Name: synovial fluid analysis to identify osteoarthritis
Uploaded: 2022-10-20T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis at JoVE.com

Yazarlar, Profesör Leonardo Punzi'ye sinovyal sıvı analizi alanındaki değerli mentorluğu için ve Padova Üniversitesi Hastanesi'ne desteği için teşekkür etmek istiyor.

Bu protokol, Padova Üniversitesi Hastanesi Etik Kurulu'nun yönergelerine uygundur. SF, eklem efüzyonu için terapötik artrosentez alan hastaların diz eklemlerinden kliniğe ilk sunumlarında veya artritik bir alevlenmeye yanıt olarak hasta onayı ile toplandı. Prosedüre kontrendikasyonlar şunlardı: koagülopati, antikoagülan ilaçlar, cilt lezyonları, dermatit veya eklemin üzerinde bulunan selülit. Tüm SF örnekleri tanımlandı.
1. Sinovyal sıvı preparatı
...

<ol>
	<li>Cui, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional+prevalence,+incidence+and+risk+factors+of+knee+osteoarthritis+in+population-based+studies.">Global, regional prevalence, incidence and risk factors of knee osteoarthritis in population-based studies.</a> EClinicalMedicine. 29, 100587 (2020).</li><li>Hunter, D. J., Bierma-Zeinstra, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoarthritis.">Osteoarthritis.</a> Lancet. 393 (10182), 1745-1759 (2019).</li><li>Mandell, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Synovial Fluid Analysis and the Evaluation of Patients with Arthritis. , (2022).</li><li>Schmerling, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+initial+evaluation+of+the+adult+patient+with+acute+musculoskeletal+symptoms.">Guidelines for the initial evaluation of the adult patient with acute musculoskeletal symptoms.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 39 (1), 1-8 (1996).</li><li>Coakley, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RCGP+and+BSAC+guidelines+for+management+of+the+hot+swollen+joint+in+adults.">RCGP and BSAC guidelines for management of the hot swollen joint in adults.</a> Rheumatology. 45 (8), 1039-1041 (2006).</li><li>Frallonardo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+calcium+phosphate+and+pyrophosphate+crystals+in+early+and+late+osteoarthritis:+relationship+with+clinical+indices+and+inflammation.">Basic calcium phosphate and pyrophosphate crystals in early and late osteoarthritis: relationship with clinical indices and inflammation.</a> Clinical Rheumatology. 37 (10), 2847-2853 (2018).</li><li>Nalbant, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synovial+fluid+features+and+their+relations+to+osteoarthritis+severity:+new+findings+from+sequential+studies.">Synovial fluid features and their relations to osteoarthritis severity: new findings from sequential studies.</a> Osteoarthritis Cartilage. 11 (1), 50-54 (2003).</li><li>Fuerst, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcification+of+articular+cartilage+in+human+osteoarthritis.">Calcification of articular cartilage in human osteoarthritis.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 60 (9), 2694-2703 (2009).</li><li>Campillo-Gimenez, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+potential+of+four+different+phases+of+calcium+pyrophosphate+relies+on+NF-&#954;B+activation+and+MAPK+pathways.">Inflammatory potential of four different phases of calcium pyrophosphate relies on NF-&#954;B activation and MAPK pathways.</a> Frontiers in Immunology. 9, 2248 (2018).</li><li>Paz&#225;r, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+calcium+phosphate+crystals+induce+monocyte/macrophage+IL-1&#946;+secretion+through+the+NLRP3+inflammasome+in+vitro.">Basic calcium phosphate crystals induce monocyte/macrophage IL-1&#946; secretion through the NLRP3 inflammasome in vitro.</a> The Journal of Immunology. 186 (4), 2495-2502 (2011).</li><li>Mart&#237;n, M. J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+cell+count+in+body+fluids:+a+review.">Automated cell count in body fluids: a review.</a> Advances in Laboratory Medicine. 2, 149-161 (2021).</li><li>Seghezzi, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+cellular+analysis+of+synovial+fluids+by+optical+microscopy+and+automated+count+using+the+Sysmex+XN+body+fluid+mode.">Optimization of cellular analysis of synovial fluids by optical microscopy and automated count using the Sysmex XN body fluid mode.</a> Clinica Chimica Acta. 462, 41-48 (2016).</li><li>Reginato, A. J., Maldonado, I., Reginato, A. M., Falasca, G. F., O'Connor, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supravital+staining+of+synovial+fluid+with+Testsimplets.">Supravital staining of synovial fluid with Testsimplets.</a> Diagnostic Cytopathology. 8 (2), 147-152 (1992).</li><li>Lumbreras, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+for+crystals+in+synovial+fluid:+training+of+the+analysts+results+in+high+consistency.">Analysis for crystals in synovial fluid: training of the analysts results in high consistency.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 64 (4), 612-615 (2005).</li><li>Tieng, A., Franchin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knee+arthrocentesis+in+adults.">Knee arthrocentesis in adults.</a> Journal of Visualized Experiments. , e63135 (2022).</li><li>Punzi, L., Oliviero, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arthrocentesis+and+synovial+fluid+analysis+in+clinical+practice:+value+of+sonography+in+difficult+cases.">Arthrocentesis and synovial fluid analysis in clinical practice: value of sonography in difficult cases.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1154 (1), 152-158 (2009).</li><li>Schumacher, H. R., Reginato, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Atlas of Synovial Fluid Analysis and Crystal Identification. , (1991).</li><li>Mopin, A., Driss, V., Brinster, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+protocol+for+characterizing+the+murine+C1498+cell+line+and+its+associated+leukemia+mouse+model.">Detailed protocol for characterizing the murine C1498 cell line and its associated leukemia mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments. (116), e54270 (2016).</li><li>Oliviero, F., Punzi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basics+of+Polarized+Light+Microscopy.">Basics of Polarized Light Microscopy.</a> Synovial Fluid Analysis and the Evaluation of Patients with Arthritis. , 79-90 (2022).</li><li>Paul, H., Reginato, A. J., Schumacher, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alizarin+red+S+staining+as+a+screening+test+to+detect+calcium+compounds+in+synovial+fluid.">Alizarin red S staining as a screening test to detect calcium compounds in synovial fluid.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 26 (2), 191-200 (1983).</li><li>Favero, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synovial+fluid+fetuin-A+levels+in+patients+affected+by+osteoarthritis+with+or+without+evidence+of+calcium+crystals.">Synovial fluid fetuin-A levels in patients affected by osteoarthritis with or without evidence of calcium crystals.</a> Rheumatology. 58 (4), 729-730 (2019).</li><li>Frallonardo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+calcium+crystals+in+knee+osteoarthritis+synovial+fluid:+a+comparison+between+polarized+light+and+scanning+electron+microscopy.">Detection of calcium crystals in knee osteoarthritis synovial fluid: a comparison between polarized light and scanning electron microscopy.</a> Journal of Clinical Rheumatology. 22 (7), 369-371 (2016).</li><li>Peffers, M. J., Smagul, A., Anderson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+analysis+of+synovial+fluid:+current+and+potential+uses+to+improve+clinical+outcomes.">Proteomic analysis of synovial fluid: current and potential uses to improve clinical outcomes.</a> Expert Review of Proteomics. 16 (4), 287-302 (2019).</li></ol>

