Name: synovial fluid analysis to identify osteoarthritis
Uploaded: 2022-10-20T14:30:00
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Os autores agradecem ao Professor Leonardo Punzi por sua preciosa orientação no campo da análise do líquido sinovial e ao Hospital Universitário de Padova por seu apoio.

O presente protocolo está de acordo com as diretrizes do Comitê de Ética do Hospital Universitário de Padova. A DC foi coletada com o consentimento do paciente das articulações do joelho de pacientes que receberam artrocentese terapêutica para derrame articular em sua apresentação inicial à clínica ou em resposta a um surto artrítico. As contraindicações ao procedimento foram: coagulopatia, medicações anticoagulantes, lesões cutâneas, dermatite ou celulite sobrejacente à articulação. Todas as amostra...

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Na OA, a análise das DC ajuda a definir as características da doença por meio de etapas simples: contagem total e diferencial de leucócitos e pesquisa de cristais, incluindo PPC e BCP. Além disso, a detecção de cristais de MSU pode evidenciar comorbidades importantes.
Apesar dos baixos custos e da simples execução, a sensibilidade dos testes e a confiabilidade dos resultados podem ser afetadas devido à inexperiência dos analistas, principalmente no que se refere à identificação d...

A osteoartrite (OA) é uma doença articular crônica complexa e multifatorial, com prevalência global combinada estimada de 16% em indivíduos com 15 anos ou mais e 23% em indivíduos com 40 anos ou mais1. Espera-se que a incidência de OA aumente devido ao envelhecimento da população e ao aumento de fatores de risco, como obesidade e síndromemetabólica2.
Entre os principais problemas associados à OA estão a dificuldade no diagnóstico da doença em seus estágios iniciais e os tratamentos atualmente disponíveis limitados ao controle da dor e aos medicamentos sintomáticos de ação lenta (SYSADOAs), como os glicosaminoglicanos. O diagnóstico da OA baseia-se nos sintomas clínicos e nos achados de imagem. No entanto, a falta de correlação entre as duas avaliações pode causar anos de atraso no diagnóstico da OA e no início do tratamento2. A OA é caracterizada por processos degenerativos e inflamação de baixo grau, que podem ser facilmente investigados por meio da análise do líquido sinovial (FS). A SF é um dialisato plasmático viscoso rico em ácido hialurônico, que lubrifica o espaço articular, fornece nutrientes e oxigênio à cartilagem e remove resíduos metabólicos. O SF também atua como amortecedor, protegendo as articulações durante o estresse e a deformação3.
A análise das DC é um método simples e confiável, que deve ser sempre realizado durante a avaliação inicial de pacientes com sintomas musculoesqueléticos e derramesarticulares3. Recomendações do American College of Rheumatology, da British Society for Rheumatology e outras incluem a análise de FS entre os testes diagnósticos para doenças reumáticas que devem ser realizados principalmente na avaliação da monoartriteaguda4,5. As contagens totais e diferenciais de leucócitos obtidas a partir da análise de DC fornecem um instantâneo do processo patológico que ocorre na articulação, classificando assim o grau de inflamação. A identificação de cristais patogênicos, como urato monossódico (MSU) e pirofosfato de cálcio (CPP), sob luz polarizada, é vital no diagnóstico e tratamento da artrite cristalina (por exemplo, gota e pseudogota). Além disso, a presença de microrganismos sugere o diagnóstico de artrite séptica.
Cristais de cálcio são frequentes em amostras coletadas de pacientes comOA6. Cristais básicos de fosfato de cálcio (BCP) e PPC foram relatados em aproximadamente 22% e 23% das amostras de SF, respectivamente, de pacientes com OA6. Embora seu papel ainda não esteja claro, esses cristais têm sido associados a formas mais graves de OA7 e são considerados um epifenômeno do próprio processo patológico. Cristais de cálcio foram detectados em 100% das amostras teciduais de pacientes com OA submetidos a artroplastia de joelho8. Além disso, foi levantada a hipótese de que cristais de cálcio possam estar envolvidos na patogênese da OA devido aos seus efeitos inflamatórios, demonstrados por vários estudos9 e mediados, pelo menos em parte, pelo inflamassoma NLRP310.
Mais recentemente, cristais de cálcio têm sido descritos em estágios iniciais e tardios6 da OA, indicando que eles podem desempenhar um papel vital no diagnóstico de diferentes subgrupos clínicos de OA e no tratamento farmacológico.
