Name: preclinical drug testing in scalable 3d engineered muscle tissues
Uploaded: 2023-04-07T13:10:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preclinical Drug Testing in Scalable 3D Engineered Muscle Tissues at JoVE.com

עבודה זו נתמכה חלקית על ידי מימון ממנהל המזון והתרופות האמריקאי (U01 FD006676-01 שהוענק למכון למדעי הבריאות והסביבה) ועל ידי מימון מהמכונים הלאומיים לבריאות (HL151094 לד"ר גייס). אנו מודים לד"ר אלק ס. ט. סמית על עזרתו בהכנת כתב יד זה.

<ol>
	<li>Sharma, A., Wu, J. C., Wu, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes+for+cardiovascular+disease+modeling+and+drug+screening.">Induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes for cardiovascular disease modeling and drug screening.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 4, 150 (2013).</li><li>Mudera, V., Smith, A. S. T., Brady, M. A., Lewis, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+cell+density+on+the+maturation+and+contractile+ability+of+muscle+derived+cells+in+a+3D+tissue-engineered+skeletal+muscle+model+and+determination+of+the+cellular+and+mechanical+stimuli+required+for+the+synthesis+of+a+postural+phenotype.">The effect of cell density on the maturation and contractile ability of muscle derived cells in a 3D tissue-engineered skeletal muscle model and determination of the cellular and mechanical stimuli required for the synthesis of a postural phenotype.</a> Journal of Cellular Physiology. 225 (3), 646-653 (2010).</li><li>Vandenburgh, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+skeletal+muscle+organoids+for+reversible+gene+therapy.">Tissue-engineered skeletal muscle organoids for reversible gene therapy.</a> Human Gene Therapy. 7 (17), 2195-2200 (1996).</li><li>Rao, L., Qian, Y., Khodabukus, A., Ribar, T., Bursac, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+human+pluripotent+stem+cells+into+a+functional+skeletal+muscle+tissue.">Engineering human pluripotent stem cells into a functional skeletal muscle tissue.</a> Nature Communications. 9 (1), 126 (2018).</li><li>Fleming, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioengineered+human+skeletal+muscle+capable+of+functional+regeneration.">Bioengineered human skeletal muscle capable of functional regeneration.</a> BMC Biology. 18 (1), 145 (2020).</li><li>Madden, L., Juhas, M., Kraus, W. E., Truskey, G. A., Bursac, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioengineered+human+myobundles+mimic+clinical+responses+of+skeletal+muscle+to+drugs.">Bioengineered human myobundles mimic clinical responses of skeletal muscle to drugs.</a> eLife. 4, 04885 (2015).</li><li>Urciuolo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+a+3D+in+vitro+model+of+human+skeletal+muscle+at+the+single+fiber+scale.">Engineering a 3D in vitro model of human skeletal muscle at the single fiber scale.</a> PLOS One. 15 (5), 0232081 (2020).</li><li>Afshar, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+96-well+culture+platform+enables+longitudinal+analyses+of+engineered+human+skeletal+muscle+microtissue+strength.">A 96-well culture platform enables longitudinal analyses of engineered human skeletal muscle microtissue strength.</a> Scientific Reports. 10, 6918 (2020).</li><li>Sakar, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+and+optogenetic+control+of+engineered+3D+skeletal+muscle+bioactuators.">Formation and optogenetic control of engineered 3D skeletal muscle bioactuators.</a> Lab on a Chip. 12 (23), 4976-4985 (2012).</li><li>Vila, O. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+human+neuromuscular+function+through+optogenetics.">Quantification of human neuromuscular function through optogenetics.</a> Theranostics. 9 (5), 1232-1246 (2019).</li><li>Khodabukus, A., Baar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defined+electrical+stimulation+emphasizing+excitability+for+the+development+and+testing+of+engineered+skeletal+muscle.">Defined electrical stimulation emphasizing excitability for the development and testing of engineered skeletal muscle.</a> Tissue Engineering Part C: Methods. 18 (5), 349-357 (2011).</li><li>Vandenburgh, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug-screening+platform+based+on+the+contractility+of+tissue-engineered+muscle.">Drug-screening platform based on the contractility of tissue-engineered muscle.</a> Muscle &amp; Nerve. 37 (4), 438-447 (2008).</li><li>Bielawski, K. S., Leonard, A., Bhandari, S., Murry, C. E., Sniadecki, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+force+and+frequency+analysis+of+engineered+human+heart+tissue+derived+from+induced+pluripotent+stem+cells+using+magnetic+sensing.">Real-time force and frequency analysis of engineered human heart tissue derived from induced pluripotent stem cells using magnetic sensing.</a> Tissue Enineering Part C Methods. 22 (10), 932-940 (2016).</li><li>Smith, A. S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput,+real-time+monitoring+of+engineered+skeletal+muscle+function+using+magnetic+sensing.">High-throughput, real-time monitoring of engineered skeletal muscle function using magnetic sensing.</a> bioRxiv. , 492879 (2022).