Name: assessment of ex vivo murine biventricular function in a langendorff model
Uploaded: 2022-12-23T13:30:00
Duration: 7 min 54 s
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कोई नहीं।

<ol>
	<li>Kim, I. C., Youn, J. C., Kobashigawa, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+past,+present+and+future+of+heart+transplantation.">The past, present and future of heart transplantation.</a> Korean Circulation Journal. 48 (7), 565-590 (2018).</li><li>Gaffey, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+&amp;#34;high-risk&amp;#34;+donor+hearts:+Implications+for+infection.">Transplantation of &amp;#34;high-risk&amp;#34; donor hearts: Implications for infection.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 152 (1), 213-220 (2016).</li><li>Hsich, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matching+the+market+for+heart+transplantation.">Matching the market for heart transplantation.</a> Circulation: Heart Failure. 9 (4), 002679 (2016).</li><li>Piperata, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+transplantation+in+the+new+era+of+extended+donor+criteria.">Heart transplantation in the new era of extended donor criteria.</a> Journal of Cardiac Surgery. 36 (12), 4828-4829 (2021).</li><li>Huckaby, L. V., Hickey, G., Sultan, I., Kilic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trends+in+the+utilization+of+marginal+donors+for+orthotopic+heart+transplantation.">Trends in the utilization of marginal donors for orthotopic heart transplantation.</a> Journal of Cardiac Surgery. 36 (4), 1270-1276 (2021).</li><li>Singh, S. S. A., Dalzell, J. R., Berry, C., Al-Attar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+graft+dysfunction+after+heart+transplantation:+a+thorn+amongst+the+roses.">Primary graft dysfunction after heart transplantation: a thorn amongst the roses.</a> Heart Failure Reviews. 24 (5), 805-820 (2019).</li><li>Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+heart+perfusion:+the+Langendorff+technique+of+isolated+heart+perfusion.">Retrograde heart perfusion: the Langendorff technique of isolated heart perfusion.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50 (6), 940-950 (2011).</li><li>Rossello, X., Hall, A. R., Bell, R. M., Yellon, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+Langendorff+perfused+isolated+mouse+heart+model+of+global+ischemia-reperfusion+injury:+impact+of+ischemia+and+reperfusion+length+on+infarct+size+and+LDH+release.">Characterization of the Langendorff perfused isolated mouse heart model of global ischemia-reperfusion injury: impact of ischemia and reperfusion length on infarct size and LDH release.</a> Journal of Cardiovascular Pharmacology and Therapeutics. 21 (3), 286-295 (2016).</li><li>Matsuura, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positive+inotropic+effects+of+ATP+released+via+the+maxi-anion+channel+in+Langendorff-perfused+mouse+hearts+subjected+to+ischemia-reperfusion.">Positive inotropic effects of ATP released via the maxi-anion channel in Langendorff-perfused mouse hearts subjected to ischemia-reperfusion.</a> Frontiers in Cell Development Biology. 9, 597997 (2021).</li><li>Tse, G., Hothi, S. S., Grace, A. A., Huang, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventricular+arrhythmogenesis+following+slowed+conduction+in+heptanol-treated,+Langendorff-perfused+mouse+hearts.">Ventricular arrhythmogenesis following slowed conduction in heptanol-treated, Langendorff-perfused mouse hearts.</a> The Journal of Physiological Sciences. 62 (2), 79-92 (2012).</li><li>Kobashigawa, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Report+from+a+consensus+conference+on+primary+graft+dysfunction+after+cardiac+transplantation.">Report from a consensus conference on primary graft dysfunction after cardiac transplantation.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 33 (4), 327-340 (2014).</li><li>Lei, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+inflammatory+responses+of+the+native+left+and+right+ventricle+associated+with+donor+heart+preservation.">Differential inflammatory responses of the native left and right ventricle associated with donor heart preservation.</a> Physiological Reports. 9 (17), 15004 (2021).</li><li>Miller, A., Wright, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fabrication+of+murine+ventricular+balloons+for+the+Langendorff+heart+preparation.">Fabrication of murine ventricular balloons for the Langendorff heart preparation.</a> Journal of Biotechnology &amp; Biomaterials. 1 (101), (2011).</li><li>Madsen, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+immunology+of+heart+transplantation.">Advances in the immunology of heart transplantation.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 36 (12), 1299-1305 (2017).</li><li>Voelkel, N. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Right+ventricular+function+and+failure:+report+of+a+National+Heart,+Lung,+and+Blood+Institute+working+group+on+cellular+and+molecular+mechanisms+of+right+heart+failure.">Right ventricular function and failure: report of a National Heart, Lung, and Blood Institute working group on cellular and molecular mechanisms of right heart failure.</a> Circulation. 114 (17), 1883-1891 (2006).</li></ol>

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए हितों का कोई टकराव नहीं है।

