Name: synovial fluid analysis to identify osteoarthritis
Uploaded: 2022-10-20T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis at JoVE.com

Forfatterne ønsker å anerkjenne professor Leonardo Punzi for hans dyrebare mentorskap innen synovialvæskeanalyse og Padova universitetssykehus for sin støtte.

Den nåværende protokollen er i samsvar med retningslinjene til etikkomiteen ved Padova universitetssykehus. SF ble samlet med pasientens samtykke fra kneleddene hos pasienter som fikk terapeutisk arthrocentese for leddvæske ved deres første presentasjon til klinikken eller som respons på en artrittisk bluss. Kontraindikasjoner for prosedyren var: koagulopati, antikoagulerende medisiner, hudlesjoner, dermatitt eller cellulitt over leddet. Alle SF-prøvene ble avidentifisert.
1. Klarg...

<ol>
	<li>Cui, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional+prevalence,+incidence+and+risk+factors+of+knee+osteoarthritis+in+population-based+studies.">Global, regional prevalence, incidence and risk factors of knee osteoarthritis in population-based studies.</a> EClinicalMedicine. 29, 100587 (2020).</li><li>Hunter, D. J., Bierma-Zeinstra, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoarthritis.">Osteoarthritis.</a> Lancet. 393 (10182), 1745-1759 (2019).</li><li>Mandell, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Synovial Fluid Analysis and the Evaluation of Patients with Arthritis. , (2022).</li><li>Schmerling, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+initial+evaluation+of+the+adult+patient+with+acute+musculoskeletal+symptoms.">Guidelines for the initial evaluation of the adult patient with acute musculoskeletal symptoms.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 39 (1), 1-8 (1996).</li><li>Coakley, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RCGP+and+BSAC+guidelines+for+management+of+the+hot+swollen+joint+in+adults.">RCGP and BSAC guidelines for management of the hot swollen joint in adults.</a> Rheumatology. 45 (8), 1039-1041 (2006).</li><li>Frallonardo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+calcium+phosphate+and+pyrophosphate+crystals+in+early+and+late+osteoarthritis:+relationship+with+clinical+indices+and+inflammation.">Basic calcium phosphate and pyrophosphate crystals in early and late osteoarthritis: relationship with clinical indices and inflammation.</a> Clinical Rheumatology. 37 (10), 2847-2853 (2018).</li><li>Nalbant, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synovial+fluid+features+and+their+relations+to+osteoarthritis+severity:+new+findings+from+sequential+studies.">Synovial fluid features and their relations to osteoarthritis severity: new findings from sequential studies.</a> Osteoarthritis Cartilage. 11 (1), 50-54 (2003).</li><li>Fuerst, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcification+of+articular+cartilage+in+human+osteoarthritis.">Calcification of articular cartilage in human osteoarthritis.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 60 (9), 2694-2703 (2009).</li><li>Campillo-Gimenez, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+potential+of+four+different+phases+of+calcium+pyrophosphate+relies+on+NF-&#954;B+activation+and+MAPK+pathways.">Inflammatory potential of four different phases of calcium pyrophosphate relies on NF-&#954;B activation and MAPK pathways.</a> Frontiers in Immunology. 9, 2248 (2018).</li><li>Paz&#225;r, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+calcium+phosphate+crystals+induce+monocyte/macrophage+IL-1&#946;+secretion+through+the+NLRP3+inflammasome+in+vitro.">Basic calcium phosphate crystals induce monocyte/macrophage IL-1&#946; secretion through the NLRP3 inflammasome in vitro.</a> The Journal of Immunology. 186 (4), 2495-2502 (2011).</li><li>Mart&#237;n, M. J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+cell+count+in+body+fluids:+a+review.">Automated cell count in body fluids: a review.</a> Advances in Laboratory Medicine. 2, 149-161 (2021).</li><li>Seghezzi, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+cellular+analysis+of+synovial+fluids+by+optical+microscopy+and+automated+count+using+the+Sysmex+XN+body+fluid+mode.">Optimization of cellular analysis of synovial fluids by optical microscopy and automated count using the Sysmex XN body fluid mode.</a> Clinica Chimica Acta. 462, 41-48 (2016).</li><li>Reginato, A. J., Maldonado, I., Reginato, A. M., Falasca, G. F., O'Connor, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supravital+staining+of+synovial+fluid+with+Testsimplets.">Supravital staining of synovial fluid with Testsimplets.</a> Diagnostic Cytopathology. 8 (2), 147-152 (1992).</li><li>Lumbreras, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+for+crystals+in+synovial+fluid:+training+of+the+analysts+results+in+high+consistency.">Analysis for crystals in synovial fluid: training of the analysts results in high consistency.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 64 (4), 612-615 (2005).</li><li>Tieng, A., Franchin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knee+arthrocentesis+in+adults.">Knee arthrocentesis in adults.</a> Journal of Visualized Experiments. , e63135 (2022).</li><li>Punzi, L., Oliviero, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arthrocentesis+and+synovial+fluid+analysis+in+clinical+practice:+value+of+sonography+in+difficult+cases.">Arthrocentesis and synovial fluid analysis in clinical practice: value of sonography in difficult cases.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1154 (1), 152-158 (2009).</li><li>Schumacher, H. R., Reginato, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Atlas of Synovial Fluid Analysis and Crystal Identification. , (1991).</li><li>Mopin, A., Driss, V., Brinster, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+protocol+for+characterizing+the+murine+C1498+cell+line+and+its+associated+leukemia+mouse+model.">Detailed protocol for characterizing the murine C1498 cell line and its associated leukemia mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments. (116), e54270 (2016).</li><li>Oliviero, F., Punzi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basics+of+Polarized+Light+Microscopy.">Basics of Polarized Light Microscopy.</a> Synovial Fluid Analysis and the Evaluation of Patients with Arthritis. , 79-90 (2022).</li><li>Paul, H., Reginato, A. J., Schumacher, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alizarin+red+S+staining+as+a+screening+test+to+detect+calcium+compounds+in+synovial+fluid.">Alizarin red S staining as a screening test to detect calcium compounds in synovial fluid.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 26 (2), 191-200 (1983).</li><li>Favero, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synovial+fluid+fetuin-A+levels+in+patients+affected+by+osteoarthritis+with+or+without+evidence+of+calcium+crystals.">Synovial fluid fetuin-A levels in patients affected by osteoarthritis with or without evidence of calcium crystals.</a> Rheumatology. 58 (4), 729-730 (2019).</li><li>Frallonardo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+calcium+crystals+in+knee+osteoarthritis+synovial+fluid:+a+comparison+between+polarized+light+and+scanning+electron+microscopy.">Detection of calcium crystals in knee osteoarthritis synovial fluid: a comparison between polarized light and scanning electron microscopy.</a> Journal of Clinical Rheumatology. 22 (7), 369-371 (2016).</li><li>Peffers, M. J., Smagul, A., Anderson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+analysis+of+synovial+fluid:+current+and+potential+uses+to+improve+clinical+outcomes.">Proteomic analysis of synovial fluid: current and potential uses to improve clinical outcomes.</a> Expert Review of Proteomics. 16 (4), 287-302 (2019).</li></ol>

