Name: murine orchiectomy and ovariectomy to reduce sex hormone production
Uploaded: 2023-11-17T14:40:00
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Agradecemos al Centro de Recursos para Animales del Centro Médico Southwestern de la Universidad de Texas por su ayuda en la capacitación quirúrgica y la revisión del protocolo. Agradecemos al equipo de soporte de Wert Lab por su inestimable ayuda. Este trabajo ha sido apoyado por fondos del Instituto Nacional de Salud (NIH P30EY030413). Biorender.com utilizó para la creación de esquemas de dibujos animados.

Todos los experimentos con animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de UTSW (APN#2019-102840).
1. Orquiectomía murina
<ol><li>Prepare un campo de trabajo aséptico y asegúrese de que los instrumentos quirúrgicos necesarios se hayan esterilizado y estén fácilmente disponibles. Siga las prácticas asépticas para la cirugía de supervivencia de roedores.</li>
	<li>Registrar el peso del ratón macho y administrar el método de ane...

<ol>
	<li>Kaprara, A., Huhtaniemi, I. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hypothalamus-pituitary-gonad+axis:+Tales+of+mice+and+men.">The hypothalamus-pituitary-gonad axis: Tales of mice and men.</a> Metabolism. 86, 3-17 (2018).</li><li>Stamatiades, G. A., Kaiser, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gonadotropin+regulation+by+pulsatile+GnRH:+Signaling+and+gene+expression.">Gonadotropin regulation by pulsatile GnRH: Signaling and gene expression.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 463, 131-141 (2018).</li><li>Plant, T. M., Marshall, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+functional+significance+of+FSH+in+spermatogenesis+and+the+control+of+its+secretion+in+male+primates.">The functional significance of FSH in spermatogenesis and the control of its secretion in male primates.</a> Endocrine Reviews. 22 (6), 764-786 (2001).</li><li>Fuentes, N., Silveyra, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+receptor+signaling+mechanisms.">Estrogen receptor signaling mechanisms.</a> Advances in Protein Chemistry and Structural Biology. 116, 135-170 (2019).</li><li>Guo, X., Yu, X., Yao, Q., Qin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+effects+of+ovariectomy+on+bone+microstructure,+bone+turnover+markers+and+mechanical+properties+in+rats.">Early effects of ovariectomy on bone microstructure, bone turnover markers and mechanical properties in rats.</a> BMC Musculoskeletal Disorder. 23 (1), 316 (2022).</li><li>Yu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-mobility+group+box+chromosomal+protein-1+deletion+alleviates+osteoporosis+in+OVX+rat+model+via+suppressing+the+osteoclastogenesis+and+inflammation.">High-mobility group box chromosomal protein-1 deletion alleviates osteoporosis in OVX rat model via suppressing the osteoclastogenesis and inflammation.</a> Journal of Orthopedic Surgery and Research. 17 (1), 232 (2022).</li><li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quercetin+attenuates+osteoporosis+in+orchiectomy+mice+by+regulating+glucose+and+lipid+metabolism.">Quercetin attenuates osteoporosis in orchiectomy mice by regulating glucose and lipid metabolism.</a> Frontiers in Endocrinology (Lausanne). 13, 849544 (2022).</li><li>Costa, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testosterone+contributes+to+vascular+dysfunction+in+young+mice+fed+a+high+fat+diet+by+promoting+nuclear+factor+E2-related+factor+2+downregulation+and+oxidative+stress.">Testosterone contributes to vascular dysfunction in young mice fed a high fat diet by promoting nuclear factor E2-related factor 2 downregulation and oxidative stress.</a> Frontiers in Physiology. 13, 837603 (2022).</li><li>Bohm-Levine, N., Goldberg, A. R., Mariani, M., Frankfurt, M., Thornton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reducing+luteinizing+hormone+levels+after+ovariectomy+improves+spatial+memory:+Possible+role+of+brain-derived+neurotrophic+factor.">Reducing luteinizing hormone levels after ovariectomy improves spatial memory: Possible role of brain-derived neurotrophic factor.</a> Hormones and Behavior. 118, 104590 (2020).