Name: murine orchiectomy and ovariectomy to reduce sex hormone production
Uploaded: 2023-11-17T14:40:00
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Nous remercions le Centre de ressources animales du Southwestern Medical Center de l’Université du Texas pour son aide dans la formation chirurgicale et la révision des protocoles. Nous remercions l’équipe d’assistance de Wert Lab pour son aide inestimable. Ces travaux ont été financés par l’Institut national de la santé (NIH P30EY030413). Biorender.com a été utilisé pour la création de schémas de dessins animés.

Toutes les expériences sur les animaux ont été approuvées par le Comité institutionnel de protection et d’utilisation des animaux de l’UTSW (APN#2019-102840).
1. Orchidectomie murine
<ol><li>Préparez un champ de travail aseptique et assurez-vous que les instruments chirurgicaux nécessaires ont été stérilisés et sont facilement accessibles. Suivez les pratiques aseptiques pour la chirurgie de survie des rongeurs.</li>
	<li>Enregistrez le poids de la souris mâl...

<ol>
	<li>Kaprara, A., Huhtaniemi, I. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hypothalamus-pituitary-gonad+axis:+Tales+of+mice+and+men.">The hypothalamus-pituitary-gonad axis: Tales of mice and men.</a> Metabolism. 86, 3-17 (2018).</li><li>Stamatiades, G. A., Kaiser, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gonadotropin+regulation+by+pulsatile+GnRH:+Signaling+and+gene+expression.">Gonadotropin regulation by pulsatile GnRH: Signaling and gene expression.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 463, 131-141 (2018).</li><li>Plant, T. M., Marshall, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+functional+significance+of+FSH+in+spermatogenesis+and+the+control+of+its+secretion+in+male+primates.">The functional significance of FSH in spermatogenesis and the control of its secretion in male primates.</a> Endocrine Reviews. 22 (6), 764-786 (2001).</li><li>Fuentes, N., Silveyra, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+receptor+signaling+mechanisms.">Estrogen receptor signaling mechanisms.</a> Advances in Protein Chemistry and Structural Biology. 116, 135-170 (2019).</li><li>Guo, X., Yu, X., Yao, Q., Qin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+effects+of+ovariectomy+on+bone+microstructure,+bone+turnover+markers+and+mechanical+properties+in+rats.">Early effects of ovariectomy on bone microstructure, bone turnover markers and mechanical properties in rats.</a> BMC Musculoskeletal Disorder. 23 (1), 316 (2022).</li><li>Yu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-mobility+group+box+chromosomal+protein-1+deletion+alleviates+osteoporosis+in+OVX+rat+model+via+suppressing+the+osteoclastogenesis+and+inflammation.">High-mobility group box chromosomal protein-1 deletion alleviates osteoporosis in OVX rat model via suppressing the osteoclastogenesis and inflammation.</a> Journal of Orthopedic Surgery and Research. 17 (1), 232 (2022).</li><li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quercetin+attenuates+osteoporosis+in+orchiectomy+mice+by+regulating+glucose+and+lipid+metabolism.">Quercetin attenuates osteoporosis in orchiectomy mice by regulating glucose and lipid metabolism.</a> Frontiers in Endocrinology (Lausanne). 13, 849544 (2022).</li><li>Costa, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testosterone+contributes+to+vascular+dysfunction+in+young+mice+fed+a+high+fat+diet+by+promoting+nuclear+factor+E2-related+factor+2+downregulation+and+oxidative+stress.">Testosterone contributes to vascular dysfunction in young mice fed a high fat diet by promoting nuclear factor E2-related factor 2 downregulation and oxidative stress.</a> Frontiers in Physiology. 13, 837603 (2022).</li><li>Bohm-Levine, N., Goldberg, A. R., Mariani, M., Frankfurt, M., Thornton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reducing+luteinizing+hormone+levels+after+ovariectomy+improves+spatial+memory:+Possible+role+of+brain-derived+neurotrophic+factor.">Reducing luteinizing hormone levels after ovariectomy improves spatial memory: Possible role of brain-derived neurotrophic factor.</a> Hormones and Behavior. 118, 104590 (2020).