Name: extraction, labeling, and purification of lineage-specific cells from human antral follicles
Uploaded: 2022-11-30T13:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Extraction, Labeling, and Purification of Lineage-Specific Cells from Human Antral Follicles at JoVE.com

Авторы выражают признательность за поддержку со стороны Queenie Victorina Neri Research Scholar Award (D.J.) и Hung-Ching Liu Research Scholar Award (L.M.). N.L.G поддерживается грантом NYSTEM Stem Cell and Regenerative Medicine для постдокторантуры.

Все процедуры с участием мышей были одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию (IACUC) в Weill Cornell Medicine. Все эксперименты по ксенотрансплантации с использованием ткани яичника проводились в соответствии с соответствующими рекомендациями и правилами. Оба...

<ol>
	<li>Aghadavod, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+granulosa+cells+from+follicular+fluid;+Applications+in+biomedical+and+molecular+biology+experiments.">Isolation of granulosa cells from follicular fluid; Applications in biomedical and molecular biology experiments.</a> Advanced Biomedical Research. 4, 250 (2015).</li><li>Man, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+human+antral+follicles+of+xenograft+versus+ovarian+origin+reveals+disparate+molecular+signatures.">Comparison of human antral follicles of xenograft versus ovarian origin reveals disparate molecular signatures.</a> Cell Reports. 32 (6), 108027 (2020).</li><li>Schmidt, K. L., Ernst, E., Byskov, A. G., Nyboe Andersen, A., Yding Andersen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+of+primordial+follicles+following+prolonged+transportation+of+ovarian+tissue+prior+to+cryopreservation.">Survival of primordial follicles following prolonged transportation of ovarian tissue prior to cryopreservation.</a> Human Reproduction. 18 (12), 2654-2659 (2003).</li><li>Jensen, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outcomes+of+transplantations+of+cryopreserved+ovarian+tissue+to+41+women+in+Denmark.">Outcomes of transplantations of cryopreserved ovarian tissue to 41 women in Denmark.</a> Human Reproduction. 30 (12), 2838-2845 (2015).</li><li>Newton, H., Aubard, Y., Rutherford, A., Sharma, V., Gosden, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+temperature+storage+and+grafting+of+human+ovarian+tissue.">Low temperature storage and grafting of human ovarian tissue.</a> Human Reproduction. 11 (7), 1487-1491 (1996).</li><li>Man, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+superphysiologic+AMH+promotes+premature+luteinization+of+antral+follicles+in+human+ovarian+xenografts.">Chronic superphysiologic AMH promotes premature luteinization of antral follicles in human ovarian xenografts.</a> Science Advances. 8 (9), 7315 (2022).</li><li>Gougeon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+follicular+growth+in+the+human:+A+model+from+preliminary+results.">Dynamics of follicular growth in the human: A model from preliminary results.</a> Human Reproduction. 1 (2), 81-87 (1986).</li><li>Richards, J. S., Ren, Y. A., Candelaria, N., Adams, J. E., Rajkovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+follicular+theca+cell+recruitment,+differentiation,+and+impact+on+fertility:+2017+update.">Ovarian follicular theca cell recruitment, differentiation, and impact on fertility: 2017 update.</a> Endocr Rev. 39 (1), 1-20 (2018).</li><li>Asiabi, P., Dolmans, M. M., Ambroise, J., Camboni, A., Amorim, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+differentiation+of+theca+cells+from+ovarian+cells+isolated+from+postmenopausal+women.">In vitro differentiation of theca cells from ovarian cells isolated from postmenopausal women.</a> Human Reproduction. 35 (12), 2793-2807 (2020).</li><li>Dalman, A., Totonchi, M., Valojerdi, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+human+theca+stem+cells+and+their+differentiation+into+theca+progenitor+cells.">Establishment and characterization of human theca stem cells and their differentiation into theca progenitor cells.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 119 (12), 9853-9865 (2018).</li></ol>

Лучшее разрешение клеточного разнообразия в фолликулах яичников клинически важно по нескольким причинам. При применении приведенного выше протокола к выделению уникальных фенотипических подтипов, которые находятся в фолликулах антральной стадии, следует учитывать несколько фактор...