I OA bidrar SF-analyse til å definere sykdomskarakteristika gjennom enkle trinn: totalt og differensielt leukocyttall og søk etter krystaller, inkludert CPP og BCP. Videre kan påvisning av MSU-krystaller fremheve viktige komorbiditeter.
Til tross for lave kostnader og enkel utførelse, kan følsomheten av testene og påliteligheten av resultatene påvirkes på grunn av uerfarne analytikere, hovedsakelig når det gjelder krystallidentifikasjon. Opplæring og erfaring fra analytikeren er avgj...

Osteoartrose (OA) er en kompleks og multifaktoriell kronisk leddsykdom, med en estimert samlet global prevalens på 16 % hos personer over 15 år og 23 % hos personer over40 år 1. Forekomsten av OA forventes å øke på grunn av en aldrende befolkning og en økning i risikofaktorer, som fedme og metabolsk syndrom2.
Blant de store problemene forbundet med OA er vanskeligheten med å diagnostisere sykdommen i sine tidlige stadier og tilgjengelige behandlinger begrenset til smertebehandling og symptomatiske langsomtvirkende stoffer (SYSADOAer) som glykosaminoglykaner. Diagnosen OA er basert på kliniske symptomer og bildefunn. Manglende samsvar mellom de to utredningene kan imidlertid føre til flere års forsinkelse i OA-diagnostikk og behandlingsstart2. OA er preget av degenerative prosesser og lavgradig betennelse, som lett kan undersøkes via synovialvæske (SF) analyse. SF er et viskøst plasmatisk dialysat rik på hyaluronsyre, som smører leddrommet, gir næringsstoffer og oksygen til brusk og fjerner metabolsk avfall. SF fungerer også som en støtdemper, og beskytter dermed leddene under stress og belastning3.
SF-analyse er en enkel og pålitelig metode som alltid må utføres under den første evalueringen av pasienter med muskel- og skjelettplager og leddvæsker3. Anbefalinger fra American College of Rheumatology, British Society for Rheumatology, og andre inkluderer SF-analyse blant diagnostisk testing for revmatiske sykdommer som må utføres hovedsakelig ved evaluering av akutt monoartritt 4,5. Totalt og differensielt leukocyttall oppnådd fra SF-analyse gir et øyeblikksbilde av den patologiske prosessen som forekommer i leddet, og klassifiserer dermed graden av betennelse. Identifisering av patogene krystaller, slik som mononatriumurat (MSU) og kalsiumpyrofosfat (CPP) krystaller, under polarisert lys, er avgjørende for diagnostisering og behandling av krystallartritt (f.eks. Gikt og pseudogout). Videre antyder tilstedeværelsen av mikroorganismer en diagnose av septisk artritt.
Kalsiumkrystaller er hyppige i prøver samlet inn fra pasienter med OA6. Basiske kalsiumfosfatkrystaller (BCP) og CPP er rapportert i henholdsvis ca. 22 % og 23 % av SF-prøvene fra pasienter med OA6. Selv om deres rolle fortsatt er uklar, har disse krystallene vært assosiert med mer alvorlige former for OA7 og regnes som et epifenomen av selve den patologiske prosessen. Kalsiumkrystaller er påvist i 100% av vevsprøver fra OA-pasienter som gjennomgår kneproteser8. Videre har det blitt antatt at kalsiumkrystaller kan være involvert i patogenesen av OA på grunn av deres inflammatoriske effekter, demonstrert av flere studier9 og mediert, i det minste delvis, av NLRP3-inflammasomet10.
Mer nylig har kalsiumkrystaller blitt beskrevet i både tidlige og sene stadier6 av OA, noe som indikerer at de kan spille en viktig rolle i diagnostisering av forskjellige kliniske undergrupper av OA og farmakologisk behandling.
Det overordnede målet med SF-analyse er todelt: å bestemme den inflammatoriske graden av SF og å diagnostisere krystall- eller septisk artritt ved å identifisere spesifikke krystaller eller mikroorganismer. Det er et spesielt nyttig, enkelt og pålitelig verktøy for å diagnostisere OA, på grunn av det typiske ikke-inflammatoriske mønsteret med en svært lav prosentandel eller fravær av nøytrofiler.