</li><li>Pandey, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+deficiency+induces+memory+loss+via+altered+hippocampal+HB-EGF+and+autophagy.">Estrogen deficiency induces memory loss via altered hippocampal HB-EGF and autophagy.</a> Journal of Endocrinology. 244 (1), 53-70 (2020).</li><li>Laouari, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sexual+dimorphism+of+kidney+growth+in+mice+and+humans.">The sexual dimorphism of kidney growth in mice and humans.</a> Kidney International. 102 (1), 78-95 (2022).</li><li>Str&#246;m, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovariectomy+and+17&#946;-estradiol+replacement+in+rats+and+mice:+a+visual+demonstration.">Ovariectomy and 17&#946;-estradiol replacement in rats and mice: a visual demonstration.</a> Journal of Visualized Experiments. (64), e4013 (2012).</li><li>Valkenburg, K. C., Amend, S. R., Pienta, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+prostate+micro-dissection+and+surgical+castration.">Murine prostate micro-dissection and surgical castration.</a> Journal of Visualized Experiments. (111), e53984 (2016).</li><li>Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+rodent+surgery+for+the+new+surgeon.">Principles of rodent surgery for the new surgeon.</a> Journal of Visualized Experiments. (47), e2586 (2011).</li><li>Haider, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+sex+hormones+in+modulating+myocardial+perfusion+and+coronary+flow+reserve.">Role of sex hormones in modulating myocardial perfusion and coronary flow reserve.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49 (7), 2209-2218 (2022).</li><li>Joll, J. E., Bersi, M. R., Nyman, J. S., Merryman, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+early+bilateral+ovariectomy+in+mice+as+a+model+of+left+heart+disease.">Evaluation of early bilateral ovariectomy in mice as a model of left heart disease.</a> American Journal of Physiology Heart-Circulartory Physiology. 322 (6), H1080-H1085 (2022).</li><li>Lu, H., Ma, K., Jin, L., Zhu, H., Cao, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17&#946;-estradiol+rescues+damages+following+traumatic+brain+injury+from+molecule+to+behavior+in+mice.">17&#946;-estradiol rescues damages following traumatic brain injury from molecule to behavior in mice.</a> Journal of Cell Physiology. 233 (2), 1712-1722 (2018).</li><li>Meydan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+testosterone+on+orchiectomy-induced+oxidative+damage+in+the+rat+hippocampus.">Effects of testosterone on orchiectomy-induced oxidative damage in the rat hippocampus.</a> Journal of Chemical Neuroanatomy. 40 (4), 281-285 (2010).</li><li>Ohlson, N., Bergh, A., Persson, M. L., Wikstr&#246;m, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Castration+rapidly+decreases+local+insulin-like+growth+factor-1+levels+and+inhibits+its+effects+in+the+ventral+prostate+in+mice.">Castration rapidly decreases local insulin-like growth factor-1 levels and inhibits its effects in the ventral prostate in mice.</a> Prostate. 66 (16), 1687-1697 (2006).</li><li>Tehranipour, M., Moghimi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effects+of+testosterone+on+regenerating+spinal+cord+motoneurons+in+rats.">Neuroprotective effects of testosterone on regenerating spinal cord motoneurons in rats.</a> Journal of Motor Behavior. 42 (3), 151-155 (2010).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+ovariectomy+on+olfactory+neuron+regeneration+in+mice.">The impact of ovariectomy on olfactory neuron regeneration in mice.</a> Chemical Senses. 45 (3), 203-209 (2020).</li><li>Koebele, S. V., Bimonte-Nelson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+menopause:+The+utility+of+rodents+in+translational+behavioral+endocrinology+research.">Modeling menopause: The utility of rodents in translational behavioral endocrinology research.</a> Maturitas. 87, 5-17 (2016).</li></ol>

L’ablation chirurgicale des testicules et des ovaires permet d’étudier la physiologie murine en privation hormonale contrôlée. Cette technique est importante pour de nombreux domaines scientifiques, notamment la neurodégénérescence, le métabolisme minéral, le système cardiovasculaire et la santé reproductive 15,16,17,18,19,20,21.<sup c...

