Name: a high-throughput platform for culture and 3d imaging of organoids
Uploaded: 2022-10-14T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A High-Throughput Platform for Culture and 3D Imaging of Organoids at JoVE.com

Forskningen støttes av CALIPSO-prosjektet støttet av National Research Foundation, Prime Minister's Office, Singapore, under sitt Campus for Research Excellence and Technological Enterprise (CREATE) -program. VV anerkjenner støtten fra NRF-etterforsker NRF-NRFI2018-07, MOE Tier 3 MOE2016-T3-1-005, MBI-frøfinansiering og ANR ADGastrulo. AB og GG anerkjenner støtten fra MBIs kjernefinansiering. AB anerkjenner Andor Technologies for lån av BC43 mikroskop.

MERK: Den første delen av denne protokollen beskriver mikrofabrikasjonen av cellekulturenheten. En original primærform med pyramidale hulrom kan produseres internt hvis mikrofabrikasjonsanlegg er tilgjengelige eller outsourcet til eksterne selskaper. Den primære formen som brukes i dette arbeidet er produsert internt, med fabrikasjonsprosesstrinn beskrevet andre steder11,13. En grunnleggende protokoll for mikrofabrikasjon av formen er tilgjengelig i ti...

<ol>
	<li>Kim, J., Koo, B. -. K., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+organoids:+model+systems+for+human+biology+and+medicine.">Human organoids: model systems for human biology and medicine.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 21 (10), 571-584 (2020).</li><li>Takebe, T., Wells James, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoids+by+design.">Organoids by design.</a> Science. 364 (6444), 956-959 (2019).</li><li>Kratochvil, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+materials+for+organoid+systems.">Engineered materials for organoid systems.</a> Nature Reviews Materials. 4 (9), 606-622 (2019).</li><li>Rossi, G., Manfrin, A., Lutolf, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+and+potential+in+organoid+research.">Progress and potential in organoid research.</a> Nature Reviews Genetics. 19 (11), 671-687 (2018).</li><li>O'Connell, L., Winter, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoids:+past+learning+and+future+directions.">Organoids: past learning and future directions.</a> Stem Cells and Development. 29 (5), 281-289 (2020).</li><li>Vives, J., Batlle-Morera, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+challenge+of+developing+human+3D+organoids+into+medicines.">The challenge of developing human 3D organoids into medicines.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 11 (1), 72 (2020).</li><li>Busslinger, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+and+challenges+of+patient-derived+organoids+in+guiding+the+multimodality+treatment+of+upper+gastrointestinal+malignancies.">The potential and challenges of patient-derived organoids in guiding the multimodality treatment of upper gastrointestinal malignancies.</a> Open Biology. 10 (4), 190274 (2020).</li><li>Lukonin, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+landscape+of+intestinal+organoid+regeneration.">Phenotypic landscape of intestinal organoid regeneration.</a> Nature. 586 (7828), 275-280 (2020).</li><li>Rios, A. C., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+organoids:+a+bright+future+ahead.">Imaging organoids: a bright future ahead.</a> Nature Methods. 15 (1), 24-26 (2018).</li><li>Dekkers, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+3D+imaging+of+fixed+and+cleared+organoids.">High-resolution 3D imaging of fixed and cleared organoids.</a> Nature Protocols. 14 (6), 1756-1771 (2019).</li><li>Galland, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+high-+and+super-resolution+imaging+using+single-objective+SPIM.">3D high- and super-resolution imaging using single-objective SPIM.</a> Nature Methods. 12 (7), 641-644 (2015).</li><li>Beghin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+content+3D+imaging+method+for+quantitative+characterization+of+organoid+development+and+phenotype.">High content 3D imaging method for quantitative characterization of organoid development and phenotype.</a> bioRxiv. , (2021).</li><li>Beghin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+high-speed+3D+imaging+of+organoid+cultures+with+multi-scale+phenotypic+quantification.">Automated high-speed 3D imaging of organoid cultures with multi-scale phenotypic quantification.</a> Nature Methods. 19 (7), 881-892 (2022).</li></ol>

