Name: genotyping single nucleotide polymorphisms in the mitochondrial genome by pyrosequencing
Uploaded: 2023-02-10T13:50:00
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हम इस प्रोटोकॉल के लिए उदाहरण के रूप में उपयोग किए जाने वाले एम.3243ए>जी साइब्रिड कोशिकाओं को तैयार करने और प्रदान करने के लिए सिल्विया मार्चेट और कॉन्स्टैंज़ा लैम्पर्टी (इस्टिटो न्यूरोलॉजिको "कार्लो बेस्टा", फोंडाज़ियोन आईआरसीसीएस, मिलान) को स्वीकार करना चाहते हैं। हम इस शोध के दौरान उपयोगी चर्चा के लिए माइटोकॉन्ड्रियल जेनेटिक्स ग्रुप (एमआरसी-एमबीयू, कैम्ब्रिज विश्वविद्यालय) के सदस्यों को भी स्वीकार करना चाहते हैं। इस काम को मेडिकल रिसर्च काउंसिल यूके (MC_UU_00015/4 और MC_UU_00028/3) से कोर फंडिंग द्वारा समर्थित किया गया था। पी.ए.एन. और पी.एस.-पी. क्रमशः लिली फाउंडेशन और द चैम्प फाउंडेशन द्वारा भी समर्थित हैं।

इस अध्ययन में उपयोग किए गए मानव 3243 ए>जी साइब्रिड कोशिकाओं और अमर एम.5024सी>टी एमईएफ के उपयोग के लिए सूचित सहमति प्रदान की गई थी। इस उदाहरण में नैतिक अनुमोदन की आवश्यकता नहीं थी क्योंकि कैम्ब्रिज विश्वविद्?...