</li><li>Scheraga, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+thrombin-fibrinogen+interaction.">The thrombin-fibrinogen interaction.</a> Biophysical Chemistry. 112 (2-3), 117-130 (2004).</li><li>Hinds, S., Bian, W., Dennis, R. G., Bursac, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+extracellular+matrix+composition+in+structure+and+function+of+bioengineered+skeletal+muscle.">The role of extracellular matrix composition in structure and function of bioengineered skeletal muscle.</a> Biomaterials. 32 (14), 3575-3583 (2011).</li><li>Carvalho, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doxorubicin:+the+good,+the+bad+and+the+ugly+effect.">Doxorubicin: the good, the bad and the ugly effect.</a> Current Medicinal Chemistry. 16 (25), 3267-3285 (2009).</li><li>Ahmad, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+dysfunction+associated+with+a+nucleotide+polymerase+inhibitor+for+treatment+of+hepatitis+C.">Cardiac dysfunction associated with a nucleotide polymerase inhibitor for treatment of hepatitis C.</a> Hepatology. 62 (2), 409-416 (2015).</li><li>Gill, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+the+cover:+Investigative+nonclinical+cardiovascular+safety+and+toxicology+studies+with+BMS-986094,+an+NS5b+RNA-dependent+RNA+polymerase+inhibitor.">From the cover: Investigative nonclinical cardiovascular safety and toxicology studies with BMS-986094, an NS5b RNA-dependent RNA polymerase inhibitor.</a> Toxicological Sciences. 155 (2), 348-362 (2017).</li><li>Ostap, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2,3-Butanedione+monoxime+(BDM)+as+a+myosin+inhibitor.">2,3-Butanedione monoxime (BDM) as a myosin inhibitor.</a> Journal of Muscle Research and Cell Motility. 23 (4), 305-308 (2002).</li><li>Fryer, M. W., Gage, P. W., Neering, I. R., Dulhunty, A. F., Lamb, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paralysis+of+skeletal+muscle+by+butanedione+monoxime,+a+chemical+phosphatase.">Paralysis of skeletal muscle by butanedione monoxime, a chemical phosphatase.</a> Pfl&#252;gers Archiv: European Journal of Physiology. 411 (1), 76-79 (1988).</li><li>Fleming, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+regeneration+of+tissue+engineered+skeletal+muscle+in+vitro+is+dependent+on+the+inclusion+of+basement+membrane+proteins.">Functional regeneration of tissue engineered skeletal muscle in vitro is dependent on the inclusion of basement membrane proteins.</a> Cytoskeleton. 76 (6), 371-382 (2019).</li><li>Capel, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scalable+3D+printed+molds+for+human+tissue+engineered+skeletal+muscle.">Scalable 3D printed molds for human tissue engineered skeletal muscle.</a> Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 7, 20 (2019).</li><li>Tsui, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tunable+electroconductive+decellularized+extracellular+matrix+hydrogels+for+engineering+human+cardiac+microphysiological+systems.">Tunable electroconductive decellularized extracellular matrix hydrogels for engineering human cardiac microphysiological systems.</a> Biomaterials. 272, 120764 (2021).</li><li>Tsui, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conductive+silk-polypyrrole+composite+scaffolds+with+bioinspired+nanotopographic+cues+for+cardiac+tissue+engineering.">Conductive silk-polypyrrole composite scaffolds with bioinspired nanotopographic cues for cardiac tissue engineering.</a> Journal of Materials Chemistry B. 6 (44), 7185-7196 (2018).</li><li>Gabella, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+cells,+nerves,+fibroblasts+and+vessels+in+the+detrusor+of+the+rat+urinary+bladder.">Muscle cells, nerves, fibroblasts and vessels in the detrusor of the rat urinary bladder.</a> Journal of Smooth Muscle Research. 55, 34-67 (2019).</li><li>Christov, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+satellite+cells+and+endothelial+cells:+close+neighbors+and+privileged+partners.">Muscle satellite cells and endothelial cells: close neighbors and privileged partners.</a> Molecular Biology of the Cell. 18 (4), 1397-1409 (2007).</li><li>Bersini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+an+environment+for+the+study+of+fibrosis:+A+3D+human+muscle+model+with+endothelium+specificity+and+endomysium.">Engineering an environment for the study of fibrosis: A 3D human muscle model with endothelium specificity and endomysium.</a> Cell Reports. 25 (13), 3858-3868 (2018).</li><li>Gilbert-Honick, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+functional+and+histological+regeneration+of+vascularized+skeletal+muscle.">Engineering functional and histological regeneration of vascularized skeletal muscle.</a> Biomaterials. 164, 70-79 (2018).</li><li>Maffioletti, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+human+iPSC-derived+artificial+skeletal+muscles+model+muscular+dystrophies+and+enable+multilineage+tissue+engineering.">Three-dimensional human iPSC-derived artificial skeletal muscles model muscular dystrophies and enable multilineage tissue engineering.</a> Cell Reports. 23 (3), 899-908 (2018).</li></ol>

כל הכותבים הם עובדים ובעלי מניות ב-Curi Bio Inc., החברה שממסחרת את חומרת Mantarray ואת התוכנה הנלווית אליה.