Prosedyren for fremstilling av mikrobrønnkulturskålen, som tillater organoidkultur og differensiering med høy tetthet, er beskrevet i dette papiret. På grunn av geometrien og arrangementet av mikrohulrommene, kan tusenvis av sfæroider dyrkes og farges i en enkelt plate i lange perioder (flere uker eller mer) med nesten ingen tap av materiale. Til sammenligning kan et område på 4 mm x 2 mm på cellekulturplaten inneholde så mange sfæroider som en enkelt 384-brønnplate med et areal på 12 cm x 8 cm. 
<p class...

I organotypiske 3D-cellekulturer, heretter kalt organoider, differensierer og organiserer stamceller seg til romlige strukturer som deler sterke morfologiske og funksjonelle likheter med virkelige organer. Organoider tilbyr verdifulle modeller for å studere menneskelig biologi og utvikling utenfor kroppen 1,2,3. Et økende antall modeller utvikles som etterligner leveren, hjernen, nyren, lungen og mange andre organer 2,4,5. Differensiering i organoider styres ved tilsetning av løselige vekstfaktorer og en ekstracellulær matrise i en presis tidssekvens. Men i markert kontrast til organer er utviklingen av organoider ganske heterogen.
Utover mange biologiske utfordringer6,7, utgjør organoidkulturer også teknologiske utfordringer når det gjelder cellekulturmetoder, karakterisering av transkriptomikk og avbildning. In vivo organutvikling skjer i et biologisk miljø som resulterer i en svært stereotyp selvorganisering av cellearrangementer. Enhver fenotypisk endring kan brukes som en proxy for å diagnostisere en syk tilstand. I motsetning til dette utvikler organoider in vitro i minimalt kontrollerte mikromiljøer som er kompatible med cellekulturforhold, noe som resulterer i stor variasjon i utviklingsbanen og formdannelsen for hver enkelt organoid.
En nylig studie8 viste at kvantitativ avbildning av organoid form (fenotypebeskrivelser) kombinert med vurderingen av noen få genetiske markører tillater definisjonen av fenotypiske utviklingslandskap. Uten tvil er evnen til å relatere mangfoldet av genomisk uttrykk i organoider med deres fenotypiske oppførsel et stort skritt mot å frigjøre det fulle potensialet til organotypiske kulturer. Dermed ber det om utvikling av dedikerte bildebehandlingsmetoder med høyt innhold som tillater karakterisering av organoide egenskaper på subcellulære, flercellede og helorganoide skalaer i 3D 9,10.
Vi utviklet en allsidig screeningplattform med høyt innhold (HCS) som muliggjør strømlinjeformet organoidkultur (fra isolerte humane embryonale stamceller [hESC], humaninduserte pluripotente stamceller [hIPSC] eller primære celler til 3D, flercellede, differensierte organoider) og rask, ikke-invasiv 3D-avbildning. Den integrerer en neste generasjons, miniatyrisert, 3D-cellekulturenhet, kalt JeWells-brikken ( brikken heretter), som inneholder tusenvis av godt arrangerte mikrobrønner flankert med 45 ° speil som tillater rask, 3D, høyoppløselig avbildning ved enkeltobjektiv lysarkmikroskopi11. Kompatibelt med ethvert standard, kommersielt, invertert mikroskop, muliggjør dette systemet avbildning av 300 organoider i 3D med subcellulær oppløsning på <1 time.
Mikrofabrikasjonen av cellekulturenheten starter fra en eksisterende mikrostrukturert form, som inneholder hundrevis av mikropyramider (figur 1A) med en firkantet base og sidevegger ved 45 ° i forhold til basen. Figur 1C viser elektronmikroskopbilder (EM) av slike strukturer. Formen i seg selv er laget av poly (dimetylsiloksan) (PDMS) og kan gjøres som en kopi av en primær mold (ikke vist her) med tilsvarende funksjoner (som hulrom) ved hjelp av standard myk-litografiske prosedyrer. Den primære formen kan produseres ved forskjellige prosedyrer. Den som ble brukt til denne protokollen ble laget ved hjelp av silisium våt etsing som rapportert i Galland et al. 11; Prosedyren for fremstilling av primærformen er ikke kritisk for denne protokollen. Pyramidene er ordnet i en kvadratisk matrise, med samme tonehøyde for X- og Y-retningene (i dette tilfellet er tonehøyden 350 μm).