Fordeler fremfor alternative teknikker SF-analyse består av enkle prosedyrer som inkluderer totalt og differensialt leukocyttall og krystallsøk. Manuell celletelling utført av ekspertlaboratorieteknikere 3,11 forblir gullstandarden for cytologisk analyse av synoviale og andre kroppsvæsker. På grunn av den tidkrevende begrensningen og variasjonen mellom og intraobservatører i denne metoden, har automatiserte celletellere gradvis erstattet manuell telling i store rutinemessige kliniske laboratorier der blod- og urinanalysatorer har blitt tilpasset for å muliggjøre SF-analyse11,12. Likevel gir manuell telling noen fordeler i spesifikke innstillinger: (1) i ambulatoriet, for å oppnå en total og differensial WBC-verdi i tide; (2) å identifisere celletyper som cytofagocytiske mononukleære (Reiter) celler eller ikke-hematopoietiske celler som synoviocytter, som automatiserte tellere ikke kan gjenkjenne; (3) når prøven er for liten til å håndteres av instrumentet; (4) å opprette lokale laboratorieregistre som er lett tilgjengelige for forskningsformål. En annen fordel med manuell telling er sett insupravital farging, en metode som gjør det mulig å differensiere celler veldig raskt og umiddelbart etter glassglassforberedelse. I motsetning til dette krever tradisjonelle farginger, som Wright og May-Grünwald-Giemsa-prosedyrene, lufttørkede SF-utstryk og tid til å farge cellene13. Selv om de ikke er egnet for tidssensitive rutineanalyser, avslører disse fargemetodene mer detaljerte cellepopulasjoner i prøven, inkludert erytrocytter, basofiler, eosinofiler, polymorfonukleære leukocytter, lymfocytter og blodplater.
Til slutt utføres rutinemessig SF-analyse for krystaller ved hjelp av en enkel teknikk basert på polarisert lysmikroskopi, som gir raske resultater14. Alternative metoder, som skanning og elektronmikroskopi, gir mer nøyaktige og følsomme resultater, men deres bruk i daglig klinisk praksis er ikke mulig på grunn av høye kostnader og tidkrevende prøvepreparering og analyse.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alizarin red S</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A5533</td>
			<td>For BCP crystal search</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Burker chamber</td>
			<td>Merck</td>
			<td>BR718905</td>
			<td>For total white blood cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glasses</td>
			<td>Merck</td>
			<td>C7931</td>
			<td>For microscopic examination&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA tubes</td>
			<td>BD</td>
			<td>368861</td>
			<td>For SF collection&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides&#160;</td>
			<td>Merck</td>
			<td>S8902</td>
			<td>For crystal search</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lambda filter (compensator)</td>
			<td>Any&#160;</td>
			<td>Refer to microscope company</td>
			<td>For crystal identification&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malassez-Potain pipette</td>
			<td>Artiglass</td>
			<td>54830000</td>
			<td>For dilution of synovial fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene blue solution</td>
			<td>Merck</td>
			<td>3978</td>
			<td>For total white blood cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarized microscope&#160;</td>
			<td>Leica, Nikon, others</td>
			<td>Depending on the model and company</td>
			<td>For complete synovial fluid analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarizing lens</td>
			<td>Any&#160;</td>
			<td>Refer to microscope company</td>
			<td>For crystal identification&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Testsimplet&#160;</td>
			<td>Waldeck</td>
			<td>14386</td>
			<td>Supravital staining for cell differentiation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

