Name: murine orchiectomy and ovariectomy to reduce sex hormone production
Uploaded: 2023-11-17T14:40:00
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Ringraziamo l'Animal Resource Center dell'Università del Texas Southwestern Medical Center per il loro aiuto nella formazione chirurgica e nella revisione del protocollo. Ringraziamo il team di supporto di Wert Lab per la loro preziosa assistenza. Questo lavoro è stato sostenuto dai fondi del National Institute of Health (NIH P30EY030413). Biorender.com è stato utilizzato per la creazione di schemi di cartoni animati.

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali presso l'UTSW (APN#2019-102840).
1. Orchiectomia murina
<ol><li>Preparare un campo di lavoro asettico e assicurarsi che gli strumenti chirurgici necessari siano stati sterilizzati e siano prontamente disponibili. Seguire pratiche asettiche per la chirurgia di sopravvivenza dei roditori.</li>
	<li>Registrare il peso del topo maschio e somministrare il metodo d...

<ol>
	<li>Kaprara, A., Huhtaniemi, I. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hypothalamus-pituitary-gonad+axis:+Tales+of+mice+and+men.">The hypothalamus-pituitary-gonad axis: Tales of mice and men.</a> Metabolism. 86, 3-17 (2018).</li><li>Stamatiades, G. A., Kaiser, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gonadotropin+regulation+by+pulsatile+GnRH:+Signaling+and+gene+expression.">Gonadotropin regulation by pulsatile GnRH: Signaling and gene expression.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 463, 131-141 (2018).</li><li>Plant, T. M., Marshall, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+functional+significance+of+FSH+in+spermatogenesis+and+the+control+of+its+secretion+in+male+primates.">The functional significance of FSH in spermatogenesis and the control of its secretion in male primates.</a> Endocrine Reviews. 22 (6), 764-786 (2001).</li><li>Fuentes, N., Silveyra, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+receptor+signaling+mechanisms.">Estrogen receptor signaling mechanisms.</a> Advances in Protein Chemistry and Structural Biology. 116, 135-170 (2019).</li><li>Guo, X., Yu, X., Yao, Q., Qin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+effects+of+ovariectomy+on+bone+microstructure,+bone+turnover+markers+and+mechanical+properties+in+rats.">Early effects of ovariectomy on bone microstructure, bone turnover markers and mechanical properties in rats.</a> BMC Musculoskeletal Disorder. 23 (1), 316 (2022).</li><li>Yu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-mobility+group+box+chromosomal+protein-1+deletion+alleviates+osteoporosis+in+OVX+rat+model+via+suppressing+the+osteoclastogenesis+and+inflammation.">High-mobility group box chromosomal protein-1 deletion alleviates osteoporosis in OVX rat model via suppressing the osteoclastogenesis and inflammation.</a> Journal of Orthopedic Surgery and Research. 17 (1), 232 (2022).</li><li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quercetin+attenuates+osteoporosis+in+orchiectomy+mice+by+regulating+glucose+and+lipid+metabolism.">Quercetin attenuates osteoporosis in orchiectomy mice by regulating glucose and lipid metabolism.</a> Frontiers in Endocrinology (Lausanne). 13, 849544 (2022).</li><li>Costa, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testosterone+contributes+to+vascular+dysfunction+in+young+mice+fed+a+high+fat+diet+by+promoting+nuclear+factor+E2-related+factor+2+downregulation+and+oxidative+stress.">Testosterone contributes to vascular dysfunction in young mice fed a high fat diet by promoting nuclear factor E2-related factor 2 downregulation and oxidative stress.</a> Frontiers in Physiology. 13, 837603 (2022).</li><li>Bohm-Levine, N., Goldberg, A. R., Mariani, M., Frankfurt, M., Thornton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reducing+luteinizing+hormone+levels+after+ovariectomy+improves+spatial+memory:+Possible+role+of+brain-derived+neurotrophic+factor.">Reducing luteinizing hormone levels after ovariectomy improves spatial memory: Possible role of brain-derived neurotrophic factor.</a> Hormones and Behavior. 118, 104590 (2020).