מחקר זה מתאר שיטות ליצירת רקמות שרירי לב ושלד מהונדסים בתלת ממד בתוך ערכת יציקה מתכלה של 24 בארות. על ידי ביצוע שיטות אלה, ניתן להשיג באופן עקבי מערך שלם של 24 רקמות ללא כשלים יציקה עבור בדיקות סמים לאחר מכן. שיקולים קריטיים להשגת תוצאה כזו הם הבטחת ביצוע כל השלבים על קרח למניעת פילמור מוקדם של ההידרוג'לים, הסרת מגיב דיסוציאציה של התא לפני יציקת רקמות, ערבוב יסודי של התא ותרחיף הידרוג'ל לכל רקמה, החלפת קצות פיפטה בין רקמות, ושימוש ב- FBS מומת חום (אם נעשה בו שימוש בכלל). כמו כן, חשוב לוודא כי הסריג הפוסט אינו זז ברגע שהיציקה מתחילה ומועברת בעדינות לאחר היווצרות הידרוג'לים.
שינויים עיקריים כוללים שימוש בסוגי תאים שונים להשגת EMT לב לעומת שלד וסימום של הידרוג'לים עם ריכוזים משתנים של חלבוני קרום מרתף כדי לקדם את הבשלת התאים ויציבות הרקמות. ההשפעות המועילות של סימום כזה חייבות להיבדק בכל מקרה לגופו, אך הוכח כמשפר את התוצאות התפקודיות ואת תוחלת החיים של רקמות בנסיבות מסוימות14,16,22. ראוי גם לציין כי צפיפויות התאים המפורטות הן מדריך וייתכן שיהיה צורך למטב אותן עבור קווי תאים שונים. הרכבי הידרוג'ל חלופיים יכולים להיחשב גם כאמצעי לשינוי המאפיינים המבניים והפונקציונליים של החובשים שהושגו23,24,25. מיקרו-סביבת השרירים הטבעית מכילה גם סוגי תאים תומכים לקידום וסקולריזציה, עצבוב ושקיעת מטריצה לתמיכה במיוציטים בצורה ובתפקוד26,27. בעוד המערכת המתוארת כאן משלבת כיום פיברובלסטים ברקמות לב תלת-ממדיות, סוגי תאים נוספים עשויים ליצור מודל פיזיולוגי רלוונטי יותר לחקר הבטיחות והיעילות של תרכובות טיפוליות במבחנה. בעבר, מגוון סוגי תאים תומכים שולבו בהצלחה ברקמות מהונדסות-תלת-ממד והציגו תבנית מרגשת למחקר עתידי באמצעות פלטפורמת ההתכווצות של החישה המגנטית28,29,30.
פתרון בעיות עבור פרוטוקול זה מתמקד בהיווצרות רקמות לא אמינות או לא עקביות במהלך תהליך הליהוק. יש להקפיד להימנע מהיווצרות בועות בהידרוג'לים בזמן יציקתם ועדיין להקל על פיזור אחיד של התאים במהלך הערבוב. ניסויי אופטימיזציה יידרשו ככל הנראה עבור כל סוג תא חדש כדי לזהות צפיפויות תאים אידיאליות, יחסי תאים והרכב מטריצה.
מגבלה עיקרית עבור טכניקה זו היא מספר משמעותי של תאים הדרושים כדי להקים צלחת מלאה של 24 EMTs. עבור הנתונים המוצגים כאן, 15 מיליון cardiomyocytes ו 18 מיליון myoblasts השלד שימשו לכל צלחת. ייתכן שלחוקרים מסוימים לא תהיה גישה למאגרים כה גדולים של חומר תאי, מה שעלול לעכב את יכולתם להשתמש בפלטפורמה זו במלואה. אם למשתמשי הקצה אין גישה לחומרת חישה מגנטית, יש לבצע מדידות של סטיות לאחר מכן באופן אופטי, מה שמפחית משמעותית את התפוקה ומונע רישום בו זמנית של התכווצויות שרירים על פני בארות מרובות. עם זאת, חומרת Mantarray מתגברת על מגבלות אלה ומציעה את המערכת המסחרית הראשונה המסוגלת לניתוח רציף ולא פולשני של התכווצות EMT בו זמנית על פני מבנים מרובים.
חישה מגנטית על פני 24 בארות מאפשרת מחקרי אורך של התפתחות תפקודית EMT בזמן אמת ומאפשרת מדידה מדויקת של תגובות אקוטיות למניפולציה כימית, סביבתית או גנטית. בעוד שלחישה מגנטית יש מספר יתרונות כגון מדידה סימולטנית על פני רקמות מרובות, ואינה דורשת ניתוח נתונים מסובך, שיטות זיהוי אופטיות מאפשרות מדידה בו זמנית של מדדים פיזיולוגיים כגון שטף סידן או מיפוי מתח. עם זאת, מערכי נתונים כמו אלה המתוארים בסעיף התוצאות מדגימים את רוחב היישומים שיש לטכנולוגיה זו בתחום פיתוח התרופות. בהתחשב בכך שבדיקות מעטות בשוק מציעות את האמצעים לבצע הערכה ישירה של תפוקת התכווצות בשרירים מהונדסים, שיטות אלה טומנות בחובן פוטנציאל לחולל מהפכה בצנרת הפיתוח הפרה-קליני.