OA'da, SF analizi basit adımlarla hastalık özelliklerini tanımlamaya yardımcı olur: toplam ve diferansiyel lökosit sayıları ve CPP ve BCP dahil olmak üzere kristallerin aranması. Ayrıca, MSU kristallerinin saptanması önemli komorbiditeleri vurgulayabilir.
Düşük maliyetlere ve basit uygulamaya rağmen, testlerin duyarlılığı ve sonuçların güvenilirliği, deneyimsiz analistler nedeniyle etkilenebilir - esas olarak kristal tanımlama ile ilgili olduğu için. Analistin eği...

Osteoartrit (OA) kompleks ve multifaktöriyel kronik eklem hastalığıdır ve 15 yaş ve üstü kişilerde %16, 40 yaşve üstü kişilerde %23 gibi tahmini bir küresel prevalansı vardır. OA insidansının yaşlanan bir popülasyon ve obezite ve metabolik sendrom gibi risk faktörlerindeki artışa bağlı olarak artması beklenmektedir2.
OA ile ilişkili başlıca sorunlar arasında, hastalığın erken evrelerinde teşhis edilmesindeki zorluk ve şu anda mevcut tedaviler, ağrı yönetimi ve glikozaminoglikanlar gibi semptomatik yavaş etkili ilaçlar (SYSADOA'lar) ile sınırlıdır. OA tanısı klinik semptomlara ve görüntüleme bulgularına dayanır. Bununla birlikte, iki değerlendirme arasındaki korelasyon eksikliği, OA tanısında ve tedaviye başlamada yıllarca gecikmeye neden olabilir2. OA, sinovyal sıvı (SF) analizi ile kolayca araştırılabilen dejeneratif süreçler ve düşük dereceli inflamasyon ile karakterizedir. SF, eklem boşluğunu yağlayan, kıkırdağa besin ve oksijen sağlayan ve metabolik atıkları gideren hyaluronik asit bakımından zengin viskoz plazmatik bir diyalizattır. SF ayrıca bir amortisör görevi görür, böylece stres ve gerinim 3 sırasında eklemlerikorur.
SF analizi, kas-iskelet sistemi semptomları ve eklem efüzyonları olan hastaların ilk değerlendirilmesi sırasında her zaman yapılması gereken basit ve güvenilir bir yöntemdir3. Amerikan Romatoloji Koleji, İngiliz Romatoloji Derneği ve diğerlerinin önerileri, esas olarak akut monoartritin değerlendirilmesinde yapılması gereken romatizmal hastalıklar için tanısal testler arasında SF analizini içerir 4,5. SF analizinden elde edilen toplam ve diferansiyel lökosit sayımları, eklemde meydana gelen patolojik sürecin anlık görüntüsünü sağlar, böylece inflamasyon derecesini sınıflandırır. Polarize ışık altında monosodyum ürat (MSU) ve kalsiyum pirofosfat (CPP) kristalleri gibi patojenik kristallerin tanımlanması, kristal artritin (örneğin, gut ve psödogut) tanı ve tedavisinde hayati öneme sahiptir. Ayrıca, mikroorganizmaların varlığı septik artrit tanısını düşündürmektedir.
OA6'lı hastalardan toplanan örneklerde kalsiyum kristalleri sık görülür. Temel kalsiyum fosfat (BCP) kristalleri ve CPP, OA6'lı hastalardan alınan SF örneklerinin sırasıyla yaklaşık% 22 ve% 23'ünde bildirilmiştir. Rolleri belirsizliğini korusa da, bu kristaller OA7'nin daha şiddetli formlarıyla ilişkilendirilmiştir ve patolojik sürecin kendisinin bir epifenomeni olarak kabul edilir. Diz protezi uygulanan OA hastalarından alınan doku örneklerinin %100'ünde kalsiyum kristalleri tespit edilmiştir8. Ayrıca, kalsiyum kristallerinin, enflamatuar etkileri nedeniyle OA patogenezinde rol oynayabileceği,çeşitli çalışmalarla gösterilen 9 ve en azından kısmen NLRP3 enflamatuar10 tarafından aracılık edildiği varsayılmıştır.
Daha yakın zamanlarda, kalsiyum kristalleri OA'nın hem erken hem de geç evre6'sında tanımlanmıştır, bu da OA'nın farklı klinik alt kümelerinin ve farmakolojik tedavinin teşhisinde hayati bir rol oynayabileceklerini göstermektedir.
SF analizinin genel amacı iki yönlüdür: SF'nin enflamatuar derecesini belirlemek ve spesifik kristalleri veya mikroorganizmaları tanımlayarak kristal veya septik artriti teşhis etmek. Çok düşük bir nötrofil yüzdesi veya yokluğu olan tipik enflamatuar olmayan patern nedeniyle OA tanısında özellikle yararlı, basit ve güvenilir bir araçtır.
