Name: murine orchiectomy and ovariectomy to reduce sex hormone production
Uploaded: 2023-11-17T14:40:00
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Agradecemos ao Centro de Recursos Animais do Centro Médico do Sudoeste do Texas por sua ajuda no treinamento cirúrgico e revisão de protocolos. Agradecemos à equipe de suporte do Wert Lab por sua inestimável assistência. Este trabalho foi apoiado por fundos do National Institute of Health (NIH P30EY030413). Biorender.com foi usado para a criação de esquemas de desenhos animados.

Todos os experimentos com animais foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da UTSW (APN#2019-102840).
1. Orquiectomia murina
<ol><li>Prepare um campo de trabalho asséptico e certifique-se de que os instrumentos cirúrgicos necessários foram esterilizados e estão prontamente disponíveis. Siga práticas assépticas para cirurgia de sobrevivência de roedores.</li>
	<li>Registrar o peso do camundongo macho e administrar o método de anestesia ...

<ol>
	<li>Kaprara, A., Huhtaniemi, I. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hypothalamus-pituitary-gonad+axis:+Tales+of+mice+and+men.">The hypothalamus-pituitary-gonad axis: Tales of mice and men.</a> Metabolism. 86, 3-17 (2018).</li><li>Stamatiades, G. A., Kaiser, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gonadotropin+regulation+by+pulsatile+GnRH:+Signaling+and+gene+expression.">Gonadotropin regulation by pulsatile GnRH: Signaling and gene expression.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 463, 131-141 (2018).</li><li>Plant, T. M., Marshall, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+functional+significance+of+FSH+in+spermatogenesis+and+the+control+of+its+secretion+in+male+primates.">The functional significance of FSH in spermatogenesis and the control of its secretion in male primates.</a> Endocrine Reviews. 22 (6), 764-786 (2001).</li><li>Fuentes, N., Silveyra, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+receptor+signaling+mechanisms.">Estrogen receptor signaling mechanisms.</a> Advances in Protein Chemistry and Structural Biology. 116, 135-170 (2019).</li><li>Guo, X., Yu, X., Yao, Q., Qin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+effects+of+ovariectomy+on+bone+microstructure,+bone+turnover+markers+and+mechanical+properties+in+rats.">Early effects of ovariectomy on bone microstructure, bone turnover markers and mechanical properties in rats.</a> BMC Musculoskeletal Disorder. 23 (1), 316 (2022).</li><li>Yu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-mobility+group+box+chromosomal+protein-1+deletion+alleviates+osteoporosis+in+OVX+rat+model+via+suppressing+the+osteoclastogenesis+and+inflammation.">High-mobility group box chromosomal protein-1 deletion alleviates osteoporosis in OVX rat model via suppressing the osteoclastogenesis and inflammation.</a> Journal of Orthopedic Surgery and Research. 17 (1), 232 (2022).</li><li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quercetin+attenuates+osteoporosis+in+orchiectomy+mice+by+regulating+glucose+and+lipid+metabolism.">Quercetin attenuates osteoporosis in orchiectomy mice by regulating glucose and lipid metabolism.</a> Frontiers in Endocrinology (Lausanne). 13, 849544 (2022).</li><li>Costa, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testosterone+contributes+to+vascular+dysfunction+in+young+mice+fed+a+high+fat+diet+by+promoting+nuclear+factor+E2-related+factor+2+downregulation+and+oxidative+stress.">Testosterone contributes to vascular dysfunction in young mice fed a high fat diet by promoting nuclear factor E2-related factor 2 downregulation and oxidative stress.</a> Frontiers in Physiology. 13, 837603 (2022).</li><li>Bohm-Levine, N., Goldberg, A. R., Mariani, M., Frankfurt, M., Thornton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reducing+luteinizing+hormone+levels+after+ovariectomy+improves+spatial+memory:+Possible+role+of+brain-derived+neurotrophic+factor.">Reducing luteinizing hormone levels after ovariectomy improves spatial memory: Possible role of brain-derived neurotrophic factor.</a> Hormones and Behavior. 118, 104590 (2020).