Les testicules et les ovaires sont les principaux organes responsables de la production d’hormones sexuelles. La cascade de communication hormonale conduisant à la production de testostérone et d’œstrogènes est un processus bien caractérisé qui commence dans l’hypothalamus avec la libération de l’hormone de libération des gonadotrophines (GnRH)1. La libération de GnRH provoque la libération de l’hormone lutéinisante (LH) et de l’hormone folliculo-stimulante (FSH) par l’hypophyse. Lorsque ces hormones pénètrent dans la circulation sanguine, elles affectent ensuite d’autres tissus du corps. La cible principale de la LH est les testicules (chez les hommes) et les ovaires (chez les femmes)2. En réponse à la LH, les testicules produisent et libèrent de la testostérone3. De même, les ovaires produisent de l’œstrogène4. Bien que les effets escomptés de ces hormones soient de préparer les cellules et le corps à la fécondation et d’assurer le bon fonctionnement du système reproducteur, de nombreux autres systèmes corporels peuvent être affectés.
Les hormones sexuelles ont été associées à plusieurs fonctions physiologiques. Par exemple, l’œstrogène aide à maintenir l’homéostasie osseuse en empêchant la résorption de l’os par les ostéoclastes. Pour cette raison, des modèles murins ovariectomisés peuvent être utilisés pour étudier la physiologie des maladies osseuses telles que l’ostéoporose 5,6,7. La testostérone et les œstrogènes sont également des cibles de recherche pour de nombreuses maladies cardiovasculaires et neurodégénératives. Récemment, une production élevée de testostérone associée à un régime riche en graisses a été liée au stress oxydatif vasculaire8. Dans le cerveau, les modifications de la LH après une ovariectomie ont provoqué des altérations de la mémoire spatiale9. La réduction des œstrogènes après une ovariectomie est également devenue un système modèle pour l’étude de la mort cellulaire dans l’hippocampe, car cela peut induire l’apoptose, entraînant des déficits de mémoire10. La testostérone a également montré un rôle dans la croissance des reins à la fois chez la souris et chez l’homme après une transplantation rénale11.
La création d’un modèle murin privé d’hormones permet d’étudier les hormones sexuelles et leurs cascades hormonales sur diverses maladies ou tissus. Cela peut être accompli par l’ablation chirurgicale des testicules (orchidectomie) ou des ovaires (ovariectomie). Cette procédure peut être effectuée chez des souris de n’importe quelle souche lorsqu’elles sont aussi jeunes que l’âge du sevrage (vingt et un jours) ou à tout âge adulte. L’ovavariectomie est pratiquée chez les souris femelles, tandis que l’orchidectomie est pratiquée chez les souris mâles. En enlevant ces organes, les niveaux d’œstrogène et de testostérone, et bon nombre de leurs dérivés, tels que la progestérone, peuvent êtreconsidérablement réduits. Le processus d’orchiectomie ou d’ovariectomie chez la souris peut être rapide et peu invasif avec la technique appropriée. L’excision rapide de ces organes de manière sûre et efficace peut permettre un traitement chirurgical rapide tout en maintenant un nombre minimal de souris en ayant un taux de survie de 100% lorsqu’il est effectué correctement. Ici, nous détaillons un protocole d’exérèse rapide des testicules et des ovaires et démontrons le suivi post-chirurgical approprié pour permettre aux chercheurs d’effectuer cette chirurgie rapidement et en toute sécurité. Nous incluons également des exemples visuels des organes sexuels et des tissus environnants pour fournir au chirurgien des repères anatomiques lors de l’exécution de cette procédure.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G 1/2&#34; Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoClip System</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12020-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine Solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC0158124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-Tipped Applicators</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10-000-692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double -ended Micro Spatula</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10091-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Galilean Loupes</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>28050-30</td>
			<td>Optional, can provide better clarity during procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Sponges, 4&#34;x4&#34;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-761-52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Temp Cautery Kit</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18010-00</td>
			<td>Using the fine tip attachment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holders</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12001-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PGA Absorbable Suture:4-0 / NFS-2 Reverse Cutting 19MM / 30 IN</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>29242</td>
			<td>4-0 or 5-0 Absorbable sutures are best</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Warming pad</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>RT-0515</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Alcohol Prep Pads</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Locking Micro Needle Holders</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12060-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>140-60-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors - 2.5mm Cutting Edge</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veet Sensitive Hair Remover Gel Cream</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wahl Professional Animal Compact Trimmer and Grooming Kit, Blue&#160;</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>#9861-900</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine orchiectomy and ovariectomy to reduce sex hormone production