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	<li>Taanman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mitochondrial+genome:+Structure,+transcription,+translation+and+replication.">The mitochondrial genome: Structure, transcription, translation and replication.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1410 (2), 103-123 (1999).</li><li>Vafai, S. B., Mootha, V. 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I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+A-to-G+base+editing+in+human+mitochondrial+DNA+with+programmable+deaminases.">Targeted A-to-G base editing in human mitochondrial DNA with programmable deaminases.</a> Cell. 185 (10), 1764-1776 (2022).</li><li>Gammage, P. A., Rorbach, J., Vincent, A. I., Rebar, E. J., Minczuk, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrially+targeted+ZFNs+for+selective+degradation+of+pathogenic+mitochondrial+genomes+bearing+large-scale+deletions+or+point+mutations.">Mitochondrially targeted ZFNs for selective degradation of pathogenic mitochondrial genomes bearing large-scale deletions or point mutations.</a> EMBO Molecular Medicine. 6 (4), 458-466 (2014).</li><li>Gammage, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Near-complete+elimination+of+mutant+mtDNA+by+iterative+or+dynamic+dose-controlled+treatment+with+mtZFNs.">Near-complete elimination of mutant mtDNA by iterative or dynamic dose-controlled treatment with mtZFNs.</a> Nucleic Acids Research. 44 (16), 7804-7816 (2016).</li><li>Gammage, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome+editing+in+mitochondria+corrects+a+pathogenic+mtDNA+mutation+in+vivo.">Genome editing in mitochondria corrects a pathogenic mtDNA mutation in vivo.</a> Nature Medicine. 24, 1691-1695 (2018).</li><li>Bacman, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MitoTALEN+reduces+mutant+mtDNA+load+and+restores+tRNAAla+levels+in+a+mouse+model+of+heteroplasmic+mtDNA+mutation.">MitoTALEN reduces mutant mtDNA load and restores tRNAAla levels in a mouse model of heteroplasmic mtDNA mutation.</a> Nature Medicine. 24 (11), 1696-1700 (2018).</li><li>Ren, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+of+mtDNA+SNPs+in+Chinese+Han+population+using+pyrosequencing.">Screening of mtDNA SNPs in Chinese Han population using pyrosequencing.</a> Forensic Science International: Genetics Supplement Series. 4 (1), 316-317 (2013).</li><li>Andr&#233;asson, H., Asp, A., Alderborn, A., Gyllensten, U., Allen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+sequence+analysis+for+forensic+identification+using+pyrosequencing+technology.">Mitochondrial sequence analysis for forensic identification using pyrosequencing technology.</a> BioTechniques. 32 (1), 124-133 (2002).</li><li>Yan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pyrosequencing+is+an+accurate+and+reliable+method+for+the+analysis+of+heteroplasmy+of+the+A3243G+mutation+in+patients+with+mitochondrial+diabetes.">Pyrosequencing is an accurate and reliable method for the analysis of heteroplasmy of the A3243G mutation in patients with mitochondrial diabetes.</a> Journal of Molecular Diagnostics. 16 (4), 431-439 (2014).</li><li>Song, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+of+LATE-PCR+to+allow+single-cell+analysis+by+pyrosequencing.">Improvement of LATE-PCR to allow single-cell analysis by pyrosequencing.</a> Analyst. 138 (17), 4991-4997 (2013).</li><li>El-Hattab, A. W., Adesina, A. M., Jones, J., Scaglia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MELAS+syndrome:+Clinical+manifestations,+pathogenesis,+and+treatment+options.">MELAS syndrome: Clinical manifestations, pathogenesis, and treatment options.</a> Molecular Genetics and Metabolism. 116 (1-2), 4-12 (2015).</li><li>Minczuk, M., Papworth, M. A., Miller, J. C., Murphy, M. P., Klug, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+single-chain,+quasi-dimeric+zinc-finger+nuclease+for+the+selective+degradation+of+mutated+human+mitochondrial+DNA.">Development of a single-chain, quasi-dimeric zinc-finger nuclease for the selective degradation of mutated human mitochondrial DNA.</a> Nucleic Acids Research. 36 (12), 3926-3938 (2008).</li><li>Minczuk, M., Kolasinska-Zwierz, P., Murphy, M. P., Papworth, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Construction+and+testing+of+engineered+zinc-finger+proteins+for+sequence-specific+modification+of+mtDNA.">Construction and testing of engineered zinc-finger proteins for sequence-specific modification of mtDNA.</a> Nature Protocols. 5, 342-356 (2010).</li><li>Bacman, S. R., Gammage, P. A., Minczuk, M., Moraes, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manipulation+of+mitochondrial+genes+and+mtDNA+heteroplasmy.">Manipulation of mitochondrial genes and mtDNA heteroplasmy.</a> Methods in Cell Biology. 155, 441-487 (2020).</li><li>Gammage, P. A., Minczuk, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+manipulation+of+human+mitochondrial+DNA+heteroplasmy+in+vitro+using+tunable+mtZFN+technology.">Enhanced manipulation of human mitochondrial DNA heteroplasmy in vitro using tunable mtZFN technology.</a> Methods in Molecular Biology. 1867, 43-56 (2018).</li><li>Pickett, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+heterogeneity+in+m.3243A&gt;G+mitochondrial+disease:+The+role+of+nuclear+factors.">Phenotypic heterogeneity in m.3243A&gt;G mitochondrial disease: The role of nuclear factors.</a> Annals of Clinical and Translational Neurology. 5 (3), 333-345 (2018).</li><li>Nunes, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=OXPHOS+dysfunction+regulates+integrin-&#946;1+modifications+and+enhances+cell+motility+and+migration.">OXPHOS dysfunction regulates integrin-&#946;1 modifications and enhances cell motility and migration.</a> Human Molecular Genetics. 24 (7), 1977-1990 (2015).</li><li>Kauppila, J. H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+phenotype-driven+approach+to+generate+mouse+models+with+pathogenic+mtDNA+mutations+causing+mitochondrial+disease.">A phenotype-driven approach to generate mouse models with pathogenic mtDNA mutations causing mitochondrial disease.</a> Cell Reports. 16 (11), 2980-2990 (2016).</li><li>Burr, S. P., Chinnery, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+single-cell+mitochondrial+DNA+copy+number+and+heteroplasmy+using+digital+droplet+polymerase+chain+reaction.">Measuring single-cell mitochondrial DNA copy number and heteroplasmy using digital droplet polymerase chain reaction.</a> Journal of Visualized Experiments. (185), e63870 (2022).</li></ol>