O objetivo geral da análise de DC é duplo: determinar o grau inflamatório de DC e diagnosticar artrite cristalina ou séptica por meio da identificação de cristais ou micro-organismos específicos. É uma ferramenta particularmente útil, simples e confiável no diagnóstico da OA, devido ao padrão não inflamatório típico com uma porcentagem muito baixa ou ausência de neutrófilos.
Vantagens sobre técnicas alternativas A análise de FF consiste em procedimentos simples que incluem contagem total e diferencial de leucócitos e busca de cristais. A contagem manual de células realizada por técnicos de laboratório especializados 3,11 continua sendo o padrão-ouro para a análise citológica de fluidos sinoviais e outros fluidos corporais. No entanto, devido à limitação demorada e à variabilidade inter e intraobservador desse método, os contadores automáticos de células têm gradualmente substituído a contagem manual em grandes laboratórios clínicos de rotina, onde analisadores de sangue e urina foram adaptados para permitir a análise de FS11,12. No entanto, a contagem manual apresenta algumas vantagens em configurações específicas: (1) no ambulatório, para obter um valor total e diferencial de leucócitos no tempo; (2) identificar tipos celulares como células mononucleares citofagocíticas (Reiter) ou células não hematopoiéticas como sinoviócitos, que contadores automatizados não conseguem reconhecer; (3) quando a amostra é muito pequena para ser manipulada pelo instrumento; (4) criar registros laboratoriais locais de fácil acesso para fins de pesquisa. Outra vantagem da contagem manual é a coloração insupravital, um método que permite a diferenciação das células de forma muito rápida e imediata após a preparação da lâmina de vidro. Por outro lado, colorações tradicionais, como as de Wright e May-Grünwald-Giemsa, requerem esfregaços de SF secos ao ar e tempo para corar as células13. Embora não sejam adequados para análises de rotina sensíveis ao tempo, esses métodos de coloração revelam populações celulares mais detalhadas na amostra, incluindo eritrócitos, basófilos, eosinófilos, leucócitos polimorfonucleares, linfócitos e plaquetas.
Finalmente, a análise rotineira de SF para cristais é realizada por meio de uma técnica simples baseada em microscopia de luz polarizada, que proporciona resultados rápidos14. Métodos alternativos, como a microscopia de varredura e a microscopia eletrônica, produzem resultados mais precisos e sensíveis, mas seu uso na prática clínica diária não é viável devido aos altos custos e ao demorado preparo e análise das amostras.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alizarin red S</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A5533</td>
			<td>For BCP crystal search</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Burker chamber</td>
			<td>Merck</td>
			<td>BR718905</td>
			<td>For total white blood cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glasses</td>
			<td>Merck</td>
			<td>C7931</td>
			<td>For microscopic examination&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA tubes</td>
			<td>BD</td>
			<td>368861</td>
			<td>For SF collection&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides&#160;</td>
			<td>Merck</td>
			<td>S8902</td>
			<td>For crystal search</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lambda filter (compensator)</td>
			<td>Any&#160;</td>
			<td>Refer to microscope company</td>
			<td>For crystal identification&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malassez-Potain pipette</td>
			<td>Artiglass</td>
			<td>54830000</td>
			<td>For dilution of synovial fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene blue solution</td>
			<td>Merck</td>
			<td>3978</td>
			<td>For total white blood cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarized microscope&#160;</td>
			<td>Leica, Nikon, others</td>
			<td>Depending on the model and company</td>
			<td>For complete synovial fluid analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarizing lens</td>
			<td>Any&#160;</td>
			<td>Refer to microscope company</td>
			<td>For crystal identification&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Testsimplet&#160;</td>
			<td>Waldeck</td>
			<td>14386</td>
			<td>Supravital staining for cell differentiation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