</li><li>Pandey, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+deficiency+induces+memory+loss+via+altered+hippocampal+HB-EGF+and+autophagy.">Estrogen deficiency induces memory loss via altered hippocampal HB-EGF and autophagy.</a> Journal of Endocrinology. 244 (1), 53-70 (2020).</li><li>Laouari, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sexual+dimorphism+of+kidney+growth+in+mice+and+humans.">The sexual dimorphism of kidney growth in mice and humans.</a> Kidney International. 102 (1), 78-95 (2022).</li><li>Str&#246;m, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovariectomy+and+17&#946;-estradiol+replacement+in+rats+and+mice:+a+visual+demonstration.">Ovariectomy and 17&#946;-estradiol replacement in rats and mice: a visual demonstration.</a> Journal of Visualized Experiments. (64), e4013 (2012).</li><li>Valkenburg, K. C., Amend, S. R., Pienta, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+prostate+micro-dissection+and+surgical+castration.">Murine prostate micro-dissection and surgical castration.</a> Journal of Visualized Experiments. (111), e53984 (2016).</li><li>Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+rodent+surgery+for+the+new+surgeon.">Principles of rodent surgery for the new surgeon.</a> Journal of Visualized Experiments. (47), e2586 (2011).</li><li>Haider, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+sex+hormones+in+modulating+myocardial+perfusion+and+coronary+flow+reserve.">Role of sex hormones in modulating myocardial perfusion and coronary flow reserve.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49 (7), 2209-2218 (2022).</li><li>Joll, J. E., Bersi, M. R., Nyman, J. S., Merryman, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+early+bilateral+ovariectomy+in+mice+as+a+model+of+left+heart+disease.">Evaluation of early bilateral ovariectomy in mice as a model of left heart disease.</a> American Journal of Physiology Heart-Circulartory Physiology. 322 (6), H1080-H1085 (2022).</li><li>Lu, H., Ma, K., Jin, L., Zhu, H., Cao, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17&#946;-estradiol+rescues+damages+following+traumatic+brain+injury+from+molecule+to+behavior+in+mice.">17&#946;-estradiol rescues damages following traumatic brain injury from molecule to behavior in mice.</a> Journal of Cell Physiology. 233 (2), 1712-1722 (2018).</li><li>Meydan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+testosterone+on+orchiectomy-induced+oxidative+damage+in+the+rat+hippocampus.">Effects of testosterone on orchiectomy-induced oxidative damage in the rat hippocampus.</a> Journal of Chemical Neuroanatomy. 40 (4), 281-285 (2010).</li><li>Ohlson, N., Bergh, A., Persson, M. L., Wikstr&#246;m, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Castration+rapidly+decreases+local+insulin-like+growth+factor-1+levels+and+inhibits+its+effects+in+the+ventral+prostate+in+mice.">Castration rapidly decreases local insulin-like growth factor-1 levels and inhibits its effects in the ventral prostate in mice.</a> Prostate. 66 (16), 1687-1697 (2006).</li><li>Tehranipour, M., Moghimi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effects+of+testosterone+on+regenerating+spinal+cord+motoneurons+in+rats.">Neuroprotective effects of testosterone on regenerating spinal cord motoneurons in rats.</a> Journal of Motor Behavior. 42 (3), 151-155 (2010).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+ovariectomy+on+olfactory+neuron+regeneration+in+mice.">The impact of ovariectomy on olfactory neuron regeneration in mice.</a> Chemical Senses. 45 (3), 203-209 (2020).</li><li>Koebele, S. V., Bimonte-Nelson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+menopause:+The+utility+of+rodents+in+translational+behavioral+endocrinology+research.">Modeling menopause: The utility of rodents in translational behavioral endocrinology research.</a> Maturitas. 87, 5-17 (2016).</li></ol>

L'asportazione chirurgica dei testicoli e delle ovaie consente di studiare la fisiologia murina in condizioni di deprivazione ormonale controllata. Questa tecnica è importante per molti campi della scienza, tra cui la neurodegenerazione, il metabolismo minerale, la salute cardiovascolare e riproduttiva 15,16,17,18,19,20,21.<...