यह प्रोटोकॉल महाधमनी कैनुलेशन के माध्यम से प्रतिगामी छिड़काव Langendorff विधि का वर्णन करता है। इस तकनीक का उपयोग कोल्ड स्टोरेज के बाद murine दिलों के LV और RV फ़ंक्शन का मूल्यांकन करने के लिए किया जा सकता है। परिणाम बताते हैं कि दाता दिलों के लंबे समय तक कोल्ड स्टोरेज इस प्रोटोकॉल का उपयोग करके एलवी और आरवी दोनों में कार्डियक फ़ंक्शन को कम करता है। 
हृदय प्रत्यारोपण के बाद तीव्र और पुरानी अस्वीकृति के अध्ययन व्यापक रूप से इम्यूनोबायोलॉजी14 पर ध्यान केंद्रित करते हैं। कोल्ड स्टोरेज के दौरान पीजीडी पर देशी कोशिकाओं के प्रभावों की कम अच्छी तरह से जांच की जाती है। पीजीडी ~ 10% -20% हृदय प्रत्यारोपण में होता है और प्रत्यारोपण के बाद 30 दिनों के भीतर 66% प्रारंभिक मृत्यु के लिए जिम्मेदार है। विशेष रूप से, एलवी बनाम आरवी को प्रभावित करने वाले पीजीडी की घटनाएं प्रत्यारोपण11 के बाद भिन्न होती हैं। प्राप्तकर्ता सेलुलर प्रतिक्रियाओं के योगदान के बिना, यह पूर्व विवो विधि दाता दिलों के ठंडे संरक्षण के बाद पीजीडी में देशी हृदय कोशिकाओं के योगदान पर केंद्रित है। आगे के अध्ययन में म्यूरिन हृदय प्रत्यारोपण मॉडल में प्राप्तकर्ता प्रतिक्रियाओं को शामिल किया जा सकता है। 
इस प्रोटोकॉल में, ठंड संरक्षित दाता दिल के Langendorff छिड़काव सेलुलर प्रतिरक्षा घुसपैठ के बिना गर्म क्रिस्टलीय छिड़काव करने के लिए देशी हृदय प्रतिक्रियाओं पर ध्यान केंद्रित. प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम प्राप्त करने के लिए, कई महत्वपूर्ण चरणों को मानकीकृत किया गया था। माउस दिलों को एचटीके समाधान का उपयोग करके गिरफ्तार किया गया था और नैदानिक अभ्यास के समान बर्फ-ठंडे एचटीके में संग्रहीत किया गया था। छिड़काव मात्रा और हर दिल के लिए HTK समाधान के जलसेक समय बारीकी से एक टाइमर के साथ निगरानी की गई थी. दाता दिल एक 4 डिग्री सेल्सियस कमरे में HTK युक्त बर्फ पर prechilled ट्यूबों में रखा गया था. Cannulation समय छिड़काव से पहले ~ 3 मिनट के लिए मानकीकृत है. इन सभी कदमों ने सुनिश्चित किया कि ठंड संरक्षण अवधि अध्ययन में प्रमुख चर थी। 
~ 20 मिनट के लिए अनियमित हृदय सिकुड़न की अवधि आमतौर पर छिड़काव की शुरुआत में देखा गया था. इस संतुलन और वसूली की अवधि को क्रमिक वार्मिंग और हृदय के ऊतकों के ऑक्सीकरण द्वारा सुगम बनाया गया था। प्रारंभिक 20 मिनट के बाद अपेक्षाकृत स्थिर अवधि की उम्मीद थी। गुब्बारे प्रारंभिक संतुलन अवधि के बाद ~ 18 मिनट में वेंट्रिकल गुहा में डाला गया था. गुब्बारा डालने के बाद हमने ~ 25 मिनट के लिए दिल स्थिर होने के बाद हेमोडायनामिक्स रिकॉर्ड करना शुरू कर दिया। केएच बफर के साथ छिड़काव ~ 1.5-2 घंटे के लिए स्थिर हृदय प्रदर्शन बनाए रखा। इसलिए हम बाएं और दाएं निलय में से प्रत्येक में 20 मिनट के लिए हेमोडायनामिक्स रिकॉर्ड करने के लिए चुने गए।
कोल्ड स्टोरेज के बाद दिल के पीजीडी का अध्ययन करने के लिए प्रतिगामी छिड़काव की कई सीमाएं हैं। सबसे पहले, गुब्बारे के आकार और प्रत्येक वेंट्रिकुलर गुहा (विशेष रूप से, आरवी) में जगह की कमी के कारण, एलवी और आरवी दोनों में दो गुब्बारे का एक साथ सम्मिलन बहुत चुनौतीपूर्ण है। इस प्रकार, हम RV और LV के कार्य को क्रमिक रूप से मापते हैं। यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि इंटरवेंट्रिकुलर सेप्टम बाएं और दाएं वेंट्रिकुलर फ़ंक्शन दोनों में महत्वपूर्ण योगदान देता है। पट सही वेंट्रिकुलर समारोह के ~ 50% करने के लिए योगदान देता है, तो वहाँ अंतः निलय निर्भरता15 है. यह भी ध्यान दें कि Langendorff डिवाइस में murine दिल के reperfusion के लिए प्रक्रियाओं ~ 3 मिनट ले, अपेक्षाकृत गर्म शल्य चिकित्सा क्षेत्र में मानव हृदय के शल्य चिकित्सा आरोपण ~ 45 मिनट लेता है कि, ध्यान दें कि महत्वपूर्ण है. इसकी तुलना में, इस लैंगेंडॉर्फ प्रणाली में म्यूरिन दिल कम इस्केमिक समय लगाता है। नैदानिक अनुवाद पर विचार करते समय इसे ध्यान में रखा जाना चाहिए।
चूंकि हमने रक्त के बिना दिल को छिड़कने के लिए केएच बफर का उपयोग किया था, इसलिए इससे ऑक्सीजन वितरण में भी कम दक्षता हो सकती है। हालांकि, छिड़काव के प्रारंभिक 1.5-2 घंटे के माध्यम से हृदय समारोह अपेक्षाकृत स्थिर है, इस प्रकार विश्वसनीय हेमोडायनामिक माप की अनुमति देता है। दुर्भाग्य से, वर्तमान में इन छोटे murine दिल के लिए कोई व्यवहार्य काम दिल छिड़काव मॉडल हैं, और वेंट्रिकुलर लोड हो रहा है के प्रभाव इस प्रणाली में मूल्यांकन नहीं किया जा सकता है. इसके बावजूद, छिड़काव प्रणाली प्रत्यारोपण मॉडल की तुलना में अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और कम श्रम-गहन और समय लेने वाली है। यह प्रत्यारोपण अध्ययनों की तुलना में भी कम खर्चीला है, जो इसे विभिन्न चिकित्सीय विकल्पों और विभिन्न आणविक मार्गों की जांच के लिए अधिक उपयुक्त बना सकता है। उम्मीदवार दवाओं को जोड़कर संरक्षण समाधान में संशोधन के साथ, इस मंच का उपयोग एलवी और आरवी दोनों में पीजीडी को कम करने पर औषधीय एजेंटों के प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए किया जा सकता है।