Alternatif tekniklere göre avantajları SF analizi, toplam ve diferansiyel lökosit sayımlarını ve kristal aramasını içeren basit prosedürlerden oluşur. Uzman laboratuvar teknisyenleri tarafından yapılan manuel hücre sayımı 3,11, sinovyal ve diğer vücut sıvılarının sitolojik analizi için altın standart olmaya devam etmektedir. Bununla birlikte, zaman alıcı sınırlama ve bu yöntemin gözlemciler arası ve gözlemciler arası değişkenliği nedeniyle, otomatik hücre sayaçları, SF analizini sağlamak için kan ve idrar analizörlerinin uyarlandığı büyük rutin klinik laboratuvarlarda manuel sayımın yerini kademeli olarak almıştır11,12. Bununla birlikte, manuel sayım, belirli ortamlarda bazı avantajlar sunar: (1) ambulatuvarda, zamanında toplam ve diferansiyel bir WBC değeri elde etmek için; (2) otomatik sayaçların tanıyamadığı sitofagositik mononükleer (Reiter) hücreler veya sinovyositler gibi hematopoetik olmayan hücreler gibi hücre tiplerini tanımlamak; (3) numune alet tarafından işlenemeyecek kadar küçük olduğunda; (4) Araştırma amaçları için kolayca erişilebilen yerel laboratuvar kayıtları oluşturmak. Manuel sayımın bir diğer avantajı, cam slayt hazırlığından hemen sonra hücrelerin çok hızlı ve hemen farklılaşmasını sağlayan bir yöntem olan insupravital boyama görülür. Buna karşılık, Wright ve May-Grünwald-Giemsa prosedürleri gibi geleneksel boyamalar, hava ile kurutulmuş SF yaymaları ve hücreleri boyamak için zaman gerektirir13. Zamana duyarlı rutin analizler için uygun olmasa da, bu boyama yöntemleri numunede eritrositler, bazofiller, eozinofiller, polimorfonükleer lökositler, lenfositler ve trombositler dahil olmak üzere daha ayrıntılı hücre popülasyonlarını ortaya koymaktadır.
Son olarak, kristaller için rutin SF analizi, hızlı sonuçlar veren polarize ışık mikroskobuna dayanan basit bir teknik kullanılarak gerçekleştirilir14. Tarama ve elektron mikroskobu gibi alternatif yöntemler daha doğru ve hassas sonuçlar verir, ancak yüksek maliyetler ve zaman alıcı numune hazırlama ve analizi nedeniyle günlük klinik pratikte kullanımları mümkün değildir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alizarin red S</td>
			<td>Merck</td>
			<td>A5533</td>
			<td>For BCP crystal search</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Burker chamber</td>
			<td>Merck</td>
			<td>BR718905</td>
			<td>For total white blood cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glasses</td>
			<td>Merck</td>
			<td>C7931</td>
			<td>For microscopic examination&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA tubes</td>
			<td>BD</td>
			<td>368861</td>
			<td>For SF collection&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides&#160;</td>
			<td>Merck</td>
			<td>S8902</td>
			<td>For crystal search</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lambda filter (compensator)</td>
			<td>Any&#160;</td>
			<td>Refer to microscope company</td>
			<td>For crystal identification&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malassez-Potain pipette</td>
			<td>Artiglass</td>
			<td>54830000</td>
			<td>For dilution of synovial fluid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene blue solution</td>
			<td>Merck</td>
			<td>3978</td>
			<td>For total white blood cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarized microscope&#160;</td>
			<td>Leica, Nikon, others</td>
			<td>Depending on the model and company</td>
			<td>For complete synovial fluid analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polarizing lens</td>
			<td>Any&#160;</td>
			<td>Refer to microscope company</td>
			<td>For crystal identification&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Testsimplet&#160;</td>
			<td>Waldeck</td>
			<td>14386</td>
			<td>Supravital staining for cell differentiation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

