Name: synovial fluid analysis to identify osteoarthritis
Uploaded: 2022-10-20T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis at JoVE.com

Författarna vill tacka professor Leonardo Punzi för hans värdefulla mentorskap inom synovialvätskeanalys och Padova universitetssjukhus för dess stöd.

Detta protokoll överensstämmer med riktlinjerna från etikkommittén vid Padova universitetssjukhus. SF samlades in med patientens samtycke från knäleden hos patienter som fick terapeutisk artrocentes för ledutgjutning vid deras första presentation till kliniken eller som svar på en artritisk flare. Kontraindikationer för förfarandet var: koagulopati, antikoagulantia läkemedel, hudskador, dermatit eller cellulit som ligger över leden. Alla SF-prover avidentifierades.
1. Beredn...

<ol>
	<li>Cui, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional+prevalence,+incidence+and+risk+factors+of+knee+osteoarthritis+in+population-based+studies.">Global, regional prevalence, incidence and risk factors of knee osteoarthritis in population-based studies.</a> EClinicalMedicine. 29, 100587 (2020).</li><li>Hunter, D. J., Bierma-Zeinstra, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoarthritis.">Osteoarthritis.</a> Lancet. 393 (10182), 1745-1759 (2019).</li><li>Mandell, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Synovial Fluid Analysis and the Evaluation of Patients with Arthritis. , (2022).</li><li>Schmerling, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+initial+evaluation+of+the+adult+patient+with+acute+musculoskeletal+symptoms.">Guidelines for the initial evaluation of the adult patient with acute musculoskeletal symptoms.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 39 (1), 1-8 (1996).</li><li>Coakley, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RCGP+and+BSAC+guidelines+for+management+of+the+hot+swollen+joint+in+adults.">RCGP and BSAC guidelines for management of the hot swollen joint in adults.</a> Rheumatology. 45 (8), 1039-1041 (2006).</li><li>Frallonardo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+calcium+phosphate+and+pyrophosphate+crystals+in+early+and+late+osteoarthritis:+relationship+with+clinical+indices+and+inflammation.">Basic calcium phosphate and pyrophosphate crystals in early and late osteoarthritis: relationship with clinical indices and inflammation.</a> Clinical Rheumatology. 37 (10), 2847-2853 (2018).</li><li>Nalbant, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synovial+fluid+features+and+their+relations+to+osteoarthritis+severity:+new+findings+from+sequential+studies.">Synovial fluid features and their relations to osteoarthritis severity: new findings from sequential studies.</a> Osteoarthritis Cartilage. 11 (1), 50-54 (2003).</li><li>Fuerst, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcification+of+articular+cartilage+in+human+osteoarthritis.">Calcification of articular cartilage in human osteoarthritis.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 60 (9), 2694-2703 (2009).</li><li>Campillo-Gimenez, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+potential+of+four+different+phases+of+calcium+pyrophosphate+relies+on+NF-&#954;B+activation+and+MAPK+pathways.">Inflammatory potential of four different phases of calcium pyrophosphate relies on NF-&#954;B activation and MAPK pathways.</a> Frontiers in Immunology. 9, 2248 (2018).</li><li>Paz&#225;r, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+calcium+phosphate+crystals+induce+monocyte/macrophage+IL-1&#946;+secretion+through+the+NLRP3+inflammasome+in+vitro.">Basic calcium phosphate crystals induce monocyte/macrophage IL-1&#946; secretion through the NLRP3 inflammasome in vitro.</a> The Journal of Immunology. 186 (4), 2495-2502 (2011).</li><li>Mart&#237;n, M. J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+cell+count+in+body+fluids:+a+review.">Automated cell count in body fluids: a review.</a> Advances in Laboratory Medicine. 2, 149-161 (2021).</li><li>Seghezzi, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+cellular+analysis+of+synovial+fluids+by+optical+microscopy+and+automated+count+using+the+Sysmex+XN+body+fluid+mode.">Optimization of cellular analysis of synovial fluids by optical microscopy and automated count using the Sysmex XN body fluid mode.</a> Clinica Chimica Acta. 462, 41-48 (2016).</li><li>Reginato, A. J., Maldonado, I., Reginato, A. M., Falasca, G. F., O'Connor, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supravital+staining+of+synovial+fluid+with+Testsimplets.">Supravital staining of synovial fluid with Testsimplets.</a> Diagnostic Cytopathology. 8 (2), 147-152 (1992).</li><li>Lumbreras, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+for+crystals+in+synovial+fluid:+training+of+the+analysts+results+in+high+consistency.">Analysis for crystals in synovial fluid: training of the analysts results in high consistency.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 64 (4), 612-615 (2005).</li><li>Tieng, A., Franchin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knee+arthrocentesis+in+adults.">Knee arthrocentesis in adults.</a> Journal of Visualized Experiments. , e63135 (2022).</li><li>Punzi, L., Oliviero, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arthrocentesis+and+synovial+fluid+analysis+in+clinical+practice:+value+of+sonography+in+difficult+cases.">Arthrocentesis and synovial fluid analysis in clinical practice: value of sonography in difficult cases.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1154 (1), 152-158 (2009).</li><li>Schumacher, H. R., Reginato, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Atlas of Synovial Fluid Analysis and Crystal Identification. , (1991).</li><li>Mopin, A., Driss, V., Brinster, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+protocol+for+characterizing+the+murine+C1498+cell+line+and+its+associated+leukemia+mouse+model.">Detailed protocol for characterizing the murine C1498 cell line and its associated leukemia mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments. (116), e54270 (2016).</li><li>Oliviero, F., Punzi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basics+of+Polarized+Light+Microscopy.">Basics of Polarized Light Microscopy.</a> Synovial Fluid Analysis and the Evaluation of Patients with Arthritis. , 79-90 (2022).</li><li>Paul, H., Reginato, A. J., Schumacher, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alizarin+red+S+staining+as+a+screening+test+to+detect+calcium+compounds+in+synovial+fluid.">Alizarin red S staining as a screening test to detect calcium compounds in synovial fluid.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 26 (2), 191-200 (1983).</li><li>Favero, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synovial+fluid+fetuin-A+levels+in+patients+affected+by+osteoarthritis+with+or+without+evidence+of+calcium+crystals.">Synovial fluid fetuin-A levels in patients affected by osteoarthritis with or without evidence of calcium crystals.</a> Rheumatology. 58 (4), 729-730 (2019).</li><li>Frallonardo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+calcium+crystals+in+knee+osteoarthritis+synovial+fluid:+a+comparison+between+polarized+light+and+scanning+electron+microscopy.">Detection of calcium crystals in knee osteoarthritis synovial fluid: a comparison between polarized light and scanning electron microscopy.</a> Journal of Clinical Rheumatology. 22 (7), 369-371 (2016).</li><li>Peffers, M. J., Smagul, A., Anderson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+analysis+of+synovial+fluid:+current+and+potential+uses+to+improve+clinical+outcomes.">Proteomic analysis of synovial fluid: current and potential uses to improve clinical outcomes.</a> Expert Review of Proteomics. 16 (4), 287-302 (2019).</li></ol>

