Name: extraction, labeling, and purification of lineage-specific cells from human antral follicles
Uploaded: 2022-11-30T13:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Extraction, Labeling, and Purification of Lineage-Specific Cells from Human Antral Follicles at JoVE.com

Författarna erkänner stöd från Queenie Victorina Neri Research Scholar Award (DJ) och Hung-Ching Liu Research Scholar Award (LM). N.L.G stöds av NYSTEM Stem Cell and Regenerative Medicine postdoktoralt utbildningsbidrag.

Alla procedurer som involverar möss godkändes av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) vid Weill Cornell Medicine. Alla xenotransplantationsexperiment med äggstocksvävnad utfördes i enlighet med relevanta riktlinjer och föreskrifter. Båda äggstockarna isolerades från en 14-årig hjärndöd organdonator utan historia av radio/kemoterapi och ingen dokumenterad historia av endokrina eller reproduktiva tillstånd. Den institutionella granskningsnämnden (IRB) Committee of Weill Cornell Medicine godkän...

<ol>
	<li>Aghadavod, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+granulosa+cells+from+follicular+fluid;+Applications+in+biomedical+and+molecular+biology+experiments.">Isolation of granulosa cells from follicular fluid; Applications in biomedical and molecular biology experiments.</a> Advanced Biomedical Research. 4, 250 (2015).</li><li>Man, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+human+antral+follicles+of+xenograft+versus+ovarian+origin+reveals+disparate+molecular+signatures.">Comparison of human antral follicles of xenograft versus ovarian origin reveals disparate molecular signatures.</a> Cell Reports. 32 (6), 108027 (2020).</li><li>Schmidt, K. L., Ernst, E., Byskov, A. G., Nyboe Andersen, A., Yding Andersen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+of+primordial+follicles+following+prolonged+transportation+of+ovarian+tissue+prior+to+cryopreservation.">Survival of primordial follicles following prolonged transportation of ovarian tissue prior to cryopreservation.</a> Human Reproduction. 18 (12), 2654-2659 (2003).</li><li>Jensen, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outcomes+of+transplantations+of+cryopreserved+ovarian+tissue+to+41+women+in+Denmark.">Outcomes of transplantations of cryopreserved ovarian tissue to 41 women in Denmark.</a> Human Reproduction. 30 (12), 2838-2845 (2015).</li><li>Newton, H., Aubard, Y., Rutherford, A., Sharma, V., Gosden, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+temperature+storage+and+grafting+of+human+ovarian+tissue.">Low temperature storage and grafting of human ovarian tissue.</a> Human Reproduction. 11 (7), 1487-1491 (1996).</li><li>Man, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+superphysiologic+AMH+promotes+premature+luteinization+of+antral+follicles+in+human+ovarian+xenografts.">Chronic superphysiologic AMH promotes premature luteinization of antral follicles in human ovarian xenografts.</a> Science Advances. 8 (9), 7315 (2022).</li><li>Gougeon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+follicular+growth+in+the+human:+A+model+from+preliminary+results.">Dynamics of follicular growth in the human: A model from preliminary results.</a> Human Reproduction. 1 (2), 81-87 (1986).</li><li>Richards, J. S., Ren, Y. A., Candelaria, N., Adams, J. E., Rajkovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+follicular+theca+cell+recruitment,+differentiation,+and+impact+on+fertility:+2017+update.">Ovarian follicular theca cell recruitment, differentiation, and impact on fertility: 2017 update.</a> Endocr Rev. 39 (1), 1-20 (2018).</li><li>Asiabi, P., Dolmans, M. M., Ambroise, J., Camboni, A., Amorim, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+differentiation+of+theca+cells+from+ovarian+cells+isolated+from+postmenopausal+women.">In vitro differentiation of theca cells from ovarian cells isolated from postmenopausal women.</a> Human Reproduction. 35 (12), 2793-2807 (2020).</li><li>Dalman, A., Totonchi, M., Valojerdi, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+human+theca+stem+cells+and+their+differentiation+into+theca+progenitor+cells.">Establishment and characterization of human theca stem cells and their differentiation into theca progenitor cells.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 119 (12), 9853-9865 (2018).</li></ol>

Bättre upplösning av den cellulära mångfalden i äggstocksfolliklarna är kliniskt viktigt av flera skäl. Vid tillämpning av ovanstående protokoll på isoleringen av de unika fenotypiska subtyperna som finns inom folliklar i antralstadiet bör flera faktorer beaktas. För det första är hälsan och livskraften hos äggstocksvävnaden från vilken antralfollikeln härrör avgörande för att bestämma cellernas kvalitet och framgången för nedströmsapplikationer. Detta kan optimeras genom att minimera det ischem...

