Name: synovial fluid analysis to identify osteoarthritis
Uploaded: 2022-10-20T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis at JoVE.com

Los autores desean reconocer al profesor Leonardo Punzi por su valiosa tutoría en el campo del análisis del líquido sinovial y al Hospital Universitario de Padua por su apoyo.

El presente protocolo cumple con las directrices del Comité de Ética del Hospital Universitario de Padua. La SF se recogió con el consentimiento del paciente de las articulaciones de la rodilla de los pacientes que recibieron artrocentesis terapéutica para derrame articular en su presentación inicial a la clínica o en respuesta a un brote artrítico. Las contraindicaciones para el procedimiento fueron: coagulopatía, medicamentos anticoagulantes, lesiones cutáneas, dermatitis o celulitis que recubre la articulaci?...

<ol>
	<li>Cui, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional+prevalence,+incidence+and+risk+factors+of+knee+osteoarthritis+in+population-based+studies.">Global, regional prevalence, incidence and risk factors of knee osteoarthritis in population-based studies.</a> EClinicalMedicine. 29, 100587 (2020).</li><li>Hunter, D. J., Bierma-Zeinstra, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoarthritis.">Osteoarthritis.</a> Lancet. 393 (10182), 1745-1759 (2019).</li><li>Mandell, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Synovial Fluid Analysis and the Evaluation of Patients with Arthritis. , (2022).</li><li>Schmerling, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+initial+evaluation+of+the+adult+patient+with+acute+musculoskeletal+symptoms.">Guidelines for the initial evaluation of the adult patient with acute musculoskeletal symptoms.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 39 (1), 1-8 (1996).</li><li>Coakley, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RCGP+and+BSAC+guidelines+for+management+of+the+hot+swollen+joint+in+adults.">RCGP and BSAC guidelines for management of the hot swollen joint in adults.</a> Rheumatology. 45 (8), 1039-1041 (2006).</li><li>Frallonardo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+calcium+phosphate+and+pyrophosphate+crystals+in+early+and+late+osteoarthritis:+relationship+with+clinical+indices+and+inflammation.">Basic calcium phosphate and pyrophosphate crystals in early and late osteoarthritis: relationship with clinical indices and inflammation.</a> Clinical Rheumatology. 37 (10), 2847-2853 (2018).</li><li>Nalbant, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synovial+fluid+features+and+their+relations+to+osteoarthritis+severity:+new+findings+from+sequential+studies.">Synovial fluid features and their relations to osteoarthritis severity: new findings from sequential studies.</a> Osteoarthritis Cartilage. 11 (1), 50-54 (2003).</li><li>Fuerst, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcification+of+articular+cartilage+in+human+osteoarthritis.">Calcification of articular cartilage in human osteoarthritis.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 60 (9), 2694-2703 (2009).</li><li>Campillo-Gimenez, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+potential+of+four+different+phases+of+calcium+pyrophosphate+relies+on+NF-&#954;B+activation+and+MAPK+pathways.">Inflammatory potential of four different phases of calcium pyrophosphate relies on NF-&#954;B activation and MAPK pathways.</a> Frontiers in Immunology. 9, 2248 (2018).</li><li>Paz&#225;r, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+calcium+phosphate+crystals+induce+monocyte/macrophage+IL-1&#946;+secretion+through+the+NLRP3+inflammasome+in+vitro.">Basic calcium phosphate crystals induce monocyte/macrophage IL-1&#946; secretion through the NLRP3 inflammasome in vitro.</a> The Journal of Immunology. 186 (4), 2495-2502 (2011).</li><li>Mart&#237;n, M. J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+cell+count+in+body+fluids:+a+review.">Automated cell count in body fluids: a review.</a> Advances in Laboratory Medicine. 2, 149-161 (2021).</li><li>Seghezzi, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+cellular+analysis+of+synovial+fluids+by+optical+microscopy+and+automated+count+using+the+Sysmex+XN+body+fluid+mode.">Optimization of cellular analysis of synovial fluids by optical microscopy and automated count using the Sysmex XN body fluid mode.</a> Clinica Chimica Acta. 462, 41-48 (2016).</li><li>Reginato, A. J., Maldonado, I., Reginato, A. M., Falasca, G. F., O'Connor, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supravital+staining+of+synovial+fluid+with+Testsimplets.">Supravital staining of synovial fluid with Testsimplets.</a> Diagnostic Cytopathology. 8 (2), 147-152 (1992).</li><li>Lumbreras, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+for+crystals+in+synovial+fluid:+training+of+the+analysts+results+in+high+consistency.">Analysis for crystals in synovial fluid: training of the analysts results in high consistency.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 64 (4), 612-615 (2005).</li><li>Tieng, A., Franchin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knee+arthrocentesis+in+adults.">Knee arthrocentesis in adults.</a> Journal of Visualized Experiments. , e63135 (2022).</li><li>Punzi, L., Oliviero, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arthrocentesis+and+synovial+fluid+analysis+in+clinical+practice:+value+of+sonography+in+difficult+cases.">Arthrocentesis and synovial fluid analysis in clinical practice: value of sonography in difficult cases.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1154 (1), 152-158 (2009).</li><li>Schumacher, H. R., Reginato, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Atlas of Synovial Fluid Analysis and Crystal Identification. , (1991).</li><li>Mopin, A., Driss, V., Brinster, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+protocol+for+characterizing+the+murine+C1498+cell+line+and+its+associated+leukemia+mouse+model.">Detailed protocol for characterizing the murine C1498 cell line and its associated leukemia mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments. (116), e54270 (2016).</li><li>Oliviero, F., Punzi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basics+of+Polarized+Light+Microscopy.">Basics of Polarized Light Microscopy.</a> Synovial Fluid Analysis and the Evaluation of Patients with Arthritis. , 79-90 (2022).</li><li>Paul, H., Reginato, A. J., Schumacher, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alizarin+red+S+staining+as+a+screening+test+to+detect+calcium+compounds+in+synovial+fluid.">Alizarin red S staining as a screening test to detect calcium compounds in synovial fluid.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 26 (2), 191-200 (1983).</li><li>Favero, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synovial+fluid+fetuin-A+levels+in+patients+affected+by+osteoarthritis+with+or+without+evidence+of+calcium+crystals.">Synovial fluid fetuin-A levels in patients affected by osteoarthritis with or without evidence of calcium crystals.</a> Rheumatology. 58 (4), 729-730 (2019).</li><li>Frallonardo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+calcium+crystals+in+knee+osteoarthritis+synovial+fluid:+a+comparison+between+polarized+light+and+scanning+electron+microscopy.">Detection of calcium crystals in knee osteoarthritis synovial fluid: a comparison between polarized light and scanning electron microscopy.</a> Journal of Clinical Rheumatology. 22 (7), 369-371 (2016).</li><li>Peffers, M. J., Smagul, A., Anderson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+analysis+of+synovial+fluid:+current+and+potential+uses+to+improve+clinical+outcomes.">Proteomic analysis of synovial fluid: current and potential uses to improve clinical outcomes.</a> Expert Review of Proteomics. 16 (4), 287-302 (2019).</li></ol>