מודלים של תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSC) הופכים יותר ויותר לשחקני מפתח בצנרת הפרה-קלינית לגילוי ופיתוח טיפולי, כמו גם מחקר ביולוגי בסיסי ומידול מחלות 1,2,3,4,5. רקמות התכווצות, כגון שרירי לב ושלד שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים טומנים בחובם פוטנציאל גדול לשיפור כוח הניבוי של מחקרי מבחנה אנושיים, שכן הערכה ישירה של כוח התכווצות השרירים והקינטיקה הם מדדים כמותיים לחקר תפקוד הרקמה הכולל 4,6,7,8. בדרך כלל, מדידות של כוח התכווצות הושגו בעקיפין על ידי מעקב אופטי של סטיית המצע9,10 או ישירות על ידי חיבור של תאים/רקמות למתמר כוח 4,11,12. שיטות אלה, למרות שהן מדויקות, הן בעלות תפוקה נמוכה מטבען ובדרך כלל דורשות מפעילים מיומנים מאוד לאסוף ולנתח נתונים.
עבודות קודמות הראו כי חישת שדה מגנטי עוקפת מכשולים אלה ומספקת שיטה חלופית להערכת תפקוד שרירים מהונדסים בו זמנית על פני מבני רקמות מרובים13. פלטפורמת ההתכווצות התלת-ממדית Mantarray (Magnetometric Analyzer for eNgineered Tissue ARRAY) מתבססת על טכנולוגיה זו באמצעות מכשיר המסוגל למדוד את ההתכווצות של רקמות שריר מהונדסות באופן מקביל מאוד הממנף את המורכבות של מודלים סלולריים תלת-ממדיים עם סינון בתפוקה גבוהה יותר14. הפלטפורמה מאפשרת ניטור כמותי ובזמן אמת ללא תוויות של תפקוד ההתכווצות ברקמות שרירי הלב והשלד בתוך או מחוץ לאינקובטור סטנדרטי של תרביות תאים, ומבטלת את הצורך בהדמיה וניתוח כיווץ אופטיים. טכנולוגיה זו מאפשרת השוואה ישירה של קווי תאים בריאים וחולים ומאפשרת מדידה של השפעת התרופה על רקמות התכווצות, תוך קביעת נתוני בטיחות ויעילות הניתנים לכימות, במבחנה, עבור תרכובות טיפוליות חדשות וקיימות.
רקמות שריר תלת-ממדיות מהונדסות-יכולות להיות מיוצרות בין שני עמודים באופן שניתן לשכפל באמצעות לוח יציקה מתכלה של Mantarray בעל 24 בארות (איור 1). עמוד אחד קשיח, ואילו המוצב השני גמיש ומכיל מגנט קטן. כאשר מבנה הרקמה מתכווץ, הוא מחליף את העמוד הגמיש ואת המגנט המשובץ. לוחית החובש ממוקמת בתוך המכשיר, והתזוזה לאחר מכן נמדדת באמצעות מערך חיישנים מגנטיים על לוח מעגלים מתחת למחזיק הצלחת. השינויים הנמדדים בשדה המגנטי מומרים לכוח כיווץ מוחלט באמצעות אלגוריתם מתמטי. המכשיר משתמש בקצב דגימת נתונים מהיר כדי לאפשר איסוף מידע מפורט על היכולת התפקודית והבשלות של סוגי התאים הנבדקים, כולל תדירות התכווצות, מהירות וזמן דעיכה. מדידות פונקציונליות אלה ניתנות להשגה בכל 24 הבארות בו זמנית באמצעות פלטפורמת החישה המגנטית או בנפרד וברצף בשיטות אופטיות מסורתיות.
מחקר זה מתאר שיטה בעלת יכולת שחזור גבוהה להנדסת שרירי שלד תלת-ממדיים ומיקרו-רקמות לב בהידרוג'ל מבוסס פיברין. במהלך תגובה קצרה, בת 80 דקות, תרומבין מזרז את הפיכת הפיברינוגן לפיברין, ומספק פיגום לתאי שריר להתפתח בתרבית מרחפת15. תאי סטרומה עוזרים לעצב מחדש את המטריצה והרקמות מתכווצות כאשר תאי שריר יוצרים סינקיטיום בתוך ההידרוג'ל. ההתכווצות של רקמות אלה נותחה באמצעות גישת החישה המגנטית, הן לפני והן אחרי חשיפה לתרכובת, ואישרה שיטה זו לשימוש במחקרי תרופות במינון תגובה. מיובלסטים אנושיים ראשוניים מביופסיה בריאה של תורם הושגו באופן מסחרי וגודלו בתרבית בדו-ממד על פי הפרוטוקולים של הספק. התאים הורחבו באמצעות מדיום צמיחת שרירי השלד דרך שלושה מעברים כדי ליצור מספר תאים מספיק כדי לייצר רקמות תלת-ממדיות. תאי סטרומה וקרדיומיוציטים שמקורם ב-hiPSC גודלו בתרבית על פי פרוטוקול הספק במשך 3 ימים כדי לאפשר התאוששות משימור בהקפאה לפני יציקת תאים לרקמות. תוצאות מייצגות מסופקות הממחישות את סוגי ערכות הנתונים שניתן לאסוף באמצעות פלטפורמת החישה המגנטית. מלכודות נפוצות הקשורות לייצור רקמות מהונדסות באמצעות שיטות אלה מטופלות גם הן.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 &#181;m cell strainer&#160;</td>
			<td>CELLTREAT</td>
			<td>229485</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm cell culture dish</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>150466</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Steriflip filter</td>
			<td>MilliporeSigma&#160;</td>
			<td>SCGP00525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500 mL filter flask</td>
			<td>MilliporeSigma&#160;</td>
			<td>S2GVU05RE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-aminocaproic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardiosight Maintenance Medium</td>
			<td>NEXEL</td>
			<td>CM-002A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardiosight Plating Medium</td>
			<td>NEXEL</td>
			<td>CM-020A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C-Pace EM stimulator&#160;</td>
			<td>IonOptix&#160;</td>
			<td>EM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curi Bio Muscle Differentiation Media Kit</td>
			<td></td>
			<td>Primary - DIFF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curi Bio Muscle Maintenance Media Kit</td>
			<td>Curi Bio</td>
			<td>Primary - MAINT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose, GlutaMAX</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10566-016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>11284932001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dystrophin antibody&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab154168</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>10082147</td>
			<td>Must be heat-inactivated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibrinogen (Bovine)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E8630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>354400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ham&#39;s F10</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11550043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemacytometer&#160;</td>
			<td>Sigma&#160;</td>
			<td>Z359629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HS-27A Fibroblasts</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-2496</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Skeletal Muscle Myoblasts&#160;</td>
			<td>Lonza&#160;</td>
			<td>CC-2580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer Lock 0.2 &#181;m syringe filter</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431219</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer Lock 10 mL syringe</td>
			<td>BH Supplies</td>
			<td>BH10LL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mantarray Instrument</td>
			<td>Curi Bio</td>
			<td>MANTA-24-B1</td>
			<td>System</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mantarray Plate Kits</td>
			<td>Curi Bio</td>
			<td>MA-24-SKM-5</td>
			<td>Pack of 5 kits</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mantarray stimulation lid&#160;</td>
			<td>Curi Bio</td>
			<td>EM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel (ECM)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nexel Cardiosight-S, Cardiomyocytes</td>
			<td>NEXEL</td>
			<td>C-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical Microscope</td>
			<td>Nikon Ti2E</td>
			<td>MEA54000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pan Myosin Heavy Chain antibody&#160;</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>MF-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly(ethyleneimine)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3143</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROCK inhibitor</td>
			<td>StemCell Technologies</td>
			<td>Y-27632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875-093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skeletal Muscle Growth Medium (SkGM-2)</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3245</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard 24-well plates</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>M8812&#160;</td>
			<td>Other manufacturer&#39;s plates will not fit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard 6-well plates</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>140675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stromal medium (DMEM + 20% FBS)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T175 Filter Flask</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>159910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T225 Filter Flask</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>159934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thrombin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4648</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue solution, 0.4%</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>15250061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Select Enzyme (10x)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A1217702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Select Enzyme (1x)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>12563011</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preclinical drug testing in scalable 3d engineered muscle tissues