I OA hjälper SF-analys till att definiera sjukdomsegenskaper genom enkla steg: totalt och differentiellt leukocytantal och sökning efter kristaller, inklusive CPP och BCP. Dessutom kan detektering av MSU-kristaller belysa viktiga comorbiditeter.
Trots låga kostnader och enkelt utförande kan testernas känslighet och resultatens tillförlitlighet påverkas på grund av oerfarna analytiker - främst när det gäller kristallidentifiering. Analytikerns utbildning och erfarenhet är avgörande...

Artros (OA) är en komplex och multifaktoriell kronisk ledsjukdom, med en uppskattad poolad global prevalens på 16% hos patienter i åldern 15 år och äldre och 23% hos personer i åldern 40 och över1. Incidensen av OA förväntas öka på grund av en åldrande befolkning och en ökning av riskfaktorer, såsom fetma och metabolt syndrom2.
Bland de viktigaste problemen i samband med OA är svårigheten att diagnostisera sjukdomen i sina tidiga skeden och för närvarande tillgängliga behandlingar begränsade till smärtlindring och symtomatiska långsamma läkemedel (SYSADOA) såsom glykosaminoglykaner. Diagnosen av OA baseras på kliniska symtom och avbildningsfynd. Bristen på korrelation mellan de två bedömningarna kan dock orsaka år av försening i OA-diagnos och behandlingsstart2. OA kännetecknas av degenerativa processer och låggradig inflammation, som lätt kan undersökas via synovialvätskeanalys (SF). SF är ett visköst plasmatiskt dialysat rikt på hyaluronsyra, som smörjer ledutrymmet, ger näringsämnen och syre till brosk och tar bort metaboliskt avfall. SF fungerar också som en stötdämpare, vilket skyddar lederna under stress och belastning3.
SF-analys är en enkel och pålitlig metod som alltid måste utföras vid den första utvärderingen av patienter med muskuloskeletala symtom och ledutgjutningar3. Rekommendationer från American College of Rheumatology, British Society for Rheumatology och andra inkluderar SF-analys bland de diagnostiska testerna för reumatiska sjukdomar som måste genomföras huvudsakligen vid utvärdering av akut monoartrit 4,5. Totalt och differentiellt leukocytantal erhållet från SF-analys ger en ögonblicksbild av den patologiska processen som förekommer i leden, vilket klassificerar graden av inflammation. Identifieringen av patogena kristaller, såsom mononatriumurat (MSU) och kalciumpyrofosfat (CPP) kristaller, under polariserat ljus, är avgörande vid diagnos och behandling av kristallartrit (t.ex. gikt och pseudogikt). Vidare föreslår närvaron av mikroorganismer en diagnos av septisk artrit.
Kalciumkristaller är vanliga i prover som samlats in från patienter med OA6. Basiska kalciumfosfatkristaller (BCP) och CPP har rapporterats i cirka 22 % respektive 23 % av SF-proverna från patienter med OA6. Även om deras roll fortfarande är oklar har dessa kristaller associerats med allvarligare former av OA7 och anses vara ett epifenomen av själva den patologiska processen. Kalciumkristaller har detekterats i 100% av vävnadsprover från OA-patienter som genomgår knäbyte8. Vidare har det antagits att kalciumkristaller kan vara involverade i patogenesen av OA på grund av deras inflammatoriska effekter, demonstrerade av flera studier9 och medierade, åtminstone delvis, av NLRP3-inflammasomen10.
På senare tid har kalciumkristaller beskrivits i både tidiga och senastadier 6 av OA, vilket indikerar att de kan spela en viktig roll vid diagnos av olika kliniska undergrupper av OA och farmakologisk behandling.
Det övergripande målet med SF-analys är tvåfaldigt: att bestämma den inflammatoriska graden av SF och att diagnostisera kristall- eller septisk artrit genom att identifiera specifika kristaller eller mikroorganismer. Det är ett särskilt användbart, enkelt och pålitligt verktyg för att diagnostisera OA på grund av det typiska icke-inflammatoriska mönstret med en mycket låg andel eller frånvaro av neutrofiler.