En la OA, el análisis de SF ayuda a definir las características de la enfermedad a través de pasos simples: recuentos leucocitarios totales y diferenciales y búsqueda de cristales, incluyendo CPP y BCP. Además, la detección de cristales de MSU puede resaltar comorbilidades importantes.
A pesar de los bajos costos y la ejecución simple, la sensibilidad de las pruebas y la confiabilidad de los resultados pueden verse afectadas debido a analistas inexpertos, principalmente en lo que respec...

La osteoartritis (OA) es una enfermedad articular crónica compleja y multifactorial, con una prevalencia global agrupada estimada del 16% en sujetos de 15 años o más, y del 23% en sujetos de 40 años o másde 1. Se espera que la incidencia de OA aumente debido al envejecimiento de la población y al aumento de los factores de riesgo, como la obesidad y el síndrome metabólico2.
Entre los principales problemas asociados con la OA se encuentran la dificultad para diagnosticar la enfermedad en sus primeras etapas y los tratamientos actualmente disponibles limitados al manejo del dolor y los medicamentos sintomáticos de acción lenta (SYSADOA) como los glicosaminoglicanos. El diagnóstico de OA se basa en los síntomas clínicos y los hallazgos de imágenes. Sin embargo, la falta de correlación entre las dos evaluaciones puede causar años de retraso en el diagnóstico de OA y el inicio del tratamiento2. La OA se caracteriza por procesos degenerativos e inflamación de bajo grado, que pueden investigarse fácilmente mediante el análisis del líquido sinovial (SF). SF es un dializado plasmático viscoso rico en ácido hialurónico, que lubrica el espacio articular, proporciona nutrientes y oxígeno al cartílago y elimina los desechos metabólicos. SF también actúa como un amortiguador, protegiendo así las articulaciones durante el estrés y la tensión3.
El análisis de SF es un método simple y confiable que siempre debe realizarse durante la evaluación inicial de pacientes con síntomas musculoesqueléticos y derrames articulares3. Las recomendaciones del Colegio Americano de Reumatología, la Sociedad Británica de Reumatología y otros incluyen el análisis de SF entre las pruebas diagnósticas para enfermedades reumáticas que deben realizarse principalmente en la evaluación de la monoartritis aguda 4,5. Los recuentos leucocitarios totales y diferenciales obtenidos del análisis de SF proporcionan una instantánea del proceso patológico que ocurre en la articulación, clasificando así el grado de inflamación. La identificación de cristales patógenos, como los cristales de urato monosódico (MSU) y pirofosfato de calcio (CPP), bajo luz polarizada, es vital en el diagnóstico y tratamiento de la artritis cristalina (por ejemplo, gota y pseudogota). Además, la presencia de microorganismos sugiere un diagnóstico de artritis séptica.
Los cristales de calcio son frecuentes en muestras recogidas de pacientes con OA6. Se han notificado cristales básicos de fosfato de calcio (BCP) y PPC en aproximadamente el 22% y el 23% de las muestras de SF, respectivamente, de pacientes con OA6. Aunque su papel sigue sin estar claro, estos cristales se han asociado con formas más graves de OA7 y se consideran un epifenómeno del proceso patológico en sí. Se han detectado cristales de calcio en el 100% de las muestras de tejido de pacientes con OA sometidos a reemplazo de rodilla8. Además, se ha planteado la hipótesis de que los cristales de calcio pueden estar implicados en la patogénesis de la OA debido a sus efectos inflamatorios, demostrados por varios estudios9 y mediados, al menos en parte, por el inflamasoma NLRP310.
Más recientemente, se han descrito cristales de calcioen las etapas 6 tempranas y tardías de la OA, lo que indica que pueden desempeñar un papel vital en el diagnóstico de diferentes subconjuntos clínicos de OA y tratamiento farmacológico.
El objetivo general del análisis de SF es doble: determinar el grado inflamatorio de SF y diagnosticar la artritis cristalina o séptica mediante la identificación de cristales o microorganismos específicos. Es una herramienta particularmente útil, simple y confiable para diagnosticar la OA, debido al patrón no inflamatorio típico con un porcentaje muy bajo o ausencia de neutrófilos.