</li><li>Pandey, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+deficiency+induces+memory+loss+via+altered+hippocampal+HB-EGF+and+autophagy.">Estrogen deficiency induces memory loss via altered hippocampal HB-EGF and autophagy.</a> Journal of Endocrinology. 244 (1), 53-70 (2020).</li><li>Laouari, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sexual+dimorphism+of+kidney+growth+in+mice+and+humans.">The sexual dimorphism of kidney growth in mice and humans.</a> Kidney International. 102 (1), 78-95 (2022).</li><li>Str&#246;m, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovariectomy+and+17&#946;-estradiol+replacement+in+rats+and+mice:+a+visual+demonstration.">Ovariectomy and 17&#946;-estradiol replacement in rats and mice: a visual demonstration.</a> Journal of Visualized Experiments. (64), e4013 (2012).</li><li>Valkenburg, K. C., Amend, S. R., Pienta, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+prostate+micro-dissection+and+surgical+castration.">Murine prostate micro-dissection and surgical castration.</a> Journal of Visualized Experiments. (111), e53984 (2016).</li><li>Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+rodent+surgery+for+the+new+surgeon.">Principles of rodent surgery for the new surgeon.</a> Journal of Visualized Experiments. (47), e2586 (2011).</li><li>Haider, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+sex+hormones+in+modulating+myocardial+perfusion+and+coronary+flow+reserve.">Role of sex hormones in modulating myocardial perfusion and coronary flow reserve.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49 (7), 2209-2218 (2022).</li><li>Joll, J. E., Bersi, M. R., Nyman, J. S., Merryman, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+early+bilateral+ovariectomy+in+mice+as+a+model+of+left+heart+disease.">Evaluation of early bilateral ovariectomy in mice as a model of left heart disease.</a> American Journal of Physiology Heart-Circulartory Physiology. 322 (6), H1080-H1085 (2022).</li><li>Lu, H., Ma, K., Jin, L., Zhu, H., Cao, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17&#946;-estradiol+rescues+damages+following+traumatic+brain+injury+from+molecule+to+behavior+in+mice.">17&#946;-estradiol rescues damages following traumatic brain injury from molecule to behavior in mice.</a> Journal of Cell Physiology. 233 (2), 1712-1722 (2018).</li><li>Meydan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+testosterone+on+orchiectomy-induced+oxidative+damage+in+the+rat+hippocampus.">Effects of testosterone on orchiectomy-induced oxidative damage in the rat hippocampus.</a> Journal of Chemical Neuroanatomy. 40 (4), 281-285 (2010).</li><li>Ohlson, N., Bergh, A., Persson, M. L., Wikstr&#246;m, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Castration+rapidly+decreases+local+insulin-like+growth+factor-1+levels+and+inhibits+its+effects+in+the+ventral+prostate+in+mice.">Castration rapidly decreases local insulin-like growth factor-1 levels and inhibits its effects in the ventral prostate in mice.</a> Prostate. 66 (16), 1687-1697 (2006).</li><li>Tehranipour, M., Moghimi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effects+of+testosterone+on+regenerating+spinal+cord+motoneurons+in+rats.">Neuroprotective effects of testosterone on regenerating spinal cord motoneurons in rats.</a> Journal of Motor Behavior. 42 (3), 151-155 (2010).</li><li>Yamada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+ovariectomy+on+olfactory+neuron+regeneration+in+mice.">The impact of ovariectomy on olfactory neuron regeneration in mice.</a> Chemical Senses. 45 (3), 203-209 (2020).</li><li>Koebele, S. V., Bimonte-Nelson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+menopause:+The+utility+of+rodents+in+translational+behavioral+endocrinology+research.">Modeling menopause: The utility of rodents in translational behavioral endocrinology research.</a> Maturitas. 87, 5-17 (2016).</li></ol>

La extirpación quirúrgica de testículos y ovarios permite estudiar la fisiología murina bajo privación hormonal controlada. Esta técnica es importante para muchos campos de la ciencia, incluyendo la neurodegeneración, el metabolismo mineral, la salud cardiovascular y reproductiva 15,16,17,18,19,20,21.<sup cl...