Fördelar jämfört med alternativa tekniker SF-analys består av enkla procedurer som inkluderar totalt och differentiellt leukocytantal och kristallsökning. Manuell cellräkning utförd av expertlaboratorietekniker 3,11 förblir guldstandarden för cytologisk analys av synovial och andra kroppsvätskor. På grund av den tidskrävande begränsningen och inter- och intraobservatörsvariationen i denna metod har automatiserade cellräknare gradvis ersatt manuell räkning i stora rutinmässiga kliniska laboratorier där blod- och urinanalysatorer har anpassats för att möjliggöra SF-analys11,12. Ändå presenterar manuell räkning vissa fördelar i specifika inställningar: (1) i ambulatoriska, för att erhålla ett totalt och differentiellt WBC-värde i tid; (2) att identifiera celltyper såsom cytofagocytiska mononukleära (Reiter) celler eller icke-hematopoetiska celler såsom synoviocyter, som automatiserade räknare inte kan känna igen; 3) När provet är för litet för att hanteras av instrumentet. (4) att skapa lokala laboratorieregister som är lättillgängliga för forskningsändamål. En annan fördel med manuell räkning ses insupravital färgning, en metod som möjliggör differentiering av celler mycket snabbt och omedelbart efter glasglidberedning. Däremot kräver traditionella färgningar, såsom Wright- och May-Grünwald-Giemsa-procedurerna, lufttorkade SF-utstryk och tid att fläcka cellerna13. Även om de inte är lämpliga för tidskänsliga rutinanalyser, avslöjar dessa färgningsmetoder mer detaljerade cellpopulationer i provet, inklusive erytrocyter, basofiler, eosinofiler, polymorfonukleära leukocyter, lymfocyter och blodplättar.
Slutligen utförs rutinmässig SF-analys för kristaller med en enkel teknik baserad på polariserad ljusmikroskopi, vilket ger snabba resultat14. Alternativa metoder, såsom skanning och elektronmikroskopi, ger mer exakta och känsliga resultat, men deras användning i daglig klinisk praxis är inte möjlig på grund av höga kostnader och tidskrävande provberedning och analys.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alizarin red S</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A5533</td>
			<td>For BCP crystal search</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Burker chamber</td>
			<td>Merck</td>
			<td>BR718905</td>
			<td>For total white blood cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glasses</td>
			<td>Merck</td>
			<td>C7931</td>
			<td>For microscopic examination&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA tubes</td>
			<td>BD</td>
			<td>368861</td>
			<td>For SF collection&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides&#160;</td>
			<td>Merck</td>
			<td>S8902</td>
			<td>For crystal search</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lambda filter (compensator)</td>
			<td>Any&#160;</td>
			<td>Refer to microscope company</td>
			<td>For crystal identification&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malassez-Potain pipette</td>
			<td>Artiglass</td>
			<td>54830000</td>
			<td>For dilution of synovial fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene blue solution</td>
			<td>Merck</td>
			<td>3978</td>
			<td>For total white blood cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarized microscope&#160;</td>
			<td>Leica, Nikon, others</td>
			<td>Depending on the model and company</td>
			<td>For complete synovial fluid analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarizing lens</td>
			<td>Any&#160;</td>
			<td>Refer to microscope company</td>
			<td>For crystal identification&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Testsimplet&#160;</td>
			<td>Waldeck</td>
			<td>14386</td>
			<td>Supravital staining for cell differentiation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