Ventajas sobre técnicas alternativas El análisis de SF consiste en procedimientos simples que incluyen recuentos de leucocitos totales y diferenciales y búsqueda de cristales. El recuento manual de células realizado por técnicos de laboratorio expertos 3,11 sigue siendo el estándar de oro para el análisis citológico de los fluidos sinoviales y otros fluidos corporales. Sin embargo, debido a la limitación de tiempo y a la variabilidad inter e intraobservador de este método, los contadores celulares automatizados han reemplazado gradualmente el conteo manual en grandes laboratorios clínicos de rutina donde los analizadores de sangre y orina han sido adaptados para permitir el análisis de SF11,12. Sin embargo, el conteo manual presenta algunas ventajas en entornos específicos: (1) en el ambulatorio, para obtener un valor total y diferencial de leucocitos en el tiempo; (2) identificar tipos de células como células mononucleares citofagocíticas (Reiter) o células no hematopoyéticas como sinoviocitos, que los contadores automatizados no pueden reconocer; (3) cuando la muestra es demasiado pequeña para ser manipulada por el instrumento; (4) crear registros de laboratorios locales que sean fácilmente accesibles para fines de investigación. Otra ventaja del conteo manual se ve en la tinción supravital, un método que permite la diferenciación de células muy rápidamente e inmediatamente después de la preparación del portaobjetos de vidrio. Por el contrario, las tinciones tradicionales, como los procedimientos de Wright y May-Grünwald-Giemsa, requieren frotis de SF secados al aire y tiempo para teñir las células13. Aunque no son adecuados para análisis de rutina sensibles al tiempo, estos métodos de tinción revelan poblaciones celulares más detalladas en la muestra, incluidos eritrocitos, basófilos, eosinófilos, leucocitos polimorfonucleares, linfocitos y plaquetas.
Finalmente, el análisis rutinario de SF para cristales se realiza utilizando una técnica simple basada en microscopía de luz polarizada, que proporciona resultados rápidos14. Los métodos alternativos, como el barrido y la microscopía electrónica, producen resultados más precisos y sensibles, pero su uso en la práctica clínica diaria no es factible debido a los altos costos y la preparación y el análisis de muestras que consumen mucho tiempo.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alizarin red S</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A5533</td>
			<td>For BCP crystal search</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Burker chamber</td>
			<td>Merck</td>
			<td>BR718905</td>
			<td>For total white blood cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glasses</td>
			<td>Merck</td>
			<td>C7931</td>
			<td>For microscopic examination&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA tubes</td>
			<td>BD</td>
			<td>368861</td>
			<td>For SF collection&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides&#160;</td>
			<td>Merck</td>
			<td>S8902</td>
			<td>For crystal search</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lambda filter (compensator)</td>
			<td>Any&#160;</td>
			<td>Refer to microscope company</td>
			<td>For crystal identification&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malassez-Potain pipette</td>
			<td>Artiglass</td>
			<td>54830000</td>
			<td>For dilution of synovial fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene blue solution</td>
			<td>Merck</td>
			<td>3978</td>
			<td>For total white blood cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarized microscope&#160;</td>
			<td>Leica, Nikon, others</td>
			<td>Depending on the model and company</td>
			<td>For complete synovial fluid analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarizing lens</td>
			<td>Any&#160;</td>
			<td>Refer to microscope company</td>
			<td>For crystal identification&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Testsimplet&#160;</td>
			<td>Waldeck</td>
			<td>14386</td>
			<td>Supravital staining for cell differentiation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