I testicoli e le ovaie sono i principali organi responsabili della produzione di ormoni sessuali. La cascata di comunicazione ormonale che porta alla produzione di testosterone ed estrogeni è un processo ben caratterizzato che inizia nell'ipotalamo con il rilascio dell'ormone di rilascio delle gonadotropine (GnRH)1. Il rilascio di GnRH provoca il rilascio dell'ormone luteinizzante (LH) e dell'ormone follicolo-stimolante (FSH) dalla ghiandola pituitaria. Quando questi ormoni entrano nel flusso sanguigno, influenzano altri tessuti del corpo. Il bersaglio primario dell'LH sono i testicoli (nei maschi) e le ovaie (nelle femmine)2. In risposta all'LH, i testicoli producono e rilasciano testosterone3. Allo stesso modo, le ovaie producono estrogeni4. Mentre gli effetti previsti di questi ormoni sono quelli di preparare le cellule e il corpo per la fecondazione e garantire un sistema riproduttivo funzionante, molti altri sistemi corporei possono essere influenzati.
Gli ormoni sessuali sono stati collegati a diverse funzioni fisiologiche. Ad esempio, gli estrogeni aiutano a mantenere l'omeostasi ossea impedendo il riassorbimento dell'osso da parte degli osteoclasti. Per questo motivo, i modelli murini ovariectomizzati possono essere utilizzati per studiare la fisiologia di malattie ossee come l'osteoporosi 5,6,7. Il testosterone e gli estrogeni sono anche obiettivi di ricerca per molte malattie cardiovascolari e neurodegenerative. Recentemente, l'elevata produzione di testosterone abbinata a una dieta ricca di grassi è stata collegata allo stress ossidativo vascolare8. Nel cervello, i cambiamenti nell'LH dopo l'ovariectomia hanno causato alterazioni nella memoria spaziale9. La riduzione degli estrogeni dopo l'ovariectomia è diventata anche un sistema modello per lo studio della morte cellulare nell'ippocampo, in quanto ciò può indurre apoptosi, con conseguenti deficit di memoria10. Il testosterone ha anche mostrato un ruolo nella crescita dei reni sia nei modelli murini che negli esseri umani dopo il trapianto di rene11.
La creazione di un modello murino privo di ormoni consente lo studio degli ormoni sessuali e delle loro cascate ormonali su varie malattie o tessuti. Ciò può essere ottenuto mediante rimozione chirurgica dei testicoli (orchiectomia) o delle ovaie (ovariectomia). Questa procedura può essere eseguita in topi di qualsiasi ceppo quando sono giovani come l'età dello svezzamento (ventuno giorni) o qualsiasi età adulta. L'ovariectomia viene eseguita nei topi femmine, mentre l'orchiectomia viene eseguita nei topi maschi. Rimuovendo questi organi, i livelli di estrogeni e testosterone e molti dei loro derivati, come il progesterone, possono essere notevolmente ridotti12,13. Il processo di esecuzione di orchiectomie o ovariectomie nei topi può essere rapido e minimamente invasivo con la tecnica appropriata. L'escissione rapida di questi organi in modo sicuro ed efficiente può consentire una rapida elaborazione chirurgica mantenendo il numero di topi al minimo avendo un tasso di sopravvivenza del 100% se eseguita correttamente. Qui, descriviamo in dettaglio un protocollo per l'escissione rapida dei testicoli e delle ovaie e dimostriamo il corretto monitoraggio post-chirurgico per consentire ai ricercatori di eseguire questo intervento chirurgico in modo rapido e sicuro. Includiamo anche esempi visivi degli organi sessuali e dei tessuti circostanti per fornire al chirurgo punti di riferimento anatomici durante l'esecuzione di questa procedura.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G 1/2&#34; Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoClip System</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12020-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine Solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC0158124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-Tipped Applicators</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10-000-692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double -ended Micro Spatula</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10091-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Galilean Loupes</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>28050-30</td>
			<td>Optional, can provide better clarity during procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Sponges, 4&#34;x4&#34;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-761-52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Temp Cautery Kit</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18010-00</td>
			<td>Using the fine tip attachment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holders</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12001-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PGA Absorbable Suture:4-0 / NFS-2 Reverse Cutting 19MM / 30 IN</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>29242</td>
			<td>4-0 or 5-0 Absorbable sutures are best</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Warming pad</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>RT-0515</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Alcohol Prep Pads</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Locking Micro Needle Holders</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12060-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>140-60-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors - 2.5mm Cutting Edge</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veet Sensitive Hair Remover Gel Cream</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wahl Professional Animal Compact Trimmer and Grooming Kit, Blue&#160;</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>#9861-900</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine orchiectomy and ovariectomy to reduce sex hormone production

