Name: extraction, labeling, and purification of lineage-specific cells from human antral follicles
Uploaded: 2022-11-30T13:40:00
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저자는 Queenie Victorina Neri Research Scholar Award (DJ)와 Hung-Ching Liu Research Scholar Award (LM)의 지원을 인정합니다. NLG는 NYSTEM 줄기 세포 및 재생 의학 박사후 과정 교육 보조금의 지원을 받습니다.

마우스와 관련된 모든 절차는 Weill Cornell Medicine의 IACUC(Institutional Animal Care and Use Committee)의 승인을 받았습니다. 난소 조직을 이용한 모든 이종 이식 실험은 관련 지침 및 규정에 따라 수행하였다. 두 난소 모두 방사선/화학 요법의 병력이 없고 내분비 또는 생식 질환의 문서화된 병력이 없는 14세의 뇌사 장기 기증자로부터 분리되었습니다. Weill Cornell Medicine의 IRB(Institutional Review Board) 위원회는 조직 ...

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	<li>Aghadavod, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+granulosa+cells+from+follicular+fluid;+Applications+in+biomedical+and+molecular+biology+experiments.">Isolation of granulosa cells from follicular fluid; Applications in biomedical and molecular biology experiments.</a> Advanced Biomedical Research. 4, 250 (2015).</li><li>Man, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+human+antral+follicles+of+xenograft+versus+ovarian+origin+reveals+disparate+molecular+signatures.">Comparison of human antral follicles of xenograft versus ovarian origin reveals disparate molecular signatures.</a> Cell Reports. 32 (6), 108027 (2020).</li><li>Schmidt, K. L., Ernst, E., Byskov, A. G., Nyboe Andersen, A., Yding Andersen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+of+primordial+follicles+following+prolonged+transportation+of+ovarian+tissue+prior+to+cryopreservation.">Survival of primordial follicles following prolonged transportation of ovarian tissue prior to cryopreservation.</a> Human Reproduction. 18 (12), 2654-2659 (2003).</li><li>Jensen, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outcomes+of+transplantations+of+cryopreserved+ovarian+tissue+to+41+women+in+Denmark.">Outcomes of transplantations of cryopreserved ovarian tissue to 41 women in Denmark.</a> Human Reproduction. 30 (12), 2838-2845 (2015).</li><li>Newton, H., Aubard, Y., Rutherford, A., Sharma, V., Gosden, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+temperature+storage+and+grafting+of+human+ovarian+tissue.">Low temperature storage and grafting of human ovarian tissue.</a> Human Reproduction. 11 (7), 1487-1491 (1996).</li><li>Man, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+superphysiologic+AMH+promotes+premature+luteinization+of+antral+follicles+in+human+ovarian+xenografts.">Chronic superphysiologic AMH promotes premature luteinization of antral follicles in human ovarian xenografts.</a> Science Advances. 8 (9), 7315 (2022).</li><li>Gougeon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+follicular+growth+in+the+human:+A+model+from+preliminary+results.">Dynamics of follicular growth in the human: A model from preliminary results.</a> Human Reproduction. 1 (2), 81-87 (1986).</li><li>Richards, J. S., Ren, Y. A., Candelaria, N., Adams, J. E., Rajkovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+follicular+theca+cell+recruitment,+differentiation,+and+impact+on+fertility:+2017+update.">Ovarian follicular theca cell recruitment, differentiation, and impact on fertility: 2017 update.</a> Endocr Rev. 39 (1), 1-20 (2018).</li><li>Asiabi, P., Dolmans, M. M., Ambroise, J., Camboni, A., Amorim, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+differentiation+of+theca+cells+from+ovarian+cells+isolated+from+postmenopausal+women.">In vitro differentiation of theca cells from ovarian cells isolated from postmenopausal women.</a> Human Reproduction. 35 (12), 2793-2807 (2020).</li><li>Dalman, A., Totonchi, M., Valojerdi, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+human+theca+stem+cells+and+their+differentiation+into+theca+progenitor+cells.">Establishment and characterization of human theca stem cells and their differentiation into theca progenitor cells.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 119 (12), 9853-9865 (2018).</li></ol>

난소 난포 내의 세포 다양성의 더 나은 분해능은 여러 가지 이유로 임상적으로 중요합니다. 위의 프로토콜을 전방 단계 난포 내에 존재하는 고유한 표현형 아형의 분리에 적용할 때 몇 가지 요소를 고려해야 합니다. 첫째, 전방 난포가 유래된 난소 조직의 건강과 생존력은 세포의 품질과 다운스트림 적용의 성공을 결정하는 데 중요합니다. 이것은 허혈 간격을 최소화하고, 신속하게 (바람직하게는...