La signalisation des hormones sexuelles joue un rôle essentiel dans plusieurs systèmes d’organes ainsi que dans la progression de diverses maladies, y compris les maladies neurodégénératives. La manipulation des niveaux d’hormones sexuelles dans le système modèle murin permet d’étudier leur impact sur les organes/tissus et dans la progression de la maladie. L’orchidectomie - l’ablation chirurgicale des testicules - et l’ovariectomie - l’ablation chirurgicale des ovaires - fournissent une méthode pour épuiser les hormones sexuelles endogènes afin que les niveaux d’hormones précis puissent être fournis par des médicaments ou d’autres méthodes d’administration. Ici, nous fournissons des méthodes rapides et peu invasives pour l’orchidectomie et l’ovariectomie dans le système modèle murin pour la réduction des hormones sexuelles. Ce protocole détaille la préparation chirurgicale et l’excision des testicules à travers le sac scrotal, et l’excision des ovaires par deux incisions dans le dos latéral droit et gauche.

La procédure présentée ici est réalisée chez des souris âgées d’un à trois mois dans le fond C57BL/6J. Les souris mâles pesaient de 16 à 28 g et les souris femelles pesaient de 14 à 24 g au moment de la procédure. Cette procédure a été optimisée pour être applicable aux souris de différents âges, du sevrage à l’âge adulte.
L’orchidectomie chirurgicale consiste en une seule incision cutanée dans le sac scrotal ventral, comme le montre la figure 1...

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Murine Orchiectomy and Ovariectomy to Reduce Sex Hormone Production

Ce manuscrit décrit une façon cohérente d’effectuer rapidement des orchiectomies et des ovariectomies de rongeurs de survie.

Orchidectomie murine et ovarictomie pour réduire la production d’hormones sexuelles

Sex hormone signaling plays a critical role in multiple organ systems as well as in the progression of various diseases, including neurodegenerative ...