Los testículos y los ovarios son los principales órganos responsables de la producción de hormonas sexuales. La cascada de comunicación hormonal que conduce a la producción de testosterona y estrógeno es un proceso bien caracterizado que comienza en el hipotálamo con la liberación de la hormona liberadora de gonadotropina (GnRH)1. La liberación de GnRH provoca la liberación de la hormona luteinizante (LH) y la hormona foliculoestimulante (FSH) de la glándula pituitaria. A medida que estas hormonas ingresan al torrente sanguíneo, afectan a otros tejidos del cuerpo. El objetivo principal de la LH son los testículos (en los hombres) y los ovarios (en las mujeres)2. En respuesta a la LH, los testículos producen y liberan testosterona3. Del mismo modo, los ovarios producen estrógeno4. Si bien los efectos previstos de estas hormonas son preparar las células y el cuerpo para la fertilización y garantizar un sistema reproductivo funcional, muchos otros sistemas corporales pueden verse afectados.
Las hormonas sexuales se han relacionado con varias funciones fisiológicas. Por ejemplo, el estrógeno ayuda a mantener la homeostasis ósea al prevenir la reabsorción ósea por parte de los osteoclastos. Por esta razón, los modelos de ratón ovariectomizados se pueden utilizar para estudiar la fisiología de enfermedades óseas como la osteoporosis 5,6,7. La testosterona y el estrógeno también son objetivos de investigación para muchas enfermedades cardiovasculares y neurodegenerativas. Recientemente, la producción elevada de testosterona junto con una dieta alta en grasas se ha relacionadocon el estrés oxidativo vascular. En el cerebro, los cambios en la LH después de la ovariectomía han causado alteraciones en la memoria espacial9. La reducción de estrógenos después de la ovariectomía también se ha convertido en un sistema modelo para estudiar la muerte celular en el hipocampo, ya que esto puede inducir apoptosis, lo que resulta en déficits de memoria10. La testosterona también ha demostrado un papel en el crecimiento de los riñones tanto en modelos de ratón como en humanos después de un trasplante de riñón11.
La creación de un modelo murino privado de hormonas permite el estudio de las hormonas sexuales y sus cascadas hormonales en diversas enfermedades o tejidos. Esto se puede lograr mediante la extirpación quirúrgica de los testículos (orquiectomía) o los ovarios (ovariectomía). Este procedimiento se puede realizar en ratones de cualquier cepa cuando son tan jóvenes como la edad de destete (veintiún días) o cualquier edad adulta. La ovariectomía se realiza en ratones hembra, mientras que la orquiectomía se realiza en ratones macho. Al eliminar estos órganos, los niveles de estrógeno y testosterona, y muchos de sus derivados, como la progesterona, pueden reducirse considerablemente12,13. El proceso de realización de orquiectomías u ovariectomías en ratones puede ser rápido y mínimamente invasivo con la técnica adecuada. La escisión rápida de estos órganos de una manera segura y eficiente puede permitir un procesamiento quirúrgico rápido mientras se mantiene el número de ratones mínimo al tener una tasa de supervivencia del 100% cuando se realiza correctamente. A continuación, detallamos un protocolo para la extirpación rápida de los testículos y los ovarios y demostramos el seguimiento postquirúrgico adecuado para permitir a los investigadores realizar esta cirugía de forma rápida y segura. También incluimos ejemplos visuales de los órganos sexuales y los tejidos circundantes para proporcionar al cirujano puntos de referencia anatómicos al realizar este procedimiento.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G 1/2&#34; Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoClip System</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12020-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine Solution</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC0158124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-Tipped Applicators</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10-000-692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double -ended Micro Spatula</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10091-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Galilean Loupes</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>28050-30</td>
			<td>Optional, can provide better clarity during procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Sponges, 4&#34;x4&#34;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-761-52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Temp Cautery Kit</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18010-00</td>
			<td>Using the fine tip attachment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Holders</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12001-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PGA Absorbable Suture:4-0 / NFS-2 Reverse Cutting 19MM / 30 IN</td>
			<td>Covetrus</td>
			<td>29242</td>
			<td>4-0 or 5-0 Absorbable sutures are best</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Warming pad</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>RT-0515</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Alcohol Prep Pads</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Locking Micro Needle Holders</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12060-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>140-60-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors - 2.5mm Cutting Edge</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veet Sensitive Hair Remover Gel Cream</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wahl Professional Animal Compact Trimmer and Grooming Kit, Blue&#160;</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>#9861-900</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine orchiectomy and ovariectomy to reduce sex hormone production