인간 난소의 주요 기능 요소는 난모세포의 성장과 발달을 관장하는 난포입니다. 난포 세포 분리를 위한 프로토콜은 체외 수정과 관련하여 잘 확립되어 있지만, 이는 난모세포 회수 시점의 황 체 화 난포에서 세포를 채취하는 데만 적합하다1. 우리는 천연 난소 또는 이종 이식된 난소 조직에서 발생하는 다양한 발달 단계의 전방 난포에서 분리된 세포 집단을 분리할 수 있는 프로토콜을 개발했습니다2. 난모세포 배양에 대한 난포 상주 세포의 기여가 매우 중요하다는 데 동의하지만, 전향적 난포에 존재하는 독특한 표현형 아형을 전향적으로 확인하고 추출한 연구는 거의 없습니다. 다양한 발달 단계에서 특수 세포 간의 분화 계층 구조와 신호 전달에 대한 더 깊은 이해는 항상성 및 병리학적 조건에서 난소 생리학에 대한 이해를 넓힐 수 있습니다. 또한, 분리된 세포 아형의 구별 및 난포 성장/성숙에 대한 분자적 기여는 난모세포 성숙을 촉진하고 및/또는 내분비 기능 장애를 치료하기 위해 난소 기능을 재구성하는 생체 외 대리모를 생성하는 수단을 제공할 수 있습니다. 
난소 내의 각각의 고유한 세포 유형은 난포의 복잡한 기능에 기여하며, 난포는 난포에 포함된 난모세포의 성장과 성숙을 촉진하는 별개의 미니 기관으로 효과적으로 기능합니다. 난포의 중심인 난모세포는 과립구 세포(GC)의 연속적인 층으로 직접 둘러싸여 있으며, 테카 세포(TC)는 난모세포 및 GC와 결합하여 난포 단위를 구성하는 세포의 2차 층을 형성합니다. 두 그룹으로 분류되지만 GC와 TC에는 수많은 하위 유형이 포함되어 있습니다. GC는 난포 내의 위치에 따라 분류됩니다. 난모세포를 둘러싸고 있는 GC와 기저막에 인접한 GC는 각각 난모세포 및 벽화 GC로 지정되며 이러한 아형은 고유한 전사체 시그니처를 나타냅니다. TC에는 스테로이드 생성, 대사 및 구조적 지원을 제공하는 기능을 하는 수많은 하위 유형이 있습니다. 내피, 혈관주위 및 면역 세포는 정상적인 난소 생리를 유지하는 데 중심적인 역할을 합니다. 난소 기질은 난포 성장의 기질 역할을 할 뿐만 아니라 TC를 유발하는 전구체의 공급원을 제공할 가능성이 높습니다. 난소 내의 세포 아형의 다층 복합체는 내분비 및 생식 기관으로서의 기능을 가능하게합니다.
이 논문은 전방 난포에서 과립구, 테카, 간질, 내피 및 조혈 세포의 식별 및 정제를 위한 프로토콜을 제시합니다. 우리는 이 프로토콜을 사용하여 이러한 난소 세포를 분리하고 단일 세포 시퀀싱을 사용하여 분석한 다음 다양한 발달 단계의 난포에서 특정 염색을 수행했습니다. 이 프로토콜은 복제 가능한 간단한 방법론을 제공하며 난소의 생리학 및 병리학 모두에 대한 고해상도 분석을 가능하게 합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chemicals, reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic 100x</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15240062</td>
			<td>Anti-Anti</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antifade Mountant solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>&#160;P36930</td>
			<td>ProLong Gold</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase from&#160;Clostridium histolyticum</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>C 2674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II, powder</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17105041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>D 2650</td>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme Cell Detachment Medium&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>00-4555-56</td>
			<td>Accutase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, heat-inactivated</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10438026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#8242; Balanced Salt solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14175079</td>
			<td>no calcium, no magnesium, no phenol red</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leibovitz&#8217;s L-15 medium&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11415064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Saline</td>
			<td>Quality Biological</td>
			<td>114-055-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>S 1888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezing Medium (100 mL, filtered through a 0.2 micron filter)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 69.64 mL of Leibovitz&#39;s L-15</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 17.66 mL of fetal bovine serum</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 3.42 g of sucrose</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 10.65 mL of DMSO</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 1 mL of antibiotic-antimycotic</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Plasticware and Supplies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well Clear Flat Bottom Not Treated&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>351146</td>
			<td>Falcon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer 100 &#181;m</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>352360</td>
			<td>Corning, Falcon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryovials</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>377267</td>
			<td>CryoTube 1.8 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish, D x H 150 mm x 25 mm&#160;</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>CLS430599</td>
			<td>60EA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round-Bottom Polystyrene Test Tubes with Cell Strainer Snap Cap, 5 mL</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>352235</td>
			<td>Corning, Falcon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Filter/Storage Bottle System, 0.22 &#181;m</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibodies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANPEP</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>301703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>FAB7227A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>304019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD55</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>311306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD 99</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>371308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVRL</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>340404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical tools</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>long forceps (~150 mm length)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-000-128</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>medium forceps (~110 mm length)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-000-157</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>number 21 scalpel</td>
			<td>Andwin Scientific&#160;</td>
			<td>EF7281H</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>number 11 scalpel</td>
			<td>Andwin Scientific</td>
			<td>&#160;FH/CX7281A</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sharp fine curved scissors</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS-5881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSJazz Flourescence activated cell sorter</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 710 META Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

extraction, labeling, and purification of lineage-specific cells from human antral follicles