Som en illustrasjon ble proof-of-concept-eksperimenter12 publisert for å demonstrere at brikken tillater langsiktig kultur (måneder) og differensieringsprotokoller mens den nøyaktig definerer antall innledende celler i brønnene. Individuell utvikling av et stort antall organoider kan automatisk overvåkes live ved hjelp av standard lysfelt og 3D lysarkfluorescensmikroskoper. Videre kan organoider hentes for å utføre ytterligere biologiske undersøkelser (f.eks. Transkriptomisk analyse). Dette papiret skisserer detaljerte protokoller for fremstilling av cellekulturdekselene, såings- og fargeprosedyren for fluorescensmikroskopi, samt gjenfinning av organoider.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-Propanol</td>
			<td>Thermofisher scientific</td>
			<td>AA19397K7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Thermofisher scientific</td>
			<td>AA19392K7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BC43 Benchtop Confocal Microscope</td>
			<td>Andor Technology</td>
			<td></td>
			<td>spinning disk confocal microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bovine serum albumin&#160;</td>
			<td>Thermofisher scientific</td>
			<td>37525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buffered oxide etching solution</td>
			<td>Merck</td>
			<td>901621-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CEE Spin Coater</td>
			<td>Brewer Science</td>
			<td>200X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermofisher scientific</td>
			<td>62248</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Developer AZ400K</td>
			<td>Merck</td>
			<td>18441223164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DI Milliq water</td>
			<td>Millipore</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10082147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverslips</td>
			<td>Marienfled</td>
			<td>117650</td>
			<td>1.5H, round 25 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15630080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris software</td>
			<td>BitPlane</td>
			<td></td>
			<td>image analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Transmission optical microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>TSF100-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labsonic M</td>
			<td>Sartorius Stedium Biotech</td>
			<td></td>
			<td>Ultrasonic homogenizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipidure</td>
			<td>NOF America</td>
			<td>CM5206</td>
			<td>bio-mimetic copolymer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOA73</td>
			<td>Norland Products</td>
			<td>17-345</td>
			<td>UV curable adhesive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15070063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phalloidin</td>
			<td>Thermofisher scientific&#160;</td>
			<td>A12379</td>
			<td>Alexa Fluor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffer Solution</td>
			<td>Thermofisher scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photo Resist AZ5214E</td>
			<td>Merck</td>
			<td>14744719710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pico Plasma tool</td>
			<td>Diener Electronic GmbH + Co. KG</td>
			<td>Pico Plasma</td>
			<td>For O2 plasma treatment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RapiClear 1.52</td>
			<td>Sunjin lab</td>
			<td>RC 152001</td>
			<td>water-soluble clearing agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RCT Hot Plate/Stirrer</td>
			<td>IKA (MY)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reactive Ion Etching tool</td>
			<td>Samco Inc. (JPN)</td>
			<td>RIE-10NR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11875093</td>
			<td>culture medium for HCT116 cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>4019862</td>
			<td>Polydimethylsiloxane or in short, PDMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloro(1H,1H,2H,2H-perfluorooctyl)silane</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>448931-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T9284</td>
			<td>surfactant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA</td>
			<td>Thermofisher scientific</td>
			<td>15400054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic Cleaner</td>
			<td>Bransonic</td>
			<td>CPX2800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-KUB 2</td>
			<td>KLOE</td>
			<td></td>
			<td>UV-LED light source, 365 nm wavelength, 35 mW/cm2 power density</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV mask aligner</td>
			<td>SUSS Microtec Semiconductor (DE)</td>
			<td>MJB4</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a high-throughput platform for culture and 3d imaging of organoids