מידול מדויק של מצבים בריאים ומחלות במבחנה חיוני לפיתוח אסטרטגיות טיפול וטיפולים חדשים. עבור מחלות לב ושרירי שלד, כוח התכווצות וקינטיקה מהווים מדדי מפתח להערכת תפקוד השרירים. שיטות חדשות ומשופרות ליצירת רקמות שריר מהונדסות (EMTs) מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים הפכו מודלים של מחלות חוץ גופיות לאמינים יותר עבור רקמות התכווצות; עם זאת, ייצור רקמות מתרביות תאים מרחפים ומדידת ההתכווצות שלהן הוא מאתגר. טכניקות כאלה סובלות לעתים קרובות משיעורי כישלון גבוהים ודורשות מכשור מורכב ושגרות ניתוח נתונים מותאמות אישית. פלטפורמה ומכשיר חדשים המשתמשים בחובשים תלת-ממדיים בשילוב עם בדיקת חוזיות נטולת תוויות, מקבילית מאוד וידידותית לאוטומציה עוקפים רבים מהמכשולים הללו. הפלטפורמה מאפשרת ייצור קל וניתן לשחזור של חובשים תלת-ממדיים באמצעות כמעט כל מקור סלולרי. לאחר מכן נמדדת התכווצות הרקמה באמצעות מכשיר המודד בו זמנית 24 רקמות ללא צורך בשגרות ניתוח תוכנה מורכבות. המכשיר יכול למדוד באופן אמין שינויים בכוח המיקרוניוטון, ומאפשר בדיקת תרכובת תלוית מינון כדי למדוד את ההשפעה של תרופה או טיפול על תפוקת התכווצות. רקמות מהונדסות, המיוצרות באמצעות מכשיר זה, מתפקדות באופן מלא, מייצרות התכווצויות עוויתות וטטניות על גירוי חשמלי, וניתן לנתח אותן לאורך זמן בתרבית במשך שבועות או חודשים. כאן, אנו מציגים נתונים מחובשים של שרירי לב במינון חריף וכרוני עם רעילים ידועים, כולל תרופה (BMS-986094) שנמשכה מניסויים קליניים לאחר מקרי מוות של מטופלים עקב רעילות לב בלתי צפויה. כמו כן מוצג שינוי בתפקוד שרירי השלד ברקמות מהונדסות, בתגובה לטיפול במעכב מיוזין. פלטפורמה זו מאפשרת לחוקר לשלב מערכות מודל מורכבות ועשירות במידע ביולוגי בתהליך העבודה של גילוי התרופות שלו עם מינימום הכשרה נוספת או מיומנויות נדרשות.