हृदय प्रत्यारोपण अंतिम चरण के दिल की विफलता वाले रोगियों में जीवित रहने और जीवन की गुणवत्ता में सुधार करताहै 1. दुर्भाग्य से, हृदय दाताओं की कमी रोगियों की संख्या को सीमित करती है जो इस चिकित्सा से लाभ उठा सकते हैं और चिकित्सकों की क्षमता को सीमित करते हैं ताकि वे प्राप्तकर्ताओं के साथ दाताओं का बेहतर मिलान कर सकें 2,3,4. इसके अलावा, नई आवंटन प्रणाली ने लंबे समय तक इस्केमिक समय में योगदान दिया है और 2018 के बाद से सीमांत दाताओं के उपयोग में काफी वृद्धि हुईहै। नतीजतन, हृदय दाताओं की औसत आयु और इस्केमिक समय समय के साथ बढ़ रहा है, जिससे हृदय संरक्षण के लिए रणनीतियों में महत्वपूर्ण सुधार के बावजूद प्राथमिक ग्राफ्ट डिसफंक्शन (पीजीडी) की उच्च दर हो रही है।
पीजीडी बाएं, दाएं या दोनों निलय को प्रभावित कर सकता है, और एक जीवन-धमकाने वाली जटिलता बनी हुई है जो हृदय प्रत्यारोपण के बाद शुरुआती मौतों के प्रमुख कारण का प्रतिनिधित्व करती है। पीडीजी के तंत्र की जांच करना और बेहतर हृदय संरक्षण के लिए रणनीतियों का विकास महत्वपूर्ण विचार हैं, हृदय प्राप्तकर्ताओं पर संभावित जीवन-बचत प्रभाव को देखते हुए। इसलिए, प्रयोगात्मक मॉडल जो लंबे समय तक भंडारण समय के बाद दाता हृदय समारोह के एक मजबूत और विश्वसनीय मूल्यांकन की अनुमति देते हैं, पीजीडी की हमारी समझ को बढ़ाने और उपन्यास चिकित्सा के विकास को सुविधाजनक बनाने के लिए आवश्यक हैं। माउस दिल में कार्डियक फ़ंक्शन का सही आकलन करने की क्षमता ट्रांसजेनिक म्यूरिन मॉडल के विशाल प्रदर्शनों की सूची तक पहुंच की अनुमति देती है जो पीजीडी तंत्र की सटीक पहचान कर सकती है।
शारीरिक और औषधीय अध्ययन में, Langendorff प्रतिगामी छिड़काव मॉडल व्यापक रूप से दिल समारोह7 का आकलन करने के लिए प्रयोग किया जाता है. विशेष रूप से, कार्डियक प्रदर्शन का पता बाएं वेंट्रिकुलर (एलवी) गुहा के भीतर एक दबाव ट्रांसड्यूसर से जुड़े एक सिलिकॉन गुब्बारे द्वारा लगाया जाता है। पीजीडी की एक प्रमुख विशेषता वेंट्रिकुलर मांसपेशियों का अपर्याप्त संकुचन और विश्राम है। पूर्व Langendorff अध्ययन LV कार्यात्मक मूल्यांकन 8,9,10 में विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम का उत्पादन करने के लिए एक LV गुब्बारे का उपयोग करने पर ध्यान केंद्रित किया है. हालांकि, गुब्बारा प्रणाली का उपयोग करके सही वेंट्रिकुलर (आरवी) फ़ंक्शन का आकलन करने के लिए एक इंट्राकैविटरी गुब्बारे का उपयोग कम अच्छी तरह से पहचाना जाता है।
प्रत्यारोपण11 के बाद आरवी को शामिल करने वाली एक महत्वपूर्ण पीजीडी दर को देखते हुए, एलवी और आरवी फ़ंक्शन दोनों का अध्ययन करने के लिए प्रयोगात्मक तरीकों से आरवी पीजीडी में योगदान करने वाले आणविक और शारीरिक तंत्र को निर्धारित करने में मदद मिलेगी। इस प्रोटोकॉल से पता चलता है कि intracavitary सिलिकॉन गुब्बारे एक ही murine दिल12 में LV और RV समारोह के विश्वसनीय आकलन प्रदान कर सकते हैं. पीजीडी अध्ययन में लैंगेंडॉर्फ प्रणाली के संभावित उपयोग का मूल्यांकन करने के लिए, हमने भंडारण की विभिन्न अवधियों के साथ हृदय कार्यों की जांच की और पाया कि मुराइन दिलों के लंबे समय तक ठंडे भंडारण के साथ संकुचन और विश्राम में हृदय समारोह में कमी आई है। दिलचस्प बात यह है कि एलवी में आरवी की तुलना में अधिक कार्यात्मक कमी है। सारांश में, यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल दोनों एलवी और आरवी समारोह पर एक उम्मीदवार दवा और आणविक रास्ते के प्रभाव का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. murine दिलों पर इस पद्धति का उपयोग करने की क्षमता विस्तृत यंत्रवत अध्ययन के प्रदर्शन की सुविधा होगी.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-0 silk suture</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>SUTS108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Silk suture</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>SUTS104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>All purpose flour</td>
			<td>Kroger</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD General Use and PrecisionGlide Hypodermic Needles 22 G</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>14-826-5A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Syringe with Luer-Lok Tips (Without Needle)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>14-823-16E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corn Syrup</td>
			<td>Kroger</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Custodiol HTK Solution</td>
			<td>Essential Pharmaceuticals LLC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Scissors&#160;</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14393/14394</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 50 mL conical tubes</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>14-959-49A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa&#160;&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H4784</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Krebs Henseleit buffer</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>K3753</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nusil silicone dispersions</td>
			<td>Avantor</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion system</td>
			<td>Radnoti</td>
			<td>130101BEZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerLab</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>PL3508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S0389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S0389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>X1126</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of ex vivo murine biventricular function in a langendorff model