synovial fluid analysis to identify osteoarthritis

Sinovyal sıvı (SF) analizi osteoartrit (OA) tanısında önemlidir. Toplam ve diferansiyel beyaz kan hücresi (WBC) sayısı da dahil olmak üzere makroskobik ve mikroskobik özellikler, OA'nın ayırt edici özelliği olan SF'nin enflamatuar olmayan doğasını tanımlamaya yardımcı olur. OA'lı hastalarda, SF örneklerinde WBC genellikle mikrolitre başına 2000 hücreyi geçmez ve nötrofiller gibi enflamatuar hücrelerin yüzdesi çok düşüktür veya yoktur. OA hastalarından toplanan SF'lerde kalsiyum kristalleri sık görülür. OA patogenezindeki rolleri tam olarak bilinmemekle birlikte, hafif inflamatuar süreç ve daha ciddi hastalık progresyonu ile ilişkilendirilmişlerdir. Son zamanlarda, kalsiyum kristalleri OA'nın hem erken hem de geç evrelerinde tanımlanmıştır, bu da OA'nın farklı klinik alt kümelerinin ve farmakolojik tedavinin teşhisinde hayati bir rol oynayabileceklerini göstermektedir. OA'da SF analizinin genel amacı iki yönlüdür: SF'nin enflamatuar olmayan derecesini belirlemek ve kalsiyum kristallerinin varlığını vurgulamak.

