Name: extraction, labeling, and purification of lineage-specific cells from human antral follicles
Uploaded: 2022-11-30T13:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Extraction, Labeling, and Purification of Lineage-Specific Cells from Human Antral Follicles at JoVE.com

Forfatterne anerkjenner støtte fra Queenie Victorina Neri Research Scholar Award (DJ) og Hung-Ching Liu Research Scholar Award (LM). N.L.G støttes av NYSTEM Stem Cell and Regenerative Medicine postdoctoral training grant.

Alle prosedyrer som involverer mus ble godkjent av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) ved Weill Cornell Medicine. Alle xenotransplantasjonsforsøk med ovarievev ble utført i henhold til gjeldende retningslinjer og forskrifter. Begge eggstokkene ble isolert fra en 14 år gammel hjernedød organdonor uten tidligere radio/kjemoterapi og ingen dokumentert historie med endokrine eller reproduktive tilstander. IRB-komiteen (Institutional Review Board) i Weill Cornell Medicine godkjente innsamling av vev, og g...

<ol>
	<li>Aghadavod, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+granulosa+cells+from+follicular+fluid;+Applications+in+biomedical+and+molecular+biology+experiments.">Isolation of granulosa cells from follicular fluid; Applications in biomedical and molecular biology experiments.</a> Advanced Biomedical Research. 4, 250 (2015).</li><li>Man, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+human+antral+follicles+of+xenograft+versus+ovarian+origin+reveals+disparate+molecular+signatures.">Comparison of human antral follicles of xenograft versus ovarian origin reveals disparate molecular signatures.</a> Cell Reports. 32 (6), 108027 (2020).</li><li>Schmidt, K. L., Ernst, E., Byskov, A. G., Nyboe Andersen, A., Yding Andersen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+of+primordial+follicles+following+prolonged+transportation+of+ovarian+tissue+prior+to+cryopreservation.">Survival of primordial follicles following prolonged transportation of ovarian tissue prior to cryopreservation.</a> Human Reproduction. 18 (12), 2654-2659 (2003).</li><li>Jensen, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outcomes+of+transplantations+of+cryopreserved+ovarian+tissue+to+41+women+in+Denmark.">Outcomes of transplantations of cryopreserved ovarian tissue to 41 women in Denmark.</a> Human Reproduction. 30 (12), 2838-2845 (2015).</li><li>Newton, H., Aubard, Y., Rutherford, A., Sharma, V., Gosden, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+temperature+storage+and+grafting+of+human+ovarian+tissue.">Low temperature storage and grafting of human ovarian tissue.</a> Human Reproduction. 11 (7), 1487-1491 (1996).</li><li>Man, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+superphysiologic+AMH+promotes+premature+luteinization+of+antral+follicles+in+human+ovarian+xenografts.">Chronic superphysiologic AMH promotes premature luteinization of antral follicles in human ovarian xenografts.</a> Science Advances. 8 (9), 7315 (2022).</li><li>Gougeon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+follicular+growth+in+the+human:+A+model+from+preliminary+results.">Dynamics of follicular growth in the human: A model from preliminary results.</a> Human Reproduction. 1 (2), 81-87 (1986).</li><li>Richards, J. S., Ren, Y. A., Candelaria, N., Adams, J. E., Rajkovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+follicular+theca+cell+recruitment,+differentiation,+and+impact+on+fertility:+2017+update.">Ovarian follicular theca cell recruitment, differentiation, and impact on fertility: 2017 update.</a> Endocr Rev. 39 (1), 1-20 (2018).</li><li>Asiabi, P., Dolmans, M. M., Ambroise, J., Camboni, A., Amorim, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+differentiation+of+theca+cells+from+ovarian+cells+isolated+from+postmenopausal+women.">In vitro differentiation of theca cells from ovarian cells isolated from postmenopausal women.</a> Human Reproduction. 35 (12), 2793-2807 (2020).</li><li>Dalman, A., Totonchi, M., Valojerdi, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+human+theca+stem+cells+and+their+differentiation+into+theca+progenitor+cells.">Establishment and characterization of human theca stem cells and their differentiation into theca progenitor cells.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 119 (12), 9853-9865 (2018).</li></ol>

Bedre oppløsning av det cellulære mangfoldet i eggstokkfolliklene er klinisk viktig av flere grunner. Ved anvendelse av ovennevnte protokoll på isolering av de unike fenotypiske subtypene som ligger i antralstadiefollikler, bør flere faktorer vurderes. For det første er helsen og levedyktigheten til eggstokkvevet hvorfra antralfollikkelen er avledet, avgjørende for å bestemme kvaliteten på cellene og suksessen til nedstrøms applikasjoner. Dette kan optimaliseres ved å minimere det iskemiske intervallet, arbeide...