synovial fluid analysis to identify osteoarthritis

Leddvæske (SF) analyse er viktig i diagnostisering av slitasjegikt (OA). Makroskopiske og mikroskopiske egenskaper, inkludert totalt og differensielt antall hvite blodlegemer (WBC), bidrar til å definere den ikke-inflammatoriske naturen til SF, som er et kjennetegn for OA. Hos pasienter med OA overstiger WBC i SF-prøver vanligvis ikke 2000 celler per mikroliter, og prosentandelen inflammatoriske celler, som nøytrofiler, er svært lav eller fraværende. Kalsiumkrystaller er hyppige i SF samlet fra OA-pasienter. Selv om deres rolle i patogenesen av OA fortsatt er uklar, har de vært assosiert med en mild inflammatorisk prosess og en mer alvorlig sykdomsprogresjon. Nylig har kalsiumkrystaller blitt beskrevet i både de tidlige og sene stadiene av OA, noe som indikerer at de kan spille en viktig rolle i å diagnostisere forskjellige kliniske undergrupper av OA og farmakologisk behandling. Det overordnede målet med SF-analyse i OA er todelt: å fastslå den ikke-inflammatoriske graden av SF og å markere tilstedeværelsen av kalsiumkrystaller.

Store ledd påvirket av OA er ofte hovne og produserer betydelige mengder SF, som dreneres via artrocentese15. De makroskopiske egenskapene til SF evaluert umiddelbart etter artrocentese inkluderer i hovedsak mengden, fargen, klarheten og viskositeten17. Til tross for deres lave spesifisitet, gir de foreløpige data om graden av betennelse. Fargen avhenger av SF-cellularitet og graden av fragmentering av ekstracellulære matriksmakromolekyler. SF samlet fra pasient...

Watch this Scientific Journal Video about Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis at JoVE.com

Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis

Synovialvæskeanalyse under overført, polarisert og kompensert lysmikroskopi brukes til å evaluere den inflammatoriske eller ikke-inflammatoriske naturen til en prøve gjennom enkle trinn. Det er spesielt nyttig i slitasjegikt for å oppdage kalsiumkrystaller og identifisere en mer alvorlig delmengde av slitasjegikt.

Synovialvæskeanalyse for å identifisere slitasjegikt

Synovial fluid (SF) analysis is important in diagnosing osteoarthritis (OA). Macroscopic and microscopic features, including total and differential white ...

