורב-גורמית, עם שכיחות עולמית מאוגדת של 16% בנבדקים בני 15 ומעלה, ו-23% בנבדקים בני 40ומעלה. התחלואה ב-OA צפויה לעלות עקב הזדקנות האוכלוסייה ועלייה בגורמי סיכון, כגון השמנת יתר ותסמונת מטבולית2.
בין הבעיות העיקריות הקשורות ל- OA הם הקושי באבחון המחלה בשלביה המוקדמים והטיפולים הזמינים כיום המוגבלים לניהול כאב ותרופות סימפטומטיות איטיות (SYSADOAs) כגון גליקוזאמינוגליקנים. האבחנה של OA מבוססת על תסמינים קליניים וממצאי הדמיה. עם זאת, חוסר המתאם בין שתי ההערכות עלול לגרום לעיכוב של שנים באבחון OA ובהתחלת הטיפול2. OA מאופיין בתהליכים ניווניים ודלקת בדרגה נמוכה, אשר ניתן לחקור בקלות באמצעות ניתוח נוזל סינוביאלי (SF). SF הוא דיאליזה פלסמטית צמיגה עשירה בחומצה היאלורונית, המשמנת את חלל המפרק, מספקת חומרים מזינים וחמצן לסחוס ומסירה פסולת מטבולית. SF פועל גם כבולם זעזועים, ובכך מגן על המפרקים במהלך מתחומתח 3.
ניתוח SF הוא שיטה פשוטה ואמינה כי תמיד חייב להתבצע במהלך ההערכה הראשונית של חולים עם סימפטומים שריר ושלד ו השתפכות משותפת3. המלצות של המכללה האמריקאית לראומטולוגיה, האגודה הבריטית לראומטולוגיה ואחרים כוללות ניתוח SF בין בדיקות האבחון למחלות ראומטיות שיש לבצע בעיקר בהערכת דלקת מפרקים חריפה 4,5. ספירת לויקוציטים כוללת ודיפרנציאלית המתקבלת מניתוח SF מספקת תמונת מצב של התהליך הפתולוגי המתרחש במפרק, ובכך מסווגת את מידת הדלקת. זיהוי גבישים פתוגניים, כגון גבישי מונוסודיום אוראט (MSU) וסידן פירופוספט (CPP), תחת אור מקוטב, חיוני לאבחון וטיפול בדלקת מפרקים גבישית (למשל, שיגדון ופסאודוגאוט). יתר על כן, נוכחותם של מיקרואורגניזמים מצביעה על אבחנה של דלקת מפרקים ספיגה.
גבישי סידן שכיחים בדגימות שנאספו מחולים עם OA6. גבישי סידן פוספט בסיסיים (BCP) ו-CPP דווחו בכ-22% ו-23% מדגימות SF, בהתאמה, מחולים עם OA6. למרות שתפקידם נותר לא ברור, גבישים אלה נקשרו לצורות חמורות יותר של OA7 ונחשבים לאפיתופעה של התהליך הפתולוגי עצמו. גבישי סידן התגלו ב-100% מדגימות הרקמה של חולי OA שעברו החלפת ברך8. יתר על כן, הועלתה השערה כי גבישי סידן עשויים להיות מעורבים בפתוגנזה של OA בשל ההשפעות הדלקתיות שלהם, שהודגמו על ידי מספר מחקרים9 ותווך, לפחות בחלקו, על ידי NLRP3 inflammasome10.
לאחרונה, גבישי סידן תוארו הן בשלב מוקדם והן בשלבים מאוחרים6 של OA, מה שמצביע על כך שהם עשויים למלא תפקיד חיוני באבחון תת-קבוצות קליניות שונות של OA וטיפול תרופתי.
המטרה הכוללת של ניתוח SF היא כפולה: לקבוע את מידת הדלקת של SF ולאבחן דלקת מפרקים גבישית או ספטית על ידי זיהוי גבישים או מיקרואורגניזמים ספציפיים. זהו כלי שימושי, פשוט ואמין במיוחד באבחון OA, בשל דפוס לא דלקתי טיפוסי עם אחוז נמוך מאוד או היעדר נויטרופילים.
יתרונות על פני טכניקות חלופיות ניתוח SF מורכב מהליכים פשוטים הכוללים ספירת לויקוציטים כוללת ודיפרנציאלית וחיפוש גבישי. ספירת תאים ידנית המבוצעת על ידי טכנאי מעבדה מומחים 3,11 נותרה תקן הזהב לניתוח ציטולוגי של נוזלי גוף סינוביאליים ואחרים. עם זאת, בשל מגבלת הזמן והשונות הבין-צופה והתוך-צופה של שיטה זו, מוני תאים אוטומטיים החליפו בהדרגה את הספירה הידנית במעבדות קליניות שגרתיות גדולות שבהן הותאמו מנתחי דם ושתן כדי לאפשר ניתוח SF11,12. עם זאת, ספירה ידנית מציגה