Name: a mouse model for the transition of streptococcus pneumoniae from colonizer to pathogen upon viral co-infection recapitulates age-exacerbated illness
Uploaded: 2022-09-28T14:15:00
Duration: 12 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness at JoVE.

We willen Nick Lenhard bedanken voor het kritisch lezen en redigeren van dit manuscript. We willen ook Andrew Camilli en Anthony Campagnari bedanken voor de bacteriestammen en Bruce Davidson voor de virale stammen. Dit werk werd ondersteund door het National Institute of Health Grant (R21AG071268-01) aan J.L. en het National Institute of Health Grants (R21AI145370-01A1), (R01AG068568-01A1), (R21AG071268-01) aan E.N.B.G.

De auteurs hebben geen belangenconflicten bekend te maken.

De meeste van de bestaande S. pneumoniae / IAV co-infectie experimentele studies vertrouwen op bacteriële afgifte in de longen van muizen die vooraf zijn geïnfecteerd met IAV. Deze modellen hebben geholpen bij het identificeren van veranderingen in de longomgeving en systemische immuunrespons die de gastheer vatbaar maken voor secundaire bacteriële infectie 15,16,17,32,33,34,35,36,37. Deze modellen zijn er echter niet in geslaagd om de overgang van S. pneumoniae van een asymptomatische kolonisator naar een pathogeen dat ernstige long- en systemische infecties kan veroorzaken, na te bootsen. Verder zijn deze modellen niet geschikt voor het bestuderen van de gastheerfactoren en gastheer-pathogeen interacties in de bovenste luchtwegen die bijdragen aan de gevoeligheid voor infectie. Een eerder model voor de verplaatsing van pneumokokken van de nasopharynx naar de long na IAV-infectie was gebaseerd op bacteriële infectie van de nasopharynx gevolgd door virale infectie. Het slaagde er echter niet in om de ernstige ziekteverschijnselen te reproduceren die werden waargenomen bij menselijke patiënten21. Het hier beschreven gemodificeerde muizeninfectiemodel vat de overgang van S. pneumoniae van asymptomatisch vervoer naar een pathogeen dat ernstige klinische ziekte veroorzaakt, samen.
Een cruciale stap van dit model is het vaststellen van S. pneumoniae-infectie in de nasopharynx. Streptococcus pneumoniae vormen biofilms en koloniseren de nasopharynx met verschillende efficiënties 21,38. Om een consistente infectie vast te stellen, is ten minste 5 × 106 CFU van de tot nu toe geteste biofilmgekweekte bacteriestammen vereist23. Het wordt aanbevolen om elke nieuwe bacteriestam te testen op stabiele infectie van de nasopharynx voorafgaand aan virale infectie. Voor virale co-infectie hebben eerdere studies aangetoond dat intranasale infectie met IAV vereist is voor de verspreiding van de bacteriën uit de nasopharynx21,22,23. In die eerdere studies werd 500 PFU IAV voor intranasale toediening gebruikt, terwijl in deze studie 200 PFU voldoende was om het aantal bacteriën in de nasopharynx te verhogen. IAV-infectie is niet beperkt tot de bovenste luchtwegen en kan zich verspreiden naar de longen39,40, wat de sleutel is om de longomgeving toleranter te maken voor bacteriële infectie15,16,41. De toediening van IAV aan de longen kan worden bereikt door intranasale toediening of intratracheale installatie van verdoofde muizen. Eerder werk met BALB / cByJ-muizen wees uit dat intranasale toediening resulteert in virale pneumonie21; de toegang van het entmateriaal tot de longen na intranasale inenting is echter beperkter bij C57BL/6-muizen. Bij C57BL/6-muizen is intratracheale installatie vereist voor een consistente afgifte van het virus23. In dit model versnelt eerdere bacteriële kolonisatie de presentatie van ziektesymptomen na virale infectie23. Omdat virale infectie zelf ziektesymptomen kan veroorzaken met mogelijke variatie in kinetiek, wordt aanbevolen om eerst een reeks doses te testen voor elke nieuwe geteste virale stam en een dosis te kiezen die versnelde kinetiek onthult in co-geïnfecteerde gastheren.
De longen bieden een andere kritische uitlezing voor ziekte-evaluatie in dit model. Voor de beoordeling van de pathogene belasting en de instroom van immuuncellen kan een long van dezelfde muis worden gebruikt. Omdat infectie en ernst van de ontsteking echter kunnen verschillen tussen lobben, wordt aanbevolen om geen verschillende lobben van dezelfde long te nemen voor de verschillende beoordelingen. Integendeel, alle lobben kunnen in kleine stukjes worden gehakt, goed met elkaar worden gemengd en vervolgens gelijkelijk worden ontleed voor de verschillende beoordelingen. Evenzo kan de nasopharynx worden gebruikt voor de opsomming van bacteriële CFU of virale PFU en immuunrespons. Het aantal cellen verkregen uit de wasbeurten en het weefsel is echter te laag om flowcytometrie uit te voeren zonder de monsters van muizen binnen dezelfde groep te bundelen. Als alternatief kan ontsteking in de nasopharynx histologisch worden beoordeeld23.
Een cruciaal kenmerk van dit model is dat het de klinische ziekte samenvat die bij patiënten wordt gezien. Bij mensen resulteert secundaire pneumokokkenpneumonie na IAV-infectie vaak in duidelijke tekenen van ziekte, waaronder hoest, kortademigheid, koorts en spierpijn die kunnen leiden tot ziekenhuisopnames, respiratoire insufficiëntie en zelfs de dood 8,15,42,43. Dit model vat de ernstige tekenen van klinische ziekte samen die bij mensen zijn waargenomen in termen van ademhalingsmoeilijkheden (weerspiegeld in de ademhalingsscore) en algehele malaise (weerspiegeld in houdings- en bewegingsscores) die door de muizen worden weergegeven, evenals de dood bij sommige van de gezonde jonge controles. De verergerde ziektesymptomen bij mede-geïnfecteerde muizen zijn waarschijnlijk een gevolg van zowel bacteriële verspreiding naar de longen als een verminderde virale klaring bij muizen met pneumokokkenvervoer23. Een beperking van het model is dat de incidentie van klinische ziekte en bacteriële verspreiding van de nasopharynx varieert tussen muizen en wordt beïnvloed door bacteriestam, gastleeftijd en genotype21,22,23. Als gevolg hiervan kan voor invasieve stammen de progressie van gelokaliseerde infectie (zonder detecteerbare bacteriëmie) tot de dood binnen 24 uur optreden. Daarom moet voor een echte beoordeling van systemische verspreiding bacteriëmie met kortere tussenpozen (elke 6-12 uur) worden gevolgd. Evenzo kan de ziektescore snel veranderen, vooral in de eerste 72 uur na co-infectie. Om de ziektesymptomen nauwlettend te volgen, is het daarom raadzaam om muizen drie keer per dag te controleren gedurende dagen 1-3 na IAV-infectie.
Samenvattend repliceert dit model de beweging van S. pneumoniae van een asymptomatische kolonisator van de nasopharynx naar een pathogeen dat long- en systemische ziekte kan veroorzaken bij IAV-infectie. In dit model activeert IAV de overgang van S. pneumoniae door het bacteriële gedrag in de nasopharynx te wijzigen, de bacteriële verspreiding naar de longen te vergroten en de antibacteriële immuniteit te veranderen23. Evenzo stompt bacterieel transport de antivirale immuunresponsen af en schaadt het de IAV-klaring uit de longen23. Dit maakt dit model ideaal voor het ontleden van veranderingen in immuunresponsen bij enkelvoudige versus polymicrobiële infecties. Bovendien is het verloop van de ziekte na co-infectie gedeeltelijk afhankelijk van de stam van pneumokokken die aanwezig is in de nasopharynx. Daarom is het model geschikt voor het ontleden van de bacteriële factoren die nodig zijn voor asymptomatische kolonisatie versus pathogene overgang van S. pneumoniae. Ten slotte reproduceert dit model de gevoeligheid van veroudering voor co-infecties, en hoewel dit hier niet is getest, kan het gemakkelijk worden gebruikt om de impact van de achtergrond van de gastheer op het ziekteverloop te beoordelen. Kortom, het scheiden van transport en ziekte in verschillende stappen biedt de mogelijkheid om de genetische varianten van zowel de pathogenen als de gastheer te analyseren, waardoor het gedetailleerde onderzoek van de interacties van een belangrijke pathobiont met de gastheer in verschillende stadia van ziekteprogressie mogelijk is. In de toekomst kan dit model worden gebruikt om behandelingsopties voor kwetsbare gastheren op maat te maken.