synovial fluid analysis to identify osteoarthritis

Synovialvätska (SF) analys är viktig vid diagnos av artros (OA). Makroskopiska och mikroskopiska egenskaper, inklusive totalt och differentiellt antal vita blodkroppar (WBC), hjälper till att definiera den icke-inflammatoriska karaktären hos SF, vilket är ett kännetecken för OA. Hos patienter med OA överstiger WBC i SF-prover vanligtvis inte 2000 celler per mikroliter, och andelen inflammatoriska celler, såsom neutrofiler, är mycket låg eller frånvarande. Kalciumkristaller är vanliga i SF som samlats in från OA-patienter. Även om deras roll i patogenesen av OA fortfarande är oklar, har de associerats med en mild inflammatorisk process och en allvarligare sjukdomsprogression. Nyligen har kalciumkristaller beskrivits i både de tidiga och sena stadierna av OA, vilket indikerar att de kan spela en viktig roll för att diagnostisera olika kliniska undergrupper av OA och farmakologisk behandling. Det övergripande målet med SF-analys i OA är tvåfaldigt: att fastställa den icke-inflammatoriska graden av SF och att belysa närvaron av kalciumkristaller.

Stora leder som påverkas av OA är ofta svullna och producerar betydande mängder SF, som dräneras via arthrocentes15. De makroskopiska egenskaperna hos SF utvärderade omedelbart efter artrocentes innefattar i huvudsak kvantitet, färg, klarhet och viskositet17. Trots deras låga specificitet ger de preliminära uppgifter om graden av inflammation. Färgen beror på SF-cellularitet och graden av fragmentering av extracellulära matrismakromolekyler. SF som samla...

Watch this Scientific Journal Video about Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis at JoVE.com

Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis

Synovialvätskeanalys under överförd, polariserad och kompenserad ljusmikroskopi används för att utvärdera provets inflammatoriska eller icke-inflammatoriska natur genom enkla steg. Det är särskilt användbart vid artros för att detektera kalciumkristaller och identifiera en allvarligare delmängd av artros.

Synovialvätskeanalys för att identifiera artros

Synovial fluid (SF) analysis is important in diagnosing osteoarthritis (OA). Macroscopic and microscopic features, including total and differential white ...