난모세포의 활성화, 성장, 발달 및 성숙은 난소의 여러 세포 유형뿐만 아니라 시상하부/뇌하수체/난소 회로 내의 여러 제어 지점에 걸쳐 조정되는 복잡한 과정입니다. 난소 내에서 여러 특수 세포 유형이 난소 난포 내의 난모세포와 밀접하게 연관되어 성장합니다. 이 세포의 생물학은 보조 생식 치료의 부산물로 쉽게 회수되는 후기 단계에서 잘 설명되었습니다. 그러나 난소에서 직접 분리된 작은 전방 난포에 대한 심층 분석은 인간 난소 조직의 부족과 보조 생식 치료를 받는 환자의 난소에 대한 제한된 접근으로 인해 일반적으로 수행되지 않습니다. 
난소 상주 세포의 동시 식별/분리와 함께 피질 스트립의 냉동 보존을 위해 전체 난소를 처리하는 이러한 방법은 전방 난포 발달의 초기 단계에 대한 고해상도 분석을 가능하게 합니다. 우리는 전방 난포를 효소로 처리하고 과립구, 테카, 내피, 조혈 및 기질 세포를 분리하여 개별 세포 유형을 분리하는 프로토콜을 보여줍니다. 다양한 크기와 발달 단계에서 전방 난포에서 세포를 분리하면 난포 성장과 난소 생리학을 유도하는 세포 및 분자 메커니즘에 대한 포괄적인 분석이 가능하며 난포 미세 환경을 요약하기 위해 시험관 내에서 배양할 수 있는 생존 가능한 세포의 공급원을 제공합니다.

우리는 난소 표면에서 난포를 분리하고 효소로 처리하여 GC와 전두강을 둘러싼 테카 및 기질 세포를 분리했습니다. 세포를 수집하고, 세포 분획을 FACS에 의해 전방 난포(직경 0.5mm에서 4mm 사이)에서 >95% 순도로 분류했습니다(그림 1).
인간 전방 난포 내의 고유한 세포 분획을 표지하고 정제하기 위해 우리는 효소 분해와 유세포 분석 분류를 결합했습니다. ?...

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Extraction, Labeling, and Purification of Lineage-Specific Cells from Human Antral Follicles

여기에서 우리는 전방 난포에서 난소 세포를 식별하고 정제하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 우리는 피질 스트립의 냉동 보존을 위해 전체 난소를 처리하는 동시에 과립구, 테카, 내피, 조혈 및 기질 세포를 포함한 여러 난포 상주 세포 유형을 유리하기 위해 효소로 처리되는 온전한 전방 난포를 수확하는 방법에 대해 자세히 설명합니다.

인간 Antral Follicles에서 계통 특이적 세포의 추출, 표지 및 정제

The activation, growth, development, and maturation of oocytes is a complex process that is coordinated not just between multiple cell types of the ovary ...