Watch this Scientific Journal Video about Preclinical Drug Testing in Scalable 3D Engineered Muscle Tissues at JoVE.com

Preclinical Drug Testing in Scalable 3D Engineered Muscle Tissues

פרוטוקול זה מספק שיטות ליצירת רקמות שרירי לב ושלד מהונדסות-תלת-ממדיות ומתאר את השימוש בהן בשיטות סינון תרופות פרה-קליניות. השיטות המתוארות משתמשות במערכת חישה מגנטית כדי להקל על הערכה בו זמנית של 24 רקמות במקביל.

בדיקות פרה-קליניות של תרופות ברקמות שריר מהונדסות תלת-ממדיות ניתנות להרחבה

Accurately modeling healthy and disease conditions in vitro is vital for the development of new treatment strategies and therapeutics. For cardiac and ...

הפלטפורמה שלנו משתמשת ברקמות שריר מהונדסות-תלת-ממד ובחומרת חישה מגנטית כדי למדוד התכווצות על פני 24 בארות בו זמנית. זה מספק שיטת תפוקה גבוהה יותר להערכת טיפולים חדשים במבחנה באמצעות רקמות שריר אנושיות. שיטת הליהוק שלנו משפרת את העקביות והשחזור בייצור רקמות שריר מהונדסות-תלת-ממדיות.תכננו לוח יציקה מתכלה של 24 בארות המצויד בחומרת חישה מגנטית למדידות וניתוח התכווצות בפלטפורמה שלנו. שיטה זו יכולה לספק תובנה חשובה לגבי מודלים של מחלות חוץ גופיות, גילוי תרופות וריפוי גנטי לכל מחלת שרירים המשפיעה על התכווצות. כיום אנו משלבים נוירונים מוטוריים במבנים התלת-ממדיים שלנו כדי ליצור מודל של צומת עצבית-שרירית גם כן.כדי להתחיל, הניחו ערכת יציקת רקמות מצוננת מראש על גוש קר או קרח בתוך מכסה המנוע של תרבית התא. הניחו את צלחת היציקה שטוחה על קרח. מוסיפים תרומבין למדיום הבסיס כדי ליצור את תמיסת הטרומבין ומעבירים את סריג העמוד מצלחת היציקה לצלחת סטרילית חדשה בת 24 בארות.פיפטה 50 מיקרוליטר של תמיסת טרומבין לתוך כל באר מקוררת מראש של צלחת היציקה ומניחים את הסריג בחזרה על הערכה. הניחו את ערכת היציקה בצד על קרח. לאחר מכן, להוסיף 500 מיליליטר של מדיום RPMI, 10 מיליליטר של B27, ו 2.5 גרם של חומצה aminocaproic, או ACA, כדי להכין את מדיום EMT הלב.הוציאו את מדיום החובש שישמש ליציקת הרקמות והוסיפו לו 10 מעכבי סלע מיקרומולאריים. הכן את מדיום EMT השלד על ידי הוספת 50 מיליליטר של מדיום F10 ו 0.25 גרם של חומצה aminocaproic, או ACA, עבור מיובלסטים ראשוניים. השתמש 0.1 גרם של ACA עבור מיובלסטים שמקורם ב- IPSC.לאחר מכן, מסננים סטריליים את מדיום הליהוק המכיל ACA. לחמם את מגיב הדיסוציאציה בדרגת תרבית תאים ונפח שווה של מדיום EMT ל 37 מעלות צלזיוס. מדיום EMT מחומם זה ישמש לדילול מגיב הדיסוציאציה.שטפו את התאים עם PBS והוסיפו את מגיב הדיסוציאציה המחומם כדי להרים את התאים. דוגרים בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך חמש דקות או עד שהתאים מתרוממים ובודקים את התרביות כל שתיים-שלוש דקות על ידי הקשה על צד הצלחת. לאחר שהתאים התרוממו, העבירו אותם לצינור חרוטי של 50 מיליליטר.עשו טריטורציה עם פיפטה P-1000 כדי להבטיח השעיה של תא יחיד. שטפו את הצלחת ואת הבקבוק עם מדיום EMT נוסף כדי לאסוף את התאים הנותרים ולהוסיף אותם לצינור החרוט. שוב, שלשו את התאים כדי להבטיח השעיה של תא בודד.הוסף מדיום EMT כדי לסיים את תהליך הדיסוציאציה ולאחר מכן לקחת דגימות של השעיות התא עבור ספירת תאים. בצע ספירת תאים באמצעות מונה תאים אוטומטי או המוציטומטר בכחול טריפאן. סובב את התאים ב 200 G במשך ארבע דקות, לשאוף את supernatant, ולהשעות מחדש את התאים בחמישה מיליליטר של תווך הבסיס EMT כדי להסיר את מגיב דיסוציאציה שיורית.