כמה יתרונות בהגדרות ספציפיות: (1) באמבולטורי, כדי לקבל ערך WBC כולל ודיפרנציאלי בזמן; (2) לזהות סוגי תאים כגון תאים חד-גרעיניים ציטופגוציטיים (רייטר) או תאים לא המטופויטיים כגון סינוביוציטים, שמונים אוטומטיים אינם יכולים לזהות; (3) כאשר הדגימה קטנה מכדי שניתן יהיה לטפל בה על ידי המכשיר; (4) ליצור רישומי מעבדות מקומיים שיהיו נגישים בקלות למטרות מחקר. יתרון נוסף של ספירה ידנית הוא צביעה בלתי נתפסת, שיטה המאפשרת התמיינות של תאים במהירות רבה ומיד לאחר הכנת מגלשת זכוכית. לעומת זאת, כתמים מסורתיים, כגון הליכי רייט ומאי-גרינוולד-גימסה, דורשים מריחות SF מיובשות באוויר וזמן להכתים את התאים13. למרות שאינן מתאימות לניתוחים שגרתיים תלויי זמן, שיטות צביעה אלה חושפות אוכלוסיות תאים מפורטות יותר בדגימה, כולל אריתרוציטים, בזופילים, אאוזינופילים, לויקוציטים פולימורפוגרעיניים, לימפוציטים וטסיות דם.
לבסוף, ניתוח SF שגרתי עבור גבישים מבוצע בטכניקה פשוטה המבוססת על מיקרוסקופ אור מקוטב, המספק תוצאות מהירות14. שיטות חלופיות, כגון סריקה ומיקרוסקופ אלקטרונים, מניבות תוצאות מדויקות ורגישות יותר, אך השימוש בהן בפרקטיקה הקלינית היומיומית אינו אפשרי בשל עלויות גבוהות והכנת דגימה וניתוח גוזלים זמן.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alizarin red S</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A5533</td>
			<td>For BCP crystal search</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Burker chamber</td>
			<td>Merck</td>
			<td>BR718905</td>
			<td>For total white blood cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glasses</td>
			<td>Merck</td>
			<td>C7931</td>
			<td>For microscopic examination&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA tubes</td>
			<td>BD</td>
			<td>368861</td>
			<td>For SF collection&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides&#160;</td>
			<td>Merck</td>
			<td>S8902</td>
			<td>For crystal search</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lambda filter (compensator)</td>
			<td>Any&#160;</td>
			<td>Refer to microscope company</td>
			<td>For crystal identification&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malassez-Potain pipette</td>
			<td>Artiglass</td>
			<td>54830000</td>
			<td>For dilution of synovial fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene blue solution</td>
			<td>Merck</td>
			<td>3978</td>
			<td>For total white blood cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarized microscope&#160;</td>
			<td>Leica, Nikon, others</td>
			<td>Depending on the model and company</td>
			<td>For complete synovial fluid analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarizing lens</td>
			<td>Any&#160;</td>
			<td>Refer to microscope company</td>
			<td>For crystal identification&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Testsimplet&#160;</td>
			<td>Waldeck</td>
			<td>14386</td>
			<td>Supravital staining for cell differentiation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