De primære funksjonelle elementene i den menneskelige eggstokken er folliklene, som styrer veksten og utviklingen av oocytter. Protokoller for isolering av follikulære celler er godt etablert i sammenheng med in vitro-fertilisering , men disse er bare egnet for innsamling av celler fra luteiniserte follikler ved punktet for uthenting av oocytt1. Vi har utviklet en protokoll som muliggjør isolering av diskrete cellepopulasjoner fra antralfollikler i forskjellige utviklingsstadier som oppstår fra innfødte eggstokker eller xenotransplantert eggstokkvev2. Selv om det er enighet om at bidragene fra follikkelbosatte celler til dyrking av oocytten er svært viktige, har få studier prospektivt identifisert og ekstrahert de unike fenotypiske subtypene som er tilstede i antralstadiumfollikler. En dypere forståelse av differensieringshierarkiet og signaltransduksjon mellom spesialiserte celler under de forskjellige utviklingsstadiene kan utvide vår forståelse av ovariefysiologi under homeostatiske og patologiske forhold. Videre kan diskriminering av diskrete cellulære subtyper og deres molekylære bidrag til follikelvekst / modning gi et middel til å generere ex vivo surrogater som rekonstruerer ovariefunksjonen for å fremme oocytmodning og / eller behandle endokrin dysfunksjon. 
Hver unik celletype i eggstokken bidrar til follikkelens komplekse funksjon, som effektivt fungerer som et diskret miniorgan for å fremme veksten og modningen av oocytten den inneholder. Oocytten, midtpunktet i follikkelen, er direkte innhyllet av et kontinuerlig lag av granulosa-celler (GC), med theca-cellene (TC) som danner et sekundært lag av celler som kombinerer med oocytten og GCene for å komponere follikulærenheten. Selv om de er klassifisert i to grupper, inneholder GC og TC mange undertyper. GC er klassifisert i henhold til deres posisjon i follikkelen; GCer som omgir oocytten versus de som ligger ved siden av kjellermembranen, er betegnet som henholdsvis oophorous og mural GCs, og disse undertypene viser unike transkriptomiske signaturer. TCs har mange subtyper som fungerer for å gi steroidogen, metabolsk og strukturell støtte. Endotel-, perivaskulære og immunceller spiller en sentral rolle i å opprettholde normal ovariefysiologi. Ovarial stroma tjener ikke bare som et substrat for follikelvekst, men gir også sannsynligvis en kilde til forfedre som gir opphav til TCS. Dette flerlagskomplekset av cellulære subtyper i eggstokken er det som gjør det mulig å fungere som både et endokrint og et reproduktivt organ.
Dette papiret presenterer en protokoll for identifisering og rensing av granulosa, theca, stromale, endoteliske og hematopoietiske celler fra antralfollikler. Vi har brukt denne protokollen til å isolere disse eggstokkcellene og analysere dem ved hjelp av enkeltcellesekvensering, etterfulgt av spesifikk farging i follikler av forskjellige utviklingsstadier. Protokollen gir en enkel metodikk som er replikerbar og vil muliggjøre høyoppløselig analyse av både fysiologi og patologi av eggstokken.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chemicals, reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic 100x</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15240062</td>
			<td>Anti-Anti</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antifade Mountant solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>&#160;P36930</td>
			<td>ProLong Gold</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase from&#160;Clostridium histolyticum</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>C 2674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II, powder</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17105041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>D 2650</td>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme Cell Detachment Medium&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>00-4555-56</td>
			<td>Accutase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, heat-inactivated</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10438026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#8242; Balanced Salt solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14175079</td>
			<td>no calcium, no magnesium, no phenol red</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leibovitz&#8217;s L-15 medium&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11415064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Saline</td>
			<td>Quality Biological</td>
			<td>114-055-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>S 1888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezing Medium (100 mL, filtered through a 0.2 micron filter)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 69.64 mL of Leibovitz&#39;s L-15</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 17.66 mL of fetal bovine serum</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 3.42 g of sucrose</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 10.65 mL of DMSO</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 1 mL of antibiotic-antimycotic</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Plasticware and Supplies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well Clear Flat Bottom Not Treated&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>351146</td>
			<td>Falcon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer 100 &#181;m</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>352360</td>
			<td>Corning, Falcon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryovials</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>377267</td>
			<td>CryoTube 1.8 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish, D x H 150 mm x 25 mm&#160;</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>CLS430599</td>
			<td>60EA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round-Bottom Polystyrene Test Tubes with Cell Strainer Snap Cap, 5 mL</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>352235</td>
			<td>Corning, Falcon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Filter/Storage Bottle System, 0.22 &#181;m</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibodies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANPEP</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>301703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>FAB7227A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>304019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD55</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>311306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD 99</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>371308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVRL</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>340404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical tools</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>long forceps (~150 mm length)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-000-128</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>medium forceps (~110 mm length)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-000-157</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>number 21 scalpel</td>
			<td>Andwin Scientific&#160;</td>
			<td>EF7281H</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>number 11 scalpel</td>
			<td>Andwin Scientific</td>
			<td>&#160;FH/CX7281A</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sharp fine curved scissors</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS-5881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSJazz Flourescence activated cell sorter</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 710 META Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