</li><li>Pandey, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+deficiency+induces+memory+loss+via+altered+hippocampal+HB-EGF+and+autophagy.">Estrogen deficiency induces memory loss via altered hippocampal HB-EGF and autophagy.</a> Journal of Endocrinology. 244 (1), 53-70 (2020).</li><li>Laouari, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sexual+dimorphism+of+kidney+growth+in+mice+and+humans.">The sexual dimorphism of kidney growth in mice and humans.</a> Kidney International. 102 (1), 78-95 (2022).</li><li>Str&#246;m, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovariectomy+and+17&#946;-estradiol+replacement+in+rats+and+mice:+a+visual+demonstration.">Ovariectomy and 17&#946;-estradiol replacement in rats and mice: a visual demonstration.</a> Journal of Visualized Experiments. (64), e4013 (2012).</li><li>Valkenburg, K. C., Amend, S. R., Pienta, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+prostate+micro-dissection+and+surgical+castration.">Murine prostate micro-dissection and surgical castration.</a> Journal of Visualized Experiments. (111), e53984 (2016).</li><li>Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+rodent+surgery+for+the+new+surgeon.">Principles of rodent surgery for the new surgeon.</a> Journal of Visualized Experiments. (47), e2586 (2011).</li><li>Haider, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+sex+hormones+in+modulating+myocardial+perfusion+and+coronary+flow+reserve.">Role of sex hormones in modulating myocardial perfusion and coronary flow reserve.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49 (7), 2209-2218 (2022).</li><li>Joll, J. E., Bersi, M. R., Nyman, J. S., Merryman, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+early+bilateral+ovariectomy+in+mice+as+a+model+of+left+heart+disease.">Evaluation of early bilateral ovariectomy in mice as a model of left heart disease.</a> American Journal of Physiology Heart-Circulartory Physiology. 322 (6), H1080-H1085 (2022).</li><li>Lu, H., Ma, K., Jin, L., Zhu, H., Cao, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17&#946;-estradiol+rescues+damages+following+traumatic+brain+injury+from+molecule+to+behavior+in+mice.">17&#946;-estradiol rescues damages following traumatic brain injury from molecule to behavior in mice.</a> Journal of Cell Physiology. 233 (2), 1712-1722 (2018).</li><li>Meydan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+testosterone+on+orchiectomy-induced+oxidative+damage+in+the+rat+hippocampus.">Effects of testosterone on orchiectomy-induced oxidative damage in the rat hippocampus.</a> Journal of Chemical Neuroanatomy. 40 (4), 281-285 (2010).</li><li>Ohlson, N., Bergh, A., Persson, M. L., Wikstr&#246;m, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Castration+rapidly+decreases+local+insulin-like+growth+factor-1+levels+and+inhibits+its+effects+in+the+ventral+prostate+in+mice.">Castration rapidly decreases local insulin-like growth factor-1 levels and inhibits its effects in the ventral prostate in mice.</a> Prostate. 66 (16), 1687-1697 (2006).</li><li>Tehranipour, M., Moghimi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effects+of+testosterone+on+regenerating+spinal+cord+motoneurons+in+rats.">Neuroprotective effects of testosterone on regenerating spinal cord motoneurons in rats.</a> Journal of Motor Behavior. 42 (3), 151-155 (2010).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+ovariectomy+on+olfactory+neuron+regeneration+in+mice.">The impact of ovariectomy on olfactory neuron regeneration in mice.</a> Chemical Senses. 45 (3), 203-209 (2020).</li><li>Koebele, S. V., Bimonte-Nelson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+menopause:+The+utility+of+rodents+in+translational+behavioral+endocrinology+research.">Modeling menopause: The utility of rodents in translational behavioral endocrinology research.</a> Maturitas. 87, 5-17 (2016).</li></ol>

A remoção cirúrgica de testículos e ovários permite estudar a fisiologia murina sob privação hormonal controlada. Essa técnica é importante para vários campos da ciência, incluindo neurodegeneração, metabolismo mineral, saúde cardiovascular e reprodutiva 15,16,17,18,19,20,21. A...