synovial fluid analysis to identify osteoarthritis

ניתוח נוזל סינוביאלי (SF) חשוב באבחון דלקת מפרקים ניוונית (OA). מאפיינים מקרוסקופיים ומיקרוסקופיים, כולל ספירה כוללת ודיפרנציאלית של תאי דם לבנים (WBC), עוזרים להגדיר את האופי הלא דלקתי של SF, שהוא סימן ההיכר של OA. בחולים עם OA, WBC בדגימות SF בדרך כלל אינו עולה על 2000 תאים למיקרוליטר, ואחוז התאים הדלקתיים, כגון נויטרופילים, נמוך מאוד או נעדר. גבישי סידן שכיחים ב- SF שנאספו מחולי OA. למרות שתפקידם בפתוגנזה של OA נותר לא ברור, הם נקשרו לתהליך דלקתי קל ולהתקדמות מחלה חמורה יותר. לאחרונה, גבישי סידן תוארו הן בשלבים המוקדמים והן בשלבים המאוחרים של OA, מה שמצביע על כך שהם עשויים למלא תפקיד חיוני באבחון תת-קבוצות קליניות שונות של OA וטיפול תרופתי. המטרה הכוללת של ניתוח SF ב- OA היא כפולה: לוודא את הדרגה הלא דלקתית של SF ולהדגיש את נוכחותם של גבישי סידן.

מפרקים גדולים המושפעים על ידי OA הם לעתים קרובות נפוחים לייצר כמויות משמעותיות של SF, אשר מנוקזים באמצעות arthrocentesis15. המאפיינים המקרוסקופיים של SF המוערכים מיד לאחר arthrocentesis כוללים למעשה את הכמות, צבע, בהירות, צמיגות17. למרות הספציפיות הנמוכה שלהם, הם מספקים נתונים...

Watch this Scientific Journal Video about Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis at JoVE.com

Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis

ניתוח נוזל סינוביאלי תחת מיקרוסקופ אור מועבר, מקוטב ומפוצה משמש להערכת האופי הדלקתי או הלא דלקתי של דגימה באמצעות צעדים פשוטים. זה שימושי במיוחד בדלקת מפרקים ניוונית כדי לזהות גבישי סידן ולזהות תת-קבוצה חמורה יותר של דלקת מפרקים ניוונית.

ניתוח נוזלים סינוביאלי לזיהוי דלקת מפרקים ניוונית

Synovial fluid (SF) analysis is important in diagnosing osteoarthritis (OA). Macroscopic and microscopic features, including total and differential white ...

