Name: a high-throughput platform for culture and 3d imaging of organoids
Uploaded: 2022-10-14T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A High-Throughput Platform for Culture and 3D Imaging of Organoids at JoVE.com

Forskningen stöds av CALIPSO-projektet som stöds av National Research Foundation, premiärministerns kontor, Singapore, under sitt program Campus for Research Excellence and Technological Enterprise (CREATE). V.V. erkänner stödet från NRF-utredaren NRF-NRFI2018-07, MOE Tier 3 MOE2016-T3-1-005, MBI-såddfinansiering och ANR ADGastrulo. A.B. och G.G. erkänner stödet från MBI:s kärnfinansiering. A.B. erkänner Andor Technologies för lånet av BC43-mikroskopet.

OBS: Den första delen av detta protokoll beskriver mikrofabrikationen av cellodlingsanordningen. En original primär form med pyramidala håligheter kan produceras internt - om mikrotillverkningsanläggningar är tillgängliga - eller outsourcas till externa företag. Den primära formen som används i detta arbete produceras internt, med tillverkningsprocesssteg som beskrivs någon annanstans11,13. Ett grundläggande protokoll för mikrofabrikation av formen fi...

<ol>
	<li>Kim, J., Koo, B. -. K., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+organoids:+model+systems+for+human+biology+and+medicine.">Human organoids: model systems for human biology and medicine.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 21 (10), 571-584 (2020).</li><li>Takebe, T., Wells James, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoids+by+design.">Organoids by design.</a> Science. 364 (6444), 956-959 (2019).</li><li>Kratochvil, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+materials+for+organoid+systems.">Engineered materials for organoid systems.</a> Nature Reviews Materials. 4 (9), 606-622 (2019).</li><li>Rossi, G., Manfrin, A., Lutolf, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+and+potential+in+organoid+research.">Progress and potential in organoid research.</a> Nature Reviews Genetics. 19 (11), 671-687 (2018).</li><li>O'Connell, L., Winter, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoids:+past+learning+and+future+directions.">Organoids: past learning and future directions.</a> Stem Cells and Development. 29 (5), 281-289 (2020).</li><li>Vives, J., Batlle-Morera, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+challenge+of+developing+human+3D+organoids+into+medicines.">The challenge of developing human 3D organoids into medicines.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 11 (1), 72 (2020).</li><li>Busslinger, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+and+challenges+of+patient-derived+organoids+in+guiding+the+multimodality+treatment+of+upper+gastrointestinal+malignancies.">The potential and challenges of patient-derived organoids in guiding the multimodality treatment of upper gastrointestinal malignancies.</a> Open Biology. 10 (4), 190274 (2020).</li><li>Lukonin, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+landscape+of+intestinal+organoid+regeneration.">Phenotypic landscape of intestinal organoid regeneration.</a> Nature. 586 (7828), 275-280 (2020).</li><li>Rios, A. C., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+organoids:+a+bright+future+ahead.">Imaging organoids: a bright future ahead.</a> Nature Methods. 15 (1), 24-26 (2018).</li><li>Dekkers, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+3D+imaging+of+fixed+and+cleared+organoids.">High-resolution 3D imaging of fixed and cleared organoids.</a> Nature Protocols. 14 (6), 1756-1771 (2019).</li><li>Galland, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+high-+and+super-resolution+imaging+using+single-objective+SPIM.">3D high- and super-resolution imaging using single-objective SPIM.</a> Nature Methods. 12 (7), 641-644 (2015).</li><li>Beghin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+content+3D+imaging+method+for+quantitative+characterization+of+organoid+development+and+phenotype.">High content 3D imaging method for quantitative characterization of organoid development and phenotype.</a> bioRxiv. , (2021).</li><li>Beghin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+high-speed+3D+imaging+of+organoid+cultures+with+multi-scale+phenotypic+quantification.">Automated high-speed 3D imaging of organoid cultures with multi-scale phenotypic quantification.</a> Nature Methods. 19 (7), 881-892 (2022).</li></ol>