Synovialvätskeanalys kan avslöja graden av inflammation och närvaron av patogena kristaller under den första utvärderingen av patient med muskuloskeletala symtom och ledutgjutningar. Den största fördelen med denna teknik är dess enkelhet och tillförlitlighet. I några steg kan läkaren få viktig diagnostisk information om patientens sjukdom.Identifieringen av specifika kristaller är avgörande för diagnos och behandling. Uratkristaller indikerar gikt, medan kalciumpyrofosfat och andra kalciumkristaller indikerar kalciumrelaterade artropatier eller en allvarligare form av artros. Börja med att ta synovialvätskeprovet som samlats in under artrocentes av svullna leder hos patienter.Anteckna provets volym i milliliter och överför det separat till ett rör innehållande antikoagulant EDTA och ett annat rör utan tillsats. I de misstänkta fallen av infektion, överför aseptiskt några milliliter av synovialvätskeprovet till en odlingsflaska för mikrobiologisk testning. För att undersöka provet makroskopiskt, ta ett rör som innehåller provet och definiera provets färg, som kan sträcka sig från blek till mörkgul.Registrera närvaron av blod, om någon. Definiera provets grad av klarhet genom att observera det i bakgrundsbelysningen och genom att bestämma hur lätt det är att läsa en tryckt sida genom röret som innehåller provet. Bedöm sedan provets viskositet genom att droppa det från en engångspipett.Medan utseendet på en lång vätskesträng indikerar hög viskositet, är bildandet av droppar en indikation på låg viskositet. Observera provet genom röret med ljus i bakgrunden för förekomst av eventuella partikelformiga material, inklusive vävnadsfragment eller fibrin. För att bestämma det totala antalet vita blodkroppar, dra 0,5 mikroliter av provet från röret innehållande EDTAA med en Malassez-Potain-pipett.Använd samma pipett för att dra 9,5 mikroliter 0,1% metylenblå lösning. Blanda provet och lösningen av metylenblått i pipetten genom försiktig inversion. Kassera de första dropparna innan du häller blandningen i räkningskammaren i en hemocytometer.Räkna nu cellerna i två på varandra följande rutor av nio och multiplicera det erhållna numret med 100. Uttryck det totala antalet vita blodkroppar som antalet leukocyter per kubikmillimeter. Använd synovialvätskeprovet från röret utan tillsats för att bestämma differentialantalet vita blodkroppar i synovialvätskeproverna.För att bestämma differentialcellantalet med supravital färgning, ta en färdig att använda glas förbelagd med kristallviolett och metylenblått och placera en liten droppe prov i mitten av bilden. Täck sedan provdroppen med ett täckglas och placera en droppe mikroskop nedsänkningsolja på täckglaset. För att använda traditionell färgning för att uppskatta differentialcellantalet, börja med att sätta en liten droppe av provet i slutet av en ren bild.Använd nu en andra bild eller ett täckglas för att sprida droppen längs bilden med en framåtrörelse. Låt smeten torka i luften. Undersök glaset som innehåller det lufttorkade utstryket under 1 000X oljenedsänkningsmål.Uppskatta differentialcellantalet genom att räkna 100 på varandra följande celler medan du skiljer de polymorfonukleära cellerna, monocyterna och lymfocyterna från varandra. Rengör en glasskiva med optiskt eller mjukt papper insupit med etanol. Applicera en liten droppe av provet som inte blandats med någon tillsats på glasskivan och täck den med ett täckglas innan du placerar glaset under mikroskopet.Fokusera bilden under mikroskopet med ett lågeffektförstoringsmål och undersök det noggrant under ett ljust fält med ett 40X-mål. Titta inuti och utanför cellerna för att identifiera kristallerna enligt deras storlek och form, som kan vara rombformad, nålformad eller stavformad. Sätt sedan in polariseringsfiltret mellan ljuskällan och provet.För att skapa en mörk bakgrund, rotera polarisatorn tills dess optiska axel är vinkelrät mot analysatorn. När en birefringent kristall har identifierats, sätt in kompensatorn mellan polarisatorn och provet och flytta den parallellt eller vinkelrätt mot kristallens optiska axel. Observera färgen som avslöjas av kristallen.För Alizarin Red-färgning, blanda en droppe av synovialvätskeprovet med en lika stor volym av tidigare beredd Alizarin Red-lösning på en ren bild. Täck glaset med ett täckglas och undersök vid 400X förstoring under ett mikroskop för att identifiera kristallerna. De makroskopiska egenskaperna hos synovialvätskeprover indikerade graden av inflammation.Ett prov med ljusgul färg och mer klarhet är i allmänhet förknippat med icke-inflammatoriska tillstånd som artros. Å andra sidan indikerar ett prov med mörkgul färg och ett grumligt utseende närvaron av celler, skräp, hyaluronsyra och fibrinfragment som är associerade med inflammatoriska effusioner. Leukocyterna som observerades i synovialvätskeprover från artrospatienter var mestadels monocyter och andra mononukleära celler som synoviocyter.Kalciumpyrofosfatkristaller detekterades i synovialvätskeprover, vilket indikerar relativt högre nivåer av inflammatoriska cytokiner. Dessutom avslöjade en positiv Alizarin Red-färgning närvaron av basiska kalciumfosfatkristaller i proverna. Det är mycket viktigt att noggrant undersöka bilden under vanligt ljus när man letar efter kristaller.Kom ihåg att pyrofosfatkristaller ofta är svagt birefringent och kan missas under polariserat ljus. Förekomsten av kalciumkristaller i ledvätska och deras samband med allvarligare sjukdomsform har lett forskare att utforska nya mekanismer i patogenesen och progressionen av artros.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation and Cellular Phenotyping of Mesenchymal Stem Cells Derived from Synovial Fluid and Bone Marrow of Minipigs