ניתוח נוזל סינוביאלי יכול לחשוף את מידת הדלקת ואת נוכחותם של גבישים פתוגניים במהלך ההערכה הראשונית של המטופל עם תסמיני שרירים ושלד ועירוי משותף. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא הפשטות והאמינות שלה. בכמה צעדים, המטפל יכול לקבל מידע אבחוני חשוב על מחלתו של המטופל.זיהוי גבישים ספציפיים חיוני לאבחון ולטיפול. גבישי אוראט מצביעים על שיגדון, בעוד שסידן פירופוספט וגבישי סידן אחרים מצביעים על ארתרופתיות הקשורות לסידן או צורה חמורה יותר של דלקת מפרקים ניוונית. כדי להתחיל, לקחת את הדגימה נוזל סינוביאלי שנאסף במהלך arthrocentesis של המפרקים נפוחים של חולים.הוסף הערות לנפח הדגימה במיליליטרים והעבר אותה בנפרד לצינור המכיל EDTA נוגד קרישה וצינור נוסף ללא כל תוסף. במקרים החשודים של זיהום, יש להעביר כמה מיליליטרים מדגימת הנוזל הסינוביאלי לבקבוק תרבית לצורך בדיקה מיקרוביולוגית. כדי לבחון את הדגימה באופן מקרוסקופי, קחו צינור המכיל את הדגימה והגדירו את צבע הדגימה, שיכול לנוע בין צהוב בהיר לצהוב כהה.רשום נוכחות של דם, אם בכלל. הגדר את מידת הבהירות של הדגימה על ידי התבוננות בה בתאורה האחורית ועל ידי קביעת קלות הקריאה של דף מודפס דרך הצינור המכיל את הדגימה. לאחר מכן להעריך את צמיגות הדגימה על ידי טפטוף אותו פיפטה חד פעמית.בעוד המראה של מחרוזת ארוכה של נוזל מצביע על צמיגות גבוהה, היווצרות טיפות מעידה על צמיגות נמוכה. התבונן בדגימה דרך הצינור עם אור ברקע לנוכחות של חומרים חלקיקיים כלשהם כולל שברי רקמות או פיברין. כדי לקבוע את ספירת תאי הדם הלבנים הכוללת, ציירו 0.5 מיקרוליטר של הדגימה מהשפופרת המכילה EDTAA באמצעות פיפטה Malassez-Potain.השתמש באותה פיפטה כדי לצייר 9.5 מיקרוליטר של 0.1% תמיסה כחולה מתילן. מערבבים את הדגימה ואת התמיסה הכחולה מתילן בפיפטה על ידי היפוך עדין. יש להשליך את הטיפות הראשונות לפני שיוצקים את התערובת לתא הספירה של המוציטומטר.כעת ספרו את התאים בשני ריבועים רצופים מתוך תשעה והכפילו את המספר המתקבל ב-100. בטא את ספירת תאי הדם הלבנים הכוללת כמספר לויקוציטים למילימטר מעוקב. השתמש בדגימת הנוזל הסינוביאלי מהצינור ללא כל תוסף כדי לקבוע את ספירת תאי הדם הלבנים הדיפרנציאלית של דגימות הנוזל הסינוביאלי.כדי לקבוע את ספירת התאים הדיפרנציאלית באמצעות צביעה על-חיונית, קח שקופית מוכנה לשימוש המצופה מראש בסגול קריסטל וכחול מתילן והנח טיפה אחת קטנה של דגימה במרכז השקופית. לאחר מכן, כסו את טיפת הדגימה עם תלוש כיסוי והניחו טיפה של שמן טבילה במיקרוסקופ על הכיסוי. כדי להשתמש בצביעה מסורתית להערכת ספירת התאים הדיפרנציאלית, התחל בהצבת טיפה קטנה של הדגימה בסוף שקופית נקייה.כעת השתמש בשקופית שנייה או בהחלקת כיסוי כדי לפזר את הטיפה לאורך השקופית בתנועה קדימה. תנו לכתם להתייבש באוויר. בדוק את השקופית המכילה את המריחה המיובשת באוויר מתחת למטרה של טבילת שמן 1, 000X.להעריך את ספירת התאים הדיפרנציאלית על ידי ספירת 100 תאים עוקבים תוך הבחנה בין התאים הפולימורפוגרעיניים, המונוציטים והלימפוציטים זה מזה. נקו שקופית זכוכית עם נייר אופטי או רך טבול באתנול. יש למרוח טיפה קטנה של הדגימה שאינה מעורבבת עם תוסף כלשהו על מגלשת הזכוכית ולכסות אותה בכיסוי לפני הנחת השקופית מתחת למיקרוסקופ.מקדו את השקופית מתחת למיקרוסקופ באמצעות יעד הגדלה בעוצמה נמוכה ובחנו אותה בזהירות תחת שדה בהיר עם מטרה פי 40. הסתכלו פנימה והחוצה על התאים כדי לזהות את הגבישים על פי גודלם וצורתם, אשר עשויים להיות בצורת רומבואידים, בצורת מחט או בצורת מוט. לאחר מכן הכניסו את המסנן המקטב בין מקור האור לדגימה.ליצירת רקע כהה, סובבו את המקטב עד שהציר האופטי שלו ניצב למנתח. לאחר זיהוי גביש דו-צדדי, הכניסו את המפצה בין המקטב לדגימה והזיזו אותו במקביל או בניצב לציר האופטי של הגביש. שימו לב לצבע המתגלה על ידי הקריסטל.עבור צביעה אדומה של אליזרין, ערבבו טיפה של דגימת הנוזל הסינוביאלי עם נפח שווה של תמיסת Alizarin Red שהוכנה בעבר בשקופית נקייה. כסו את המגלשה בכיסוי ובחנו בהגדלה של 400X תחת מיקרוסקופ כדי לזהות את הגבישים. המאפיינים המקרוסקופיים של דגימות נוזל סינוביאלי הצביעו על מידת הדלקת.דגימה עם צבע צהוב בהיר ובהירות רבה יותר קשורה בדרך כלל למצבים לא דלקתיים כגון דלקת מפרקים ניוונית. לעומת זאת, דגימה בעלת צבע צהוב כהה ומראה עכור מצביעה על נוכחות תאים, פסולת, חומצה היאלורונית ושברי פיברין הקשורים להתפרצויות דלקתיות. הלויקוציטים שנצפו בדגימות נוזל סינוביאלי מחולי אוסטאוארתריטיס היו בעיקר מונוציטים ותאים חד-גרעיניים אחרים כמו סינוביוציטים.גבישי סידן פירופוספט התגלו בדגימות נוזל סינוביאלי המעידות על רמות גבוהות יחסית של ציטוקינים דלקתיים. יתר על כן, צביעה אדומה חיובית של אליזרין חשפה נוכחות של גבישי סידן פוספט בסיסיים בדגימות. חשוב מאוד לבחון היטב את המגלשה תחת אור רגיל בעת חיפוש גבישים.זכור כי גבישי pyrophosphate הם לעתים קרובות birefringent חלש וניתן להחמיץ תחת אור מקוטב. נוכחותם של גבישי סידן בנוזל הסינוביאלי והקשר שלהם לצורה חמורה יותר של מחלה הובילו חוקרים לחקור מנגנונים חדשים בפתוגנזה ובהתקדמות של דלקת מפרקים ניוונית.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation and Cellular Phenotyping of Mesenchymal Stem Cells Derived from Synovial Fluid and Bone Marrow of Minipigs