De primära funktionella elementen i den mänskliga äggstocken är folliklarna, som styr tillväxten och utvecklingen av oocyter. Protokoll för isolering av follikulära celler har varit väl etablerade i samband med in vitro-fertilisering , men dessa är endast lämpliga för insamling av celler från luteiniserade folliklar vid tidpunkten för ägguttag1. Vi har utvecklat ett protokoll som möjliggör isolering av diskreta cellpopulationer från antrala folliklar i olika utvecklingsstadier som uppstår från inhemska äggstockar eller xenotransplanterad äggstocksvävnad2. Även om det finns enighet om att bidragen från follikelbosatta celler till odlingen av äggcellen är mycket viktiga, har få studier prospektivt identifierat och extraherat de unika fenotypiska subtyperna som finns i folliklar i antralstadiet. En djupare förståelse av differentieringshierarkin och signaltransduktionen mellan specialiserade celler under de olika utvecklingsstadierna kan bredda vår förståelse av äggstocksfysiologi under homeostatiska och patologiska förhållanden. Dessutom kan diskriminering av diskreta cellulära subtyper och deras molekylära bidrag till follikeltillväxt/mognad tillhandahålla ett sätt att generera ex vivo-surrogat som rekonstruerar äggstocksfunktionen för att främja äggstocksmognad och/eller behandla endokrin dysfunktion. 
Varje unik celltyp inom äggstocken bidrar till follikelns komplexa funktion, som effektivt fungerar som ett diskret miniorgan för att främja tillväxten och mognaden av äggcellen den innehåller. Oocyten, follikelns mittpunkt, är direkt omsluten av ett kontinuerligt skikt av granulosaceller (GC), med theca-cellerna (TC) som bildar ett sekundärt lager av celler som kombinerar med oocyten och GC för att komponera follikelenheten. Även om de klassificeras i två grupper innehåller GC och TC många undertyper. GC klassificeras enligt deras position i follikeln; GC som omger äggcellen kontra de som ligger intill basalmembranet betecknas som oophorous respektive mural GC, och dessa subtyper visar unika transkriptomiska signaturer. TC har många subtyper som fungerar för att ge steroidogent, metaboliskt och strukturellt stöd. Endotel-, perivaskulära och immunceller spelar en central roll för att upprätthålla normal äggstocksfysiologi. Äggstocksstroma fungerar inte bara som ett substrat för follikeltillväxt utan ger sannolikt också en källa till förfäder som ger upphov till TC. Detta flerskiktade komplex av cellulära subtyper inom äggstocken är det som möjliggör dess funktion som både ett endokrint och ett reproduktionsorgan.
Detta dokument presenterar ett protokoll för identifiering och rening av granulosa-, theca-, stromal-, endotelial- och hematopoetiska celler från antrala folliklar. Vi har använt detta protokoll för att isolera dessa äggstocksceller och analysera dem med hjälp av encellssekvensering, följt av specifik färgning i folliklar i olika utvecklingsstadier. Protokollet ger en enkel metod som är replikerbar och möjliggör högupplöst analys av både äggstockens fysiologi och patologi.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chemicals, reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic 100x</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15240062</td>
			<td>Anti-Anti</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antifade Mountant solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>&#160;P36930</td>
			<td>ProLong Gold</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase from&#160;Clostridium histolyticum</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>C 2674</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II, powder</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17105041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>D 2650</td>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14190144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme Cell Detachment Medium&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>00-4555-56</td>
			<td>Accutase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, heat-inactivated</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10438026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#8242; Balanced Salt solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14175079</td>
			<td>no calcium, no magnesium, no phenol red</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leibovitz&#8217;s L-15 medium&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11415064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Saline</td>
			<td>Quality Biological</td>
			<td>114-055-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>S 1888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezing Medium (100 mL, filtered through a 0.2 micron filter)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 69.64 mL of Leibovitz&#39;s L-15</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 17.66 mL of fetal bovine serum</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 3.42 g of sucrose</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 10.65 mL of DMSO</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>- 1 mL of antibiotic-antimycotic</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Plasticware and Supplies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well Clear Flat Bottom Not Treated&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>351146</td>
			<td>Falcon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer 100 &#181;m</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>352360</td>
			<td>Corning, Falcon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryovials</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>377267</td>
			<td>CryoTube 1.8 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish, D x H 150 mm x 25 mm&#160;</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>CLS430599</td>
			<td>60EA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round-Bottom Polystyrene Test Tubes with Cell Strainer Snap Cap, 5 mL</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>352235</td>
			<td>Corning, Falcon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Filter/Storage Bottle System, 0.22 &#181;m</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibodies</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANPEP</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>301703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>FAB7227A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>304019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD55</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>311306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD 99</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>371308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVRL</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>340404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical tools</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>long forceps (~150 mm length)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-000-128</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>medium forceps (~110 mm length)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-000-157</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>number 21 scalpel</td>
			<td>Andwin Scientific&#160;</td>
			<td>EF7281H</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>number 11 scalpel</td>
			<td>Andwin Scientific</td>
			<td>&#160;FH/CX7281A</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sharp fine curved scissors</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS-5881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSJazz Flourescence activated cell sorter</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 710 META Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