Основными функциональными элементами яичника человека являются фолликулы, которые регулируют рост и развитие ооцитов. Протоколы выделения фолликулярных клеток хорошо зарекомендовали себя в контексте экстракорпорального оплодотворения, но они подходят только для сбора клеток из лютеинизированных фолликулов в точке извлечения ооцитов1. Мы разработали протокол, который позволяет выделять дискретные клеточные популяции из антральных фолликулов на разных стадиях развития, которые возникают из нативных яичников или ксенотрансплантированной ткани яичника2. Хотя существует консенсус в отношении того, что вклад резидентных клеток фолликулов в культивирование ооцитов очень важен, лишь немногие исследования проспективно идентифицировали и извлекли уникальные фенотипические подтипы, присутствующие в фолликулах антральной стадии. Более глубокое понимание иерархии дифференцировки и передачи сигналов между специализированными клетками на разных стадиях развития может расширить наше понимание физиологии яичников в гомеостатических и патологических условиях. Кроме того, различение дискретных клеточных подтипов и их молекулярного вклада в рост/созревание фолликулов может обеспечить средства создания суррогатов ex vivo , которые реконструируют функцию яичников для стимулирования созревания ооцитов и/или лечения эндокринной дисфункции. 
Каждый уникальный тип клеток в яичнике вносит свой вклад в сложную функцию фолликула, который эффективно функционирует как отдельный мини-орган, способствующий росту и созреванию содержащегося в нем ооцита. Ооцит, центральный элемент фолликула, непосредственно окружен непрерывным слоем гранулезных клеток (ГК), при этом тека-клетки (ТК) образуют вторичный слой клеток, которые объединяются с ооцитом и ГК, образуя фолликулярную единицу. Несмотря на то, что ГХ и ТК подразделяются на две группы, они содержат множество подтипов. ГК классифицируются в соответствии с их положением в фолликуле; ГК, которые окружают ооцит, по сравнению с теми, которые примыкают к базальной мембране, обозначаются как оофорные и настенные ГК соответственно, и эти подтипы демонстрируют уникальные транскриптомные сигнатуры. ТК имеют множество подтипов, которые функционируют для обеспечения стероидогенной, метаболической и структурной поддержки. Эндотелиальные, периваскулярные и иммунные клетки играют центральную роль в поддержании нормальной физиологии яичников. Строма яичника служит не только субстратом для роста фолликулов, но и, вероятно, является источником предшественников, которые дают начало ТК. Этот многослойный комплекс клеточных подтипов в яичнике обеспечивает его функцию как эндокринного, так и репродуктивного органа.
В данной работе представлен протокол идентификации и очистки гранулезных, тека-, стромальных, эндотелиальных и кроветворных клеток из антральных фолликулов. Мы использовали этот протокол для выделения этих клеток яичников и их анализа с помощью секвенирования отдельных клеток с последующим специфическим окрашиванием фолликулов на разных стадиях развития. Протокол предоставляет простую методологию, которую можно воспроизвести и которая позволит проводить анализ с высоким разрешением как физиологии, так и патологии яичника.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chemicals, reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic 100x</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15240062</td>
			<td>Anti-Anti</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antifade Mountant solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>&#160;P36930</td>
			<td>ProLong Gold</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase from&#160;Clostridium histolyticum</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>C 2674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II, powder</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17105041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>D 2650</td>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme Cell Detachment Medium&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>00-4555-56</td>
			<td>Accutase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, heat-inactivated</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10438026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#8242; Balanced Salt solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14175079</td>
			<td>no calcium, no magnesium, no phenol red</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leibovitz&#8217;s L-15 medium&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11415064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Saline</td>
			<td>Quality Biological</td>
			<td>114-055-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>S 1888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezing Medium (100 mL, filtered through a 0.2 micron filter)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 69.64 mL of Leibovitz&#39;s L-15</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 17.66 mL of fetal bovine serum</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 3.42 g of sucrose</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 10.65 mL of DMSO</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 1 mL of antibiotic-antimycotic</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Plasticware and Supplies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well Clear Flat Bottom Not Treated&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>351146</td>
			<td>Falcon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer 100 &#181;m</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>352360</td>
			<td>Corning, Falcon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryovials</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>377267</td>
			<td>CryoTube 1.8 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish, D x H 150 mm x 25 mm&#160;</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>CLS430599</td>
			<td>60EA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round-Bottom Polystyrene Test Tubes with Cell Strainer Snap Cap, 5 mL</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>352235</td>
			<td>Corning, Falcon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Filter/Storage Bottle System, 0.22 &#181;m</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibodies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANPEP</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>301703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>FAB7227A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>304019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD55</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>311306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD 99</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>371308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVRL</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>340404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical tools</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>long forceps (~150 mm length)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-000-128</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>medium forceps (~110 mm length)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-000-157</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>number 21 scalpel</td>
			<td>Andwin Scientific&#160;</td>
			<td>EF7281H</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>number 11 scalpel</td>
			<td>Andwin Scientific</td>
			<td>&#160;FH/CX7281A</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sharp fine curved scissors</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS-5881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSJazz Flourescence activated cell sorter</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 710 META Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