בידוד נייד phenotyping של בתאי גזע mesenchymal נגזר הסינוביאלי נוזל מח עצם של Minipigs

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been established after isolation from various tissue sources, including bone marrow and synovial fluid. Recently, ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cell Subsets within the Murine Spleen, Bone Marrow, Lymph Nodes and Synovial Tissue in an Osteoarthritis Model

ניתוח ציתום זרימה של תת-סטים של תאים חיסוניים בתוך הטחול מורין, מח העצם, בלוטות הלימפה ורקמות Synovial במודל דלקת מפרקים ניוונית

Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent musculoskeletal diseases, affecting patients suffering from pain and physical limitations. Recent ...

Evaluation of Fluid Overload by Bioelectrical Impedance Vectorial Analysis

הערכת עומס יתר של נוזלים על ידי אנליזה וקטורית של עכבה ביואלקטרית

Early detection and management of fluid overload are critically important in acute illness, as the impact of therapeutic intervention can result in ...

Ameliorating Osteoarthritis in Mice Using Silver Nanoparticles

הקלה על דלקת מפרקים ניוונית בעכברים באמצעות ננו-חלקיקי כסף

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most commonly encountered degenerative diseases of the joints in people over 45 years of age. Currently, there are ...

Standardized Tuina Manipulation for Knee Osteoarthritis in Rats

Tuina Manipulation to Reduce Inflammation and Cartilage Loss in Knee Osteoarthritis Rats

Understanding the Mechanism of Tuina Manipulation in Rats (Video) | JoVE

מניפולציה Tuina כדי להפחית דלקת ואובדן סחוס בחולדות osteoarthritis הברך

Clinical trials suggest that Tuina manipulation is effective in treating knee osteoarthritis (KOA), while further studies are required to discover its ...

Performing Fu's Subcutaneous Needling for Degenerative Knee Osteoarthritis

Performing Fu's Subcutaneous Needling for Degenerative Knee Osteoarthritis (Video) | JoVE 

ביצוע מחט תת עורית של פו לדלקת מפרקים ניוונית בברך

Treating Knee Osteoarthritis with Tuina in a Rabbit Model

Tuina Intervention in Rabbit Model of Knee Osteoarthritis

Using a Rabbit Model to Explore the Efficacy of Tuina in Treating Knee Osteoarthritis (Video) | JoVE

התערבות טווינה במודל ארנב של דלקת מפרקים ניוונית בברך

Knee osteoarthritis (KOA) is mainly characterized by degenerative changes in the knee joint's cartilage and surrounding soft tissues. The efficacy of ...

Experimental Modeling of Knee Osteoarthritis in Rats

Experimental Modeling of Knee Osteoarthritis in Rats (Video) | JoVE 

מידול ניסיוני של דלקת מפרקים ניוונית בברך בחולדות

A Reproducible Cartilage Impact Model to Generate Post-Traumatic Osteoarthritis in the Rabbit

מודל פגיעת סחוס הניתן לשחזור ליצירת דלקת מפרקים ניוונית פוסט טראומטית בארנב

Post-traumatic osteoarthritis (PTOA) is responsible for 12% of all osteoarthritis cases in the United States. PTOA can be initiated by a single traumatic ...

Therapeutic Potential of Tuina Massage for Knee Osteoarthritis

Tuina Intervention in Sodium Monoiodoacetate Injection-Induced Rat Model of Knee Osteoarthritis

Treating Knee Osteoarthritis with Tuina - A New Perspective (Video) | JoVE

התערבות Tuina בהזרקת נתרן מונויודואצטט מודל חולדה של אוסטיאוארתריטיס בברך

Knee osteoarthritis (KOA), a common degenerative joint disorder, is characterized by chronic pain and disability, which can progress to irreparable ...