synovial fluid analysis to identify osteoarthritis

A análise do líquido sinovial (FS) é importante no diagnóstico da osteoartrite (OA). Características macroscópicas e microscópicas, incluindo contagem total e diferencial de leucócitos, ajudam a definir a natureza não inflamatória da FS, que é uma característica da OA. Em pacientes com OA, leucócitos em amostras de SF geralmente não excede 2000 células por microlitro, e a porcentagem de células inflamatórias, como neutrófilos, é muito baixa ou ausente. Cristais de cálcio são frequentes em FS coletadas de pacientes com OA. Embora seu papel na patogênese da OA ainda não esteja claro, eles têm sido associados a um processo inflamatório leve e a uma progressão mais grave da doença. Recentemente, cristais de cálcio têm sido descritos tanto na fase precoce quanto na tardia da OA, indicando que eles podem desempenhar um papel vital no diagnóstico de diferentes subgrupos clínicos de OA e no tratamento farmacológico. O objetivo geral da análise de DC na OA é duplo: verificar o grau não inflamatório de DC e destacar a presença de cristais de cálcio.

Grandes articulações afetadas pela OA são frequentemente inchadas e produzem quantidades significativas de FS, que são drenadas por artrocentese15. As características macroscópicas das DC avaliadas imediatamente após a artrocentese incluem essencialmente a quantidade, cor, claridade e viscosidade17. Apesar de sua baixa especificidade, eles fornecem dados preliminares sobre o grau de inflamação. A cor depende da celularidade do SF e do grau de fragmentaçã...

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Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis

A análise do líquido sinovial sob microscopia de luz transmitida, polarizada e compensada é usada para avaliar a natureza inflamatória ou não inflamatória de uma amostra através de etapas simples. É particularmente útil na osteoartrite para detectar cristais de cálcio e identificar um subgrupo mais grave de osteoartrite.

Análise do líquido sinovial para identificar osteoartrite

Synovial fluid (SF) analysis is important in diagnosing osteoarthritis (OA). Macroscopic and microscopic features, including total and differential white ...