La segnalazione degli ormoni sessuali svolge un ruolo fondamentale in più sistemi di organi e nella progressione di varie malattie, comprese le malattie neurodegenerative. La manipolazione dei livelli di ormoni sessuali nel sistema modello murino consente di studiare il loro impatto su organi/tessuti e all'interno della progressione della malattia. L'orchiectomia - la rimozione chirurgica dei testicoli - e l'ovariectomia - la rimozione chirurgica delle ovaie - forniscono un metodo per esaurire gli ormoni sessuali endogeni in modo che i livelli ormonali precisi possano essere forniti attraverso farmaci o altri metodi di somministrazione. Qui, forniamo metodi rapidi e minimamente invasivi sia per l'orchiectomia che per l'ovariectomia nel sistema modello murino per la riduzione degli ormoni sessuali. Questo protocollo descrive in dettaglio la preparazione chirurgica e l'escissione dei testicoli attraverso il sacco scrotale e l'escissione delle ovaie tramite due incisioni nel dorso laterale destro e sinistro.

La procedura qui presentata viene eseguita in topi di età compresa tra uno e tre mesi nel background C57BL/6J. I topi maschi pesavano 16-28 g e i topi femmine pesavano 14-24 g al momento della procedura. Questa procedura è stata ottimizzata per essere applicabile a topi di molte età, dallo svezzamento fino all'età adulta.
L'orchiectomia chirurgica comporta una singola incisione cutanea nel sacco scrotale ventrale, come illustrato nella Figura 1A. Entrambi i te...

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Murine Orchiectomy and Ovariectomy to Reduce Sex Hormone Production

Questo manoscritto descrive un modo coerente per eseguire rapidamente orchiectomie e ovariectomie di sopravvivenza nei roditori.

Orchiectomia murina e ovariectomia per ridurre la produzione di ormoni sessuali

Sex hormone signaling plays a critical role in multiple organ systems as well as in the progression of various diseases, including neurodegenerative ...