L’objectif global de cette procédure est de démontrer l’ablation chirurgicale des testicules et des ovaires murins de manière rapide, sûre et efficace. L’orchidectomie murine est réalisée par une incision de la ligne médiane ventrale dans le sac scrotal, où les testicules sont isolés et retirés, suivie de la fermeture de l’incision cutanée. L’ovariectomie murine est réalisée par une incision dorsolatérale dans l’abdomen où l’ovaire est isolé et retiré, suivie d’une fermeture de l’incision cutanée, avec la possibilité de répéter cette procédure de l’autre côté pour effectuer une ovariectomie bilatérale.Pour commencer l’orchidectomie murine, commencez d’abord par enregistrer le poids d’une souris mâle et préparez-vous à administrer les analgésiques et les anesthésiques appropriés conformément aux directives de votre établissement. Une fois que la souris est sous anesthésie, couvrez les yeux avec un gel lubrifiant pour les yeux pour les protéger du dessèchement pendant la procédure. Avant de continuer, assurez-vous que la souris est à un niveau d’anesthésie approprié en effectuant un test de réponse au pincement de l’orteil.Ensuite, rasez les zones inguinale et scrotale de la souris. À l’aide d’un applicateur à embout cotonneux, appliquez une fine couche de crème dépilatoire dépilatoire sur le site chirurgical et les zones environnantes. Après 30 secondes, retirez la crème dépilatoire avec l’éponge de gaze propre.Transférez la souris dans une zone chirurgicale et assurez-vous qu’une source de chaleur est disponible. Utilisez du ruban adhésif souple pour faire adhérer les pattes de la souris au tapis chirurgical. Si les testicules sont montés dans l’abdomen, exercez une légère pression sur l’abdomen pour les aider à descendre.Frottez la peau avec une solution de bétadine, en commençant par le centre sur le site chirurgical et en travaillant facilement vers l’extérieur vers le bord de la zone rasée. Faites suivre le gommage à la bétadine d’un gommage à l’alcool effectué de la même manière. Répétez ce processus trois fois pour assurer une bonne désinfection de la peau.Couvrez la souris avec le champ chirurgical. Saisissez la peau et faites une incision médiane d’environ 1 à 1 1/2 centimètre de longueur. En saisissant le bord coupé de la peau, utilisez un instrument à bout émoussé pour séparer la peau du tissu sous-jacent.Prenez le temps de le faire sur les bords latéraux, supérieurs et inférieurs de l’incision. Ensuite, isolez un testicule en faisant glisser l’incision cutanée pour qu’elle soit directement au-dessus. Utilisez une paire de pinces pour saisir le muscle crémaster mince et transparent qui entoure le testicule.L’identification du bon tissu peut être confirmée par sa transparence et sa capacité à se déplacer indépendamment des tissus sous-jacents qu’il renferme. Ensuite, incisez le muscle crémaster en faisant une incision dans l’apex du tissu. Placez une pince de verrouillage sur le bord postérieur du muscle crémaster coupé pour maintenir la tension sur le tissu.Utilisez une paire de pinces pour saisir le testicule et l’extérioriser de sa gaine crémaster. Une fois le testicule sorti, roulez le tissu latéralement et localisez le point d’insertion du crémaster qui relie le muscle crémaster au testicule et à l’épididyme sur la face postérieure du testicule. Serrez et déchirez ce tissu pour rompre cette connexion.Extériorisez le coussinet adipeux inguinal en le tirant lentement. Ce faisant, surveillez les signes de saignement et assurez-vous de ne pas endommager les vaisseaux sanguins dans le processus. Ensuite, utilisez une paire d’hémostatiques verrouillables pour serrer le cordon spermatique et les vaisseaux sanguins.Tout en maintenant une légère tension sur le testicule, cautériser le cordon spermatique et les vaisseaux sanguins distaux à la pince hémostatique. Relâchez lentement l’hémostatique et assurez-vous que le moignon tissulaire a une bonne hémostase et ne continue pas à saigner. L’application d’une légère pression vers l’extérieur sur le muscle crémaster permettra à ce moignon de tissu de se rétracter dans la cavité corporelle.Rapprochez les deux côtés du muscle crémaster. À l’aide de sutures résorbables 4-0 ou 5-0, placez une suture pour joindre les deux extrémités du muscle crémaster. Une fois la suture terminée, coupez les extrémités du matériau de suture pour qu’elles aient une longueur de 1/2 centimètre.Répétez ce processus pour l’autre testicule en faisant glisser l’incision cutanée pour qu’elle soit au-dessus de l’autre côté et suivez les mêmes étapes que celles utilisées pour retirer le premier testicule. Une fois que les deux testicules ont été retirés et que les deux côtés du crémaster ont été suturés, inversez la peau vers le haut et préparez-vous à appliquer un clip sur la plaie. Assurez-vous que les extrémités de la suture ne seront pas coincées dans le clip de la plaie.La souris est maintenant prête à poursuivre la surveillance postopératoire. Pour vous préparer à l’ovariectomie murine, pesez une souris femelle et administrez-lui des analgésiques et une anesthésie conformément aux directives de votre établissement. Administrez un gel lubrifiant pour les yeux et assurez-vous que la souris n’a pas de réponse de pincement