extraction, labeling, and purification of lineage-specific cells from human antral follicles

Aktivering, tillväxt, utveckling och mognad av oocyter är en komplex process som samordnas inte bara mellan flera celltyper av äggstocken utan också över flera kontrollpunkter inom hypotalamus/hypofysen/äggstockskretsen. Inom äggstocken växer flera specialiserade celltyper i nära anslutning till äggcellen i äggstocksfolliklarna. Biologin hos dessa celler har beskrivits väl i senare skeden, när de lätt återvinns som biprodukter av assisterad reproduktiv behandling. Den fördjupade analysen av små antrala folliklar isolerade direkt från äggstocken utförs emellertid inte vanligtvis på grund av bristen på human äggstocksvävnad och den begränsade tillgången till äggstocken hos patienter som genomgår assisterad reproduktiv behandling. 
Dessa metoder för bearbetning av hela äggstockar för kryokonservering av kortikala remsor med samtidig identifiering / isolering av äggstocksbosatta celler möjliggör högupplöst analys av de tidiga stadierna av antralfollikelutveckling. Vi demonstrerar protokoll för att isolera diskreta celltyper genom att behandla antrala folliklar enzymatiskt och separera granulosa-, theca-, endotel-, hematopoietiska och stromaceller. Isoleringen av celler från antrala folliklar i olika storlekar och utvecklingsstadier möjliggör en omfattande analys av de cellulära och molekylära mekanismer som driver follikeltillväxt och äggstocksfysiologi och ger en källa till livskraftiga celler som kan odlas in vitro för att rekapitulera follikelmikromiljön.

Vi isolerade folliklar från ytan av äggstocken och behandlade dem enzymatiskt för att isolera GCs såväl som theca- och stromaceller som omger antralhålan. Cellerna samlades in och cellfraktionerna sorterades från antralfolliklarna (diametrar mellan 0,5 mm och 4 mm) med FACS till >95% renhet (figur 1).
För att märka och rena unika cellulära fraktioner inom de mänskliga antrala folliklarna kombinerade vi enzymatisk nedbrytning med flödescytometrisk sorte...

Watch this Scientific Journal Video about Extraction, Labeling, and Purification of Lineage-Specific Cells from Human Antral Follicles at JoVE.com

Extraction, Labeling, and Purification of Lineage-Specific Cells from Human Antral Follicles

Här presenterar vi protokoll för identifiering och rening av äggstocksceller från antrala folliklar. Vi utarbetar metoder för bearbetning av hela äggstockar för kryokonservering av kortikala remsor samtidigt som vi skördar intakta antrala folliklar som behandlas enzymatiskt för att frigöra flera follikelbosatta celltyper, inklusive granulosa, theca, endotelial, hematopoietisk och stromaceller.

Extraktion, märkning och rening av härstamningsspecifika celler från humana antrala folliklar

The activation, growth, development, and maturation of oocytes is a complex process that is coordinated not just between multiple cell types of the ovary ...