여기에서 입증된 프로토콜은 초기 전방 단계부터 난소 난포에 존재하는 특정 세포 계통의 표지 및 분리를 가능하게 하여 고분해능 분석 및 배양을 가능하게 합니다. 이 고정밀 접근법은 형광단 접합 항체의 조합을 활용하여 개별 과립구, 기질 및 테카 계통 사이에서 강력하고 특이적으로 발현되는 세포 표면 마커를 표적으로 삼습니다. 난소를 멸균 페트리 접시에 넣고 차가운 배지를 부어 조직에 수분을 공급하여 난소가 배지에 반쯤 잠기도록 합니다.봉합사나 기타 물질을 제거하고 잔여 주변 조직을 난소에서 해부합니다. antral follicles를 분리하려면 개별 모낭을 식별하고 건강한 모낭을 선택하십시오. 혈액이 채워진 모낭, 어둡거나 대칭이 아닌 모낭을 제외하십시오.메스를 사용하여 선택한 전방 난포를 난소에서 분리하고 전방을 온전하게 유지하고 난포를 둘러싸고 있는 피질 조직을 절제합니다. 절제된 각각의 온전한 전방 난포를 6개의 웰 플레이트 중 하나의 웰에 놓습니다. 접시 아래에 놓인 자를 사용하여 설명을 위해 모낭 직경을 결정합니다.메스를 사용하여 손상되지 않은 전방 난포를 이등분하여 전두강을 평가하고 6밀리리터의 효소 세포 분리 배지를 추가한 후 가습된 인큐베이터에서 플레이트를 10분 동안 배양합니다. 배양 후, 20% 소 태아 혈청(FBS)을 함유한 사용 가능한 배지 6밀리리터를 추가하고 P-1000 마이크로피펫으로 이등분된 모낭에 반복적으로 격렬한 피펫팅을 하여 배지와 플러시합니다. 그런 다음 매체를 모아 100mm 필터에 통과시킵니다.여과된 상층액을 300 G과 섭씨 4도에서 3분 동안 원심분리한 후, 상층액을 흡인한다. 나머지 조직을 100 밀리리터 콜라게나제와 1 밀리리터 디스파아제의 혼합물에 넣고 30 분 동안 배양하기 전에 균형 잡힌 식염수로 희석한다. 10분과 20분 후에 두 번 분쇄하고 격렬한 피펫팅을 하여 조직을 기계적으로 파괴합니다.완료되면 조직을 회수하고 피펫팅, P-1000 마이크로피펫 팁을 통해 세척하고 100밀리리터 필터를 통해 걸러냅니다. 변형된 조직을 300G 및 섭씨 4도에서 3분 동안 원심분리한 후 라벨링 및 FACS를 위해 테카 세포와 기질 세포가 풍부한 세포 펠릿을 얼음 위에 놓습니다. 과립구 세포와 theca 세포를 식별하기 위해 직접 접합 항체가 포함된 차단 용액에 세포 펠릿을 재현탁하고 섭씨 4도에서 10분 동안 배양합니다.세포를 세척하고 원심분리한 후, 4-6 디아미디노-2-페닐인돌 또는 DAPI를 함유하는 FACS 완충액에 세포를 재현탁하고, 형광단 접합 항체의 형광 강도를 사용하여 세포의 작은 집단을 포획하기 위해 FACS 기기를 통해 세포 현탁액을 실행합니다. 난소의 나머지 부분을 이등분하십시오. 구부러진 미세한 가위와 메스를 사용하여 수질을 절제하여 난소 피질의 손상을 피하십시오.최소한의 수질이 남을 때까지 부드럽게 긁어 난소 피질의 처리와 얇아짐을 계속하십시오. 피질 조직을 난소 길이를 따라 2-3 밀리미터 너비의 스트립으로 나눕니다. 난소 조직 동결의 경우, 냉동 용액이 들어있는 각 냉장 극저온 바이알에 하나의 피질 스트립을 넣습니다.피질 스트립이 들어 있는 극저온 바이알을 섭씨 4도에서 20분 동안 회전판에 흔듭니다. 액체 질소에 잠깐 담근 면봉으로 각 극저온 바이알을 만져 얼음 결정 형성을 핵화합니다. 난소 세포를 수집하고, 전방 난포 FACS로부터 세포 분획을 95% 이상의 순도로 분류하였다.PVRL1 또는 넥틴에서 특이적으로 표지된 CD99 과립구 세포는 전방 난포의 크기가 증가함에 따라 난소 과립구 세포 구획에 점점 더 국한되었습니다. 엔도글린 또는 CD55에 대한 항체는 모든 간질 및 테카 세포를 특이적으로 구분하고, 알라닌 아미노펩티다아제는 안드로겐성 테카 세포에 의해 특이적으로 발현되는 것으로 나타났다. 과립구 세포를 확인하기 위해 CD99에 대한 항체로 세포를 표지하고 조혈 세포를 배제하기 위해 CD45에 대한 항체를 사용했습니다.PVRL1에 대한 항체는 과립구 세포 집단을 난포와 벽화 구획으로 분리했습니다. 콜라게나제 디스파스를 사용한 효소 분해 후, CD55, CD34 및 알라닌 아미노펩티다아제에 대한 항체로 표지된 세포 제제는 테카 세포 집단에서 내피 세포를 제외하고 모든 간질 또는 테카 세포 또는 안드로겐 테카 세포의 포획을 가능하게 했습니다. 난포 경계 주변의 안전한 여백 내에서 절단하여 초기 난포 격리 중에 난포의 antrum을 방해하지 않도록 특히 주의하십시오.이 절차의 하류에서 세포는 분자 또는 진단 분석에 활용되거나 대안적으로 독성 연구, 실험 분석 또는 난포 미세 환경의 요약을 위해 시험관 내에서 배양될 수 있습니다. 현재까지 이러한 방법은 난소와 관련된 내분비 장애를 모델링하고 난포 관련 세포의 새로운 하위 집단을 식별하는 데 사용되었습니다.

Research

JoVE Journal

Biology

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연구

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