extraction, labeling, and purification of lineage-specific cells from human antral follicles

Aktivering, vekst, utvikling og modning av oocytter er en kompleks prosess som koordineres ikke bare mellom flere celletyper av eggstokken, men også over flere kontrollpunkter innenfor hypothalamus / hypofysen / eggstokkkretsen. Innenfor eggstokken vokser flere spesialiserte celletyper i nær tilknytning til oocytten i eggstokkfolliklene. Biologien til disse cellene har blitt godt beskrevet i senere stadier, når de lett gjenvinnes som biprodukter av assistert reproduktiv behandling. Imidlertid utføres den grundige analysen av små antralfollikler isolert direkte fra eggstokken ikke vanligvis på grunn av mangel på humant eggstokkvev og begrenset tilgang til eggstokken hos pasienter som gjennomgår assistert reproduktiv behandling. 
Disse metodene for behandling av hele eggstokkene for kryopreservering av kortikale strimler med samtidig identifisering / isolering av ovariebosatte celler muliggjør høyoppløselig analyse av de tidlige stadiene av antralfollikelutvikling. Vi demonstrerer protokoller for å isolere diskrete celletyper ved å behandle antralfollikler enzymatisk og separere granulosa-, theca-, endotel-, hematopoietiske og stromale celler. Isoleringen av celler fra antralfolliklene i forskjellige størrelser og utviklingsstadier muliggjør omfattende analyse av de cellulære og molekylære mekanismene som driver follikelvekst og ovariefysiologi og gir en kilde til levedyktige celler som kan dyrkes in vitro for å rekapitulere follikelmikromiljøet.

Vi isolerte follikler fra overflaten av eggstokken og behandlet dem enzymatisk for å isolere GC-ene samt theca- og stromacellene som omgir antralhulen. Cellene ble samlet inn, og cellefraksjonene ble sortert fra antralfolliklene (diametere mellom 0,5 mm og 4 mm) med FACS til >95 % renhet (figur 1).
For å merke og rense unike cellulære fraksjoner i de humane antralfolliklene, kombinerte vi enzymatisk fordøyelse med flowcytometrisk sortering. Vi har tidligere id...

Watch this Scientific Journal Video about Extraction, Labeling, and Purification of Lineage-Specific Cells from Human Antral Follicles at JoVE.com

Extraction, Labeling, and Purification of Lineage-Specific Cells from Human Antral Follicles

Her presenterer vi protokoller for identifisering og rensing av eggstokkceller fra antralfollikler. Vi utdyper metoder for behandling av hele eggstokker for kryopreservering av kortikale strimler samtidig som vi høster intakte antralfollikler som behandles enzymatisk for å frigjøre flere follikkelboende celletyper, inkludert granulosa, theca, endotel, hematopoietiske og stromale celler.

Ekstraksjon, merking og rensing av avstamningsspesifikke celler fra humane antralfollikler

The activation, growth, development, and maturation of oocytes is a complex process that is coordinated not just between multiple cell types of the ovary ...