synovial fluid analysis to identify osteoarthritis

El análisis del líquido sinovial (SF) es importante para diagnosticar la osteoartritis (OA). Las características macroscópicas y microscópicas, incluido el recuento total y diferencial de glóbulos blancos (WBC), ayudan a definir la naturaleza no inflamatoria de SF, que es un sello distintivo de OA. En pacientes con OA, los leucocitos en muestras de SF generalmente no exceden las 2000 células por microlitro, y el porcentaje de células inflamatorias, como los neutrófilos, es muy bajo o está ausente. Los cristales de calcio son frecuentes en SF recogidos de pacientes con OA. Aunque su papel en la patogénesis de la OA sigue sin estar claro, se han asociado con un proceso inflamatorio leve y una progresión más grave de la enfermedad. Recientemente, se han descrito cristales de calcio tanto en las etapas tempranas como tardías de la OA, lo que indica que pueden desempeñar un papel vital en el diagnóstico de diferentes subconjuntos clínicos de OA y tratamiento farmacológico. El objetivo general del análisis de SF en OA es doble: determinar el grado no inflamatorio de SF y resaltar la presencia de cristales de calcio.

Las articulaciones grandes afectadas por la OA a menudo están hinchadas y producen cantidades significativas de SF, que se drenan a través de la artrocentesis15. Las características macroscópicas de la SF evaluadas inmediatamente después de la artrocentesis incluyen esencialmente la cantidad, el color, la claridad y la viscosidad17. A pesar de su baja especificidad, proporcionan datos preliminares sobre el grado de inflamación. El color depende de la celulari...

Watch this Scientific Journal Video about Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis at JoVE.com

Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis

El análisis del líquido sinovial bajo microscopía de luz transmitida, polarizada y compensada se utiliza para evaluar la naturaleza inflamatoria o no inflamatoria de una muestra a través de pasos simples. Es particularmente útil en la osteoartritis para detectar cristales de calcio e identificar un subconjunto más grave de osteoartritis.

Análisis del líquido sinovial para identificar la osteoartritis

Synovial fluid (SF) analysis is important in diagnosing osteoarthritis (OA). Macroscopic and microscopic features, including total and differential white ...