L'obiettivo generale di questa procedura è dimostrare la rimozione chirurgica di testicoli e ovaie murini in modo rapido, sicuro ed efficace. L'orchiectomia murina viene eseguita mediante un'incisione ventrale della linea mediana nel sacco scrotale, dove i testicoli vengono isolati e rimossi, seguita dalla chiusura dell'incisione cutanea. L'ovariectomia murina viene eseguita mediante un'incisione dorsolaterale nell'addome in cui l'ovaio viene isolato e rimosso, seguita dalla chiusura dell'incisione cutanea, con la possibilità di ripetere questa procedura sull'altro lato per eseguire un'ovariectomia bilaterale.Per iniziare l'orchiectomia murina, inizia prima registrando il peso di un topo maschio e preparati a somministrare i farmaci antidolorifici e gli anestetici appropriati secondo le linee guida istituzionali. Una volta che il topo è sotto anestesia, copri gli occhi con un gel lubrificante per gli occhi per proteggerli dalla secchezza durante la procedura. Prima di procedere, assicurarsi che il topo si trovi su un piano di anestesia appropriato eseguendo un test di risposta al pizzicamento delle dita dei piedi.Successivamente, radere le aree inguinali e scrotali del topo. Utilizzando un applicatore con punta in cotone, applicare uno strato sottile di crema depilatoria depilatoria sul sito chirurgico e sulle aree circostanti. Dopo 30 secondi, rimuovere la crema depilatoria con la spugna di garza pulita.Trasferisci il mouse in un'area chirurgica e assicurati che sia disponibile una fonte di calore. Utilizzare del nastro adesivo morbido per far aderire i piedi del mouse al tappetino chirurgico. Se i testicoli sono risaliti nell'addome, esercita una leggera pressione sull'addome per aiutarli a scendere.Strofinare la pelle con la soluzione di Betadine, partendo dal centro sopra il sito chirurgico e procedendo prontamente verso l'esterno verso il bordo dell'area rasata. Seguire lo scrub Betadine con uno scrub alcolico eseguito in modo simile. Ripetere questo processo tre volte per garantire una corretta disinfezione della pelle.Copri il topo con il telo chirurgico. Afferra la pelle e fai un'incisione sulla linea mediana di circa 1 o 1 1/2 centimetri di lunghezza. Afferrando il bordo tagliato della pelle, utilizzare uno strumento con punta smussata per separare la pelle dal tessuto sottostante.Prenditi del tempo per farlo sui bordi laterali, superiori e inferiori dell'incisione. Quindi, isola un testicolo facendo scorrere l'incisione cutanea in modo che sia direttamente sopra di esso. Usa un paio di pinze per afferrare il muscolo cremastere sottile e trasparente che circonda il testicolo.L'identificazione del tessuto corretto può essere confermata dalla sua trasparenza e dalla sua capacità di muoversi indipendentemente dai tessuti sottostanti racchiusi al suo interno. Successivamente, incidi il muscolo cremastere praticando un'incisione nell'apice del tessuto. Posizionare un morsetto di bloccaggio sul bordo posteriore del muscolo cremastere tagliato per mantenere la tensione sul tessuto.Usa un paio di pinze per afferrare il testicolo ed esteriorizzarlo dalla sua guaina cremastere. Una volta che il testicolo è fuori, arrotolare il tessuto lateralmente e localizzare il punto di inserzione del cremastere che collega il muscolo cremastere al testicolo e all'epididimo sul lato posteriore del testicolo. Clamp e strappa questo tessuto per recidere questa connessione.Esteriorizzare il cuscinetto adiposo inguinale estraendolo lentamente. Mentre lo fai, fai attenzione ai segni di sanguinamento e assicurati di non danneggiare nessuno dei vasi sanguigni durante il processo. Successivamente, utilizzare un paio di emostatici bloccabili per bloccare il funicolo spermatico e i vasi sanguigni.Mantenendo una leggera tensione sul testicolo, cauterizzare il funicolo spermatico e i vasi sanguigni distali alla pinza emostatica. Rilasciare lentamente l'emostatico e assicurarsi che il moncone di tessuto abbia una buona emostasi e non continui a sanguinare. L'applicazione di una leggera pressione verso l'esterno sul muscolo cremastere consentirà a questo moncone di tessuto di ritrarsi nella cavità del corpo.Unisci i due lati del muscolo cremastere. Utilizzando punti di sutura riassorbibili 4-0 o 5-0, posizionare una sutura per unire le due estremità del muscolo cremastere. Una volta terminata la sutura, tagliare le estremità del materiale di sutura in modo che siano lunghe 1/2 centimetro.Ripeti questo processo per l'altro testicolo facendo scorrere l'incisione cutanea in cima all'altro lato e segui gli stessi passaggi utilizzati per rimuovere il primo testicolo. Una volta che entrambi i testicoli sono stati rimossi ed entrambi i lati del cremaster sono stati suturati, estrarre la pelle verso l'alto e prepararsi ad applicare una clip per ferite sull'area. Assicurarsi che le estremità della sutura non rimangano impigliate nella clip della ferita.Il