प्राथमिक ग्राफ्ट डिसफंक्शन (पीजीडी) हृदय प्रत्यारोपण के बाद प्रारंभिक मृत्यु का प्रमुख कारण बना हुआ है। ठंड संरक्षण के दौरान लंबे समय तक इस्केमिक समय पीजीडी के लिए एक महत्वपूर्ण जोखिम कारक है, और ठंड संरक्षण के बाद दाता हृदय की कार्यात्मक प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए हृदय समारोह का विश्वसनीय मूल्यांकन आवश्यक है। साथ में वीडियो विभिन्न अवधि के लिए ठंड संरक्षण के बाद एक Langendorff मॉडल में आधारित पूर्व विवो छिड़काव का उपयोग कर murine सही और छोड़ दिया वेंट्रिकुलर समारोह का आकलन करने के लिए एक तकनीक का वर्णन करता है. संक्षेप में, हृदय को अलग किया जाता है और एक ठंडे हिस्टिडाइन-ट्रिप्टोफैन-किटोग्लूटारेट (एचटीके) समाधान में संग्रहीत किया जाता है। फिर, दिल 60 मिनट के लिए एक Langendorff मॉडल में एक क्रेब बफर के साथ perfused है. एक सिलिकॉन गुब्बारा बाएं और दाएं वेंट्रिकल में डाला जाता है, और कार्डियक फंक्शनल पैरामीटर दर्ज किए जाते हैं (डीपी / डीटी, दबाव-मात्रा संबंध)। यह प्रोटोकॉल विभिन्न हृदय संरक्षण प्रोटोकॉल के बाद हृदय समारोह के विश्वसनीय मूल्यांकन की अनुमति देता है। महत्वपूर्ण रूप से, यह तकनीक विशेष रूप से देशी हृदय कोशिकाओं में हृदय संरक्षण प्रतिक्रियाओं के अध्ययन की अनुमति देती है। बहुत छोटे murine दिल का उपयोग पीजीडी के तंत्र की जांच करने के लिए ट्रांसजेनिक चूहों की एक विशाल सरणी तक पहुंच की अनुमति देता है।