A análise do líquido sinovial pode revelar o grau de inflamação e a presença de cristais patogênicos durante a avaliação inicial de pacientes com sintomas musculoesqueléticos e derrames articulares. A principal vantagem desta técnica é a sua simplicidade e confiabilidade. Em poucos passos, o clínico pode obter informações diagnósticas importantes sobre a doença do paciente.A identificação de cristais específicos é fundamental para o diagnóstico e tratamento. Cristais de urato indicam gota, enquanto pirofosfato de cálcio e outros cristais de cálcio indicam artropatias relacionadas ao cálcio ou uma forma mais grave de osteoartrite. Para começar, pegue a amostra de líquido sinovial coletada durante a artrocentese de articulações inchadas dos pacientes.Anote o volume da amostra em mililitros e transfira-a separadamente para um tubo contendo EDTA anticoagulante e outro tubo sem qualquer aditivo. Nos casos suspeitos de infecção, transferir assepticamente alguns mililitros da amostra de líquido sinovial para um frasco de cultura para teste microbiológico. Para examinar macroscopicamente a amostra, pegue um tubo contendo a amostra e defina a cor da amostra, que pode variar de amarelo pálido a amarelo escuro.Registre a presença de sangue, se houver. Defina o grau de clareza da amostra observando-a na luz de fundo e determinando a facilidade de leitura de uma página impressa através do tubo que contém a amostra. Em seguida, avalie a viscosidade da amostra pingando-a de uma pipeta descartável.Enquanto o aparecimento de uma longa cadeia de líquido indica alta viscosidade, a formação de gotas é indicativa de baixa viscosidade. Observe a amostra através do tubo com luz no fundo para a presença de quaisquer materiais particulados, incluindo fragmentos de tecido ou fibrina. Para determinar a contagem total de leucócitos, retire 0,5 microlitros da amostra do tubo contendo EDTAA usando uma pipeta de Malassez-Potain.Use a mesma pipeta para extrair 9,5 microlitros de solução de azul de metileno a 0,1%. Misturar a amostra e a solução de azul de metileno na pipeta por inversão suave. Descarte as primeiras gotas antes de despejar a mistura na câmara de contagem de um hemocitômetro.Agora conte as células em dois quadrados consecutivos de nove e multiplique o número obtido por 100. Expresse a contagem total de glóbulos brancos como o número de leucócitos por milímetro cúbico. Utilizar a amostra de líquido sinovial do tubo sem qualquer aditivo para determinar a contagem diferencial de glóbulos brancos das amostras de líquido sinovial.Para determinar a contagem diferencial de células usando coloração supravital, pegue uma lâmina pronta para uso pré-revestida com violeta de cristal e azul de metileno e coloque uma pequena gota de amostra no centro da lâmina. Em seguida, cubra a gota de amostra com uma lamínula e coloque uma gota de óleo de imersão do microscópio na lamínula. Para usar a coloração tradicional para estimar a contagem diferencial de células, comece colocando uma pequena gota da amostra no final de uma lâmina limpa.Agora use um segundo slide ou uma lamínula para espalhar a gota ao longo do slide com um movimento para frente. Deixe a mancha secar ao ar. Examine a lâmina que contém o esfregaço seco ao ar sob a objetiva de imersão em óleo de 1,000X.Estimar a contagem diferencial de células contando 100 células consecutivas, distinguindo as células polimorfonucleares, os monócitos e os linfócitos uns dos outros. Limpe uma lâmina de vidro com papel óptico ou macio embebido com etanol. Aplicar uma pequena gota da amostra não misturada com qualquer aditivo sobre a lâmina de vidro e cobri-la com uma lamínula antes de colocar a lâmina sob o microscópio.Focalize a lâmina sob o microscópio usando uma objetiva de ampliação de baixa potência e examine-a cuidadosamente sob um campo brilhante com uma objetiva de 40X. Olhe para dentro e para fora das células para identificar os cristais de acordo com seu tamanho e forma, que podem ser romboida, em forma de agulha ou em forma de haste. Em seguida, insira o filtro polarizador entre a fonte de luz e a amostra.Para criar um fundo escuro, gire o polarizador até que seu eixo óptico esteja perpendicular ao analisador. Uma vez identificado um cristal birrefringente, insira o compensador entre o polarizador e o espécime e mova-o paralelo ou perpendicularmente ao eixo óptico do cristal. Observe a cor revelada pelo cristal.Para a coloração de vermelho de alizarina, misturar uma gota da amostra de líquido sinovial com um volume igual de solução de vermelho de alizarina previamente preparada em uma lâmina limpa. Cubra a lâmina com uma lamínula e examine em aumento de 400X sob um microscópio para identificar os cristais. As características macroscópicas das amostras de líquido sinovial indicaram o grau de inflamação.Uma amostra com cor amarelo pálido e mais clareza geralmente está associada a condições não inflamatórias, como osteoartrite. Por outro lado, uma amostra de coloração amarelo-escura e aspecto turvo indica a presença de células, debris, ácido hialurônico e fragmentos de fibrina que estão associados a derrames inflamatórios. Os leucócitos observados nas amostras de líquido sinovial de pacientes com osteoartrite eram, em sua maioria, monócitos e outras células mononucleares como sinoviócitos.Cristais de pirofosfato de cálcio foram detectados em amostras do líquido sinovial, indicando níveis relativamente mais elevados de citocinas inflamatórias. Além disso, a coloração positiva para Vermelho de Alizarina revelou a presença de cristais básicos de fosfato de cálcio nas amostras. É muito importante examinar cuidadosamente a lâmina sob luz comum ao procurar cristais.Lembre-se de que os cristais de pirofosfato são muitas vezes fracamente birrefringentes e podem ser perdidos sob luz polarizada. A presença de cristais de cálcio no líquido sinovial e sua associação com formas mais graves da doença têm levado pesquisadores a explorar novos mecanismos na patogênese e progressão da osteoartrite.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation and Cellular Phenotyping of Mesenchymal Stem Cells Derived from Synovial Fluid and Bone Marrow of Minipigs

Isolation and Cellular fenotipagem de células-tronco mesenquimais derivadas do líquido sinovial e Medula Óssea de miniporcos

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been established after isolation from various tissue sources, including bone marrow and synovial fluid. Recently, ...