प्रोटोकॉल की सफलता के लिए एक महत्वपूर्ण पहलू संदूषण से बचना है, खासकर जब शुरुआती सामग्री की कम मात्रा का उपयोग किया जाता है। जहां भी संभव हो नमूने तैयार करते समय यूवी हुड और फ़िल्टर किए गए पिपेट युक्तिय...

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>KOD Hot Start DNA Polymerase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>71086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PyroMark Assay Design&#160;2.0</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyromark Q48 Absorber Strips&#160;</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>974912</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PyroMark Q48 Advanced CpG Reagents (4 x 48)</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>974022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyromark Q48 Autoprep&#160;</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>9002470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PyroMark Q48 Cartridge Set</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>9024321</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyromark Q48 Disks</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>974901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyromark Q48 Magnetic beads&#160;</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>974203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PyroMark Q48 Software License (1)</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>9024325</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

genotyping single nucleotide polymorphisms in the mitochondrial genome by pyrosequencing

माइटोकॉन्ड्रियल जीनोम (एमटीडीएनए) में उत्परिवर्तन मातृ विरासत में मिली आनुवंशिक बीमारियों से जुड़ा हुआ है। हालांकि, एमटीडीएनए म्यूटेनेसिस द्वारा मॉडल का उत्पादन करने की हाल ही में विकसित क्षमता और माइटोकॉन्ड्रियल आनुवंशिक विपथन और कैंसर, मधुमेह और मनोभ्रंश जैसी सामान्य उम्र से संबंधित बीमारियों के बीच संबंध की एक नई सराहना के कारण हाल के वर्षों में एमटीडीएनए बहुरूपताओं में रुचि बढ़ी है। पायरोसीक्वेंसिंग एक अनुक्रमण-दर-संश्लेषण तकनीक है जो नियमित जीनोटाइपिंग प्रयोगों के लिए माइटोकॉन्ड्रियल क्षेत्र में व्यापक रूप से नियोजित है। बड़े पैमाने पर समानांतर अनुक्रमण विधियों और कार्यान्वयन में आसानी की तुलना में इसकी सापेक्ष सामर्थ्य इसे माइटोकॉन्ड्रियल आनुवंशिकी के क्षेत्र में एक अमूल्य तकनीक बनाती है, जिससे बढ़े हुए लचीलेपन के साथ हेटरोप्लाज्मी की तेजी से मात्रा का ठहराव होता है। इस पद्धति की व्यावहारिकता के बावजूद, एमटीडीएनए जीनोटाइपिंग के साधन के रूप में इसके कार्यान्वयन के लिए कुछ दिशानिर्देशों के अवलोकन की आवश्यकता होती है, विशेष रूप से जैविक या तकनीकी मूल के कुछ पूर्वाग्रहों से बचने के लिए। यह प्रोटोकॉल हेटरोप्लाज्मी माप के संदर्भ में उपयोग के लिए पाइरोसीक्वेंसिंग परख को डिजाइन और कार्यान्वित करने में आवश्यक कदमों और सावधानियों को रेखांकित करता है।

यह खंड मानव रोगजनक एमटीडीएनए उत्परिवर्तन के लिए पाइरोसीक्वेंसिंग परख का एक उदाहरण अनुकूलन प्रस्तुत करता है, साथ ही माइटोकॉन्ड्रियल जिंक फिंगर न्यूक्लियस (एमटीजेडएफएन) के साथ इलाज किए गए हेटेरोप्ला?...