OA'dan etkilenen büyük eklemler sıklıkla şişer ve artrosentez15 yoluyla boşaltılan önemli miktarda SF üretir. Artrosentezden hemen sonra değerlendirilen SF'nin makroskopik özellikleri esas olarak miktar, renk, berraklık ve viskoziteyi içerir17. Düşük özgüllüklerine rağmen, inflamasyon derecesi hakkında ön veri sağlarlar. Renk, SF hücreselliğine ve hücre dışı matriks makromoleküllerinin parçalanma derecesine bağlıdır. OA'lı hastal...

Watch this Scientific Journal Video about Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis at JoVE.com

Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis

İletilen, polarize ve kompanse ışık mikroskobu altındaki sinovyal sıvı analizi, bir numunenin enflamatuar veya enflamatuar olmayan doğasını basit adımlarla değerlendirmek için kullanılır. Osteoartritte kalsiyum kristallerini tespit etmek ve osteoartritin daha ciddi bir alt kümesini tanımlamak için özellikle yararlıdır.

Osteoartriti Tanımlamak için Sinovyal Sıvı Analizi

Synovial fluid (SF) analysis is important in diagnosing osteoarthritis (OA). Macroscopic and microscopic features, including total and differential white ...

Sinovyal sıvı analizi, kas-iskelet sistemi semptomları ve eklem efüzyonları olan hastanın ilk değerlendirmesi sırasında inflamasyon derecesini ve patojenik kristallerin varlığını ortaya çıkarabilir. Bu tekniğin temel avantajı basitliği ve güvenilirliğidir. Birkaç adımda, klinisyen hastanın hastalığı hakkında önemli tanısal bilgiler edinebilir.Spesifik kristallerin tanımlanması tanı ve tedavi için hayati öneme sahiptir. Ürat kristalleri gutu gösterirken, kalsiyum pirofosfat ve diğer kalsiyum kristalleri kalsiyumla ilişkili artropatileri veya daha şiddetli bir osteoartrit formunu gösterir. Başlamak için, hastaların şişmiş eklemlerinin artrosentezi sırasında toplanan sinovyal sıvı örneğini alın.Numunenin hacmine mililitre cinsinden açıklama ekleyin ve ayrı ayrı antikoagülan EDTA içeren bir tüpe ve herhangi bir katkı maddesi olmadan başka bir tüpe aktarın. Şüpheli enfeksiyon vakalarında, sinovyal sıvı numunesinin birkaç mililitresini mikrobiyolojik testler için bir kültür şişesine aseptik olarak aktarın. Numuneyi makroskopik olarak incelemek için, numuneyi içeren bir tüp alın ve numunenin soluk ila koyu sarı arasında değişebilen rengini tanımlayın.Varsa kanın varlığını kaydedin. Arka ışıkta gözlemleyerek ve numuneyi içeren tüpten basılı bir sayfayı okuma kolaylığını belirleyerek numunenin netlik derecesini tanımlayın. Ardından, numuneyi tek kullanımlık bir pipetten damlatarak numunenin viskozitesini değerlendirin.Uzun bir sıvı dizisinin ortaya çıkması yüksek viskoziteyi gösterirken, damla oluşumu düşük viskozitenin göstergesidir. Doku parçaları veya fibrin dahil olmak üzere herhangi bir partikül materyalin varlığı için numuneyi arka planda ışıkla tüpün içinden gözlemleyin. Toplam beyaz kan hücresi sayısını belirlemek için, bir Malassez-Potain pipeti kullanarak EDTAA içeren tüpten 0,5 mikrolitre numune çekin.9,5 mikrolitre% 0.1 metilen mavisi çözeltisi çekmek için aynı pipeti kullanın. Numuneyi ve metilen mavisi çözeltisini pipet içinde nazik ters çevirme ile karıştırın. Karışımı bir hemositometrenin sayım odasına dökmeden önce ilk birkaç damlayı atın.