Karakteriseringen av et stort antall tredimensjonale (3D) organotypiske kulturer (organoider) på forskjellige oppløsningsskalaer er for tiden begrenset av standard bildebehandlingsmetoder. Denne protokollen beskriver en måte å forberede mikrofabrikerte organoidkulturbrikker på, som muliggjør multiskala, 3D-live-bildebehandling på et brukervennlig instrument som krever minimal manipulasjon og er i stand til opptil 300 organoider/t-bildegjennomstrømning. Disse kulturbrikkene er kompatible med både luft- og nedsenkningsmål (luft, vann, olje og silikon) og et bredt spekter av vanlige mikroskoper (f.eks. spinnskive, punktskanner konfokal, bredt felt og brightfield). Videre kan de brukes med lysarkmodaliteter som single-objective, single-plane illumination microscopy (SPIM) teknologi (soSPIM). 
Protokollen beskrevet her gir detaljerte trinn for fremstilling av mikrofabrikerte kulturbrikker og kultur og farging av organoider. Bare kort tid er nødvendig for å bli kjent med, og forbruksvarer og utstyr kan lett finnes i vanlige biolaboratorier. Her vil 3D-bildebehandlingsmulighetene kun bli demonstrert med kommersielle standardmikroskoper (f.eks. Spinning disk for 3D-rekonstruksjon og bredfeltsmikroskopi for rutinemessig overvåking).

Figur 8F viser det typiske aspektet ved et cellekulturdeksel etter vellykket fabrikasjon. Det UV-herdbare klebende laget virker flatt og fester seg godt til dekselet. Overføringen av det selvklebende laget på dekselet kan mislykkes hvis laget på dekkslipen er overherdet, eller hvis fjerningen av det flate PDMS-substratet gjøres feil (som vist i figur 8G,H). I begge tilfeller er feilen tydelig da ingen strukturert film overføres til dekselet...

Watch this Scientific Journal Video about A High-Throughput Platform for Culture and 3D Imaging of Organoids at JoVE.com

A High-Throughput Platform for Culture and 3D Imaging of Organoids

Dette papiret presenterer en fabrikasjonsprotokoll for en ny type kultursubstrat med hundrevis av mikrobeholdere per mm2, hvor organoider kan dyrkes og observeres ved hjelp av høyoppløselig mikroskopi. Cellesåings- og immunfargingsprotokollene er også detaljerte.

En plattform med høy gjennomstrømning for kultur og 3D-avbildning av organoider

The characterization of a large number of three-dimensional (3D) organotypic cultures (organoids) at different resolution scales is currently limited by ...