El análisis del líquido sinovial puede revelar el grado de inflamación y la presencia de cristales patógenos durante la evaluación inicial del paciente con síntomas musculoesqueléticos y derrames articulares. La principal ventaja de esta técnica es su simplicidad y fiabilidad. En unos pocos pasos, el médico puede obtener información diagnóstica importante sobre la enfermedad del paciente.La identificación de cristales específicos es vital para el diagnóstico y tratamiento. Los cristales de urato indican gota, mientras que el pirofosfato de calcio y otros cristales de calcio indican artropatías relacionadas con el calcio o una forma más grave de osteoartritis. Para comenzar, tome la muestra de líquido sinovial recolectada durante la artrocentesis de las articulaciones inflamadas de los pacientes.Anote el volumen de la muestra en mililitros y transfiérala por separado a un tubo que contenga EDTA anticoagulante y a otro tubo sin ningún aditivo. En los casos sospechosos de infección, transfiera asépticamente unos pocos mililitros de la muestra de líquido sinovial a una botella de cultivo para pruebas microbiológicas. Para examinar la muestra macroscópicamente, tome un tubo que contenga la muestra y defina el color de la muestra, que puede variar de amarillo pálido a amarillo oscuro.Registre la presencia de sangre, si la hubiera. Defina el grado de claridad de la muestra observándola a contraluz y determinando la facilidad de lectura de una página impresa a través del tubo que contiene la muestra. A continuación, evalúe la viscosidad de la muestra goteándola de una pipeta desechable.Mientras que la aparición de una larga cadena de líquido indica alta viscosidad, la formación de gotas es indicativa de baja viscosidad. Observe la muestra a través del tubo con luz en el fondo para detectar la presencia de cualquier material particulado, incluidos fragmentos de tejido o fibrina. Para determinar el recuento total de glóbulos blancos, extraiga 0,5 microlitros de la muestra del tubo que contiene EDTAA utilizando una pipeta Malassez-Potain.Use la misma pipeta para extraer 9,5 microlitros de solución de azul de metileno al 0,1%. Mezclar la muestra y la solución de azul de metileno en la pipeta mediante una inversión suave. Deseche las primeras gotas antes de verter la mezcla en la cámara de conteo de un hemocitómetro.Ahora cuente las celdas en dos casillas consecutivas de nueve y multiplique el número obtenido por 100. Exprese el recuento total de glóbulos blancos como el número de leucocitos por milímetro cúbico. Use la muestra de líquido sinovial del tubo sin ningún aditivo para determinar el recuento diferencial de glóbulos blancos de las muestras de líquido sinovial.Para determinar el recuento diferencial de células mediante tinción supravital, tome un portaobjetos listo para usar precubierto con cristal violeta y azul de metileno y coloque una pequeña gota de muestra en el centro del portaobjetos. A continuación, cubra la gota de muestra con un cubreobjetos y coloque una gota de aceite de inmersión de microscopio en el cubreobjetos. Para usar la tinción tradicional para estimar el recuento diferencial de células, comience colocando una pequeña gota de la muestra al final de un portaobjetos limpio.Ahora use una segunda diapositiva o un cubreobjetos para extender la gota a lo largo de la diapositiva con un movimiento hacia adelante. Deje que la mancha se seque al aire. Examine el portaobjetos que contiene el frotis secado al aire por debajo del objetivo de inmersión en aceite 1, 000X.Estimar el recuento diferencial de células contando 100 células consecutivas mientras se distinguen las células polimorfonucleares, los monocitos y los linfocitos entre sí. Limpie un portaobjetos de vidrio con papel óptico o blando embebido con etanol. Aplique una pequeña gota de la muestra no mezclada con ningún aditivo en el portaobjetos de vidrio y cúbralo con un cubreobjetos antes de colocar el portaobjetos bajo el microscopio.Enfoque el portaobjetos bajo el microscopio utilizando un objetivo de aumento de baja potencia y examínelo cuidadosamente bajo un campo brillante con un objetivo de 40X. Mire dentro y fuera de las células para identificar los cristales de acuerdo con su tamaño y forma, que pueden ser romboidales, en forma de aguja o en forma de varilla. Luego inserte el filtro polarizador entre la fuente de luz y la muestra.Para crear un fondo oscuro, gire el polarizador hasta que su eje óptico sea perpendicular al analizador. Una vez que se haya identificado un cristal birrefringente, inserte el compensador entre el polarizador y la muestra y muévalo paralelo o perpendicular al eje óptico del cristal. Observa el color revelado por el cristal.Para la tinción de Alizarin Red, mezcle una gota de la muestra de líquido sinovial con un volumen igual de solución previamente preparada de Alizarin Red en un portaobjetos limpio. Cubra el portaobjetos con un cubreobjetos y examine con un aumento de 400X bajo un microscopio para identificar los cristales. Las características macroscópicas de las muestras de líquido sinovial indicaron el grado de inflamación.Una muestra con color amarillo pálido y más claridad generalmente se asocia con afecciones no inflamatorias como la osteoartritis. Por otro lado, una muestra de color amarillo oscuro y aspecto turbio indica la presencia de células, desechos, ácido hialurónico y fragmentos de fibrina que están asociados con derrames inflamatorios. Los leucocitos observados en muestras de líquido sinovial de pacientes con osteoartritis eran en su mayoría monocitos y otras células mononucleares como sinoviocitos.Se detectaron cristales de pirofosfato de calcio en muestras de líquido sinovial que indican niveles relativamente más altos de citoquinas inflamatorias. Además, una tinción positiva de Alizarin Red reveló la presencia de cristales básicos de fosfato de calcio en las muestras. Es muy importante examinar cuidadosamente la diapositiva bajo luz ordinaria cuando busque cristales.Recuerde que los cristales de pirofosfato a menudo son débilmente birrefringentes y pueden perderse bajo luz polarizada. La presencia de cristales de calcio en el líquido sinovial y su asociación con una forma más grave de enfermedad han llevado a los investigadores a explorar nuevos mecanismos en la patogénesis y la progresión de la osteoartritis.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation and Cellular Phenotyping of Mesenchymal Stem Cells Derived from Synovial Fluid and Bone Marrow of Minipigs