extraction, labeling, and purification of lineage-specific cells from human antral follicles

Активация, рост, развитие и созревание ооцитов является сложным процессом, который координируется не только между несколькими типами клеток яичника, но и между несколькими точками контроля в гипоталамо/гипофизе/яичниковой цепи. В яичнике несколько специализированных типов клеток растут в тесной связи с ооцитами в фолликулах яичников. Биология этих клеток была хорошо описана на более поздних стадиях, когда они легко восстанавливаются как побочные продукты вспомогательного репродуктивного лечения. Однако углубленный анализ небольших антральных фолликулов, выделенных непосредственно из яичника, обычно не проводится из-за нехватки ткани яичников человека и ограниченного доступа к яичнику у пациенток, проходящих вспомогательное репродуктивное лечение. 
Эти методы обработки целых яичников для криоконсервации кортикальных полосок с одновременной идентификацией/выделением резидентных клеток яичников позволяют проводить анализ ранних стадий развития антрального фолликула с высоким разрешением. Мы демонстрируем протоколы выделения дискретных типов клеток путем ферментативной обработки антральных фолликулов и разделения гранулезных, тека-, эндотелиальных, кроветворных и стромальных клеток. Выделение клеток из антральных фолликулов различных размеров и стадий развития позволяет всесторонне анализировать клеточные и молекулярные механизмы, которые управляют ростом фолликулов и физиологией яичников, и обеспечивает источник жизнеспособных клеток, которые можно культивировать in vitro для повторения микроокружения фолликулов.

Мы выделили фолликулы с поверхности яичника и ферментативно обработали их, чтобы выделить ГК, а также тека и стромные клетки, окружающие антральную полость. Клетки были собраны, а клеточные фракции были отсортированы из антральных фолликулов (диаметр от 0,5 мм до 4 мм) с помощью FACS до чист?...

Watch this Scientific Journal Video about Extraction, Labeling, and Purification of Lineage-Specific Cells from Human Antral Follicles at JoVE.com

Extraction, Labeling, and Purification of Lineage-Specific Cells from Human Antral Follicles

Здесь мы представляем протоколы идентификации и очистки клеток яичников от антральных фолликулов. Мы разрабатываем методы обработки целых яичников для криоконсервации кортикальных полосок, а также сбора интактных антральных фолликулов, которые обрабатываются ферментативно для высвобождения нескольких типов резидентных клеток фолликулов, включая гранулезные, тека, эндотелиальные, кроветворные и стромальные клетки.

Экстракция, маркировка и очистка клеток, специфичных для линии, из антральных фолликулов человека

The activation, growth, development, and maturation of oocytes is a complex process that is coordinated not just between multiple cell types of the ovary ...