des orteils.Rasez les régions dorsolatérales du dos de la souris pour préparer le site chirurgical. À l’aide d’un applicateur à embout de coton, appliquez une couche de crème dépilatoire dépilatoire sur la zone rasée. Après 30 secondes, retirez la crème avec une éponge de gaze propre.Transférez la souris sur un tapis chirurgical et assurez-vous qu’une source de chaleur est disponible. Frottez la peau avec la solution de bétadine, en commençant par le centre et en travaillant facilement vers l’extérieur vers le bord de la zone rasée. Ensuite, frottez la peau avec une solution d’alcool à 70% appliquée de la même manière.Répétez ce processus trois fois au total pour assurer une bonne désinfection de la peau. Planifiez l’incision chirurgicale comme indiqué dans le protocole écrit. Placez un champ chirurgical sur le site chirurgical de la souris.Saisissez la peau avec une pince et incisez la peau avec une incision d’un centimètre. Utilisez un instrument à bout émoussé ou une simple paire d’hémostatiques pour séparer la peau du tissu sous-jacent. Prenez le temps de le faire sur les bords latéraux, supérieurs et inférieurs de l’incision.Saisissez la paroi abdominale et incisez avec une incision de 1/2 centimètre. Utilisez une paire de pinces pour localiser l’ovaire à l’intérieur de l’incision et tirez pour l’extérioriser. Une fois les tissus identifiés, utilisez une paire d’hémostatiques pour clamper et écraser la corne utérine distale.Utilisez une deuxième paire d’hémostatiques ou une paire de pinces pour serrer juste à l’extérieur de la première pince. En maintenant l’hémostatique inférieur immobile, tirez la pince supérieure vers le haut et loin du corps pour effectuer un écrasement et une déchirure de la corne utérine distale. Relâchez lentement l’hémostatique et surveillez pour vous assurer qu’il n’y a pas de saignement excessif provenant du site chirurgical.Rapprochez les deux côtés de la paroi abdominale et suturez l’incision fermée, à l’aide d’une seule suture avec un matériau de suture résorbable 4-0. Une fois la suture fixée, coupez les extrémités du matériau de suture pour qu’elles aient une longueur de 1/2 centimètre. Rapprochez les deux côtés de la peau et préparez-vous à placer un clip pour la plaie.Tout en éversant la peau, placez une pince sur le site de l’incision. La souris est maintenant prête à poursuivre la surveillance postopératoire. Documentez la date et l’heure de l’intervention et l’administration d’analgésiques conformément aux directives de votre établissement.Une fois qu’une souris a subi une orchidectomie chirurgicale ou une ovariectomie, transférez-la dans une cage propre et chauffée. Une fois qu’une souris a retrouvé sa position couchée sternale, placez-la dans une cage propre et donnez-lui de la nourriture humide et de l’eau. Pendant leur convalescence, vérifiez fréquemment le site chirurgical de la souris et recherchez tout signe d’infection ou de saignement.Pour éviter d’endommager le clip de la plaie, retirez tous les habitats d’igloo pour rongeurs de la cage d’une souris ovariectomie pendant une semaine après la chirurgie. Après 14 jours, retirez les clips de la plaie de la peau de la souris. Le protocole démontré détaille comment effectuer une orchidectomie et une ovariectomie chez une souris pour générer un modèle appauvri en hormones sexuelles.Cela implique l’ablation des testicules par une incision médiane dans le scrotum, suivie de l’extériorisation des testicules et de la section du cordon spermatique dans les vaisseaux sanguins, ce qui entraîne l’ablation du testicule, de l’épididyme et des coussinets adipeux inguinaux. L’ovariectomie chirurgicale peut être réalisée par une incision dorsolatérale dans le dos et l’extériorisation de l’ovaire, de l’oviducte et de la corne utérine distale. Ceci est suivi par la section de la corne utérine distale, conduisant à l’ablation de l’ovaire et de l’oviducte.Une technique chirurgicale minutieuse et des soins postopératoires appropriés se traduiront par des sites chirurgicaux bien cicatrisés. Ces procédures chirurgicales peuvent être validées en analysant les niveaux d’hormones dans des échantillons de sérum de souris une semaine après l’orchidectomie. L’ovarectomie peut être confirmée par l’observation d’une atrophie utérine suite à l’ablation des ovaires.Ce protocole permet l’ablation chirurgicale rapide et efficace des ovaires et des testicules de souris afin de générer un modèle appauvri en hormones sexuelles. Cela peut avoir de nombreuses utilisations pour étudier comment l’épuisement de ces hormones affecte divers organes et processus physiologiques.

Research

JoVE Journal

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Recherche

Médecine

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L&#39;isolement et l&#39;aide de sections d&#39;encéphalopathie mésentérique artère et la veine comme les essais biologiques pour tester vasoactivité dans l&#39;intestin grêle

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

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Une<em&gt; Ex vivo</em&gt; Modèle pour étudier action hormone dans le sein humain

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

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