Name: extraction, labeling, and purification of lineage-specific cells from human antral follicles
Uploaded: 2022-11-30T13:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Extraction, Labeling, and Purification of Lineage-Specific Cells from Human Antral Follicles at JoVE.com

Forfatterne anerkender støtte fra Queenie Victorina Neri Research Scholar Award (D.J.) og Hung-Ching Liu Research Scholar Award (L.M.). N.L.G støttes af NYSTEM Stem Stem Cell and Regenerative Medicine postdoc training grant.

Alle procedurer, der involverede mus, blev godkendt af Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) hos Weill Cornell Medicine. Alle xenotransplantationsforsøg med ovarievæv blev udført i overensstemmelse med relevante retningslinjer og regler. Begge æggestokke blev isoleret fra en 14-årig hjernedød organdonor uden tidligere radio/kemoterapi og uden dokumenteret historie med endokrine eller reproduktive tilstande. Weill Cornell Medicine's institutional review board (IRB) Committee godkendte indsamling af væ...

<ol>
	<li>Aghadavod, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+granulosa+cells+from+follicular+fluid;+Applications+in+biomedical+and+molecular+biology+experiments.">Isolation of granulosa cells from follicular fluid; Applications in biomedical and molecular biology experiments.</a> Advanced Biomedical Research. 4, 250 (2015).</li><li>Man, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+human+antral+follicles+of+xenograft+versus+ovarian+origin+reveals+disparate+molecular+signatures.">Comparison of human antral follicles of xenograft versus ovarian origin reveals disparate molecular signatures.</a> Cell Reports. 32 (6), 108027 (2020).</li><li>Schmidt, K. L., Ernst, E., Byskov, A. G., Nyboe Andersen, A., Yding Andersen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+of+primordial+follicles+following+prolonged+transportation+of+ovarian+tissue+prior+to+cryopreservation.">Survival of primordial follicles following prolonged transportation of ovarian tissue prior to cryopreservation.</a> Human Reproduction. 18 (12), 2654-2659 (2003).</li><li>Jensen, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outcomes+of+transplantations+of+cryopreserved+ovarian+tissue+to+41+women+in+Denmark.">Outcomes of transplantations of cryopreserved ovarian tissue to 41 women in Denmark.</a> Human Reproduction. 30 (12), 2838-2845 (2015).</li><li>Newton, H., Aubard, Y., Rutherford, A., Sharma, V., Gosden, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+temperature+storage+and+grafting+of+human+ovarian+tissue.">Low temperature storage and grafting of human ovarian tissue.</a> Human Reproduction. 11 (7), 1487-1491 (1996).</li><li>Man, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+superphysiologic+AMH+promotes+premature+luteinization+of+antral+follicles+in+human+ovarian+xenografts.">Chronic superphysiologic AMH promotes premature luteinization of antral follicles in human ovarian xenografts.</a> Science Advances. 8 (9), 7315 (2022).</li><li>Gougeon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+follicular+growth+in+the+human:+A+model+from+preliminary+results.">Dynamics of follicular growth in the human: A model from preliminary results.</a> Human Reproduction. 1 (2), 81-87 (1986).</li><li>Richards, J. S., Ren, Y. A., Candelaria, N., Adams, J. E., Rajkovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+follicular+theca+cell+recruitment,+differentiation,+and+impact+on+fertility:+2017+update.">Ovarian follicular theca cell recruitment, differentiation, and impact on fertility: 2017 update.</a> Endocr Rev. 39 (1), 1-20 (2018).</li><li>Asiabi, P., Dolmans, M. M., Ambroise, J., Camboni, A., Amorim, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+differentiation+of+theca+cells+from+ovarian+cells+isolated+from+postmenopausal+women.">In vitro differentiation of theca cells from ovarian cells isolated from postmenopausal women.</a> Human Reproduction. 35 (12), 2793-2807 (2020).</li><li>Dalman, A., Totonchi, M., Valojerdi, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+human+theca+stem+cells+and+their+differentiation+into+theca+progenitor+cells.">Establishment and characterization of human theca stem cells and their differentiation into theca progenitor cells.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 119 (12), 9853-9865 (2018).</li></ol>

Bedre opløsning af den cellulære mangfoldighed i æggestokkene er klinisk vigtigt af flere grunde. Ved anvendelse af ovennævnte protokol til isolering af de unikke fænotypiske undertyper, der befinder sig inden for antralstadiet follikler, bør flere faktorer overvejes. For det første er sundheden og levedygtigheden af ovarievævet, hvorfra den antrale follikel er afledt, afgørende for at bestemme cellernes kvalitet og succesen med downstream-applikationer. Dette kan optimeres ved at minimere det iskæmiske interva...