Показанный здесь протокол позволяет маркировать и выделять определенные клеточные линии, которые присутствуют в фолликулах яичников, начиная с ранних антральных стадий, тем самым обеспечивая анализ и культивирование с высоким разрешением. Этот высокоточный подход использует комбинации флуорофорных конъюгированных антител для маркеров клеточной поверхности, которые надежно и специфически экспрессируются среди дискретных гранулезных, стромальных и тека-линий. Начните с помещения яичника в стерильную чашку Петри и залейте ею охлажденную среду, чтобы увлажнить ткань, убедившись, что яичник наполовину погружен в среду.Удалите все швы или другой материал и рассеките остаточную окружающую ткань от яичника. Чтобы выделить антральные фолликулы, определите отдельные фолликулы и выберите здоровые фолликулы. Исключите любые заполненные кровью, темные или несимметричные фолликулы.Изолируйте выбранные антральные фолликулы от яичника с помощью скальпелей, сохраняя антральный отдел нетронутым и иссекая корковую ткань, охватывающую фолликул. Поместите каждый иссеченный неповрежденный антральный фолликул в одну лунку из шести лунок. Используя линейку, помещенную под блюдо, определите диаметр фолликула для описательных целей.Используя скальпель, разделите пополам неповрежденный антральный фолликул, чтобы оценить антральную полость, и добавьте шесть миллилитров ферментативной среды для отсоединения клеток перед инкубацией пластины в увлажненном инкубаторе в течение 10 минут. После инкубации добавляют шесть миллилитров доступной среды, содержащей 20% эмбриональной бычьей сыворотки, или FBS, и промывают средой путем повторного энергичного пипетирования над разделенными пополам фолликулами микропипеткой P-1000. Далее собирают среду и пропускают ее через 100-миллиметровый фильтр.После центрифугирования отфильтрованной надосадочной жидкости при температуре 300 г и четырех градусах Цельсия в течение трех минут перед этим аспирируйте надосадочную жидкость. Поместите оставшуюся ткань в смесь 100 единиц на миллилитр коллагеназы и одну единицу на миллилитр диспазы, разведенную в сбалансированном физиологическом растворе до 30 минут инкубации. Механически разрушают ткани путем растирания и энергичного пипетирования дважды через 10 и 20 минут.После этого восстановите ткань и промойте с помощью пипетки через наконечник микропипетки P-1000 и процедите через 100-миллилитровый фильтр. Центрифугируйте процеженную ткань при температуре 300 г и четырех градусах Цельсия в течение трех минут, прежде чем положить клеточный гранул, обогащенный тека-клетками и клетками стромы, на лед для маркировки и FACS. Чтобы идентифицировать гранулезные клетки и тека-клетки, ресуспендируют клеточные гранулы в блокирующем растворе, содержащем непосредственно конъюгированные антитела, и инкубируют при четырех градусах Цельсия в течение 10 минут.После промывки и центрифугирования клеток ресуспендируют клетки в буфере FACS, содержащем 4-6 диамидино-2-фенилиндол или DAPI, и пропускают клеточную суспензию через прибор FACS для захвата небольшой популяции клеток, используя флуоресцентную интенсивность флуорофорных конъюгированных антител для стробирования. Оставшуюся часть завязи разделите пополам. Иссекают мозговое вещество с помощью изогнутых тонких ножниц и скальпелей, избегая повреждения коры яичника.Продолжайте обработку и истончение коры яичников путем осторожного соскабливания до тех пор, пока не останется минимальное мозговое вещество. Разделите кортикальную ткань на полоски шириной две-три миллиметра по длине яичника. Для замораживания ткани яичников поместите одну кортикальную полоску в каждый охлажденный криогенный флакон, содержащий замораживающий раствор.Встряхните криогенные флаконы, содержащие кортикальные полоски, на вращающейся пластине в течение 20 минут при четырех градусах Цельсия. Образование кристаллов льда происходит путем прикосновения к каждому криофлакону ватным наконечником, ненадолго погруженным в жидкий азот. Клетки яичников были собраны, а клеточные фракции были отсортированы из антральных фолликулов FACS до чистоты более 95%.CD99, специфически меченные гранулезными клетками в PVRL1, или нектине, все больше локализулись в клеточном компартменте oophorus granulosa по мере увеличения антральных фолликулов. Было замечено, что антитела против эндоглина или CD55 специфически разграничивают все клетки стромы и тека, и что аланинаминопептидаза специфически экспрессируется андрогенными тека-клетками. Клетки были помечены антителом, направленным против CD99 для идентификации гранулезных клеток, а антитела против CD45 использовались для исключения гемопоэтических клеток.Антитела против PVRL1 разделяли популяцию гранулезных клеток на оофоры и компартменты. После ферментативного расщепления с диспазой коллагеназы клеточные препараты, меченные антителами против CD55, CD34 и аланинаминопептидазы, позволили захватить все строма- или тека-клетки или андрогенные тека-клетки с исключением эндотелиальных клеток из популяций тека-клеток. Будьте особенно осторожны, чтобы избежать нарушения антрального отдела фолликулов во время первоначальной изоляции фолликулов, разрезая в пределах безопасного края вокруг границ фолликулов.После этой процедуры клетки могут быть использованы для молекулярного или диагностического анализа или, альтернативно, культивированы in vitro для токсикологических исследований, экспериментального анализа или рекапитуляции микроокружения фолликула. На сегодняшний день эти методы использовались для моделирования эндокринных нарушений, связанных с яичником, и для выявления новых субпопуляций фолликулоассоциированных клеток.