לאחר צנטריפוגה נוספת במשך ארבע דקות, שואפים את הסופרנאטנט ומכינים את מתלי התא בצפיפויות המתאימות. חישוב הנפחים של כל תמיסת תא הנדרשת כדי לפצות על מספר הרקמות הרצוי פיפטה את הכרכים המחושבים של תאים לתוך צינור חרוטי 15 מיליליטר. הוסף 10 מיקרוליטר פיברינוגן לכל EMT לתרחיף התא והנח אותו על קרח.ודא כי לכל חובש יש 90 מיקרוליטר של השעיית תאים, 10 מיקרוליטר של פיברינוגן, ו 50 מיקרוליטר של תמיסת תרומבין במבנה הרקמה הסופי. במכסה מנוע של תרבית תאים, הסירו את מכסה ערכת יציקת הרקמה והניחו את צלחת היציקה כשסריג העמוד מונח שטוח על הקרח. מערבבים את תערובת פיברינוגן התא לצייר 100 מיקרוליטר עם פיפטה P-200.מוסיפים 100 מיקרוליטר מהתערובת לבארות שהוכנו עם 50 מיקרוליטר של תמיסת תרומבין וטריטוראט חמש פעמים כדי לערבב היטב. אין לדחוף את הפיפטה מעבר לתחנה הראשונה ולהסיר את הקצה לאחר הטריטורציה כדי למנוע יצירת בועות. מערבבים את תרחיף התא בצינור החרוטי לפני יציקת כל רקמה.החזיקו את הסריג ואת צלחת היציקה בו זמנית באמצעות אצבע מצביעה ואגודל של יד אחת כדי למנוע כל תזוזה של הסריג או השאירו את הצלחת שטוחה על קרח ונענעו את דלי הקרח כדי לראות לתוך צלחת היציקה. חזור על הפעולה עם קצה P-200 טרי לכל רקמה עד שכל הרקמות יצוקות. מעבירים בזהירות את ערכת הזרעים לאינקובטור ודגרים בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך 80 דקות.לאחר מכן, להכין צלחת 24 באר טרי עם שני מיליליטר לכל באר של מדיום EMT עבור רקמות הלב לדגור את הצלחת ב 37 מעלות צלזיוס כדי לחמם את המדיום. לאחר הדגירה של 80 דקות, מוסיפים בעדינות מיליליטר אחד של מדיום החובש לקצה בארות היציקה ודגרים במשך 10 דקות נוספות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. לאחר 10 דקות של דגירה, בזהירות להרים את הסריג פוסט ולהעביר את הרקמות מן צלחת יציקה צלחת מוכן 24 בארות עם המדיום מחומם.לבסוף, להחזיר את הצלחות עם רקמות לאינקובטור תרבית התא ב 37 מעלות צלזיוס. ייצור EMT לא מוצלח יכול לנוע בין כשלים קטסטרופליים כגון ניתוק רקמות מהעמדות, לפגמים מבניים עדינים יותר כגון בועות אוויר ושקיעת רקמות לא שוות סביב שני העמודים. מבנה EMT יום לאחר היציקה מוצג כאן.רקמות שרירי השלד הועברו למדיום התמיינות החל מהיום אפס של איחוי תאים ודחיסת הידרוג'ל. מהיום השביעי ועד היום ה-28, אותו חובש הציג אורך כולל מעט קצר יותר בין שתי העמדות ורוחב קטן יותר כאשר נמדד דרך החלק האמצעי של החובש. ארבע פלטות של רקמות היו במעקב במשך 21 ימים והשוו את קוטר החובשים לאורך הדחיסה.נקודות זמן מציגות גודל EMT עקבי בין הלוחות. דחיסה מקסימלית מושגת ביום ה -21 כאשר שיפוץ המטריצה מתייצב. האימונוהיסטוכימיה של החובשים מתוארת כאן.החובשים תוקנו ביום 10 לתרבית והוטמעו בפרפין. חתכים דקים הוכתמו בנוגדנים נגד מיוזין, שרשרת כבדה ודיסטרופין לפני ההדמיה. תמונות גרפיות אלה מייצגות את כוח העווית המוחלט הממוצע שנמדד מהחובשים הלבביים ומחובשי השלד לאורך זמן.טיפול דוקסורוביצין אקוטי וכרוני ברקמות לב מהונדסות מוצג כאן. שלושה ריכוזי מינון שונים של דוקס ניתנו בבולוס או שניתנו ברציפות לרקמות לב מהונדסות, במשך 27 ימים. תגובת המינון ל- BDM ברקמות שרירי שלד מהונדסים מוצגת באיור זה.קצב פעימות הלב או תדירות העוויתות נפסק באופן תלוי מינון בד בבד עם הפסקת כוח התכווצות המציין רעילות לב כאשר חובשים נחשפים לתרכובת זו. הדברים החשובים ביותר שיש לזכור בעת יציקת רקמות הם לשמור על הכל קר בכל עת, כולל מתלה התא והריאגנטים שלך ולשמור על הסריג שלאחר מכן נייח לחלוטין ברגע שהיציקה מתחילה.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Production, Characterization and Potential Uses of a 3D Tissue-engineered Human Esophageal Mucosal Model