De primære funktionelle elementer i den menneskelige æggestok er folliklerne, som styrer væksten og udviklingen af oocytter. Protokoller til isolering af follikulære celler er veletablerede i forbindelse med in vitro-befrugtning , men disse er kun egnede til indsamling af celler fra luteiniserede follikler ved tidspunktet for oocytudtagning1. Vi har udviklet en protokol, der muliggør isolering af diskrete cellepopulationer fra antrale follikler på forskellige udviklingsstadier, der opstår fra indfødte æggestokke eller xenotransplanteret ovarievæv2. Selv om der er enighed om, at follikelresidente cellers bidrag til dyrkning af oocyten er meget vigtige, har få undersøgelser prospektivt identificeret og ekstraheret de unikke fænotypiske undertyper, der findes i antralstadiet follikler. En dybere forståelse af differentieringshierarkiet og signaltransduktion mellem specialiserede celler i de forskellige udviklingsstadier kunne udvide vores forståelse af ovariefysiologi under homeostatiske og patologiske tilstande. Desuden kan diskrimination af diskrete cellulære undertyper og deres molekylære bidrag til follikelvækst/modning være et middel til at generere ex vivo-surrogater, der rekonstruerer ovariefunktionen for at fremme oocytmodning og/eller behandle endokrin dysfunktion. 
Hver unik celletype i æggestokken bidrager til follikelens komplekse funktion, som effektivt fungerer som et diskret miniorgan for at fremme væksten og modningen af den oocyt, den indeholder. Oocytten, follikelens midtpunkt, er direkte omsluttet af et kontinuerligt lag af granulosaceller (GC'er), hvor thecacellerne (TC'er) danner et sekundært lag af celler, der kombineres med oocyten og GC'erne for at komponere follikelenheden. Selvom GC'er og TC'er er klassificeret i to grupper, indeholder GC'er og TC'er adskillige undertyper. GC'er klassificeres efter deres position inden for folliklen; GC'er, der omgiver oocytten versus dem, der støder op til kældermembranen, betegnes som henholdsvis oophorous og vægmaleri GC'er, og disse undertyper viser unikke transkriptomiske signaturer. TC'er har adskillige undertyper, der fungerer til at tilvejebringe steroidogen, metabolisk og strukturel støtte. Endotel-, perivaskulære og immunceller spiller en central rolle i opretholdelsen af normal ovariefysiologi. Ovariestroma tjener ikke kun som et substrat for follikelvækst, men giver sandsynligvis også en kilde til forfædre, der giver anledning til TC'er. Dette flerlagede kompleks af cellulære undertyper i æggestokken er det, der muliggør dets funktion som både et endokrin og et reproduktivt organ.
Dette papir præsenterer en protokol til identifikation og oprensning af granulosa, theca, stromale, endotel- og hæmatopoietiske celler fra antrale follikler. Vi har brugt denne protokol til at isolere disse ovarieceller og analysere dem ved hjælp af enkeltcellesekventering efterfulgt af specifik farvning i follikler i forskellige udviklingsstadier. Protokollen giver en ligetil metode, der kan replikeres og muliggør analyse i høj opløsning af både æggestokkens fysiologi og patologi.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chemicals, reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic 100x</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15240062</td>
			<td>Anti-Anti</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antifade Mountant solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>&#160;P36930</td>
			<td>ProLong Gold</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase from&#160;Clostridium histolyticum</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>C 2674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II, powder</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17105041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>D 2650</td>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme Cell Detachment Medium&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>00-4555-56</td>
			<td>Accutase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, heat-inactivated</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10438026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#8242; Balanced Salt solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14175079</td>
			<td>no calcium, no magnesium, no phenol red</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leibovitz&#8217;s L-15 medium&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11415064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Saline</td>
			<td>Quality Biological</td>
			<td>114-055-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>S 1888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezing Medium (100 mL, filtered through a 0.2 micron filter)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 69.64 mL of Leibovitz&#39;s L-15</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 17.66 mL of fetal bovine serum</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 3.42 g of sucrose</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 10.65 mL of DMSO</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 1 mL of antibiotic-antimycotic</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Plasticware and Supplies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well Clear Flat Bottom Not Treated&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>351146</td>
			<td>Falcon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer 100 &#181;m</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>352360</td>
			<td>Corning, Falcon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryovials</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>377267</td>
			<td>CryoTube 1.8 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish, D x H 150 mm x 25 mm&#160;</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>CLS430599</td>
			<td>60EA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round-Bottom Polystyrene Test Tubes with Cell Strainer Snap Cap, 5 mL</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>352235</td>
			<td>Corning, Falcon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Filter/Storage Bottle System, 0.22 &#181;m</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibodies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANPEP</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>301703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>FAB7227A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>304019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD55</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>311306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD 99</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>371308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVRL</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>340404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical tools</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>long forceps (~150 mm length)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-000-128</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>medium forceps (~110 mm length)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-000-157</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>number 21 scalpel</td>
			<td>Andwin Scientific&#160;</td>
			<td>EF7281H</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>number 11 scalpel</td>
			<td>Andwin Scientific</td>
			<td>&#160;FH/CX7281A</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sharp fine curved scissors</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS-5881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSJazz Flourescence activated cell sorter</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 710 META Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