Denne protokollen demonstrerer en mikrotekstur cellekulturskål konstruert for vekst av hundrevis av organoider med kunnskap om materiale og fullt kompatibel med mikroskopi. Vår teknikk gjør det effektivt mulig å generere tusenvis av organoider, fullt kompatible med langsiktig bildebehandling og langsiktig cellekultur. Denne protokollen er av stor interesse for biomedisinske applikasjoner som narkotika screening rørledning og kreft forskning domener.Teknikken som presenteres i denne protokollen er lett å mestre etter noen få forsøk fra alle som har erfaring med laboratorieprosedyrer og optisk mikroskopi. For å begynne, kutt små deler av PDMS-formen til dimensjonen som kreves for den endelige enheten. Klipp dem parallelt med XY-retningene til matrisen.Plasser en av de forberedte PDMS-formterningene med forsiden ned på den flate PDMS-delen. Bruk deretter en pipette til å tilsette ca. 0,1 til 0,2 milliliter UV-herdbart lim på den ene siden av formen. Følg utviklingen av væsken inne i hulrommet ved hjelp av et invertert optisk mikroskop ved 10X forstørrelse.Utsett limet for UV-lys for å kurere det. Juster eksponeringstiden avhengig av UV-kildens strømtetthet som beskrevet i tekstmanuskriptet. Bruk overflødig mengde lim i den ene kanten, hold det herdede limet på det flate PDMS-underlaget ved å trykke det forsiktig med en finger.I mellomtiden, ved hjelp av pinsett, klem det ene hjørnet av formen ved siden av den samme kanten som holdes nede og sakte skrell av formen, samtidig som du sørger for at den teksturerte filmen ikke løftes. Trim overflødig lim og PDMS-substrat med et barberblad for å la det herdede, teksturerte og selvklebende laget være flatt på PDMS med overflødig substrat bare på den ene kanten. Behandle et rent deksel med en kort oksygenplasmaprosess for å forbedre hydrofiliteten.Etter plasmaaktiveringen, spinn belegg det tynne laget av UV-herdbart lim ved å plassere dekselet på vakuumklumpen til en standard spinnbelegg og hell en liten dråpe lim i midten av dekselet. Kjør rotasjonsbeleggingsprosessen som beskrevet i tekstmanuskriptet. Hvis spinnbelegg ikke er tilgjengelig, slipp omtrent 0,1 ml UV-herdbart lim på et rent deksel ved hjelp av en pipette.Ta en annen dekselslip og legg den på toppen av den første for å få det flytende limet til å spre seg jevnt mellom de to dekslene. Når limet har nådd kanten av dekslene, skiller du dem forsiktig ved å skyve det ene over det andre. Når de er separert, vil begge dekkene være fullstendig belagt med et tynt lag flytende lim.Etter spinnbelegg, forherd limet ved eksponering for UV. Juster eksponeringstiden avhengig av strømtettheten til UV-kilden som brukes. Ta en av de teksturerte filmene og legg den i kontakt med det selvklebende belagte dekselet. Sørg for at kontakten mellom det delvis herdede limet og den strukturerte filmen er så jevn som mulig.På dette stadiet bør limet på dekselet være solid nok til å unngå å flyte igjen, og kontakten kan optimaliseres ved å trykke forsiktig på dekselet. Utsett dekslene for UV-lys til det belagte klebemiddellaget er fullstendig herdet. Dette vil forsegle den strukturerte filmen på dekselet og gi lekkasjesikker isolasjon mellom hulrommene.Bruk deretter pinsett, klem PDMS på kanten der overflødig materiale ble igjen etter trimming og fjern PDMS flatt underlag. Dette trinnet gjør det mulig for det teksturerte filmlaget å feste seg til dekselet med åpen tilgang øverst for cellesåing. Før cellesåing, på en enhet passivisert med biometrisk kopolymer som beskrevet i manuskriptet, dispenser en milliliter steril PBS i 35 millimeter cellekultur petriskåler.Degas fatet med steril PBS ved hjelp av vakuumkammeret i 10 minutter, etterfulgt av flere runder med pipettering for å fjerne alle boblene. Bytt PBS med sterilt kulturmedium og steriliser platen med UV-lys i 30 minutter under en cellekulturhette. Forbered en cellesuspensjon ved å følge anbefalingene for trypsinisering eller cellesuspensjonsforberedelse for cellene av interesse som beskrevet i tekstmanuskriptet.Telle og justere cellekonsentrasjonen til 500 000 celler per milliliter i det anbefalte cellekulturmediet. Fjern PBS-bufferen fra 35 millimeter cellekulturskålen og dispenser deretter en milliliter av den justerte cellesuspensjonen. Plasser cellekulturfatet tilbake i celleinkubatoren i 10 minutter.Omtrent 80 til 100 celler vil komme inn i hvert omkretshulrom. Etter ca. 10 minutters inkubasjon, gjenopprett cellekulturskålen fra inkubatoren og aspirer forsiktig den cellulære suspensjonen for å fjerne ufangede celler. Legg til en milliliter kulturmedium til kulturskålen og legg den tilbake i celleinkubatoren.Eventuelt, for å hente organoidene etter at de vokste i brønnene, klem det strukturerte limlaget på kuttkanten ved hjelp av pinsett og skrell det forsiktig av fra glassdekselet, men hold det nedsenket i mediet. Økning av konsentrasjonen av biometrisk kopolymer økte beleggtykkelsen. Fullstendig avgassing av cellekulturskålene var avgjørende for å fjerne luftbobler fanget i hulrommene.Organoider ble dannet etter dag to og 15 av dyrking. Spinneskivens konfokalmikroskopi viste representative bilder av organoidene og en 3D-rekonstruksjon. Når du tilbereder kulturfatet, er det viktig å være oppmerksom på monteringen av formen eller underlagsstakken og for å sikre god kontakt mellom den teksturerte filmen og dekselet.Inneslutningen fra mikrohulrommene våre og fraværet av materialtap har tiltrukket seg oppmerksomheten til rombiologiforskere som er interessert i å studere effekten av mikrogravitasjon på organoid homeostase.