La señalización de las hormonas sexuales desempeña un papel fundamental en múltiples sistemas de órganos, así como en la progresión de diversas enfermedades, incluidas las enfermedades neurodegenerativas. La manipulación de los niveles de hormonas sexuales en el sistema modelo murino permite estudiar su impacto en los órganos/tejidos y en la progresión de la enfermedad. La orquiectomía (la extirpación quirúrgica de los testículos) y la ovariectomía (la extirpación quirúrgica de los ovarios) proporcionan un método para agotar las hormonas sexuales endógenas, de modo que se puedan proporcionar los niveles hormonales precisos a través de medicamentos u otros métodos de administración. Aquí, proporcionamos métodos rápidos y mínimamente invasivos tanto para la orquiectomía como para la ovariectomía en el sistema modelo murino para la reducción de hormonas sexuales. Este protocolo detalla la preparación quirúrgica y la extirpación de los testículos a través del saco escrotal, y la extirpación de los ovarios a través de dos incisiones en el dorso lateral derecho e izquierdo.

El procedimiento presentado aquí se realiza en ratones de uno a tres meses de edad en el fondo C57BL/6J. Los ratones machos pesaban entre 16 y 28 g y las hembras entre 14 y 24 g en el momento del procedimiento. Este procedimiento se ha optimizado para ser aplicable a ratones de muchas edades, desde el destete hasta la edad adulta.
La orquiectomía quirúrgica implica una sola incisión en la piel del saco escrotal ventral, como se muestra en la Figura 1A. Ambos t...

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Murine Orchiectomy and Ovariectomy to Reduce Sex Hormone Production

Este manuscrito describe una forma consistente de realizar rápidamente orquiectomías y ovariectomías de supervivencia en roedores.

Orquiectomía murina y ovariectomía para reducir la producción de hormonas sexuales

Sex hormone signaling plays a critical role in multiple organ systems as well as in the progression of various diseases, including neurodegenerative ...