वयस्क C57Bl/6 माउस दिल, 3 महीने की उम्र, काटा गया और लैंगेंडोर्फ प्रणाली पर लगाया गया। दाता दिल एचटीके में 0 और 8 घंटे के लिए संग्रहीत किया गया था, और फिर ऑक्सीजन युक्त केएच बफर के साथ perfused था। एक दबाव ट्रांसड्यूसर से जुड़ने वाले एक सिलिकॉन गुब्बारे का उपयोग एलवी और आरवी फ़ंक्शन के संकुचन और विश्राम को मापने के लिए किया गया था।
महाधमनी दबाव 70-80 mmHg रेंज में बनाए रखा गया था। हृदय गति 0 और 8 घंटे के भंडारण के साथ माउस दिलों में तुलनीय थी। एलवी और आरवी फ़ंक्शन की जांच सिस्टोलिक और डायस्टोलिक दबाव को मापकर की गई थी। dP/dt, दबाव परिवर्तन के अनुपात की गणना करने के लिए एक व्युत्पन्न, दबाव गतिशीलता को निर्धारित करने के लिए गणना की गई थी। अधिकतम डीपी/डीटी और न्यूनतम डीपी/डीटी की पूर्ण संख्या मांसपेशियों के संकुचन और विश्राम के स्तर का प्रतिनिधित्व कर सकती है। भंडारण के 0 घंटे में, एलवी में आरवी(चित्रा 2सी और चित्रा 3ए)की तुलना में उच्च सिस्टोलिक दबाव था। एलवी ने 0 एच भंडारण(चित्रा 2सी) और चित्रा 3बी,सी) के छिड़काव के बाद आरवी की तुलना में अधिक मांसपेशियों के संकुचन और विश्राम दिखाया। हालांकि, कोल्ड स्टोरेज के 8 घंटे के बाद, एलवी और आरवी दोनों ने 0 घंटे बेसलाइन(चित्रा 2ए-डी और चित्रा 3बी,सी)की तुलना में एक महत्वपूर्ण कार्यात्मक कमी दिखाई। हृदय संकुचन में कमी एलवी में अधिक गंभीर थी। भंडारण के 8 घंटे के बाद, एलवी का संकुचन और विश्राम 0 घंटे बेसलाइन का 25.1% और 30.7% था, जबकि आरवी में 0 एच बेसलाइन(चित्रा 3बी,सी)की तुलना में 32.5% और 29.1% फ़ंक्शन था। इन परिणामों से पता चला कि लंबे समय तक भंडारण के बाद एलवी के पीजीडी में आरवी की तुलना में अधिक महत्वपूर्ण हृदय संकुचन में कमी आई थी।
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64384/64384fig01.jpg"> चित्रा 1: बढ़ते और माउस दिल के cannulation . (ए) छिड़काव सेटअप के समग्र सेटअप. 1. छिड़काव जलाशय। 2. ऑक्सीजन कक्ष। 3. एयर ट्रैप चैंबर। 4. हृदय कक्ष। 5. निरंतर प्रवाह और दबाव के लिए मूल्य स्विच। 6 और 7. ऑक्सीजन का प्रवाह। (बी) सामने आरवी के साथ कैनुलेट दिल। (सी) आरवी की स्थिति इसकी गुहा खोलने के लिए कटौती करने के लिए। (डी) प्रवेशनी के साथ गुब्बारा ट्यूब ठोकर. संक्षिप्त: RV = दायां वेंट्रिकल। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64384/64384fig01large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64384/64384fig02.jpg"> चित्रा 2: एलवी बनाम आरवी के कार्य की तुलना करना। (ए) भंडारण के 0 घंटे के साथ दाता दिल में आरवी और एलवी में अधिकतम और न्यूनतम डीपी/डीटी के अनुरेखण रिकॉर्ड। (बी) भंडारण के 8 घंटे के साथ दाता दिल में आरवी और एलवी में अधिकतम और न्यूनतम डीपी / (सी, डी) डीटी, एलवी दबाव, हृदय गति, और 0 घंटे और 8 घंटे में एलवी और आरवी में छिड़काव दबाव का विवरण। संक्षिप्ताक्षर: RV = दायां वेंट्रिकल; LV = बायाँ वेंट्रिकल; dP/dt = दबाव-समय संबंध। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64384/64384fig02large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64384/64384fig03.jpg"> चित्रा 3: भंडारण और छिड़काव के बाद एलवी बनाम आरवी के कार्य की तुलना। (ए) भंडारण के 0 घंटे और 8 घंटे के बाद एलवी और आरवी के सिस्टोलिक और डायस्टोलिक दबाव। (बी) अधिकतम डीपी/डीटी और (सी) 0 घंटे और 8 घंटे भंडारण के साथ छिड़काव के बाद एलवी और आरवी के न्यूनतम डीपी/डीटी। यह आंकड़ा लेई एट अल 12 से है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64384/64384fig03large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>