Protokollet som demonstreras här möjliggör märkning och isolering av specifika cellinjer som finns i äggstocksfolliklar som börjar i tidiga antrala stadier, vilket möjliggör högupplöst analys och odling. Detta mycket exakta tillvägagångssätt använder kombinationer av fluoroforkonjugerade antikroppar för att rikta cellytmarkörer som uttrycks robust och specifikt bland diskreta granulosa-, stroma- och theca-linjer. Börja med att placera äggstocken i en steril petriskål och häll ett kylt medium med det för att hydrera vävnaden, så att äggstocken är halvt nedsänkt i mediet.Ta bort suturer eller annat material och dissekera den kvarvarande omgivande vävnaden bort från äggstocken. För att isolera antralfolliklarna, identifiera enskilda folliklar och välj friska folliklar. Uteslut blodfyllda, mörka eller icke-symmetriska folliklar.Isolera de valda antrala folliklarna från äggstocken med skalpeller, håll antrummet intakt och excisera den kortikala vävnaden som omfattar follikeln. Placera varje utskuren intakt antralfollikel i en brunn på sexbrunnsplattan. Använd en linjal placerad under skålen och bestäm follikeldiametern för beskrivande ändamål.Använd en skalpell, skär den intakta antrala follikeln för att bedöma antralhålan och tillsätt sex milliliter enzymatiskt cellavskiljningsmedium innan du inkuberar plattan i en fuktad inkubator i 10 minuter. Efter inkubation, tillsätt sex milliliter tillgängligt medium innehållande 20% fetalt bovint serum, eller FBS, och spola med mediet genom upprepad kraftig pipettering över de halverade folliklarna med en P-1000 mikropipett. Samla sedan mediet och passera det genom ett 100 millimeter filter.Efter centrifugering av den filtrerade supernatanten vid 300 G och fyra grader Celsius i tre minuter före, aspirera supernatanten. Placera den återstående vävnaden i en blandning av 100 enheter per milliliter kollagenas och en enhet per milliliter dispase utspädd i en balanserad saltlösning före 30 minuters inkubation. Mekaniskt störa vävnaden genom triturerande och kraftig pipettering två gånger efter 10 och 20 minuter.När du är klar, återvinn vävnaden och spola via pipettering, genom en P-1000 mikropipettspets och sil genom ett 100-milliliter filter. Centrifugera den ansträngda vävnaden vid 300 G och fyra grader Celsius i tre minuter innan du lägger cellpelleten berikad med thecacellerna och stromacellerna på is för märkning och FACS. För att identifiera granulosaceller och thecaceller, suspendera cellpelletsen i en blockerande lösning innehållande direkt konjugerade antikroppar och inkubera vid fyra grader Celsius i 10 minuter.Efter tvättning och centrifugering av cellerna, suspendera cellerna i FACS-buffert innehållande 4-6 diamidino-2-fenylindol, eller DAPI, och kör cellsuspensionen genom ett FACS-instrument för att fånga en liten population av cellerna, med hjälp av den fluorescerande intensiteten av fluoroforkonjugerade antikroppar för grindning. Halvera resten av äggstocken. Punktskatt medulla med böjda fina saxar och skalpeller, för att undvika skador på äggstocksbarken.Fortsätt bearbetning och gallring av äggstocksbarken genom försiktig skrapning tills minimal medulla kvarstår. Dela den kortikala vävnaden i två till tre millimeter breda remsor längs äggstocklängden. För frysning av äggstocksvävnad, placera en kortikal remsa i varje kyld kryogen injektionsflaska som innehåller fryslösningen.Skaka de kryogena injektionsflaskorna som innehåller kortikala remsor på en roterande platta i 20 minuter vid fyra grader Celsius. Kärnbildning av iskristaller genom att röra vid varje kryoflaska med en bomullsspets kort nedsänkt i flytande kväve. Äggstockscellerna samlades in och cellfraktionerna sorterades från antralfolliklarna FACS till mer än 95% renhet.CD99 specifikt märkta granulosaceller i PVRL1, eller nektin, lokaliserades alltmer till oophorus granulosa-cellfacket när antralfolliklarna ökade i storlek. Man såg att antikropparna mot endoglin eller CD55 specifikt avgränsade alla stroma- och thecaceller och att alaninaminopeptidas specifikt uttrycktes av androgena thecaceller. Cellerna märktes med en antikropp riktad mot CD99 för att identifiera granulosaceller och antikroppar mot CD45 användes för att utesluta hematopoetiska celler.Antikroppar mot PVRL1 separerade granulosacellpopulationen i ooforus och väggmålningar. Efter enzymatisk nedbrytning med kollagenasdispase möjliggjorde cellpreparaten märkta med antikroppar mot CD55, CD34 och alaninaminopeptidas infångning av alla stroma- eller thecaceller eller androgena theca-celler med uteslutning av endotelceller från thecacellernas populationer. Var särskilt försiktig för att undvika att störa folliklarnas antrum under initial follikelisolering genom att skära inom en säker marginal runt follikelgränserna.Nedströms om denna procedur kan cellerna användas för molekylär eller diagnostisk analys eller alternativt odlas in vitro för toxikologiska studier, experimentell analys eller rekapitulation av follikelmikromiljön. Hittills har dessa metoder använts för att modellera endokrina störningar som involverar äggstocken och för att identifiera nya subpopulationer av follikelassocierade celler.