El objetivo general de este procedimiento es demostrar la extirpación quirúrgica de testículos y ovarios murinos de una manera rápida, segura y eficaz. La orquiectomía murina se realiza mediante una incisión ventral en la línea media en el saco escrotal, donde se aíslan y extirpan los testículos, seguido del cierre de la incisión en la piel. La ovariectomía murina se realiza mediante una incisión dorsolateral en el abdomen donde se aísla y extirpa el ovario, seguida del cierre de la incisión cutánea, con la opción de repetir este procedimiento en el otro lado para realizar una ovariectomía bilateral.Para comenzar la orquiectomía murina, primero comience registrando el peso de un ratón macho y prepárese para administrar los analgésicos y anestésicos adecuados según sus pautas institucionales. Una vez que el ratón esté bajo anestesia, cubra los ojos con un gel lubricante para los ojos para evitar que se sequen durante el procedimiento. Antes de continuar, asegúrese de que el ratón esté en un plano adecuado de anestesia realizando una prueba de respuesta de pellizco de los dedos de los pies.A continuación, afeita las zonas inguinal y escrotal del ratón. Con un aplicador con punta de algodón, aplique una capa delgada de crema depilatoria depilatoria en el sitio quirúrgico y las áreas circundantes. Después de 30 segundos, retire la crema depilatoria con la esponja de gasa limpia.Transfiera el ratón a un área quirúrgica y asegúrese de que haya una fuente de calor disponible. Utilice cinta adhesiva suave para adherir las patas del ratón a la alfombrilla quirúrgica. Si los testículos han ascendido hacia el abdomen, ejerza una presión suave sobre el abdomen para ayudarlos a descender.Frote la piel con la solución de Betadine, comenzando en el centro sobre el sitio quirúrgico y trabajando fácilmente hacia afuera hacia el borde del área afeitada. Siga el exfoliante de Betadine con un exfoliante con alcohol realizado de manera similar. Repita este proceso tres veces para garantizar una desinfección adecuada de la piel.Cubra el ratón con el paño quirúrgico. Agarre la piel y haga una incisión en la línea media de aproximadamente 1 a 1 1/2 centímetros de largo. Agarrando el borde cortado de la piel, use un instrumento de punta roma para separar la piel del tejido subyacente.Tómese el tiempo para hacer esto en los bordes lateral, superior e inferior de la incisión. A continuación, aísle un testículo deslizando la incisión en la piel para que quede directamente encima de él. Use un par de fórceps para agarrar el músculo cremaster delgado y transparente que rodea el testículo.La identificación del tejido correcto puede confirmarse por su transparencia y su capacidad para moverse independientemente de los tejidos subyacentes encerrados en él. A continuación, haga una incisión en el músculo cremaster haciendo una incisión en el ápice del tejido. Coloque una pinza de bloqueo en el borde posterior del músculo cremaster cortado para mantener la tensión en el tejido.Use un par de fórceps para agarrar el testículo y exteriorizarlo de su vaina cremaster. Una vez que el testículo esté fuera, enrolle el tejido lateralmente y localice el punto de inserción cremaster que conecta el músculo cremaster con el testículo y el epidídimo en el lado posterior del testículo. Sujeta y rasga este tejido para cortar esta conexión.Exteriorice la almohadilla de grasa inguinal tirando lentamente de ella. Mientras hace esto, esté atento a los signos de sangrado y asegúrese de no dañar ninguno de los vasos sanguíneos en el proceso. A continuación, use un par de hemostáticos de bloqueo para sujetar el cordón espermático y los vasos sanguíneos.Mientras mantiene una ligera tensión en el testículo, cauterice el cordón espermático y los vasos sanguíneos distales a la pinza del hemostático. Suelte lentamente el hemostático y asegúrese de que el muñón de tejido tenga una buena hemostasia y no continúe sangrando. La aplicación de una ligera presión hacia afuera sobre el músculo cremaster permitirá que este muñón de tejido se retraiga hacia la cavidad corporal.Une los dos lados del músculo cremaster. Usando suturas absorbibles 4-0 o 5-0, coloque una sutura para unir los dos extremos del músculo cremaster. Una vez terminada la sutura, recorte los extremos del material de sutura para que tengan 1/2 centímetro de longitud.Repita este proceso para el otro testículo deslizando la incisión en la piel para que quede encima del otro lado y siga los mismos pasos utilizados para extirpar el primer testículo. Una vez que se hayan extirpado ambos testículos y se hayan suturado ambos lados del cremaster, everte la piel hacia arriba y prepárate para aplicar un clip para heridas en el área. Asegúrese de que los extremos de la sutura no queden atrapados en el clip de la herida.El ratón ya