Förfarandet för tillverkning av mikrobrunnsodlingsskålen, som möjliggör organoidkultur och differentiering med hög densitet, har beskrivits i detta dokument. På grund av mikrokaviteternas geometri och arrangemang kan tusentals sfäroider odlas och färgas i en enda platta under långa perioder (flera veckor eller mer) med nästan ingen förlust av material. Som jämförelse kan ett område på 4 mm x 2 mm på cellodlingsplattan innehålla lika många sfäroider som en enda 384-brunnsplatta med en yta på 12 cm x 8...

I organotypiska 3D-cellkulturer, nedan kallade organoider, differentierar stamceller och självorganiserar sig i rumsliga strukturer som delar starka morfologiska och funktionella likheter med verkliga organ. Organoider erbjuder värdefulla modeller för att studera mänsklig biologi och utveckling utanför kroppen 1,2,3. Ett växande antal modeller utvecklas som efterliknar lever, hjärna, njure, lunga och många andra organ 2,4,5. Differentiering i organoider styrs genom tillsats av lösliga tillväxtfaktorer och en extracellulär matris i en exakt tidssekvens. Men i markant kontrast till organ är utvecklingen av organoider ganska heterogen.
Utöver många biologiska utmaningar 6,7 utgör organoidkulturer också tekniska utmaningar när det gäller cellodlingsmetoder, karakterisering av transkriptomik och avbildning. In vivo organutveckling sker i en biologisk miljö som resulterar i en mycket stereotyp självorganisation av cellarrangemang. Varje fenotypisk förändring kan användas som en proxy för att diagnostisera ett sjukt tillstånd. Däremot utvecklas organoider in vitro i minimalt kontrollerade mikromiljöer som är kompatibla med cellodlingsförhållanden, vilket resulterar i stor variation i utvecklingsvägen och formbildningen för varje enskild organoid.
En nyligen genomförd studie8 visade att kvantitativ avbildning av organoidform (fenotypdeskriptorer) i kombination med bedömningen av några genetiska markörer möjliggör definition av fenotypiska utvecklingslandskap. Förmodligen är förmågan att relatera mångfalden av genomiskt uttryck i organoider med deras fenotypiska beteende ett stort steg mot att frigöra den fulla potentialen hos organotypiska kulturer. Således ber det om utveckling av dedikerade, höginnehållsavbildningsmetoder som möjliggör karakterisering av organoida egenskaper på subcellulära, flercelliga och helorganoidskalor i 3D 9,10.
Vi utvecklade en mångsidig plattform för screening med högt innehåll (HCS) som möjliggör strömlinjeformad organoidodling (från isolerade mänskliga embryonala stamceller [hESC], humant inducerade pluripotenta stamceller [hIPSC] eller primära celler till 3D, flercelliga, differentierade organoider) och snabb, icke-invasiv 3D-avbildning. Den integrerar en nästa generation, miniatyriserad, 3D-cellodlingsenhet, kallad JeWells-chipet ( chipet nedan), som innehåller tusentals välordnade mikrobrunnar flankerade med 45 ° speglar som möjliggör snabb, 3D, högupplöst avbildning med enkelobjektiv ljusarkmikroskopi11. Detta system är kompatibelt med alla vanliga, kommersiella, inverterade mikroskop och möjliggör avbildning av 300 organoider i 3D med subcellulär upplösning på <1 timmar.
Mikrofabrikationen av cellodlingsanordningen utgår från en befintlig mikrostrukturerad form, som innehåller hundratals mikropyramider (figur 1A) med en kvadratisk bas och sidoväggar vid 45° i förhållande till basen. Figur 1C visar elektronmikroskopbilder (EM) av sådana strukturer. Formen i sig är gjord av poly (dimetylsiloxan) (PDMS) och kan tillverkas som en replikavgjutning av en primär form (visas inte här) med motsvarande egenskaper (som hålrum) med hjälp av standard mjuklitografiska procedurer. Den primära formen kan framställas genom olika förfaranden. Den som användes för detta protokoll gjordes med användning av kiselvåtetsning som rapporterats i Galland et al. 11; Förfarandet för tillverkning av den primära formen är inte kritisk för detta protokoll. Pyramiderna är ordnade i en kvadratisk matris, med samma tonhöjd för X- och Y-riktningarna (i detta fall är tonhöjden 350 μm).