Research

JoVE Journal

Biology

Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells

Mänskliga ES-celler: Starta Kultur från frusna celler

Here we demonstrate how our lab begins a HuES human embryonic stem cell line culture from a frozen stock.  First, a one to two day old ten cm plate of  ...

In vitro Labeling of Human Embryonic Stem Cells for Magnetic Resonance Imaging

In vitro-märkning av mänskliga embryonala stamceller för magnetisk resonanstomografi

Human embryonic stem cells (hESC) have demonstrated the ability to restore the injured myocardium. Magnetic resonance imaging (MRI) has emerged as one of ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Färgning av proteinerna i geler med Coomassie G-250 utan organiska lösningsmedel och ättiksyra

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Purification of Mitochondria from Yeast Cells

Rening av mitokondrier från jästceller

Mitochondria are the main site of ATP production during aerobic metabolism in eukaryotic non-photosynthetic cells1. These complex organelles also play ...

Extraction and Analysis of Cortisol from Human and Monkey Hair

Extraktion och analys av kortisol från Human och Monkey Hair

The stress hormone cortisol (CORT) is slowly incorporated into the growing hair shaft of humans, nonhuman primates, and other mammals. We developed and ...

Efficient Production and Purification of Recombinant Murine Kindlin-3 from Insect Cells for Biophysical Studies

Effektiv Produktion och rening av rekombinant Murina Kindlin-3 från insektsceller för biofysikalisk Studies

Kindlins are essential coactivators, with talin, of the cell surface receptors&#160;integrins and also participate in integrin outside-in signalling, and ...

Visualization and Quantification of Mesenchymal Cell Adipogenic Differentiation Potential with a Lineage Specific Marker

Visualisering och kvantifiering av mesenkymala Cell adipogena differentiering Potential med en härstamning specifik markör

Several dyes are currently available for use in detecting differentiation of mesenchymal cells into adipocytes. Dyes, such as Oil Red O, are cheap, easy ...

Isolation of High Quality Murine Atrial and Ventricular Myocytes for Simultaneous Measurements of Ca2+ Transients and L-Type Calcium Current

Isolation of High Quality Murine Atrial and Ventricular Myocytes for Simultaneous Measurements of Ca2+ Transients and L-Type Calcium Current

Isolering av högkvalitativa murina förmaks- och ventrikulära myocyter för samtidiga mätningar av Ca2+ transienter och kalciumström av L-typ

Mouse models play a crucial role in arrhythmia research and allow studying key mechanisms of arrhythmogenesis including altered ion channel function and ...

Tissue Collection and RNA Extraction from the Human Osteoarthritic Knee Joint

Vävnadsuppsamling och RNA-extraktion från den mänskliga osteoarthritiska knäleden

Osteoarthritis (OA) is a chronic and degenerative joint disease most often affecting the knee. As there is currently no cure, total knee arthroplasty ...

Scalable Isolation and Purification of Extracellular Vesicles from Escherichia coli and Other Bacteria

Scalable Isolation and Purification of Extracellular Vesicles from Escherichia coli and Other Bacteria

Skalbar isolering och rening av extracellulära vesiklar från Escherichia coli och andra bakterier

Diverse bacterial species secrete ~20-300 nm extracellular vesicles (EVs), comprised of lipids, proteins, nucleic acids, glycans, and other molecules ...