está listo para continuar con la monitorización postoperatoria. Para prepararse para la ovariectomía murina, pesa un ratón hembra y administra analgésicos y anestesia según las pautas institucionales. Administre gel lubricante para los ojos y verifique que el mouse no tenga una respuesta de pellizco de los dedos de los pies.Afeita las regiones dorsolaterales de la espalda del ratón para preparar el sitio quirúrgico. Con un aplicador con punta de algodón, aplique una capa de crema depilatoria depilatoria en el área afeitada. Después de 30 segundos, retire la crema con una esponja de gasa limpia.Transfiera el mouse a una alfombrilla quirúrgica y asegúrese de que haya una fuente de calor disponible. Frote la piel con la solución de Betadine, comenzando en el centro y trabajando fácilmente hacia afuera hacia el borde del área afeitada. A continuación, frote la piel con una solución de alcohol al 70% aplicada de manera similar.Repita este proceso un total de tres veces para garantizar una desinfección adecuada de la piel. Planifique la incisión quirúrgica como se detalla en el protocolo escrito. Coloque un paño quirúrgico sobre el sitio quirúrgico del ratón.Agarre la piel con pinzas e incida la piel con una incisión de un centímetro. Use un instrumento de punta roma o un par de hemostáticos simples para separar la piel del tejido subyacente. Tómese el tiempo para hacer esto en los bordes lateral, superior e inferior de la incisión.Agarre la pared abdominal e incida con una incisión de 1/2 centímetro. Use un par de fórceps para ubicar el ovario dentro de la incisión y tire para exteriorizarlo. Una vez que se hayan identificado los tejidos, use un par de hemostáticos para sujetar y aplastar el asta uterina distal.Use un segundo par de hemostáticos o un par de pinzas para pinzar justo distal a la primera pinza. Manteniendo el hemostático inferior quieto, tire de la pinza superior hacia arriba y lejos del cuerpo para realizar un aplastamiento y desgarro del cuerno uterino distal. Suelte lentamente el hemostático y observe para asegurarse de que no haya sangrado excesivo proveniente del sitio quirúrgico.Junte los dos lados de la pared abdominal y suture la incisión para cerrarla, utilizando una sola sutura con material de sutura absorbible 4-0. Una vez que la sutura esté asegurada, recorte los extremos del material de sutura para que tengan 1/2 centímetro de largo. Vuelva a juntar los dos lados de la piel y prepárese para colocar un clip para heridas.Mientras everte la piel, coloque una pinza para heridas sobre el sitio de la incisión. El ratón ya está listo para continuar con la monitorización postoperatoria. Documente la fecha y hora del procedimiento y la administración de analgésicos según sus pautas institucionales.Una vez que un ratón se haya sometido a una orquiectomía u ovariectomía quirúrgica, transfiéralo a una jaula limpia y con calefacción. Una vez que un ratón haya recuperado la decúbito esternal, colóquelo en una jaula limpia y proporciónele comida húmeda y agua. Durante su recuperación, revise con frecuencia el sitio quirúrgico del ratón y busque cualquier signo de infección o sangrado.Para evitar daños en la pinza de la herida, retire cualquier hábitat de iglú de roedores de la jaula de un ratón de ovariectomía durante una semana después de la cirugía. Después de 14 días, retire las pinzas de la piel del ratón. El protocolo demostrado detalla cómo realizar una orquiectomía y una ovariectomía en un ratón para generar un modelo con agotamiento de hormonas sexuales.Esto implica la extirpación de los testículos a través de una incisión en la línea media del escroto, seguida de la exteriorización de los testículos y el corte del cordón espermático en los vasos sanguíneos, lo que resulta en la extirpación del testículo, el epidídimo y las almohadillas de grasa inguinal. La ovariectomía quirúrgica se puede realizar mediante una incisión dorsolateral en el dorso y la exteriorización del ovario, el oviducto y el asta uterina distal. A continuación, se corta el asta uterina distal, lo que lleva a la extirpación del ovario y el oviducto.Una técnica quirúrgica cuidadosa y un cuidado postoperatorio adecuado darán como resultado sitios quirúrgicos bien curados. Estos procedimientos quirúrgicos pueden validarse aún más mediante el análisis de los niveles hormonales en muestras de suero de ratón una semana después de la orquiectomía. La ovariectomía puede confirmarse mediante la observación de la atrofia uterina tras la extirpación de los ovarios.Este protocolo permite la extirpación quirúrgica rápida y eficaz de ovarios y testículos de ratones para generar un modelo con agotamiento de hormonas sexuales. Esto puede tener muchos usos para estudiar cómo el agotamiento de estas hormonas afecta a varios órganos y procesos fisiológicos.