topo è ora pronto per continuare con il monitoraggio postoperatorio. Per prepararti all'ovariectomia murina, pesa un topo femmina e somministra farmaci antidolorifici e anestesia secondo le linee guida istituzionali. Somministrare gel lubrificante per gli occhi e verificare che il mouse non abbia una risposta al pizzicamento delle dita dei piedi.Radere le regioni dorsolaterali della schiena del topo per preparare il sito chirurgico. Utilizzando un applicatore con punta in cotone, applicare uno strato di crema depilatoria depilatoria sulla zona rasata. Dopo 30 secondi, rimuovere la crema con una spugna di garza pulita.Trasferisci il mouse su un tappetino chirurgico e assicurati che sia disponibile una fonte di calore. Strofinare la pelle con la soluzione di Betadine, partendo dal centro e procedendo prontamente verso l'esterno verso il bordo della zona rasata. Seguire strofinando la pelle con una soluzione alcolica al 70% applicata in modo simile.Ripetere questo processo per un totale di tre volte per garantire una corretta disinfezione della pelle. Pianificare l'incisione chirurgica come dettagliato nel protocollo scritto. Posizionare un telo chirurgico sul sito chirurgico del topo.Afferrare la pelle con una pinza e incidere la pelle con un'incisione di un centimetro. Usa uno strumento con punta smussata o un semplice paio di emostatici per separare la pelle dal tessuto sottostante. Prenditi del tempo per farlo sui bordi laterali, superiori e inferiori dell'incisione.Afferrare la parete addominale e incidere con un'incisione di 1/2 centimetro. Usa un paio di pinze per individuare l'ovaio all'interno dell'incisione e tira per esteriorizzarlo. Una volta identificati i tessuti, utilizzare un paio di emostatici per bloccare e schiacciare il corno uterino distale.Utilizzare un secondo paio di emostatici o un paio di pinze per bloccare appena distale al primo morsetto. Tenendo fermo l'emostatico inferiore, tirare il morsetto superiore verso l'alto e lontano dal corpo per eseguire uno schiacciamento e uno strappo del corno uterino distale. Rilasciare lentamente l'emostatico e osservare per assicurarsi che non vi sia un'eccessiva emorragia proveniente dal sito chirurgico.Unire i due lati della parete addominale e suturare l'incisione chiusa, utilizzando un'unica sutura con materiale di sutura riassorbibile 4-0. Una volta fissata la sutura, tagliare le estremità del materiale di sutura in modo che siano lunghe 1/2 centimetro. Riavvicina i due lati della pelle e preparati a posizionare una clip per ferite.Mentre si estrofletta la pelle, posizionare una clip per ferita sul sito dell'incisione. Il topo è ora pronto per continuare con il monitoraggio postoperatorio. Documentare la data e l'ora della procedura e la somministrazione dell'analgesico secondo le linee guida istituzionali.Una volta che un topo è stato sottoposto a orchiectomia chirurgica o ovariectomia, trasferiscilo in una gabbia pulita e riscaldata. Una volta che un topo ha riacquistato la decubito sternale, mettilo in una gabbia pulita e fornisci cibo umido e acqua. Durante il loro recupero, controllare frequentemente il sito chirurgico del topo e cercare eventuali segni di infezione o sanguinamento.Per evitare danni alla clip della ferita, rimuovere eventuali habitat di igloo di roditori dalla gabbia di un topo ovariectomia per una settimana dopo l'intervento chirurgico. Dopo 14 giorni, rimuovere le clip della ferita dalla pelle del topo. Il protocollo dimostrato descrive in dettaglio come eseguire un'orchiectomia e un'ovariectomia in un topo per generare un modello impoverito dagli ormoni sessuali.Ciò comporta la rimozione dei testicoli attraverso un'incisione della linea mediana nello scroto, seguita dall'esteriorizzazione dei testicoli e dalla recisione del funicolo spermatico nei vasi sanguigni, con conseguente rimozione del testicolo, dell'epididimo e dei cuscinetti adiposi inguinali. L'ovariectomia chirurgica può essere eseguita mediante un'incisione dorsolaterale nel dorso e l'esternalizzazione dell'ovaio, dell'ovidotto e del corno uterino distale. Segue la recisione del corno uterino distale, che porta alla rimozione dell'ovaio e dell'ovidotto.Un'attenta tecnica chirurgica e un'adeguata cura postoperatoria si tradurranno in siti chirurgici ben guariti. Queste procedure chirurgiche possono essere ulteriormente convalidate analizzando i livelli ormonali in campioni di siero di topo una settimana dopo l'orchiectomia. L'ovariectomia può essere confermata dall'osservazione dell'atrofia uterina in seguito all'asportazione delle ovaie.Questo protocollo consente la rimozione chirurgica rapida ed efficace di ovaie e testicoli dai topi per generare un modello impoverito di ormoni sessuali. Questo può avere molti usi per studiare come l'esaurimento di questi ormoni influisce su vari organi e processi fisiologici.

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