Research

JoVE Journal

Biology

A Multi-compartment CNS Neuron-glia Co-culture Microfluidic Platform

We present a novel multi-compartment neuron co-culture microsystem platform for in vitro CNS axon-glia interaction research, capable of conducting up to ...

Lensless On-chip Imaging of Cells Provides a New Tool for High-throughput Cell-Biology and Medical Diagnostics

Conventional optical microscopes image cells by use of objective lenses that work together with other lenses and optical components. While quite ...

A High Throughput Screen for Biomining Cellulase Activity from Metagenomic Libraries

Cellulose, the most abundant source of organic carbon on the planet, has wide-ranging industrial applications with increasing emphasis on biofuel ...

Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

Biokjemiske og høy gjennomstrømning mikroskopisk vurdering av fettmasse i<em&gt; Caenorhabditis Elegans</em

The nematode C. elegans has emerged as an important  model for the study of conserved genetic pathways regulating fat metabolism as  it relates to human ...

High Throughput Microinjections of Sea Urchin Zygotes

Høy gjennomstrømning Microinjections av Sea Urchin zygoter

Microinjection into cells and embryos is a common technique that is used to study a wide range of biological processes. In this method a small amount of ...

High-throughput Image Analysis of Tumor Spheroids: A User-friendly Software Application to Measure the Size of Spheroids Automatically and Accurately

Høy gjennomstrømming Bildeanalyse av Tumor Spheroids: Et brukervennlig program for å måle størrelsen på Spheroids automatisk og nøyaktig

The increasing number of applications of three-dimensional (3D) tumor spheroids as an in vitro model for drug discovery requires their adaptation to ...

Recovery of Adult Zebrafish Hearts for High-throughput Applications

Utvinning av Voksen sebrafisk Hearts for høy gjennomstrømming Applications

Use of the zebrafish model system for studying development, regeneration, and disease is expanding toward use of adult hearts for cell dissociation and ...

High-throughput Screening for Chemical Modulators of Post-transcriptionally Regulated Genes

Høy gjennomstrømming Screening for kjemi modulatorer av Post-transcriptionally Regulerte Gener

Both transcriptional and post-transcriptional regulation have a profound impact on genes expression. However, commonly adopted cell-based screening assays ...

qPCRTag Analysis - A High Throughput, Real Time PCR Assay for Sc2.0 Genotyping

qPCRTag Analysis - En høy gjennomstrømning, Real Time PCR-analyse for Sc2.0 Genotyping

The Synthetic Yeast Genome Project (Sc2.0) aims to build 16 designer yeast chromosomes and combine them into a single yeast cell. To date one synthetic ...