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Assessment of Ex Vivo Murine Biventricular Function in a Langendorff Model

यहाँ प्रस्तुत एक प्रोटोकॉल मज़बूती से एक पूर्व विवो छिड़काव प्रणाली का उपयोग कर ठंड संरक्षण के बाद दाता दिल के सही और बाएँ वेंट्रिकुलर समारोह यों करने के लिए है.

एक Langendorff मॉडल में पूर्व विवो murine biventricular समारोह का आकलन

Primary graft dysfunction (PGD) remains the leading cause of early death following heart transplantation. Prolonged ischemic time during cold preservation ...

वर्णित प्रोटोकॉल के साथ, हम संरक्षण के बाद दाता हृदय बाएं वेंट्रिकल और वेंट्रिकल फ़ंक्शन की तुलना कर सकते हैं, और हम इन संरक्षण प्रक्रिया के दौरान दोनों वेंट्रिकल में संरक्षण जीव विज्ञान के अंतर की जांच कर सकते हैं। यह तकनीक संरक्षण के बाद हृदय कार्यों की जांच करने के लिए पूर्व विवो छिड़काव प्रणाली का उपयोग करती है। यह संरक्षण के बाद दाता हृदय कार्यों को बेहतर बनाने के लिए नए उपचारों की जांच करने के लिए एक मजबूत और विश्वसनीय उपकरण प्रदान करता है।पाठ में वर्णित आटा की तैयारी के साथ शुरू करें और सिर प्राप्त करने के लिए आटे के एक छोटे टुकड़े को अंडाकार आकार दें। इसे एक सूखी स्पेगेटी स्ट्रैंड के अंत में संलग्न करें। पहले से तैयार चीनी के घोल में सिर को डुबोएं और घोल की एक पतली फिल्म के साथ अच्छी तरह से लेपित होने के बाद इसे धीरे-धीरे हटा दें।फिर, स्पेगेटी स्ट्रैंड को पॉलीस्टायर्न फोम ब्लॉक या अन्य धारकों पर निलंबित करें ताकि सिर पर एक समान और चमकदार कवर बन सके और इसे रात भर सुखा सकें। अगले दिन, मोल्ड को सिलिकॉन इलास्टोमेर में डिक्लेयर में डुबोएं और स्पेगेटी स्ट्रैंड को पॉलीस्टायर्न फोम ब्लॉक में 37 डिग्री सेल्सियस पर दो घंटे या सूखने तक रखें। इस चरण को एक बार और दोहराएं।फिर, गुब्बारे को अलग करने और इकट्ठा करने के लिए मोल्ड को पानी में रखें। गुब्बारे को 0.02% सोडियम एज़ाइड में स्टोर करें। अब, एक 22 गेज सुई से एक दो कुंद अंत टिप में कटौती और एक पीई टयूबिंग के लिए अन्य कुंद अंत जबकि सिलिकॉन गुब्बारे के लिए एक कुंद अंत माउंट.सुई पर जगह में गुब्बारे टाई करने के लिए एक 4-0 रेशम सीवन का प्रयोग करें. C57Black/6 माउस लें और intraperitoneally anticoagulation के लिए जानवर के पेट में हेपरिन की 200 इकाइयों इंजेक्षन. एक पैर की अंगुली चुटकी के साथ उचित संज्ञाहरण की पुष्टि करने के बाद, उरोस्थि के ठीक नीचे एक चीरा बनाओ।और कैंची का उपयोग करके, पसलियों में डायाफ्राम को काटकर छाती खोलें। फिर, महाधमनी चाप के करीब अवरोही महाधमनी पर एक कटौती करने से पहले छाती को पूरी तरह से उजागर करने के लिए पूर्वकाल छाती की दीवार को मोड़ो। अब, माउस के दिल, फेफड़े, और थाइमस को बर्फ-ठंडे हिस्टिडाइन-ट्रिप्टोफैन-किटोग्लूटारेट, या एचटीके बफर में स्थानांतरित करें, अंगों को अलग करने के लिए।किसी भी संयोजी ऊतक को हटाकर महाधमनी बेनकाब. महाधमनी के अंत को 22-गेज सुई से कनेक्ट करें और इसे 6-0 रेशम सिवनी के साथ बांधें। सुनिश्चित करें कि प्रवेशनी महाधमनी जड़ से ऊपर है, ताकि महाधमनी वाल्व के साथ हस्तक्षेप न करें।एचटीके बफर के 10 मिलीलीटर के साथ लगभग 10 मिनट के लिए महाधमनी को छिड़कें, चार डिग्री सेल्सियस तक पूर्व-ठंडा। प्रयोग के प्रकार के आधार पर, या तो दिल को 50-मिलीलीटर ट्यूब में बर्फ-ठंडे एचटीके के साथ आठ घंटे तक स्टोर करें या तुरंत प्रचुरता करें। प्रचुरता प्रदर्शन करने के लिए, Langendorff तंत्र में प्रवेशनी के लिए सुई घुड़सवार दिल कनेक्ट और एक रेशम सीवन के साथ टाई.तीन मिलीलीटर प्रति मिनट पर एक निरंतर प्रवाह मोड में प्रचुरता शुरू करें, और फिर 70 से 80 मिलीमीटर पारा पर एक निरंतर दबाव मोड में बदलने के बाद, छिड़काव दर को लगभग छह मिलीलीटर प्रति मिनट तक समायोजित करें। इसके बाद, एक डिफ्लेटेड पानी से भरे सिलिकॉन गुब्बारे को एक दबाव ट्रांसड्यूसर और तीन-तरफा नल का उपयोग करके पानी से भरे सिरिंज से कनेक्ट करें। पिछले छिड़काव के बाद एक संतुलन अवधि के 15 से 20 मिनट के बाद, सही आलिंदा, या आरए में कटौती, और आरए के माध्यम से सही वेंट्रिकल, या आरवी में गुब्बारा डालें। आरवी के अंदर गुब्बारे को पकड़ने के लिए टेप का उपयोग करें और वेंट्रिकल में गुब्बारे को बाधित करने में मदद करने के लिए आरए के खुले क्षेत्र को कम करें।