Os testículos e ovários são os principais órgãos responsáveis pela produção de hormônios sexuais. A cascata de comunicação hormonal que leva à produção de testosterona e estrógeno é um processo bem caracterizado que se inicia no hipotálamo com a liberação do hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH)1. A liberação de GnRH causa a liberação de hormônio luteinizante (LH) e hormônio folículo-estimulante (FSH) da glândula pituitária. Como esses hormônios entram na corrente sanguínea, eles então afetam outros tecidos do corpo. O alvo primário do LH são os testículos (no sexo masculino) e os ovários (no sexo feminino)2. Em resposta ao LH, os testículos produzem e liberam testosterona3. Da mesma forma, os ovários produzem estrogênio4. Enquanto os efeitos pretendidos desses hormônios são preparar as células e o corpo para a fertilização e garantir um sistema reprodutivo funcional, muitos outros sistemas corporais podem ser afetados.
Os hormônios sexuais têm sido associados a diversas funções fisiológicas. Por exemplo, o estrogênio ajuda a manter a homeostase óssea, impedindo a reabsorção óssea pelos osteoclastos. Por essa razão, modelos de camundongos ovariectomizados podem ser utilizados para estudar a fisiologia de doenças ósseas como a osteoporose 5,6,7. Testosterona e estrogênio também são alvos de pesquisa para muitas doenças cardiovasculares e neurodegenerativas. Recentemente, a produção elevada de testosterona aliada à dieta rica em gordura tem sido associada ao estresse oxidativo vascular8. No cérebro, alterações no LH após ooforectomia têm causado alterações na memória espacial9. A redução de estrógenos após ooforectomia também se tornou um sistema modelo para estudar a morte celular no hipocampo, pois pode induzir apoptose, resultando em déficits de memória10. A testosterona também tem demonstrado um papel no crescimento dos rins tanto em modelos de camundongos quanto em humanos após transplante renal11.
A criação de um modelo murino privado de hormônios permite o estudo de hormônios sexuais e suas cascatas hormonais em várias doenças ou tecidos. Isso pode ser realizado pela remoção cirúrgica dos testículos (orquiectomia) ou ovários (ooforectomia). Este procedimento pode ser realizado em camundongos de qualquer linhagem quando eles são tão jovens quanto a idade de desmame (vinte e um dias) ou qualquer idade adulta. A ooforectomia é realizada em camundongos fêmeas, enquanto a orquiectomia é realizada em camundongos machos. Com a remoção desses órgãos, os níveis de estrogênio e testosterona e muitos de seus derivados, como a progesterona, podem ser bastante reduzidos12,13. O processo de realização de orquiectomias ou ovariectomias em camundongos pode ser rápido e minimamente invasivo com a técnica adequada. A rápida excisão desses órgãos de forma segura e eficiente pode permitir um processamento cirúrgico rápido, mantendo o número mínimo de camundongos por ter uma taxa de sobrevivência de 100% quando realizada corretamente. Aqui, detalhamos um protocolo para a excisão rápida dos testículos e ovários e demonstramos o acompanhamento pós-cirúrgico adequado para permitir que os pesquisadores realizem essa cirurgia de forma rápida e segura. Também incluímos exemplos visuais dos órgãos sexuais e tecidos circundantes para fornecer ao cirurgião pontos de referência anatômicos ao realizar este procedimento.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G 1/2&#34; Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoClip System</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12020-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine Solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC0158124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-Tipped Applicators</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10-000-692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double -ended Micro Spatula</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10091-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Galilean Loupes</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>28050-30</td>
			<td>Optional, can provide better clarity during procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Sponges, 4&#34;x4&#34;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-761-52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Temp Cautery Kit</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18010-00</td>
			<td>Using the fine tip attachment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holders</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12001-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PGA Absorbable Suture:4-0 / NFS-2 Reverse Cutting 19MM / 30 IN</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>29242</td>
			<td>4-0 or 5-0 Absorbable sutures are best</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Warming pad</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>RT-0515</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Alcohol Prep Pads</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Locking Micro Needle Holders</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12060-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>140-60-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors - 2.5mm Cutting Edge</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veet Sensitive Hair Remover Gel Cream</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wahl Professional Animal Compact Trimmer and Grooming Kit, Blue&#160;</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>#9861-900</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine orchiectomy and ovariectomy to reduce sex hormone production

A sinalização de hormônios sexuais desempenha um papel crítico em vários sistemas de órgãos, bem como na progressão de várias doenças, incluindo doenças neurodegenerativas. A manipulação dos níveis de hormônios sexuais no sistema modelo murino permite o estudo de seu impacto em órgãos/tecidos e na progressão da doença. Orquiectomia - a remoção cirúrgica dos testículos - e ovariectomia - a remoção cirúrgica dos ovários - fornecem um método para esgotar os hormônios sexuais endógenos para que os níveis hormonais precisos possam ser fornecidos através de drogas ou outros métodos de entrega. Aqui, fornecemos métodos rápidos e minimamente invasivos para orquiectomia e ooforectomia no sistema modelo murino para a redução de hormônios sexuais. Este protocolo detalha o preparo cirúrgico e a excisão dos testículos através do saco escrotal, e a excisão dos ovários através de duas incisões no dorso lateral direito e esquerdo.