Şimdi hücreleri dokuzdan iki ardışık karede sayın ve elde edilen sayıyı 100 ile çarpın. Toplam beyaz kan hücresi sayısını, milimetreküp başına lökosit sayısı olarak ifade edin. Sinovyal sıvı örneklerinin diferansiyel beyaz kan hücresi sayısını belirlemek için tüpten sinovyal sıvı örneğini herhangi bir katkı maddesi olmadan kullanın.Supravital boyama kullanarak diferansiyel hücre sayısını belirlemek için, kristal menekşe ve metilen mavisi ile önceden kaplanmış kullanıma hazır bir slayt alın ve slaydın ortasına küçük bir damla numune yerleştirin. Daha sonra, numune damlasını bir kapak kapağı ile örtün ve kapak kapağına bir damla mikroskop daldırma yağı yerleştirin. Diferansiyel hücre sayısını tahmin etmek için geleneksel boyamayı kullanmak için, temiz bir slaydın sonuna numunenin küçük bir damlasını koyarak başlayın.Şimdi damlayı slayt boyunca ileri doğru hareket ettirerek yaymak için ikinci bir slayt veya kapak kayması kullanın. Yaymanın havada kurumasını bekleyin. 1.000X yağ daldırma hedefi altında hava ile kurutulmuş yaymayı içeren slaydı inceleyin.Polimorfonükleer hücreleri, monositleri ve lenfositleri birbirinden ayırt ederken 100 ardışık hücreyi sayarak diferansiyel hücre sayısını tahmin edin. Bir cam slaytı etanol ile emilmiş optik veya yumuşak kağıtla temizleyin. Cam slayt üzerine herhangi bir katkı maddesi ile karıştırılmamış numunenin küçük bir damlasını uygulayın ve slaytı mikroskop altına yerleştirmeden önce bir kapak kayması ile örtün.Düşük güçlü bir büyütme hedefi kullanarak slaytı mikroskop altına odaklayın ve 40X hedefi olan parlak bir alan altında dikkatlice inceleyin. Kristalleri, eşkenar dörtgen, iğne şeklinde veya çubuk şeklinde olabilen boyutlarına ve şekillerine göre tanımlamak için hücrelerin içine ve dışına bakın. Ardından polarize filtreyi ışık kaynağı ile numune arasına yerleştirin.Koyu bir arka plan oluşturmak için, polarizörü optik ekseni analizöre dik olana kadar döndürün. Bir çift kırılımlı kristal tanımlandıktan sonra, kompansatörü polarizör ile numune arasına yerleştirin ve kristalin optik eksenine paralel veya dik olarak hareket ettirin. Kristalin ortaya çıkardığı rengi gözlemleyin.Alizarin Kırmızı boyama için, sinovyal sıvı numunesinin bir damlasını temiz bir slayt üzerinde önceden hazırlanmış eşit miktarda Alizarin Kırmızı çözeltisi ile karıştırın. Slaytı bir kapak kayması ile örtün ve kristalleri tanımlamak için mikroskop altında 400X büyütmede inceleyin. Sinovyal sıvı örneklerinin makroskopik özellikleri inflamasyon derecesini gösterdi.Soluk sarı renge ve daha fazla netliğe sahip bir örnek genellikle osteoartrit gibi enflamatuar olmayan durumlarla ilişkilidir. Öte yandan, koyu sarı renge ve bulanık bir görünüme sahip bir örnek, enflamatuar efüzyonlarla ilişkili hücrelerin, döküntülerin, hyaluronik asidin ve fibrin fragmanlarının varlığını gösterir. Osteoartrit hastalarından alınan sinovyal sıvı örneklerinde gözlenen lökositler çoğunlukla monositler ve sinovyositler gibi diğer mononükleer hücrelerdi.Sinovyal sıvı örneklerinde kalsiyum pirofosfat kristalleri tespit edildi ve nispeten daha yüksek seviyelerde inflamatuar sitokinler görüldü. Ayrıca, pozitif bir Alizarin Kırmızı boyaması, numunelerde bazik kalsiyum fosfat kristallerinin varlığını ortaya koymuştur. Kristalleri ararken slaytı normal ışık altında dikkatlice incelemek çok önemlidir.Pirofosfat kristallerinin genellikle zayıf bir şekilde çift kırılımlı olduğunu ve polarize ışık altında kaçırılabileceğini unutmayın. Sinovyal sıvıda kalsiyum kristallerinin varlığı ve bunların daha şiddetli hastalık formlarıyla ilişkisi, araştırmacıları osteoartritin patogenezinde ve ilerlemesinde yeni mekanizmaları keşfetmeye yönlendirmiştir.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation and Cellular Phenotyping of Mesenchymal Stem Cells Derived from Synovial Fluid and Bone Marrow of Minipigs