आरवी के लिए कार्यात्मक डेटा संग्रह के 20 मिनट के बाद, बाएं आलिंद या एलए को काट लें, और एलए के माध्यम से बाएं वेंट्रिकल, या एलवी में एक डिफ्लेटेड पानी से भरा गुब्बारा डालें। LV.To के अंदर गुब्बारे को पकड़ने के लिए टेप का उपयोग करें दबाव ट्रांसड्यूसर को कैलिब्रेट करें, पहले गर्म खारा के साथ 10 मिलीलीटर सिरिंज भरें और तीन-तरफा नल के माध्यम से सिरिंज को गुंबद से कनेक्ट करें। नल खोलें और धीरे-धीरे सभी नल बंद करने और सिरिंज को हटाने से पहले खारा के साथ गुंबद भरें. फिर, भरे हुए गुंबद को थ्री-वे टैप के तीसरे छोर पर प्रेशर गेज से जोड़कर ट्रांसड्यूसर से जोड़ दें।रिकॉर्डिंग सॉफ्टवेयर में, ट्रांसड्यूसर से कनेक्ट करने वाले चैनल के ड्रॉपडाउन मेनू से, ब्रिज एम्प के विकल्प का चयन करें। ट्रांसड्यूसर रीडिंग को पारा के शून्य मिलीमीटर पर सेट करने के लिए रिकॉर्डिंग शुरू करने से पहले 0 पर क्लिक करें। रिकॉर्डिंग के कई सेकंड के बाद, धीरे धीरे सिरिंज धक्का और 100 के लिए दबाव में वृद्धि.रिकॉर्डिंग समाप्त करने के लिए रुकें पर क्लिक करें। इकाई रूपांतरण संवाद में, शून्य मिलीमीटर पारा के लिए रिकॉर्डिंग के क्षेत्र का चयन करें और पारा के शून्य मिलीमीटर टाइप करने से पहले तीर को 1 पर क्लिक करें। इसी तरह, 100 मिलीमीटर पारा के लिए रिकॉर्डिंग के क्षेत्र का चयन करें।2 के लिए तीर पर क्लिक करें और पारा के 100 मिलीमीटर टाइप करें। अब, ट्रांसड्यूसर को कैलिब्रेट करने के लिए ओके पर क्लिक करें। अंशांकन किया जाता है के बाद, वेंट्रिकल दबाव, या LV दबाव के रूप में गुब्बारे के साथ दबाव transducer के अनुरूप चैनल का नाम बदलें, और जब दिल प्रणाली से जुड़ा है रिकॉर्डिंग शुरू.वेंट्रिकल में गुब्बारा डालने के बाद, पारा के पांच से 10 मिलीमीटर पर अंत डायस्टोलिक दबाव बनाए रखने के लिए तीन-तरफा नल के माध्यम से माइक्रोमीटर सिरिंज का उपयोग करके गुब्बारे में पानी की मात्रा को समायोजित करें। इसके बाद, एक खाली चैनल का नाम बदलकर डीपी/डीटी करें और व्युत्पन्न स्रोत चैनल को वेंट्रिकल दबाव के रूप में रखें। यह चैनल संकुचन के दौरान वेंट्रिकुलर गुहा में दबाव परिवर्तन के अनुपात को रिकॉर्ड करता है।रक्तचाप मॉड्यूल में सेटिंग पर जाने से पहले माप की स्थिर अवधि का चयन करें। फिर, इनपुट चैनल के रूप में LV प्रेशर चुनें और ओके दबाने से पहले चयन पर क्लिक करें। अब, किसी भी बाहरी कार्डियक चक्र को हटाने के लिए क्लासिफायरियर व्यू पर क्लिक करें, और चयनित अवधि के लिए अधिकतम डीपी/डीटी और न्यूनतम डीपी/डीटी के औसत के लिए टेबल व्यू जनरेट करने के लिए टेबल व्यू। जब माउस दिल छिड़काव से पहले शून्य घंटे के लिए HTK बफर में संग्रहीत किया गया था, उच्च सिस्टोलिक दबाव आरवी की तुलना में LV के लिए दर्ज किया गया था. इसके अतिरिक्त, आरवी की तुलना में, एलवी ने भी काफी अधिक मांसपेशियों के संकुचन, साथ ही विश्राम भी प्रदर्शित किया।हालांकि, जब आठ घंटे के कोल्ड स्टोरेज के अधीन होने के बाद दिल पर छिड़काव किया गया था, तो एलवी और आरवी दोनों ने शून्य घंटे के चरण की तुलना में एक महत्वपूर्ण कार्यात्मक कमी दिखाई। आरवी की तुलना में एलवी में कमी अधिक गंभीर देखी गई। आठ घंटे के भंडारण के बाद एलवी का संकुचन और विश्राम शून्य-घंटे के भंडारण के अनुरूप फ़ंक्शन का 25.1% और 30.7% था, जबकि आरवी ने शून्य-घंटे की आधार रेखा की तुलना में 32.5% और 29.1% फ़ंक्शन प्रदर्शित किया। लंबे समय तक भंडारण के बाद एलवी की प्राथमिक ग्राफ्ट शिथिलता का संकेत आरवी की तुलना में अधिक महत्वपूर्ण था। संरक्षण की गुणवत्ता काफी हद तक एचटीके के छिड़काव पर निर्भर करती है।यह सुनिश्चित करना महत्वपूर्ण है कि छिड़काव विभिन्न उपचारों की सटीक तुलना के अनुरूप है। संरक्षण के दाता हृदय समारोह के सटीक माप के साथ, यह विधि आसानी से स्क्रीन दवाओं के अनुकूल हो सकती है जो दाता हृदय समारोह में सुधार कर सकती हैं और फिर एक हेटेरोटोपिक प्रत्यारोपण मॉडल का उपयोग करके आगे मान्य कर सकती हैं।