ייצור, אפיון ופוטנציאל שימושים של הוושט רירי דגם אדם מהונדס-רקמות 3D

The incidence of both esophageal adenocarcinoma and its precursor, Barrett&#8217;s Metaplasia, are rising rapidly in the western world. Furthermore ...

Engineered 3D Silk-collagen-based Model of Polarized Neural Tissue

דגם של רקמות עצביות מקוטב מבוסס משי-קולגן מהונדס 3D

Despite huge efforts to decipher the anatomy, composition and function of the brain, it remains the least understood organ of the human body. To gain a ...

Engineered Vascularized Muscle Flap

דש שריר כלי דם מהונדס

One of the main factors limiting the thickness of a tissue construct and its consequential viability and applicability in vivo, is the control of oxygen ...

Construction of Defined Human Engineered Cardiac Tissues to Study Mechanisms of Cardiac Cell Therapy

בניית רקמות לב Engineered האנושית תחם לחקור מנגנונים של טיפול בתאי לב

Human cardiac tissue engineering can fundamentally impact therapeutic discovery through the development of new species-specific screening systems that ...

A Combined 3D Tissue Engineered In Vitro/In Silico Lung Tumor Model for Predicting Drug Effectiveness in Specific Mutational Backgrounds

A Combined 3D Tissue Engineered In Vitro/In Silico Lung Tumor Model for Predicting Drug Effectiveness in Specific Mutational Backgrounds

רקמת 3D משולב תכנון הנדסי<em&gt; במבחנה</em&gt; /<em&gt; סיליקו</em&gt; דגם גידול ריאות לניבוי יעילות טיפול תרופתי רקעים מוטציוני ספציפיים

In the present study, we combined an in vitro 3D lung tumor model with an in silico model to optimize predictions of drug response based on a specific ...

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

Applications of In Vivo Functional Testing of the Rat Tibialis Anterior for Evaluating Tissue Engineered Skeletal Muscle Repair

יישומים של<em&gt; In vivo</em&gt; בדיקות פונקציונליות של עכברוש השוקה הקדמי להערכת רקמות מהונדסות תיקון שרירי שלד

Despite the regenerative capacity of skeletal muscle, permanent functional and/or cosmetic deficits (e.g., volumetric muscle loss (VML) resulting from ...

Biomechanical Characterization of Human Soft Tissues Using Indentation and Tensile Testing

אפיון ביומכנית של רקמות רכות אדם באמצעות זחה ו מתיחת בדיקה

Regenerative medicine aims to engineer materials to replace or restore damaged or diseased organs. The mechanical properties of such materials should ...

Automated Contraction Analysis of Human Engineered Heart Tissue for Cardiac Drug Safety Screening

ניתוח התכווצות האוטומטי של רקמת לב Engineered האנוש להקרנת בטיחות תרופת לב

Cardiac tissue engineering describes techniques to constitute three dimensional force-generating engineered tissues. For the implementation of these ...

Standardized and Scalable Assay to Study Perfused 3D Angiogenic Sprouting of iPSC-derived Endothelial Cells In Vitro

שיטת הלימוד הסטנדרטית והמדמדית למחקר בלבלוב אנגיוגנטית בתלת-ממד של התאים הנגזרים מתוך מבחנה

Pre-clinical drug research of vascular diseases requires in vitro models of vasculature that are amendable to high-throughput screening. However, current ...

Advanced 3D Liver Models for In vitro Genotoxicity Testing Following Long-Term Nanomaterial Exposure

דגמי כבד תלת-ממדיים מתקדמים לבדיקות גנוטוקסיות במבחנה בעקבות חשיפה ננו-חומרית לטווח ארוך

Due to the rapid development and implementation of a diverse array of engineered nanomaterials (ENM), exposure to ENM is inevitable and the development of ...