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Genotyping Single Nucleotide Polymorphisms in the Mitochondrial Genome by Pyrosequencing

पायरोसीक्वेंसिंग परख हेटरप्लाज्मिक कोशिकाओं या ऊतकों में माइटोकॉन्ड्रियल डीएनए एकल न्यूक्लियोटाइड बहुरूपताओं की मजबूत और तेजी से जीनोटाइपिंग को सक्षम करती है।

पाइरोसीक्वेंसिंग द्वारा माइटोकॉन्ड्रियल जीनोम में जीनोटाइपिंग सिंगल न्यूक्लियोटाइड पॉलीमोर्फिज्म

Mutations in the mitochondrial genome (mtDNA) have been associated with maternally inherited genetic diseases. However, interest in mtDNA polymorphisms ...

पाइरोसीक्वेंसिंग संश्लेषण तकनीक द्वारा एक अनुक्रमण है जिसका उपयोग माइटोकॉन्ड्रियल डीएनए में एकल न्यूक्लियोटाइड बहुरूपताओं को जीनोटाइप करने के लिए किया जा सकता है। अन्य अनुक्रमण विधियों की तुलना में यह विधि कार्यान्वयन में आसानी और लागत-प्रभावशीलता में फायदेमंद है। यह आसानी से माइटोकॉन्ड्रियल डीएनए में रोगजनक वेरिएंट के हेटरोप्लाज्मी मूल्यों को निर्धारित करके कुछ माइटोकॉन्ड्रियल रोगों के लिए नैदानिक विधि के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।शुरू करने के लिए, जीनोटाइप होने वाली प्रजातियों के लिए एक माइटोकॉन्ड्रियल डीएनए अनुक्रम फ़ाइल प्राप्त करें और एकल न्यूक्लियोटाइड बहुरूपता, या एसएनपी की स्थिति की पहचान करें। सुनिश्चित करें कि उपयोग किया गया संदर्भ अनुक्रम अध्ययन किए गए उत्परिवर्तन के लिए उपयुक्त आधार नंबरिंग को नियोजित करता है ताकि एसएनपी की स्थिति को आसानी से पहचाना जा सके। एसएनपी साइट के अपस्ट्रीम और डाउनस्ट्रीम 1,000 बेस जोड़े कॉपी करें और कटे हुए अनुक्रम को पाइरोसीक्वेंसिंग प्राइमर डिज़ाइन सॉफ़्टवेयर में पेस्ट करें।पॉलीमॉर्फिक बेस को हाइलाइट करें, उस पर राइट-क्लिक करें, और फिर विश्लेषण किए गए एसएनपी बेस को पाइरोसीक्वेंसिंग परख के लक्ष्य के रूप में सेट करने के लिए लक्ष्य क्षेत्र सेट करें का चयन करें। प्राइमर चयन को लॉन्च करने के लिए इंटरफ़ेस के ऊपरी दाएं कोने में प्ले आइकन दबाएं, और सॉफ़्टवेयर के स्वचालित रूप से प्राइमर तिकड़ी उत्पन्न करने की प्रतीक्षा करें, टेम्पलेट डीएनए के पूर्वप्रवर्धन के लिए दो प्राइमर, और पायरोसीक्वेंसिंग मशीन में संश्लेषण द्वारा अनुक्रमण के लिए तीसरा प्राइमर। राइट-क्लिक करें और सभी प्राइमर सेट को बनाए रखने के लिए सभी प्राइमर सेट कॉपी करें का चयन करें।पायरोसीक्वेंसर के साथ प्रदान किए गए रन सॉफ़्टवेयर को खोलें, नई परख का चयन करें, फिर एलील परिमाणीकरण परख टेम्पलेट का चयन करें। अनुक्रमण प्राइमर के सीधे डाउनस्ट्रीम न्यूक्लियोटाइड में टाइप करके संबंधित बॉक्स में विश्लेषण किए जाने वाले अनुक्रम को इनपुट करें। चर स्थिति के लिए, दो संभावित आधारों को निरूपित करें, जिन्हें एक स्लैश द्वारा अलग किया गया है।