Isolering och Cellular fenotypning av mesenkymala stamceller från ledvätska och benmärgen hos minigrisar

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been established after isolation from various tissue sources, including bone marrow and synovial fluid. Recently, ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cell Subsets within the Murine Spleen, Bone Marrow, Lymph Nodes and Synovial Tissue in an Osteoarthritis Model

Flödescytometrianalys av immuncellsdelmängder inom Murine Mjälte, Benmärg, Lymfkörtlar och synovial vävnad i en artrosmodell

Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent musculoskeletal diseases, affecting patients suffering from pain and physical limitations. Recent ...

Evaluation of Fluid Overload by Bioelectrical Impedance Vectorial Analysis

Utvärdering av vätskeöverbelastning genom bioelektrisk impedansvektoranalys

Early detection and management of fluid overload are critically important in acute illness, as the impact of therapeutic intervention can result in ...

Ameliorating Osteoarthritis in Mice Using Silver Nanoparticles

Förbättrande artros hos möss med hjälp av silvernanopartiklar

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most commonly encountered degenerative diseases of the joints in people over 45 years of age. Currently, there are ...

Standardized Tuina Manipulation for Knee Osteoarthritis in Rats

Tuina Manipulation to Reduce Inflammation and Cartilage Loss in Knee Osteoarthritis Rats

Understanding the Mechanism of Tuina Manipulation in Rats (Video) | JoVE

Tuina manipulation för att minska inflammation och broskförlust hos knä artros råttor

Clinical trials suggest that Tuina manipulation is effective in treating knee osteoarthritis (KOA), while further studies are required to discover its ...

Performing Fu's Subcutaneous Needling for Degenerative Knee Osteoarthritis

Performing Fu's Subcutaneous Needling for Degenerative Knee Osteoarthritis (Video) | JoVE 

Utför Fus subkutana nålning för degenerativ knäartros

Treating Knee Osteoarthritis with Tuina in a Rabbit Model

Tuina Intervention in Rabbit Model of Knee Osteoarthritis

Using a Rabbit Model to Explore the Efficacy of Tuina in Treating Knee Osteoarthritis (Video) | JoVE

Tuina intervention i kaninmodell av knäartros

Knee osteoarthritis (KOA) is mainly characterized by degenerative changes in the knee joint's cartilage and surrounding soft tissues. The efficacy of ...

Experimental Modeling of Knee Osteoarthritis in Rats

Experimental Modeling of Knee Osteoarthritis in Rats (Video) | JoVE 

Experimentell modellering av knäartros hos råttor

A Reproducible Cartilage Impact Model to Generate Post-Traumatic Osteoarthritis in the Rabbit

En reproducerbar broskslagsmodell för att generera posttraumatisk artros hos kanin

Post-traumatic osteoarthritis (PTOA) is responsible for 12% of all osteoarthritis cases in the United States. PTOA can be initiated by a single traumatic ...

Therapeutic Potential of Tuina Massage for Knee Osteoarthritis

Tuina Intervention in Sodium Monoiodoacetate Injection-Induced Rat Model of Knee Osteoarthritis

Treating Knee Osteoarthritis with Tuina - A New Perspective (Video) | JoVE

Tuina Intervention i natriummonojodoacetat injektionsinducerad råtta modell av knäartros

Knee osteoarthritis (KOA), a common degenerative joint disorder, is characterized by chronic pain and disability, which can progress to irreparable ...