O procedimento aqui apresentado é realizado em camundongos de um a três meses de idade no fundo C57BL/6J. Camundongos machos pesavam 16-28 g, e camundongos fêmeas pesavam 14-24 g no momento do procedimento. Este procedimento foi otimizado para ser aplicável em camundongos de várias idades, desde o desmame até a idade adulta.
A orquiectomia cirúrgica envolve uma única incisão cutânea no saco escrotal ventral, como mostra a Figura 1A. Ambos os testículos ...

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Murine Orchiectomy and Ovariectomy to Reduce Sex Hormone Production

Este manuscrito descreve uma maneira consistente de realizar rapidamente orquiectomias e ovariectomias de roedores de sobrevivência.

Orquiectomia murina e ooforectomia para reduzir a produção de hormônios sexuais

Sex hormone signaling plays a critical role in multiple organ systems as well as in the progression of various diseases, including neurodegenerative ...

O objetivo geral deste procedimento é demonstrar a remoção cirúrgica de testículos murinos e ovários de forma rápida, segura e eficaz. A orquiectomia murina é realizada por uma incisão ventral na linha média do saco escrotal, onde os testículos são isolados e removidos, seguido pelo fechamento da incisão da pele. A ooforectomia murina é realizada por uma incisão dorsolateral no abdome onde o ovário é isolado e removido, seguido pelo fechamento da incisão da pele, com a opção de repetir este procedimento do outro lado para realizar uma ooforectomia bilateral.Para iniciar a orquiectomia murina, comece registrando o peso de um camundongo macho e prepare-se para administrar a medicação para dor e anestésicos apropriados de acordo com suas diretrizes institucionais. Quando o rato estiver sob anestesia, cubra os olhos com um gel lubrificante para os olhos para protegê-los do ressecamento durante o procedimento. Antes de prosseguir, certifique-se de que o mouse esteja em um plano apropriado de anestesia realizando um teste de resposta à pinça dos dedos.Em seguida, raspe as áreas inguinal e escrotal do rato. Usando um aplicador com ponta de algodão, aplique uma fina camada de creme depilatório depilatório no local cirúrgico e áreas circundantes. Após 30 segundos, retire o creme depilatório com a compressa de gaze limpa.Transfira o mouse para uma área cirúrgica e verifique se uma fonte de calor está disponível. Use fita adesiva macia para aderir os pés do rato ao tapete cirúrgico. Se os testículos subiram para o abdômen, use uma pressão suave sobre o abdômen para ajudá-los a descer.Esfregue a pele com solução de Betadine, começando no centro sobre o local cirúrgico e trabalhando prontamente para fora em direção à borda da área raspada. Siga a esfoliação Betadine com uma esfoliação com álcool realizada de maneira semelhante. Repita este processo três vezes para garantir a desinfecção adequada da pele.Cubra o rato com o campo cirúrgico. Segure a pele e faça uma incisão mediana de cerca de 1 a 1 1/2 centímetros de comprimento. Segurando a borda cortada da pele, use um instrumento de ponta romba para separar a pele do tecido subjacente.Reserve um tempo para fazer isso nas bordas lateral, superior e inferior da incisão. Em seguida, isole um testículo deslizando a incisão da pele para ficar diretamente sobre ele. Use um par de pinças para agarrar o músculo cremaster fino e transparente que envolve o testículo.A identificação do tecido correto pode ser confirmada por sua transparência e sua capacidade de se mover independentemente dos tecidos subjacentes dentro dele. Em seguida, incite o músculo cremaster fazendo uma incisão no ápice do tecido. Coloque uma pinça de bloqueio na borda posterior do músculo cremaster cortado para manter a tensão no tecido.Use um par de pinças para agarrar o testículo e exteriorizá-lo de sua bainha cremaster. Uma vez que o testículo está fora, enrole o tecido lateralmente e localize o ponto de inserção cremaster que conecta o músculo cremaster ao testículo e ao epidídimo na face posterior do testículo. Aperte e rasgue esse tecido para cortar essa conexão.Exteriorize o coxim de gordura inguinal puxando-o lentamente para fora. Ao fazer isso, observe os sinais de sangramento e certifique-se de não prejudicar nenhum dos vasos sanguíneos no processo. Em seguida, use um par de hemostáticos de bloqueio para prender o cordão espermático e os vasos sanguíneos.Enquanto mantém uma leve tensão no testículo, cauterize o cordão espermático e os vasos sanguíneos distais à pinça do hemostático. Solte lentamente o hemostático e garanta que o coto tecidual tenha boa hemostasia e não continue a sangrar. A aplicação de uma ligeira pressão externa sobre o músculo cremaster permitirá que este coto de tecido se retraia para a cavidade do corpo.Junte os dois lados do músculo cremaster. Usando suturas absorvíveis 4-0 ou 5-0, colocar uma sutura para unir as duas extremidades do músculo cremaster. Uma vez terminada a sutura, aparar as extremidades do material de