जेनरेट डिस्पेंसेशन ऑर्डर दबाएं, और सॉफ्टवेयर को संश्लेषण प्रतिक्रिया द्वारा अनुक्रमण में वितरित किए जाने वाले न्यूक्लियोटाइड के लिए स्वचालित रूप से एक उपयुक्त क्रम निर्धारित करने दें। सहेजें, और परख के लिए एक नाम प्रदान करें। इसके बाद, डीएनए को पतला करके रन निष्पादित करें जिसे 5 नैनोग्राम प्रति माइक्रोलीटर तक विश्लेषण किया जा सके।पहले भाग में, ज्ञात हेटरोप्लाज्मी के नमूनों को संदर्भ और जंगली प्रकार के नमूनों के रूप में शामिल करना सुनिश्चित करें। फिर प्रवर्धन प्राइमरों और मापदंडों का उपयोग करके 5 माइक्रोलीटर पतला डीएनए और 25 माइक्रोलीटर प्रतिक्रियाओं का प्रीसीक्वेंसिंग पीसीआर करें। फ़ाइल सेटअप चलाने के लिए, पायरोसीक्वेंसर सॉफ़्टवेयर में नया चलाएँ का चयन करें।पाइरोसीक्वेंसर एक साथ 48 अलग-अलग प्रवर्धित प्रतिक्रियाओं को अनुक्रमित कर सकता है, जिसमें एक खाली वर्ग एक पायरोसीक्वेंसिंग डिस्क पर एक एकल अनुक्रमण का प्रतिनिधित्व करता है। एक वर्ग पर राइट-क्लिक करके और लोड परख का चयन करके परख लोड करें। यदि आवश्यक हो, तो विभिन्न अनुक्रमण प्राइमरों के साथ चार अलग-अलग परखों को अनुक्रमित करें।रन के लिए उपयोग किए जाने वाले प्रत्येक अनुक्रमण प्राइमर के लिए स्वचालित रूप से एक इंजेक्शन कक्ष असाइन करने के लिए प्राइमर वितरण मोड को स्वचालित रूप से सेट करें। रन मोड को मानक पर सेट करें, जब तक कि एक अनुक्रमण डिस्क पर चार अलग-अलग प्रकार के परख न चल रहे हों। सुनिश्चित करें कि रन टेम्प्लेट फ़ाइल पर परख की संख्या पीसीआर प्रतिक्रियाओं की संख्या से मेल खाती है।उसके बाद चलाएँ फ़ाइलों को USB ड्राइव पर सहेजें। पायरोसीक्वेंसर को प्राइम करने के लिए, डिवाइस के मुख्य टचस्क्रीन पर सफाई बटन दबाएं और स्क्रीन पर दिए गए निर्देशों का पालन करते हुए सभी इंजेक्टर को उच्च शुद्धता वाले पानी से साफ करें। मशीन में अवशोषक पट्टी डालते समय, सुनिश्चित करें कि छोर 9 बजे की स्थिति में मिलते हैं।यूएसबी स्टिक में प्लग करने के बाद, पहले तैयार की गई रन फ़ाइलों को लोड करने के लिए अनुक्रम बटन दबाएं। मशीन पर संबंधित इंजेक्टर में आवश्यकतानुसार अभिकर्मकों को लोड और प्राइम करने के लिए डिवाइस पर दिए गए निर्देशों का पालन करें। कुओं में 3 माइक्रोलीटर मोती लोड करें, और फिर संबंधित नमूने में अनुक्रमित करने के लिए प्रत्येक पीसीआर प्रतिक्रिया के 10 माइक्रोलीटर लोड करें।चुंबकीय मोतियों के साथ नमूने को मिलाने के लिए ऊपर और नीचे पिपेट। प्राइमेड पाइरोसीक्वेंसर में संकेत देखें कि डिस्क को मशीन में लोड किया जा सकता है। प्लेट होल्डिंग नट को अनस्क्रू करें, और लोड किए गए नमूना प्लेट को डिस्क डिब्बे में धातु पिन के साथ संरेखित करें।