Mini-domuzlarda sinovyal sıvı ve Kemik İliği Elde Edilen Mezenkimal Kök Hücrelerin İzolasyonu ve Hücresel Fenotiplendirme

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been established after isolation from various tissue sources, including bone marrow and synovial fluid. Recently, ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cell Subsets within the Murine Spleen, Bone Marrow, Lymph Nodes and Synovial Tissue in an Osteoarthritis Model

Bir Osteoartrit Modelinde Minör Dalak, Kemik İliği, Lenf Düğümleri ve Sinovyal DokuDaki İmmün Hücre Alt Kümelerinin Akış Sitometri Analizi

Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent musculoskeletal diseases, affecting patients suffering from pain and physical limitations. Recent ...

Evaluation of Fluid Overload by Bioelectrical Impedance Vectorial Analysis

Aşırı Sıvı Yükünün Biyoelektrik Empedans Vektörel Analizi ile Değerlendirilmesi

Early detection and management of fluid overload are critically important in acute illness, as the impact of therapeutic intervention can result in ...

Ameliorating Osteoarthritis in Mice Using Silver Nanoparticles

Gümüş Nanopartiküller Kullanarak Farelerde Osteoartritin İyileştirilmesi

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most commonly encountered degenerative diseases of the joints in people over 45 years of age. Currently, there are ...

Standardized Tuina Manipulation for Knee Osteoarthritis in Rats

Tuina Manipulation to Reduce Inflammation and Cartilage Loss in Knee Osteoarthritis Rats

Understanding the Mechanism of Tuina Manipulation in Rats (Video) | JoVE

Diz Osteoartritli Sıçanlarda Enflamasyonu ve Kıkırdak Kaybını Azaltmak için Tuina Manipülasyonu

Clinical trials suggest that Tuina manipulation is effective in treating knee osteoarthritis (KOA), while further studies are required to discover its ...

Performing Fu's Subcutaneous Needling for Degenerative Knee Osteoarthritis

Performing Fu's Subcutaneous Needling for Degenerative Knee Osteoarthritis (Video) | JoVE 

Dejeneratif Diz Osteoartriti için Fu'nun Subkutan İğnelemesinin Yapılması

Treating Knee Osteoarthritis with Tuina in a Rabbit Model

Tuina Intervention in Rabbit Model of Knee Osteoarthritis

Using a Rabbit Model to Explore the Efficacy of Tuina in Treating Knee Osteoarthritis (Video) | JoVE

Diz Osteoartritinin Tavşan Modelinde Tuina Müdahalesi

Knee osteoarthritis (KOA) is mainly characterized by degenerative changes in the knee joint's cartilage and surrounding soft tissues. The efficacy of ...

Experimental Modeling of Knee Osteoarthritis in Rats

Experimental Modeling of Knee Osteoarthritis in Rats (Video) | JoVE 

Sıçanlarda Diz Osteoartritinin Deneysel Modellenmesi

A Reproducible Cartilage Impact Model to Generate Post-Traumatic Osteoarthritis in the Rabbit

Tavşanda travma sonrası osteoartrit oluşturmak için tekrarlanabilir bir kıkırdak etki modeli

Post-traumatic osteoarthritis (PTOA) is responsible for 12% of all osteoarthritis cases in the United States. PTOA can be initiated by a single traumatic ...

Therapeutic Potential of Tuina Massage for Knee Osteoarthritis

Tuina Intervention in Sodium Monoiodoacetate Injection-Induced Rat Model of Knee Osteoarthritis

Treating Knee Osteoarthritis with Tuina - A New Perspective (Video) | JoVE

Diz Osteoartritinin Sodyum Monoiyodoasetat Enjeksiyonuna Bağlı Sıçan Modelinde Tuina Müdahalesi

Knee osteoarthritis (KOA), a common degenerative joint disorder, is characterized by chronic pain and disability, which can progress to irreparable ...