Aislamiento y Celular del fenotipo de células madre mesenquimales derivadas del líquido sinovial y la médula ósea de cerdos enanos

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been established after isolation from various tissue sources, including bone marrow and synovial fluid. Recently, ...

Investigación

Medicina

Flow Cytometry Analysis of Immune Cell Subsets within the Murine Spleen, Bone Marrow, Lymph Nodes and Synovial Tissue in an Osteoarthritis Model

Análisis de citometría de flujo de subconjuntos de células inmunitarias dentro del bazo murino, médula ósea, ganglios linfáticos y tejido sinovial en un modelo de osteoartritis

Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent musculoskeletal diseases, affecting patients suffering from pain and physical limitations. Recent ...

Evaluation of Fluid Overload by Bioelectrical Impedance Vectorial Analysis

Evaluación de sobrecarga de fluidos mediante análisis vectorial de impedancia bioeléctrica

Early detection and management of fluid overload are critically important in acute illness, as the impact of therapeutic intervention can result in ...

Ameliorating Osteoarthritis in Mice Using Silver Nanoparticles

Mejora de la osteoartritis en ratones mediante nanopartículas de plata

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most commonly encountered degenerative diseases of the joints in people over 45 years of age. Currently, there are ...

Standardized Tuina Manipulation for Knee Osteoarthritis in Rats

Tuina Manipulation to Reduce Inflammation and Cartilage Loss in Knee Osteoarthritis Rats

Understanding the Mechanism of Tuina Manipulation in Rats (Video) | JoVE

Manipulación de Tuina para reducir la inflamación y la pérdida de cartílago en ratas con artrosis de rodilla

Clinical trials suggest that Tuina manipulation is effective in treating knee osteoarthritis (KOA), while further studies are required to discover its ...

Performing Fu's Subcutaneous Needling for Degenerative Knee Osteoarthritis

Performing Fu's Subcutaneous Needling for Degenerative Knee Osteoarthritis (Video) | JoVE 

Realización de la punción subcutánea de Fu para la osteoartritis degenerativa de rodilla

Treating Knee Osteoarthritis with Tuina in a Rabbit Model

Tuina Intervention in Rabbit Model of Knee Osteoarthritis

Using a Rabbit Model to Explore the Efficacy of Tuina in Treating Knee Osteoarthritis (Video) | JoVE

Intervención Tuina en Conejo Modelo de Artrosis de Rodilla

Knee osteoarthritis (KOA) is mainly characterized by degenerative changes in the knee joint's cartilage and surrounding soft tissues. The efficacy of ...

Experimental Modeling of Knee Osteoarthritis in Rats

Experimental Modeling of Knee Osteoarthritis in Rats (Video) | JoVE 

Modelado experimental de la osteoartritis de rodilla en ratas

A Reproducible Cartilage Impact Model to Generate Post-Traumatic Osteoarthritis in the Rabbit

Un modelo de impacto cartilaginoso reproducible para generar artrosis postraumática en el conejo

Post-traumatic osteoarthritis (PTOA) is responsible for 12% of all osteoarthritis cases in the United States. PTOA can be initiated by a single traumatic ...

Therapeutic Potential of Tuina Massage for Knee Osteoarthritis

Tuina Intervention in Sodium Monoiodoacetate Injection-Induced Rat Model of Knee Osteoarthritis

Treating Knee Osteoarthritis with Tuina - A New Perspective (Video) | JoVE

Intervención de Tuina en el modelo de artrosis de rodilla inducido por inyección de monoyodoacetato de sodio

Knee osteoarthritis (KOA), a common degenerative joint disorder, is characterized by chronic pain and disability, which can progress to irreparable ...