sutura para ter 1/2 centímetro de comprimento.Repita esse processo para o outro testículo, deslizando a incisão da pele para ficar em cima do outro lado, e siga os mesmos passos usados para remover o primeiro testículo. Uma vez que ambos os testículos foram removidos e ambos os lados do cremaster foram suturados, evert a pele para cima e prepare-se para aplicar um clipe de ferida na área. Certifique-se de que as extremidades da sutura não ficarão presas no clipe da ferida.O rato está agora pronto para continuar com a monitorização pós-operatória. Para se preparar para a ooforectomia murina, pese uma rata e administre medicação para dor e anestesia de acordo com suas diretrizes institucionais. Administre gel lubrificante para os olhos e verifique se o rato não tem resposta de pinça dos dedos.Raspar as regiões dorsolaterais das costas do camundongo para preparar o local cirúrgico. Usando um aplicador com ponta de algodão, aplique uma camada de creme depilatório depilatório na área raspada. Após 30 segundos, retire o creme com uma compressa de gaze limpa.Transfira o mouse para um tapete cirúrgico e verifique se uma fonte de calor está disponível. Esfregue a pele com solução de Betadine, começando no centro e trabalhando prontamente para fora em direção à borda da área raspada. Em seguida, esfregando a pele com solução de álcool a 70% aplicada de maneira semelhante.Repita este processo por um total de três vezes para garantir a desinfecção adequada da pele. Planejar a incisão cirúrgica conforme detalhado no protocolo escrito. Coloque um pano cirúrgico sobre o local cirúrgico do rato.Segure a pele com uma pinça e incida a pele com uma incisão de um centímetro. Use um instrumento de ponta romba ou um par simples de hemostáticos para separar a pele do tecido subjacente. Reserve um tempo para fazer isso nas bordas lateral, superior e inferior da incisão.Segure a parede abdominal e incite com uma incisão de 1/2 centímetro. Use um par de pinças para localizar o ovário dentro da incisão e puxe para exteriorizá-lo. Uma vez identificados os tecidos, use um par de hemostáticos para clampar e esmagar o corno uterino distal.Use um segundo par de hemostáticos ou um par de pinças para pinçar apenas distal à primeira pinça. Segurando o hemostático inferior imóvel, puxe a pinça superior para cima e para longe do corpo para realizar um esmagamento e ruptura do corno uterino distal. Solte lentamente o hemostático e observe para se certificar de que não há sangramento excessivo vindo do local cirúrgico.Unir os dois lados da parede abdominal e suturar a incisão fechada, utilizando-se uma única sutura com material absorvível 4-0. Uma vez fixada a sutura, aparar as extremidades do material de sutura para ter 1/2 centímetro de comprimento. Reúna os dois lados da pele e prepare-se para colocar um clipe de ferida.Ao evertar a pele, coloque um clipe da ferida sobre o local da incisão. O rato está agora pronto para continuar com a monitorização pós-operatória. Documente a data e hora do procedimento e a administração do analgésico de acordo com suas diretrizes institucionais.Uma vez que um camundongo tenha sido submetido a orquiectomia cirúrgica ou ooforectomia, transfira-os para uma gaiola limpa e aquecida. Uma vez que um rato tenha recuperado o decúbito esternal, coloque-os em uma gaiola limpa e forneça ração úmida e água. Durante sua recuperação, verifique frequentemente o local cirúrgico do camundongo e procure quaisquer sinais de infecção ou sangramento.Para evitar danos ao clipe da ferida, remova quaisquer habitats de iglu de roedor da gaiola de um camundongo ovariectomizado por uma semana após a cirurgia. Após 14 dias, remova os clipes da ferida da pele do rato. O protocolo demonstrado detalha como realizar uma orquiectomia e ooforectomia em um camundongo para gerar um modelo esgotado de hormônios sexuais.Isso envolve a remoção dos testículos através de uma incisão na linha média no escroto, seguida pela exteriorização dos testículos e corte do cordão espermático nos vasos sanguíneos, resultando na remoção do testículo, epidídimo e coxins de gordura inguinal. A ooforectomia cirúrgica pode ser realizada por uma incisão dorsolateral no dorso e exteriorizando o ovário, oviduto e corno uterino distal. Segue-se a corte do corno uterino distal, levando à remoção do ovário e do oviduto.A técnica cirúrgica cuidadosa e os cuidados pós-operatórios adequados resultarão em locais cirúrgicos bem cicatrizados. Esses procedimentos cirúrgicos podem ser validados pela análise dos níveis hormonais em amostras de soro de camundongos uma semana após a orquiectomia. A ooforectomia pode ser confirmada pela observação de atrofia uterina após a remoção dos ovários.Este protocolo permite a remoção cirúrgica rápida e eficaz de ovários e testículos de camundongos para gerar um modelo de esgotamento de hormônios sexuais. Isso pode ter muitos usos para estudar como a depleção desses hormônios afeta vários órgãos e processos fisiológicos.