Som en illustration publicerades proof-of-concept-experiment12 för att visa att chipet möjliggör långsiktig odling (månader) och differentieringsprotokoll samtidigt som antalet initiala celler i brunnarna exakt definieras. Individuell utveckling av ett stort antal organoider kan automatiskt övervakas live med hjälp av standard ljusfält och 3D-ljusarkfluorescensmikroskop. Dessutom kan organoider hämtas för att utföra ytterligare biologiska undersökningar (t.ex. transkriptomisk analys). Detta dokument beskriver detaljerade protokoll för tillverkning av cellkulturens täckglas, sådd- och färgningsproceduren för fluorescensmikroskopi samt hämtning av organoiderna.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-Propanol</td>
			<td>Thermofisher scientific</td>
			<td>AA19397K7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Thermofisher scientific</td>
			<td>AA19392K7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BC43 Benchtop Confocal Microscope</td>
			<td>Andor Technology</td>
			<td></td>
			<td>spinning disk confocal microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bovine serum albumin&#160;</td>
			<td>Thermofisher scientific</td>
			<td>37525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buffered oxide etching solution</td>
			<td>Merck</td>
			<td>901621-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CEE Spin Coater</td>
			<td>Brewer Science</td>
			<td>200X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermofisher scientific</td>
			<td>62248</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Developer AZ400K</td>
			<td>Merck</td>
			<td>18441223164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DI Milliq water</td>
			<td>Millipore</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10082147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverslips</td>
			<td>Marienfled</td>
			<td>117650</td>
			<td>1.5H, round 25 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15630080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris software</td>
			<td>BitPlane</td>
			<td></td>
			<td>image analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Transmission optical microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>TSF100-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Labsonic M</td>
			<td>Sartorius Stedium Biotech</td>
			<td></td>
			<td>Ultrasonic homogenizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipidure</td>
			<td>NOF America</td>
			<td>CM5206</td>
			<td>bio-mimetic copolymer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOA73</td>
			<td>Norland Products</td>
			<td>17-345</td>
			<td>UV curable adhesive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15070063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phalloidin</td>
			<td>Thermofisher scientific&#160;</td>
			<td>A12379</td>
			<td>Alexa Fluor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffer Solution</td>
			<td>Thermofisher scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photo Resist AZ5214E</td>
			<td>Merck</td>
			<td>14744719710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pico Plasma tool</td>
			<td>Diener Electronic GmbH + Co. KG</td>
			<td>Pico Plasma</td>
			<td>For O2 plasma treatment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RapiClear 1.52</td>
			<td>Sunjin lab</td>
			<td>RC 152001</td>
			<td>water-soluble clearing agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RCT Hot Plate/Stirrer</td>
			<td>IKA (MY)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reactive Ion Etching tool</td>
			<td>Samco Inc. (JPN)</td>
			<td>RIE-10NR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11875093</td>
			<td>culture medium for HCT116 cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>4019862</td>
			<td>Polydimethylsiloxane or in short, PDMS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloro(1H,1H,2H,2H-perfluorooctyl)silane</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>448931-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T9284</td>
			<td>surfactant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA</td>
			<td>Thermofisher scientific</td>
			<td>15400054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic Cleaner</td>
			<td>Bransonic</td>
			<td>CPX2800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-KUB 2</td>
			<td>KLOE</td>
			<td></td>
			<td>UV-LED light source, 365 nm wavelength, 35 mW/cm2 power density</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV mask aligner</td>
			<td>SUSS Microtec Semiconductor (DE)</td>
			<td>MJB4</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a high-throughput platform for culture and 3d imaging of organoids