Protokollen demonstrert her muliggjør merking og isolering av spesifikke cellelinjer som er tilstede i eggstokkfollikler som begynner i tidlige antralstadier, og muliggjør dermed høyoppløselig analyse og kultur. Denne svært presise tilnærmingen benytter kombinasjoner av fluoroforkonjugerte antistoffer for å målrette celleoverflatemarkører som er robust og spesifikt uttrykt blant diskrete granulosa-, stroma- og theca-linjer. Begynn med å plassere eggstokken i en steril petriskål, og hell et kjølt medium med det for å hydrere vevet, slik at eggstokken er halvt nedsenket i mediet.Fjern eventuelle suturer eller annet materiale, og dissekere det resterende omkringliggende vevet vekk fra eggstokken. For å isolere antralfolliklene, identifiser individuelle follikler og velg sunne follikler. Ekskluder blodfylte, mørke eller ikke-symmetriske follikler.Isoler de valgte antralfolliklene fra eggstokken ved hjelp av skalpeller, hold antrum intakt og ekskluder det kortikale vevet som omfatter follikkelen. Plasser hver utskårne intakte antralfollikkel i en brønn av de seks brønnplatene. Bruk en linjal plassert under fatet, bestem follikeldiameteren for beskrivende formål.Bruk en skalpell, kryss den intakte antralfollikkelen for å vurdere antralhulen og tilsett seks milliliter enzymatisk celleavløsningsmedium før du inkuberer platen i en fuktet inkubator i 10 minutter. Etter inkubering, tilsett seks milliliter tilgjengelig medium som inneholder 20% føtalt bovint serum, eller FBS, og skyll med mediet ved gjentatt kraftig pipettering over de todelte folliklene med en P-1000 mikropipette. Deretter samler du mediet og sender det gjennom et 100 millimeter filter.Etter å ha sentrifugert den filtrerte supernatanten ved 300 G og fire grader Celsius i tre minutter før, aspirerer supernatanten. Plasser det gjenværende vevet i en blanding av 100 enheter per milliliter kollagenase og en enhet per milliliter dispase fortynnet i en balansert saltoppløsning før 30 minutters inkubasjon. Forstyrr vevet mekanisk ved å triturere og kraftig pipettere to ganger etter 10 og 20 minutter.Når du er ferdig, gjenvinn vevet og skyll via pipettering, gjennom en P-1000 mikropipettespiss, og sil gjennom et 100 milliliters filter. Sentrifuger det anstrengte vevet ved 300 G og fire grader Celsius i tre minutter før du legger cellepelleten beriket med theca-cellene og stromacellene på is for merking og FACS. For å identifisere granulosaceller og theca-celler, resuspendere cellepellets i en blokkeringsløsning som inneholder direkte konjugerte antistoffer og inkubere ved fire grader Celsius i 10 minutter.Etter vasking og sentrifugering av cellene, resuspendere cellene i FACS-buffer som inneholder 4-6 diamidino-2-fenylindol eller DAPI, og kjør cellesuspensjonen gjennom et FACS-instrument for å fange en liten populasjon av cellene, ved hjelp av fluorescerende intensitet av fluoroforkonjugerte antistoffer for gating. Bisect resten av eggstokken. Excise medulla ved hjelp av buede fine saks og skalpeller, unngå skade på eggstokken.Fortsett behandling og tynning av eggstokkbarken ved forsiktig skraping til minimal medulla forblir. Del det kortikale vevet i to til tre millimeter brede strimler langs eggstokklengden. For frysing av eggstokkvev, plasser en kortikal strimmel i hvert kjølt kryogent hetteglass som inneholder fryseoppløsningen.Rist de kryogene hetteglassene med kortikale strimler på en roterende plate i 20 minutter ved fire grader Celsius. Nukleer iskrystalldannelse ved å berøre hvert kryohetteglass med en bomullsspiss kort nedsenket i flytende nitrogen. Eggstokkcellene ble samlet og cellefraksjonene ble sortert fra antralfolliklene FACS til mer enn 95% renhet.CD99 spesifikt merket granulosa celler i PVRL1, eller nektin, ble i økende grad lokalisert til oophorus granulosa cellerommet som antralfolliklene økte i størrelse. Det ble sett at antistoffene mot endoglin eller CD55 spesifikt avgrenset alle stroma og theca celler og at alanin aminopeptidase ble spesifikt uttrykt av androgene theca celler. Cellene ble merket med et antistoff rettet mot CD99 for å identifisere granuloseceller, og antistoffer mot CD45 ble brukt til å utelukke hematopoietiske celler.Antistoffer mot PVRL1 separerte granulosacellepopulasjonen i oophorus og veggmalerier. Etter enzymatisk fordøyelse med kollagenasedispase, gjorde cellepreparatene merket med antistoffer mot CD55, CD34 og alaninaminopeptidase det mulig å fange alle stroma- eller theca-cellene eller androgene theca-celler med utelukkelse av endotelceller fra theca-cellene. Vær spesielt forsiktig for å unngå å forstyrre antrum av follikler under første follikelisolering ved å kutte innenfor en sikker margin rundt follikelgrenser.Nedstrøms for denne prosedyren kan cellene brukes til molekylær eller diagnostisk analyse eller alternativt dyrket in vitro for toksikologiske studier, eksperimentell analyse eller rekapitulering av follikelmikromiljøet. Til dags dato ble disse metodene brukt til å modellere endokrine lidelser som involverer eggstokken og for å identifisere nye subpopulasjoner av follikelassosierte celler.