extraction, labeling, and purification of lineage-specific cells from human antral follicles

Aktivering, vækst, udvikling og modning af oocytter er en kompleks proces, der koordineres ikke kun mellem flere celletyper i æggestokken, men også på tværs af flere kontrolpunkter inden for hypothalamus/hypofyse/ovariekredsløbet. Inden for æggestokken vokser flere specialiserede celletyper i tæt forbindelse med oocytten i æggestokkene. Disse cellers biologi er blevet godt beskrevet i de senere stadier, når de let genvindes som biprodukter af assisteret reproduktionsbehandling. Imidlertid udføres den dybdegående analyse af små antrale follikler, der er isoleret direkte fra æggestokken, ikke almindeligt på grund af manglen på humant ovarievæv og den begrænsede adgang til æggestokken hos patienter, der gennemgår assisteret reproduktionsbehandling. 
Disse metoder til behandling af hele æggestokke til kryopræservering af kortikale strimler med samtidig identifikation/isolering af ovarieresidente celler muliggør højopløsningsanalyse af de tidlige stadier af antral follikeludvikling. Vi demonstrerer protokoller til isolering af diskrete celletyper ved enzymatisk behandling af antrale follikler og adskillelse af granulosa-, theca-, endotel-, hæmatopoietiske og stromale celler. Isolering af celler fra de antrale follikler i forskellige størrelser og udviklingsstadier muliggør omfattende analyse af de cellulære og molekylære mekanismer, der driver follikelvækst og ovariefysiologi og giver en kilde til levedygtige celler, der kan dyrkes in vitro for at rekapitulere follikelmikromiljøet.

Vi isolerede follikler fra overfladen af æggestokken og behandlede dem enzymatisk for at isolere GC'erne samt theca- og stromacellerne, der omgiver antralhulen. Cellerne blev indsamlet, og cellefraktionerne blev sorteret fra de antrale follikler (diametre mellem 0,5 mm og 4 mm) af FACS til >95% renhed (figur 1).
For at mærke og rense unikke cellulære fraktioner i de humane antrale follikler kombinerede vi enzymatisk fordøjelse med flowcytometrisk sortering. Vi...

Watch this Scientific Journal Video about Extraction, Labeling, and Purification of Lineage-Specific Cells from Human Antral Follicles at JoVE.com

Extraction, Labeling, and Purification of Lineage-Specific Cells from Human Antral Follicles

Her præsenterer vi protokoller til identifikation og oprensning af ovarieceller fra antrale follikler. Vi uddyber metoder til behandling af hele æggestokke til kryopræservering af kortikale strimler, samtidig med at vi høster intakte antrale follikler, der behandles enzymatisk for at frigøre flere follikelresidente celletyper, herunder granulosa, theca, endotel-, hæmatopoietiske og stromale celler.

Ekstraktion, mærkning og oprensning af afstamningsspecifikke celler fra humane antrale follikler

The activation, growth, development, and maturation of oocytes is a complex process that is coordinated not just between multiple cell types of the ovary ...