Medicina

Flow Cytometry Analysis of Immune Cell Subsets within the Murine Spleen, Bone Marrow, Lymph Nodes and Synovial Tissue in an Osteoarthritis Model

Análise de Citometria de Fluxo de Subconjuntos de Células Imunes dentro do Baço de Murina, Medula Óssea, Linfonodos e Tecido Sinovial em um Modelo de Osteoartrite

Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent musculoskeletal diseases, affecting patients suffering from pain and physical limitations. Recent ...

Evaluation of Fluid Overload by Bioelectrical Impedance Vectorial Analysis

Avaliação da Sobrecarga de Fluidos por Análise Vetorial de Impedância Bioelétrica

Early detection and management of fluid overload are critically important in acute illness, as the impact of therapeutic intervention can result in ...

Ameliorating Osteoarthritis in Mice Using Silver Nanoparticles

Melhorando a osteoartrite em camundongos usando nanopartículas de prata

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most commonly encountered degenerative diseases of the joints in people over 45 years of age. Currently, there are ...

Standardized Tuina Manipulation for Knee Osteoarthritis in Rats

Tuina Manipulation to Reduce Inflammation and Cartilage Loss in Knee Osteoarthritis Rats

Understanding the Mechanism of Tuina Manipulation in Rats (Video) | JoVE

Manipulação de Tuina para Reduzir a Inflamação e Perda de Cartilagem em Ratos com Osteoartrite de Joelho

Clinical trials suggest that Tuina manipulation is effective in treating knee osteoarthritis (KOA), while further studies are required to discover its ...

Performing Fu's Subcutaneous Needling for Degenerative Knee Osteoarthritis

Performing Fu's Subcutaneous Needling for Degenerative Knee Osteoarthritis (Video) | JoVE 

Realizando o agulhamento subcutâneo de Fu para osteoartrite degenerativa do joelho

Treating Knee Osteoarthritis with Tuina in a Rabbit Model

Tuina Intervention in Rabbit Model of Knee Osteoarthritis

Using a Rabbit Model to Explore the Efficacy of Tuina in Treating Knee Osteoarthritis (Video) | JoVE

Intervenção Tuina em Modelo de Osteoartrite de Joelho em Coelhos

Knee osteoarthritis (KOA) is mainly characterized by degenerative changes in the knee joint's cartilage and surrounding soft tissues. The efficacy of ...

Experimental Modeling of Knee Osteoarthritis in Rats

Experimental Modeling of Knee Osteoarthritis in Rats (Video) | JoVE 

Modelagem Experimental da Osteoartrite de Joelho em Ratos

A Reproducible Cartilage Impact Model to Generate Post-Traumatic Osteoarthritis in the Rabbit

Modelo de impacto de cartilagem reprodutível para gerar osteoartrite pós-traumática em coelhos

Post-traumatic osteoarthritis (PTOA) is responsible for 12% of all osteoarthritis cases in the United States. PTOA can be initiated by a single traumatic ...

Therapeutic Potential of Tuina Massage for Knee Osteoarthritis

Tuina Intervention in Sodium Monoiodoacetate Injection-Induced Rat Model of Knee Osteoarthritis

Treating Knee Osteoarthritis with Tuina - A New Perspective (Video) | JoVE

Intervenção Tuina em Modelo de Osteoartrite de Joelho Induzida por Injeção de Monoiodoacetato de Sódio em Rato

Knee osteoarthritis (KOA), a common degenerative joint disorder, is characterized by chronic pain and disability, which can progress to irreparable ...