Synovialvæskeanalyse kan avsløre graden av betennelse og tilstedeværelsen av patogene krystaller under den første evalueringen av pasient med muskuloskeletale symptomer og leddeffusjoner. Den største fordelen med denne teknikken er dens enkelhet og pålitelighet. I noen få trinn kan klinikeren få viktig diagnostisk informasjon om pasientens sykdom.Identifisering av spesifikke krystaller er avgjørende for diagnose og behandling. Uratkrystaller indikerer gikt, mens kalsiumpyrofosfat og andre kalsiumkrystaller indikerer kalsiumrelaterte artropatier eller en mer alvorlig form for slitasjegikt. For å begynne, ta synovialvæskeprøven samlet under artrocentese av hovne ledd hos pasienter.Kommenter volumet av prøven i milliliter og overfør det separat til et rør som inneholder antikoagulant EDTA og et annet rør uten tilsetningsstoff. Ved mistanke om infeksjon overføres aseptisk noen få milliliter av leddvæskeprøven til en dyrkningsflaske for mikrobiologisk testing. For å undersøke prøven makroskopisk, ta et rør som inneholder prøven og definer fargen på prøven, som kan variere fra blek til mørk gul.Registrer tilstedeværelsen av blod, hvis noen. Definer graden av klarhet i prøven ved å observere den i bakgrunnsbelysningen og ved å bestemme hvor enkelt det er å lese en utskrevet side gjennom røret som inneholder prøven. Vurder deretter viskositeten til prøven ved å dryppe den fra en engangspipette.Mens utseendet på en lang væskestreng indikerer høy viskositet, er dannelsen av dråper indikativ for lav viskositet. Følg prøven gjennom røret med lys i bakgrunnen for tilstedeværelse av partikler, inkludert vevsfragmenter eller fibrin. For å bestemme totalt antall hvite blodlegemer, trekk 0,5 mikroliter av prøven fra røret som inneholder EDTAA ved hjelp av en Malassez-Potain pipette.Bruk samme pipette til å trekke 9,5 mikroliter 0,1% metylenblå løsning. Bland prøven og metylenblå oppløsning i pipetten ved forsiktig inversjon. Kast de første dråpene før du heller blandingen i tellekammeret til et hemocytometer.Tell nå cellene i to påfølgende firkanter ut av ni og multipliser det oppnådde tallet med 100. Express totalt antall hvite blodlegemer som antall leukocytter per kubikkmillimeter. Bruk synovialvæskeprøven fra røret uten tilsetningsstoff for å bestemme differensialantallet hvite blodlegemer i synovialvæskeprøvene.For å bestemme differensialcelletallet ved hjelp av supravital farging, ta et klart lysbilde forhåndsbelagt med krystallfiolett og metylenblått og plasser en liten dråpe prøve i midten av lysbildet. Deretter dekker du prøvedråpen med en dekselslip og legger en dråpe mikroskop nedsenkningsolje på dekselet. For å bruke tradisjonell farging for å estimere differensialcelletallet, begynn med å sette en liten dråpe av prøven på slutten av et rent lysbilde.Bruk nå et ekstra lysbilde eller en coverslip for å spre slippet langs lysbildet med en fremoverbevegelse. La smøret tørke i luften. Undersøk lysbildet som inneholder lufttørket smøring under 1.000X olje nedsenking mål.Beregn differensialcelletallet ved å telle 100 påfølgende celler mens du skiller polymorfonukleære celler, monocytter og lymfocytter fra hverandre. Rengjør et lysbilde med optisk eller mykt papir imbibed med etanol. Påfør en liten dråpe av prøven som ikke er blandet med noe tilsetningsstoff på glassglasset og dekk det med et deksel før du plasserer lysbildet under mikroskopet.Fokuser lysbildet under mikroskopet ved hjelp av et mål om lav effektforstørrelse og undersøk det nøye under et lyst felt med et 40X-mål. Se på innsiden og utsiden av cellene for å identifisere krystallene i henhold til deres størrelse og form, som kan være rhomboidal, nålformet eller stangformet. Sett deretter polariseringsfilteret mellom lyskilden og prøven.For å lage en mørk bakgrunn, roter polarisatoren til den optiske aksen er vinkelrett på analysatoren. Når en birefringent krystall er identifisert, sett kompensatoren mellom polarisatoren og prøven og flytt den parallelt eller vinkelrett på krystallens optiske akse. Vær oppmerksom på fargen avslørt av krystallet.For Alizarin Red-farging, bland en dråpe av synovialvæskeprøven med et like volum tidligere tilberedt Alizarin Red-løsning på et rent lysbilde. Dekk lysbildet med en dekselslip og undersøk ved 400X forstørrelse under et mikroskop for å identifisere krystallene. De makroskopiske egenskapene til synovialvæskeprøver indikerte graden av betennelse.En prøve med blekgul farge og mer klarhet er vanligvis forbundet med ikke-inflammatoriske tilstander som slitasjegikt. På den annen side indikerer en prøve med mørk gul farge og et uklart utseende tilstedeværelsen av celler, rusk, hyaluronsyre og fibrinfragmenter som er forbundet med inflammatoriske effusjoner. Leukocyttene observert i synovialvæskeprøver fra osteoarthritis-pasienter var for det meste monocytter og andre mononukleære celler som synoviocytter.Kalsiumpyrofosfatkrystaller ble påvist i leddvæskeprøver som indikerer relativt høyere nivåer av inflammatoriske cytokiner. Videre avslørte en positiv Alizarin Red-farging tilstedeværelsen av basiske kalsiumfosfatkrystaller i prøvene. Det er veldig viktig å nøye undersøke lysbildet under vanlig lys når du søker etter krystaller.Husk at pyrofosfatkrystaller ofte er svakt birefringent og kan bli savnet under polarisert lys. Tilstedeværelsen av kalsiumkrystaller i synovialvæske og deres tilknytning til mer alvorlig sykdomsform har ført forskere til å utforske nye mekanismer i patogenesen og utviklingen av slitasjegikt.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation and Cellular Phenotyping of Mesenchymal Stem Cells Derived from Synovial Fluid and Bone Marrow of Minipigs