Karakteriseringen av ett stort antal tredimensionella (3D) organotypiska kulturer (organoider) vid olika upplösningsskalor begränsas för närvarande av standardavbildningsmetoder. Detta protokoll beskriver ett sätt att förbereda mikrofabricerade organoidodlingschips, som möjliggör multiskalig, 3D-liveavbildning på ett användarvänligt instrument som kräver minimala manipulationer och kan upp till 300 organoider / h-bildgenomströmning. Dessa odlingschips är kompatibla med både luft- och nedsänkningsmål (luft, vatten, olja och silikon) och ett brett spektrum av vanliga mikroskop (t.ex. spinnskiva, punktskannerkonfokal, brett fält och ljusfält). Dessutom kan de användas med ljusarkmodaliteter som SPIM-tekniken (single-objective, single-plane illumination microscopy) (soSPIM). 
Protokollet som beskrivs här ger detaljerade steg för framställning av mikrofabricerade odlingschips och odling och färgning av organoider. Endast en kort tid krävs för att bli bekant med, och förbrukningsvaror och utrustning kan lätt hittas i vanliga biolaboratorier. Här kommer 3D-avbildningsfunktionerna endast att demonstreras med kommersiella standardmikroskop (t.ex. spinnskiva för 3D-rekonstruktion och bredfältsmikroskopi för rutinövervakning).

Figur 8F visar den typiska aspekten av en cellodlingstäckslip efter framgångsrik tillverkning. Det UV-härdbara självhäftande skiktet verkar platt och fäster väl på täckglaset. Överföringen av det självhäftande skiktet på täckglaset kan misslyckas om skiktet på täckglaset är överhärdat eller om avlägsnandet av det plana PDMS-substratet görs felaktigt (som visas i figur 8G,H). I båda fallen är felet uppenbart eftersom ingen...

Watch this Scientific Journal Video about A High-Throughput Platform for Culture and 3D Imaging of Organoids at JoVE.com

A High-Throughput Platform for Culture and 3D Imaging of Organoids

Detta dokument presenterar ett tillverkningsprotokoll för en ny typ av odlingssubstrat med hundratals mikrobehållare per mm2, där organoider kan odlas och observeras med hjälp av högupplöst mikroskopi. Cellsådd- och immunfärgningsprotokollen är också detaljerade.

En plattform med hög kapacitet för odling och 3D-avbildning av organoider

The characterization of a large number of three-dimensional (3D) organotypic cultures (organoids) at different resolution scales is currently limited by ...