Den her demonstrerede protokol muliggør mærkning og isolering af specifikke cellelinjer, der er til stede i ovariefollikler, der begynder i tidlige antrale stadier, hvilket muliggør analyse og kultur med høj opløsning. Denne meget præcise tilgang anvender kombinationer af fluoroforkonjugerede antistoffer til at målrette celleoverflademarkører, der er robust og specifikt udtrykt blandt diskrete granulosa-, stroma- og theca-slægter. Begynd med at placere æggestokken i en steril petriskål, og hæld et kølet medium med det for at hydrere vævet, hvilket sikrer, at æggestokken er halvt nedsænket i mediet.Fjern suturer eller andet materiale, og disseker det resterende omgivende væv væk fra æggestokken. For at isolere de antrale follikler skal du identificere individuelle follikler og vælge sunde follikler. Ekskluder blodfyldte, mørke eller ikke-symmetriske follikler.Isoler de valgte antrale follikler fra æggestokken ved hjælp af skalpeller, hold antrummet intakt og udskår det kortikale væv, der omfatter folliklen. Placer hver udskåret intakt antral follikel i en brønd af de seks brøndplader. Brug en lineal placeret under skålen til at bestemme follikeldiameteren til beskrivende formål.Brug en skalpel til at skære den intakte antrale follikel for at vurdere antralhulen og tilsæt seks ml enzymatisk celleløsrivelsesmedium, før pladen inkuberes i en befugtet inkubator i 10 minutter. Efter inkubation tilsættes seks ml tilgængeligt medium indeholdende 20% føtalt bovint serum eller FBS, og skylles med mediet ved gentagen kraftig pipettering over de bisekterede follikler med en P-1000 mikropipette. Derefter samles mediet og føres gennem et 100 millimeter filter.Efter centrifugering af den filtrerede supernatant ved 300 G og fire grader Celsius i tre minutter før opsuges supernatanten. Det resterende væv anbringes i en blanding af 100 enheder pr. milliliter kollagenase og en enhed pr. milliliter dispase fortyndet i en afbalanceret saltopløsning inden 30 minutters inkubation. mekanisk forstyrre vævet ved triturering og kraftig pipettering to gange efter 10 og 20 minutter.Når det er gjort, genvindes vævet og skylles via pipettering gennem en P-1000 mikropipettespids og siles gennem et 100 ml filter. Centrifuger det anstrengte væv ved 300 G og fire grader Celsius i tre minutter, før du lægger cellepillen beriget med thecacellerne og stromacellerne på is til mærkning og FACS. For at identificere granulosaceller og theca-celler resuspenderes cellepillerne i en blokerende opløsning indeholdende direkte konjugerede antistoffer og inkuberes ved fire grader Celsius i 10 minutter.Efter vask og centrifugering af cellerne resuspenderes cellerne i FACS-buffer indeholdende 4-6 diamidino-2-phenylindol eller DAPI, og cellesuspensionen føres gennem et FACS-instrument for at fange en lille population af cellerne ved hjælp af fluorescerende intensitet af fluoroforkonjugerede antistoffer til gating. Skær resten af æggestokken. Punktafgifter medulla ved hjælp af buet fin saks og skalpeller, undgå skader på æggestokkens cortex.Fortsæt behandling og udtynding af æggestokkens cortex ved forsigtig skrabning, indtil minimal medulla forbliver. Opdel det kortikale væv i to til tre millimeter brede strimler langs æggestokkens længde. Ved frysning af ovarievæv anbringes en kortikal strimmel i hvert afkølet kryogent hætteglas, der indeholder fryseopløsningen.De kryogene hætteglas med kortikale strimler rystes på en roterende plade i 20 minutter ved fire grader Celsius. Nukleat iskrystaldannelse ved at berøre hvert kryohætteglas med en bomuldsspids, der kortvarigt nedsænkes i flydende nitrogen. Ovariecellerne blev opsamlet, og cellefraktionerne blev sorteret fra de antrale follikler FACS til mere end 95% renhed.CD99 specifikt mærket granulosa celler i PVRL1, eller nektin, blev i stigende grad lokaliseret til oophorus granulosa cellerummet, da de antrale follikler steg i størrelse. Det blev set, at antistofferne mod endoglin eller CD55 specifikt afgrænsede alle stroma- og thecaceller, og at alaninaminopeptidase specifikt blev udtrykt af androgene thecaceller. Cellerne blev mærket med et antistof rettet mod CD99 for at identificere granulosaceller, og antistoffer mod CD45 blev brugt til at udelukke hæmatopoietiske celler.Antistoffer mod PVRL1 adskilte granulosacellepopulationen i oophorus- og vægmalerirum. Efter enzymatisk fordøjelse med kollagenasedispase muliggjorde cellepræparaterne mærket med antistoffer mod CD55, CD34 og alaninaminopeptidase indfangning af alle stroma- eller theca-cellerne eller androgene theca-celler med udelukkelse af endotelceller fra thecacellernes populationer. Vær særlig omhyggelig med at undgå at forstyrre folliklernes antrum under indledende follikelisolering ved at skære inden for en sikker margen omkring follikelgrænserne.Nedstrøms for denne procedure kan cellerne anvendes til molekylær eller diagnostisk analyse eller alternativt dyrkes in vitro til toksikologiske undersøgelser, eksperimentel analyse eller rekapitulation af follikelmikromiljøet. Hidtil er disse metoder blevet anvendt til at modellere endokrine lidelser, der involverer æggestokken, og til at identificere nye subpopulationer af follikelassocierede celler.