Research

JoVE Journal

Medicine

The Measurement and Treatment of Suppression in Amblyopia

La medición y tratamiento de la represión en la ambliopía

Amblyopia, a developmental disorder of the visual cortex, is one of the leading causes of visual dysfunction in the working age population. Current ...

Investigación

Medicina

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

El aislamiento y uso de las Secciones de bovino mesentérica arteria y la vena como un bioensayo para la Prueba de Vasoactividad en el intestino delgado

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

Una<em&gt; Ex vivo</em&gt; Modelo para estudiar la acción hormonal en el pecho humano

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Povidone Iodine Rectal Preparation at Time of Prostate Needle Biopsy is a Simple and Reproducible Means to Reduce Risk of Procedural Infection

Povidona yodada Preparación rectal al momento de la próstata Biopsia con aguja es un medio simple y reproducible para reducir el riesgo de infección Procesal

Single institution and population-based studies highlight that infectious complications following transrectal ultrasound guided prostate needle biopsy ...

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

Trasplante de células madre derivadas de tejido adiposo hoja para reducir fugas después de colectomía parcial en un modelo de rata

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...

A Clinical Trial Assessing the Safety, Efficacy, and Delivery of Olive-Oil-Based Three-Chamber Bags for Parenteral Nutrition

Un ensayo clínico que evalúa la seguridad, eficacia y entrega de bolsas de tres cámaras basadas en aceite de oliva para la nutrición parenteral

Limited evidence exists to precisely estimate efficacy and safety differences between parenteral nutrition (PN) prepared using olive-oil-based ...

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

Mecanismos subyacentes de la secreción de la hormona del intestino utilizando los aislados perfusión intestino de rata

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...

Cooling or Warming the Esophagus to Reduce Esophageal Injury During Left Atrial Ablation in the Treatment of Atrial Fibrillation

Enfriar o calentar el esófago para reducir la lesión esofágica durante la ablación auricular izquierda en el tratamiento de la fibrilación auricular

Ablation of the left atrium using either radiofrequency (RF) or cryothermal energy is an effective treatment for atrial fibrillation (AF) and is the most ...

Network Pharmacology Prediction and Experimental Validation of Trichosanthes-Fritillaria thunbergii Action Mechanism Against Lung Adenocarcinoma

Network Pharmacology Prediction and Experimental Validation of Trichosanthes-Fritillaria thunbergii Action Mechanism Against Lung Adenocarcinoma

Predicción de farmacología en red y validación experimental del mecanismo de acción de Trichosanthes-Fritillaria thunbergii contra el adenocarcinoma de pulmón

We aimed to study the mechanism of Trichosanthes-Fritillaria thunbergii in treating lung adenocarcinoma (LUAD) based on network pharmacology and ...

Production of Modified Autologous Conditioned Serum and Ex Vivo Assessment of Its Healing Potential in Murine Corneal Epithelium

Production of Modified Autologous Conditioned Serum and Ex Vivo Assessment of Its Healing Potential in Murine Corneal Epithelium

Producción de suero condicionado autólogo modificado y evaluación ex vivo de su potencial curativo en el epitelio corneal murino

Human blood-derived topical therapies have been a boon to clinicians in recent decades. Autologous serum (AS) and platelet-rich plasma (PRP) are enriched ...