Detta protokoll demonstrerar en mikrotexturcellodlingsskål konstruerad för tillväxt av hundratals organoider med kunskap om material och fullt kompatibel med mikroskopi. Vår teknik gör det möjligt att generera tusentals organoider, fullt kompatibla med långvarig avbildning och långsiktig cellodling. Detta protokoll är av stort intresse för biomedicinska tillämpningar såsom pipeline för läkemedelsscreening och cancerforskningsdomäner.Tekniken som presenteras i detta protokoll är lätt att behärska efter några försök av någon som har erfarenhet av laboratorieprocedurer och optisk mikroskopi. För att börja, skär små delar av PDMS-formen till den dimension som krävs för den slutliga enheten. Klipp dem parallellt med matrisens XY-riktningar.Placera en av de förberedda PDMS-formtärningarna med framsidan nedåt på den plana PDMS-sektionen. Använd sedan en pipett, tillsätt cirka 0,1 till 0,2 ml UV-härdbart lim på ena sidan av formen. Följ vätskans progression inuti hålrummet med hjälp av ett inverterat optiskt mikroskop vid 10X förstoring.Utsätt limet för UV-ljus för att härda det. Justera exponeringstiden beroende på UV-källans effekttäthet enligt beskrivningen i textmanuskriptet. Använd överskottet av lim vid ena kanten och håll det härdade limet på det platta PDMS-substratet genom att försiktigt trycka på det med ett finger.Under tiden, med pincett, nypa ett hörn av formen bredvid samma kant som hålls nere och dra långsamt av formen, samtidigt som du ser till att den texturerade filmen inte lyfts. Trimma överflödigt lim och PDMS-substrat med ett rakblad för att lämna det härdade, texturerade och självhäftande skiktet platt på PDMS med överskottssubstratet endast på ena kanten. Behandla ett rent täckglas med en kort syreplasmaprocess för att förbättra dess hydrofilicitet.Efter plasmaaktiveringen, spinnbelägg det tunna lagret av UV-härdbart lim genom att placera täckglaset på vakuumchucken på en vanlig spinnbeläggare och häll en liten droppe lim i mitten av täckglaset. Kör centrifugeringsbeläggningsprocessen enligt beskrivningen i textmanuskriptet. Om centrifugeringsbeläggning inte är tillgänglig, släpp cirka 0,1 ml UV-härdbart lim på ett rent täckglas med en pipett.Ta en andra täckglasning och placera den ovanpå den första för att få det flytande limet att spridas jämnt mellan de två täckglasen. När limmet har nått kanten på täckglasen, separera dem försiktigt genom att skjuta över varandra. När de har separerats kommer båda täckglasen att vara helt belagda med ett tunt lager flytande lim.Efter centrifugeringsbeläggning, förhärda limet genom exponering för UV. Justera exponeringstiden beroende på effekttätheten hos den UV-källa som används. Ta en av de texturerade filmerna och placera den i kontakt med det självhäftande belagda täckglaset. Se till att kontakten mellan det delvis härdade limet och den texturerade filmen är så enhetlig som möjligt.I detta skede bör limmet på täckglaset vara tillräckligt fast för att undvika återflöde och kontakten kan optimeras genom att försiktigt trycka på täckglaset. Utsätt täckglasen för UV-ljus tills det belagda limskiktet är helt härdat. Detta kommer att täta den texturerade filmen på täckglaset och ge läckagesäker isolering mellan omkretshålrummen.Använd sedan pincett, nyp PDMS vid kanten där överskottsmaterialet lämnades efter trimning och dra av PDMS plana underlag. Detta steg gör det möjligt för det texturerade filmskiktet att fästa vid täckglaset med öppen åtkomst högst upp för cellsådd. Före cellsådd, på en anordning passiverad med biometrisk sampolymer som beskrivs i manuskriptet, dispensera en milliliter steril PBS i 35 millimeter cellkultur Petri-skålar.Avgasa skålen med steril PBS med vakuumkammaren i 10 minuter, följt av flera omgångar pipettering för att avlägsna alla bubblor. Byt ut PBS mot sterilt odlingsmedium och sterilisera plattan med UV-ljus i 30 minuter under en cellodlingshuv. Bered en cellsuspension genom att följa rekommendationerna för trypsinisering eller cellsuspensionsberedning för cellerna av intresse som beskrivs i textmanuskriptet.Räkna och justera cellkoncentrationen till 500 000 celler per milliliter i det rekommenderade cellodlingsmediet. Ta bort PBS-bufferten från 35 millimeters cellodlingsskålen och fördela sedan en milliliter av den justerade cellsuspensionen. Placera cellodlingsskålen tillbaka i cellinkubatorn i 10 minuter.Cirka 80 till 100 celler kommer in i varje omkretshålighet. Efter cirka 10 minuters inkubation, återställ cellodlingsskålen från inkubatorn och aspirera försiktigt den cellulära suspensionen för att avlägsna ofångade celler. Tillsätt en milliliter odlingsmedium till odlingsskålen och placera den tillbaka i cellinkubatorn.Valfritt, för att hämta organoiderna efter att de växte i brunnarna, kläm det texturerade limskiktet på skärkanten med pincett och dra försiktigt av det från glasskyddet, men håll det nedsänkt i mediet. Ökad koncentration av biometrisk sampolymer ökade beläggningstjockleken. Fullständig avgasning av cellodlingsskålarna var avgörande för att avlägsna luftbubblor som fångades i omkretshåligheterna.Organoider bildades efter dag två och 15 av odling. Den spinnande skivans konfokalmikroskopi visade representativa bilder av organoiderna och en 3D-rekonstruktion. När du förbereder odlingsskålen är det viktigt att vara uppmärksam på monteringen av formen eller substratstapeln och för att säkerställa god kontakt mellan den texturerade filmen och täckglaset.Inneslutningen som tillhandahålls av våra mikrohåligheter och frånvaron av materialförlust har uppmärksammats av rymdbiologiska forskare som är intresserade av att studera effekten av mikrogravitet på organoid homeostas.