Research

JoVE Journal

Biology

Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells

Here we demonstrate how our lab begins a HuES human embryonic stem cell line culture from a frozen stock.  First, a one to two day old ten cm plate of  ...

In vitro Labeling of Human Embryonic Stem Cells for Magnetic Resonance Imaging

Human embryonic stem cells (hESC) have demonstrated the ability to restore the injured myocardium. Magnetic resonance imaging (MRI) has emerged as one of ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Purification of Mitochondria from Yeast Cells

Mitochondria are the main site of ATP production during aerobic metabolism in eukaryotic non-photosynthetic cells1. These complex organelles also play ...

Extraction and Analysis of Cortisol from Human and Monkey Hair

Utvinning og analyse av kortisol fra Menneske og Monkey Hair

The stress hormone cortisol (CORT) is slowly incorporated into the growing hair shaft of humans, nonhuman primates, and other mammals. We developed and ...

Efficient Production and Purification of Recombinant Murine Kindlin-3 from Insect Cells for Biophysical Studies

Effektiv produksjon og rensing av rekombinant mus Kindlin-3 fra insektceller for biofysiske studier

Kindlins are essential coactivators, with talin, of the cell surface receptors&#160;integrins and also participate in integrin outside-in signalling, and ...

Visualization and Quantification of Mesenchymal Cell Adipogenic Differentiation Potential with a Lineage Specific Marker

Visualisering og kvantifisering av Mesenchymal celle Adipogenic differensiering potensial med en slektslinje spesifikk markør

Several dyes are currently available for use in detecting differentiation of mesenchymal cells into adipocytes. Dyes, such as Oil Red O, are cheap, easy ...

Isolation of High Quality Murine Atrial and Ventricular Myocytes for Simultaneous Measurements of Ca2+ Transients and L-Type Calcium Current

Isolation of High Quality Murine Atrial and Ventricular Myocytes for Simultaneous Measurements of Ca2+ Transients and L-Type Calcium Current

Isolering av høykvalitets murine atrielle og ventrikulære myocytter for samtidige målinger av ca2+ transienter og L-type kalsiumstrøm

Mouse models play a crucial role in arrhythmia research and allow studying key mechanisms of arrhythmogenesis including altered ion channel function and ...

Tissue Collection and RNA Extraction from the Human Osteoarthritic Knee Joint

Vevsinnsamling og RNA-ekstraksjon fra den humane osteoarthritic kneleddet

Osteoarthritis (OA) is a chronic and degenerative joint disease most often affecting the knee. As there is currently no cure, total knee arthroplasty ...

Scalable Isolation and Purification of Extracellular Vesicles from Escherichia coli and Other Bacteria

Scalable Isolation and Purification of Extracellular Vesicles from Escherichia coli and Other Bacteria

Skalerbar isolasjon og rensing av ekstracellulære vesikler fra Escherichia coli og andre bakterier

Diverse bacterial species secrete ~20-300 nm extracellular vesicles (EVs), comprised of lipids, proteins, nucleic acids, glycans, and other molecules ...