Research

JoVE Journal

Biology

Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells

Here we demonstrate how our lab begins a HuES human embryonic stem cell line culture from a frozen stock.  First, a one to two day old ten cm plate of  ...

In vitro Labeling of Human Embryonic Stem Cells for Magnetic Resonance Imaging

Human embryonic stem cells (hESC) have demonstrated the ability to restore the injured myocardium. Magnetic resonance imaging (MRI) has emerged as one of ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Purification of Mitochondria from Yeast Cells

Mitochondria are the main site of ATP production during aerobic metabolism in eukaryotic non-photosynthetic cells1. These complex organelles also play ...

Extraction and Analysis of Cortisol from Human and Monkey Hair

Udvinding og analyse af Cortisol fra menneske og Monkey Hair

The stress hormone cortisol (CORT) is slowly incorporated into the growing hair shaft of humans, nonhuman primates, and other mammals. We developed and ...

Efficient Production and Purification of Recombinant Murine Kindlin-3 from Insect Cells for Biophysical Studies

Effektiv Produktion og oprensning af rekombinant murin Kindlin-3 fra Insect Celler til Biofysiske Studies

Kindlins are essential coactivators, with talin, of the cell surface receptors&#160;integrins and also participate in integrin outside-in signalling, and ...

Visualization and Quantification of Mesenchymal Cell Adipogenic Differentiation Potential with a Lineage Specific Marker

Visualisering og kvantificering af mesenchymale celler Adipogenic differentiering potentiale med en afstamning specifikke markør

Several dyes are currently available for use in detecting differentiation of mesenchymal cells into adipocytes. Dyes, such as Oil Red O, are cheap, easy ...

Isolation of High Quality Murine Atrial and Ventricular Myocytes for Simultaneous Measurements of Ca2+ Transients and L-Type Calcium Current

Isolation of High Quality Murine Atrial and Ventricular Myocytes for Simultaneous Measurements of Ca2+ Transients and L-Type Calcium Current

Isolering af murin atriale og ventrikulære myocytter af høj kvalitet til samtidige målinger afCa2+ transienter og L-type calciumstrøm

Mouse models play a crucial role in arrhythmia research and allow studying key mechanisms of arrhythmogenesis including altered ion channel function and ...

Tissue Collection and RNA Extraction from the Human Osteoarthritic Knee Joint

Vævssamling og RNA-udvinding fra human osteoarthritic knee joint

Osteoarthritis (OA) is a chronic and degenerative joint disease most often affecting the knee. As there is currently no cure, total knee arthroplasty ...

Scalable Isolation and Purification of Extracellular Vesicles from Escherichia coli and Other Bacteria

Scalable Isolation and Purification of Extracellular Vesicles from Escherichia coli and Other Bacteria

Skalerbar isolering og oprensning af ekstracellulære vesikler fra Escherichia coli og andre bakterier

Diverse bacterial species secrete ~20-300 nm extracellular vesicles (EVs), comprised of lipids, proteins, nucleic acids, glycans, and other molecules ...