Research

JoVE Journal

Biology

Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells

ЭС клетки человека: начиная культуры из замороженных клеток

Here we demonstrate how our lab begins a HuES human embryonic stem cell line culture from a frozen stock.  First, a one to two day old ten cm plate of  ...

In vitro Labeling of Human Embryonic Stem Cells for Magnetic Resonance Imaging

В пробирке Маркировка человеческих эмбриональных стволовых клеток для магнитно-резонансная томография

Human embryonic stem cells (hESC) have demonstrated the ability to restore the injured myocardium. Magnetic resonance imaging (MRI) has emerged as one of ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Окрашивание белков в гелях Кумасси G-250 без органических растворителей и уксусной кислоты

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Purification of Mitochondria from Yeast Cells

Очистка Митохондрии из дрожжей Клетки

Mitochondria are the main site of ATP production during aerobic metabolism in eukaryotic non-photosynthetic cells1. These complex organelles also play ...

Extraction and Analysis of Cortisol from Human and Monkey Hair

Добыча и Анализ кортизола от человека и обезьян волос

The stress hormone cortisol (CORT) is slowly incorporated into the growing hair shaft of humans, nonhuman primates, and other mammals. We developed and ...

Efficient Production and Purification of Recombinant Murine Kindlin-3 from Insect Cells for Biophysical Studies

Эффективное производство и очистка рекомбинантного мышиного Kindlin-3 от клетках насекомых биофизической исследований

Kindlins are essential coactivators, with talin, of the cell surface receptors&#160;integrins and also participate in integrin outside-in signalling, and ...

Visualization and Quantification of Mesenchymal Cell Adipogenic Differentiation Potential with a Lineage Specific Marker

Визуализация и количественная оценка потенциала дифференциация адипогенном мезенхимальных клеток с маркером конкретных Lineage

Several dyes are currently available for use in detecting differentiation of mesenchymal cells into adipocytes. Dyes, such as Oil Red O, are cheap, easy ...

Isolation of High Quality Murine Atrial and Ventricular Myocytes for Simultaneous Measurements of Ca2+ Transients and L-Type Calcium Current

Isolation of High Quality Murine Atrial and Ventricular Myocytes for Simultaneous Measurements of Ca2+ Transients and L-Type Calcium Current

Выделение высококачественных предсердных и желудочковых миоцитов мышей для одновременного измерения переходных процессов Ca2+ и кальциевого тока L-типа

Mouse models play a crucial role in arrhythmia research and allow studying key mechanisms of arrhythmogenesis including altered ion channel function and ...

Tissue Collection and RNA Extraction from the Human Osteoarthritic Knee Joint

Сбор тканей и извлечение РНК из остеоартритного коленного сустава человека

Osteoarthritis (OA) is a chronic and degenerative joint disease most often affecting the knee. As there is currently no cure, total knee arthroplasty ...

Scalable Isolation and Purification of Extracellular Vesicles from Escherichia coli and Other Bacteria

Scalable Isolation and Purification of Extracellular Vesicles from Escherichia coli and Other Bacteria

Масштабируемое выделение и очистка внеклеточных везикул от кишечной палочки и других бактерий

Diverse bacterial species secrete ~20-300 nm extracellular vesicles (EVs), comprised of lipids, proteins, nucleic acids, glycans, and other molecules ...