एक बार प्लेट को प्लेट डिब्बे में मजबूती से पेंच करने के बाद, टचस्क्रीन इंटरफ़ेस पर स्टार्ट बटन दबाकर अनुक्रमण रन लॉन्च करें। एक बार रन पूरा हो जाने के बाद, मशीन से यूएसबी ड्राइव को हटा दें, और इसे पायरोसीक्वेंसर सॉफ़्टवेयर चलाने वाले कंप्यूटर में वापस प्लग करें। USB ड्राइव पर नई जेनरेट की गई रन फ़ाइल प्रकट होने के बाद, परिणाम चलाएँ फ़ाइल पर डबल-क्लिक करें।यह स्वचालित रूप से न्यूक्लियोटाइड निगमन पर प्रत्येक कुएं के ल्यूसिफेरस आउटपुट का विश्लेषण करता है, और ब्याज के माइटोकॉन्ड्रियल एलील को निर्धारित करता है। पढ़ने की गुणवत्ता के आधार पर सॉफ्टवेयर द्वारा दिखाए गए रंग स्कोर की तलाश करें। परिणामों को सहेजने के लिए, शीर्ष विंडो में रिपोर्ट का चयन करें, इसके बाद एक पीडीएफ फाइल उत्पन्न करने के लिए पूर्ण रिपोर्ट का चयन करें जिसमें पायरोग्राम और रन के प्रत्येक कुएं से परिणाम शामिल हैं।वैकल्पिक रूप से, रिपोर्ट टैब के अंतर्गत अन्य स्वरूपों में परिणाम डाउनलोड करें. एम. 3243ए>जी म्यूटेशन के लिए चुने गए दोनों सेटों से प्रवर्धन प्राइमरों का उपयोग करके पीसीआर प्रवर्धन का एगारोस जेल वैद्युतकणसंचलन जैसा कि इस आंकड़े में दिखाया गया है।यहां, हेट विश्लेषण किए जाने वाले लगभग होमोप्लाज्मिक एम 3243 ए>जी नमूने को दर्शाता है। अंशांकन के लिए दाढ़ मानकों का उपयोग करके दोनों प्राइमर सेटों के प्रदर्शन की तुलना इस आंकड़े में दिखाई गई है।मापा मान ऊर्ध्वाधर बिंदीदार रेखाओं द्वारा निरूपित किए जाते हैं। एक एक्स = वाई रैखिक फ़ंक्शन यह बताने के लिए प्रदर्शित किया जाता है कि दो परीक्षण किए गए परखों में से प्रत्येक एक आदर्श माप के कितना करीब है। एक्स-अक्ष पर सेल लाइनों के नाम विभिन्न साइब्रिड क्लोनों के नाम हैं जो इस परख का उपयोग करके जीनोटाइप किए गए थे।दोनों परखों का उपयोग करके अज्ञात एम 3243 ए > जी हेटेरोप्लाज्मी के चार साइब्रिड क्लोन ों पर जीनोटाइपिंग परिणाम यहां दिखाए गए हैं। अनुक्रमण तकनीकी तीन प्रतियों में किया गया था।माइटोकॉन्ड्रियल जिंक फिंगर न्यूक्लियस-उपचारित कोशिकाओं के जीनोटाइपिंग परिणाम, अनुपचारित और नकली-उपचारित नियंत्रणों के साथ, और परिणामों के साथ-साथ जंगली-प्रकार जीनोटाइपिंग नियंत्रण उत्पन्न करने के लिए उपयोग किए जाने वाले दो एमईएफ सेल नमूना पीसीआर प्रतिकृति से पाइरोग्राम यहां दिखाए गए हैं। पाइरोसीक्वेंसिंग का उपयोग माइटोकॉन्ड्रियल डीएनए में विभिन्न जीन थेरेपी प्रौद्योगिकियों का आकलन करने के लिए जीन थेरेपी प्रयोगों के लिए रीडआउट के रूप में किया जा सकता है।