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Medicina

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Isolando e com cortes de bovinos artéria e veia mesentérica como Bioassay teste para vasoactividade no intestino delgado

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

Um<em&gt; Ex vivo</em&gt; Modelo para estudar a ação do hormônio no peito humano

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Povidone Iodine Rectal Preparation at Time of Prostate Needle Biopsy is a Simple and Reproducible Means to Reduce Risk of Procedural Infection

Iodopovidona retal Preparação no momento da próstata agulha de biópsia é um simples e reprodutível meios para reduzir o risco de infecção Processual

Single institution and population-based studies highlight that infectious complications following transrectal ultrasound guided prostate needle biopsy ...

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

Transplante de células-tronco derivadas de tecido adiposo folha para reduzir o vazamento após colectomia parcial em um modelo do rato

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...

A Clinical Trial Assessing the Safety, Efficacy, and Delivery of Olive-Oil-Based Three-Chamber Bags for Parenteral Nutrition

Um ensaio clínico avaliando a segurança, eficácia e entrega de sacos de três câmaras à base de azeite para nutrição parenteral

Limited evidence exists to precisely estimate efficacy and safety differences between parenteral nutrition (PN) prepared using olive-oil-based ...

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

Os mecanismos subjacentes a secreção do hormônio Gut usando o isolado perfundido intestino de rato

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...

Cooling or Warming the Esophagus to Reduce Esophageal Injury During Left Atrial Ablation in the Treatment of Atrial Fibrillation

Resfriamento ou Aquecimento do Esôfago para reduzir a lesão esofágica durante a ablação atrial esquerda no tratamento da fibrilação atrial

Ablation of the left atrium using either radiofrequency (RF) or cryothermal energy is an effective treatment for atrial fibrillation (AF) and is the most ...

Network Pharmacology Prediction and Experimental Validation of Trichosanthes-Fritillaria thunbergii Action Mechanism Against Lung Adenocarcinoma

Network Pharmacology Prediction and Experimental Validation of Trichosanthes-Fritillaria thunbergii Action Mechanism Against Lung Adenocarcinoma

Predição de Farmacologia de Rede e Validação Experimental do Mecanismo de Ação do Trichosanthes-Fritillaria thunbergii Contra o Adenocarcinoma Pulmonar

We aimed to study the mechanism of Trichosanthes-Fritillaria thunbergii in treating lung adenocarcinoma (LUAD) based on network pharmacology and ...

Production of Modified Autologous Conditioned Serum and Ex Vivo Assessment of Its Healing Potential in Murine Corneal Epithelium

Production of Modified Autologous Conditioned Serum and Ex Vivo Assessment of Its Healing Potential in Murine Corneal Epithelium

Produção de Soro Autólogo Condicionado Modificado e Avaliação Ex Vivo de seu Potencial de Cicatrização em Epitélio Corneano Murino

Human blood-derived topical therapies have been a boon to clinicians in recent decades. Autologous serum (AS) and platelet-rich plasma (PRP) are enriched ...