Research

JoVE Journal

Biology

A Multi-compartment CNS Neuron-glia Co-culture Microfluidic Platform

En flera brandceller CNS Neuron-Glia Co-kulturen mikroflödessystem plattform

We present a novel multi-compartment neuron co-culture microsystem platform for in vitro CNS axon-glia interaction research, capable of conducting up to ...

Lensless On-chip Imaging of Cells Provides a New Tool for High-throughput Cell-Biology and Medical Diagnostics

Lensless On-chip Imaging Celler ett nytt verktyg för high-throughput Cell-biologi och medicinsk diagnostik

Conventional optical microscopes image cells by use of objective lenses that work together with other lenses and optical components. While quite ...

A High Throughput Screen for Biomining Cellulase Activity from Metagenomic Libraries

En hög genomströmning skärm för Biomining cellulas aktivitet från Metagenomic bibliotek

Cellulose, the most abundant source of organic carbon on the planet, has wide-ranging industrial applications with increasing emphasis on biofuel ...

Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

Biokemisk och hög kapacitet Mikroskopisk bedömning av fettmassa i<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

The nematode C. elegans has emerged as an important  model for the study of conserved genetic pathways regulating fat metabolism as  it relates to human ...

High Throughput Microinjections of Sea Urchin Zygotes

Hög genomströmning microinjections av Sea Urchin Zygotes

Microinjection into cells and embryos is a common technique that is used to study a wide range of biological processes. In this method a small amount of ...

High-throughput Image Analysis of Tumor Spheroids: A User-friendly Software Application to Measure the Size of Spheroids Automatically and Accurately

Hög kapacitet bildanalys av tumör spheroids: Ett användarvänligt program för att mäta storleken på sfäroider automatiskt och korrekt

The increasing number of applications of three-dimensional (3D) tumor spheroids as an in vitro model for drug discovery requires their adaptation to ...

Recovery of Adult Zebrafish Hearts for High-throughput Applications

Återvinning av vuxna zebrafisk Hjärtan för hög genomströmning Applications

Use of the zebrafish model system for studying development, regeneration, and disease is expanding toward use of adult hearts for cell dissociation and ...

High-throughput Screening for Chemical Modulators of Post-transcriptionally Regulated Genes

Hög kapacitet Screening för kemiska modulatorer av Post-transkription Reglerade Gener

Both transcriptional and post-transcriptional regulation have a profound impact on genes expression. However, commonly adopted cell-based screening assays ...

qPCRTag Analysis - A High Throughput, Real Time PCR Assay for Sc2.0 Genotyping

qPCRTag Analys - En hög genomströmning, Realtid PCR-analys för Sc2.0 Genotypning

The Synthetic Yeast Genome Project (Sc2.0) aims to build 16 designer yeast chromosomes and combine them into a single yeast cell. To date one synthetic ...