Isolasjon og Cellular fenotyping av stamceller Avledet fra leddvæske og benmarg av minigriser

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been established after isolation from various tissue sources, including bone marrow and synovial fluid. Recently, ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cell Subsets within the Murine Spleen, Bone Marrow, Lymph Nodes and Synovial Tissue in an Osteoarthritis Model

Flow Cytometry Analyse av immuncelle undergrupper innenfor Murine Milten, Benmarg, Lymfeknuter og synovialvev i en slitasjegikt modell

Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent musculoskeletal diseases, affecting patients suffering from pain and physical limitations. Recent ...

Evaluation of Fluid Overload by Bioelectrical Impedance Vectorial Analysis

Evaluering av væskeoverbelastning ved bioelektrisk impedans vektoriell analyse

Early detection and management of fluid overload are critically important in acute illness, as the impact of therapeutic intervention can result in ...

Ameliorating Osteoarthritis in Mice Using Silver Nanoparticles

Forbedring av slitasjegikt hos mus ved hjelp av sølvnanopartikler

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most commonly encountered degenerative diseases of the joints in people over 45 years of age. Currently, there are ...

Standardized Tuina Manipulation for Knee Osteoarthritis in Rats

Tuina Manipulation to Reduce Inflammation and Cartilage Loss in Knee Osteoarthritis Rats

Understanding the Mechanism of Tuina Manipulation in Rats (Video) | JoVE

Tuina manipulasjon for å redusere betennelse og brusk tap i kneet slitasjegikt rotter

Clinical trials suggest that Tuina manipulation is effective in treating knee osteoarthritis (KOA), while further studies are required to discover its ...

Performing Fu's Subcutaneous Needling for Degenerative Knee Osteoarthritis

Performing Fu's Subcutaneous Needling for Degenerative Knee Osteoarthritis (Video) | JoVE 

Utfører Fus subkutane nåling for degenerativ kneartrose

Treating Knee Osteoarthritis with Tuina in a Rabbit Model

Tuina Intervention in Rabbit Model of Knee Osteoarthritis

Using a Rabbit Model to Explore the Efficacy of Tuina in Treating Knee Osteoarthritis (Video) | JoVE

Tuina-intervensjon i kaninmodell av knet artrose

Knee osteoarthritis (KOA) is mainly characterized by degenerative changes in the knee joint's cartilage and surrounding soft tissues. The efficacy of ...

Experimental Modeling of Knee Osteoarthritis in Rats

Experimental Modeling of Knee Osteoarthritis in Rats (Video) | JoVE 

Eksperimentell modellering av knet artrose hos rotter

A Reproducible Cartilage Impact Model to Generate Post-Traumatic Osteoarthritis in the Rabbit

En reproduserbar bruskpåvirkningsmodell for å generere posttraumatisk slitasjegikt hos kaninen

Post-traumatic osteoarthritis (PTOA) is responsible for 12% of all osteoarthritis cases in the United States. PTOA can be initiated by a single traumatic ...

Therapeutic Potential of Tuina Massage for Knee Osteoarthritis

Tuina Intervention in Sodium Monoiodoacetate Injection-Induced Rat Model of Knee Osteoarthritis

Treating Knee Osteoarthritis with Tuina - A New Perspective (Video) | JoVE

Tuina-intervensjon i natriummonoiodoacetat injeksjon-indusert rottemodell av knet artrose

Knee osteoarthritis (KOA), a common degenerative joint disorder, is characterized by chronic pain and disability, which can progress to irreparable ...