Research

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Genomic, proteomic, transcriptomic, and epigenomic analyses of human tumors indicate that there are thousands of anomalies within each cancer genome ...

Collection and Extraction of Saliva DNA for Next Generation Sequencing

अगली पीढ़ी के अनुक्रमण के लिए संग्रह और लार के डीएनए निष्कर्षण

The preferred source of DNA in human genetics research is blood, or cell lines derived from blood, as these sources yield large quantities of high quality ...

Single-stage Dynamic Reanimation of the Smile in Irreversible Facial Paralysis by Free Functional Muscle Transfer

नि: शुल्क कार्यात्मक मांसपेशी हस्तांतरण द्वारा अपरिवर्तनीय चेहरे का पक्षाघात में मुस्कान के एकल चरण गतिशील Reanimation

Unilateral facial paralysis is a common disease that is associated with significant functional, aesthetic and psychological issues. Though idiopathic ...

Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo: A Model of Single Vessel Stroke

Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo:  A Model of Single Vessel Stroke

Confocal ऑप्टिकल इमेजिंग द्वारा गुलाब बंगाल Photothrombosis<em&gt; Vivo</em&gt;: एक पोत स्ट्रोक का एक मॉडल

In vivo imaging techniques have increased in utilization due to recent advances in imaging dyes and optical technologies, allowing for the ability to ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

फास्फोरस-31 चुंबकीय अनुनाद स्पेक्ट्रोस्कोपी: मापने के लिए एक उपकरण<em&gt; Vivo</em&gt; मानव कंकाल की मांसपेशी में Mitochondrial ऑक्सीडेटिव Phosphorylation क्षमता

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Imaging Metals in Brain Tissue by Laser Ablation - Inductively Coupled Plasma - Mass Spectrometry (LA-ICP-MS)

Imaging Metals in Brain Tissue by Laser Ablation - Inductively Coupled Plasma - Mass Spectrometry LA-ICP-MS

उपपादन द्वारा मिलकर प्लाज्मा - - लेजर पृथक से मस्तिष्क के ऊतकों में इमेजिंग धातु मास स्पेक्ट्रोमेट्री (ला आईसीपी एमएस)

Metals are found ubiquitously throughout an organism, with their biological role dictated by both their chemical reactivity and abundance within a ...

An Ex Vivo Tissue Culture Model for Fibrovascular Complications in Proliferative Diabetic Retinopathy

प्रफलन मधुमेह रेटिनोपैथी में Fibrovascular जटिलताओं के लिए एक पूर्व Vivo ऊतक संस्कृति मॉडल

Diabetic retinopathy (DR) is the most common microvascular complication of diabetes and one of the leading causes of blindness in working-age adults. No ...

Osteoarthritis Pain Model Induced by Intra-Articular Injection of Mono-Iodoacetate in Rats

ओस्टियोआर्थराइटिस दर्द मॉडल चूहों में मोनो-आयोडोसेटेट के इंट्रा-आर्टिकुलर इंजेक्शन द्वारा प्रेरित

The current animal models of osteoarthritis (OA) can be divided into spontaneous models and induced models, both of which aim to simulate the ...

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

चूहा लिवर प्रत्यारोपण मॉडल में हेमोडायनामिक परिवर्तनों का अनुकरण करके अंग इस्केमिया-रिफ्यूजन इंजरी

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...