Research

JoVE Journal

Medicine

Assessment of Ex Vivo Murine Biventricular Function in a Langendorff Model

A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology

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एक मानव<em&gt; पूर्व vivo</em&gt; Atherosclerotic पट्टिका मॉडल घाव जीव विज्ञान का अध्ययन करने के लिए

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Ex वीवो Normothermic लिवर छिड़काव का एक छोटा सा एनिमल मॉडल

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The current standard method for organ preservation (cold storage, CS), exposes the heart to a period of cold ischemia that limits the safe preservation ...

Non-invasive Assessment of Dorsiflexor Muscle Function in Mice

चूहों में Dorsiflexor मांसपेशी समारोह के गैर इनवेसिव आकलन

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A Computerized Functional Skills Assessment and Training Program Targeting Technology Based Everyday Functional Skills

एक कंप्यूटरीकृत कार्यात्मक कौशल मूल्यांकन और प्रशिक्षण कार्यक्रम प्रौद्योगिकी आधारित रोजमर्रा के कार्यात्मक कौशल को लक्षित करता है

Today, many functional skills are technology-based, so development of a technology-based training program has broad importance. Here we present a ...

Optocardiography and Electrophysiology Studies of Ex Vivo Langendorff-perfused Hearts

पूर्व वीवो लैंगेंडोर्फ-पर्फ्यूज ्डहार्ट्स के ऑप्टोकार्डियोग्राफी और इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी स्टडीज

Small animal models are most commonly used in cardiovascular research due to the availability of genetically modified species and lower cost compared to ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

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Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...