Streptococcus pneumoniae (pneumokokken) zijn Gram-positieve bacteriën die asymptomatisch verblijven in de nasopharynx van de meeste gezonde personen 1,2. Gepromoot door factoren die niet volledig zijn gedefinieerd, kunnen pneumokokken overgaan van goedaardige kolonisatoren van de nasopharynx naar pathogenen die zich verspreiden naar andere organen, wat resulteert in ernstige infecties, waaronder otitis media, longontsteking en bacteriëmie3. De presentatie van pneumokokkenziekte is gedeeltelijk afhankelijk van stamspecifieke verschillen, waaronder het serotype, dat is gebaseerd op de samenstelling van kapselpolysacchariden. Er zijn tot nu toe meer dan 100 serotypen gekarakteriseerd en sommige zijn geassocieerd met meer invasieve infecties 4,5. Verschillende andere factoren verhogen het risico op pneumokokkenziekte. Een van die factoren is virale infectie, waarbij het risico op pneumokokkenpneumonie 100-voudig wordt verhoogd met IAV 6,7. Historisch gezien is S. pneumoniae een van de meest voorkomende oorzaken van secundaire bacteriële pneumonie na influenza en wordt geassocieerd met slechtere resultaten8. Een andere belangrijke risicofactor is gevorderde leeftijd. In feite is S. pneumoniae de belangrijkste oorzaak van door de gemeenschap verworven bacteriële pneumonie bij ouderen ouder dan 65 jaar 9,10. Ouderen zijn verantwoordelijk voor de meerderheid (>75%) van de sterfgevallen als gevolg van longontsteking en influenza, wat aangeeft dat de twee risicofactoren - veroudering en IAV-infectie - synergetisch de ziektegevoeligheid verergeren11,12,13,14. De mechanismen waarmee virale infectie de overgang van pneumokokken van asymptomatische kolonisator naar invasieve ziekteverwekker veroorzaakt en hoe dit wordt gevormd door gastheerfactoren, blijven echter slecht gedefinieerd. Dit is grotendeels te wijten aan de afwezigheid van een klein diermodel dat de overgang van asymptomatische pneumokokkenkolonisatie naar kritieke klinische ziekte samenvat.
Co-infectiestudies zijn klassiek gemodelleerd bij muizen die 7 dagen na influenza-infectie rechtstreeks in de longen zijn ingeënt met pneumokokken15,16. Dit reproduceert de gevoeligheid voor secundaire bacteriële pneumonie en is ideaal om te bestuderen hoe antivirale immuunresponsen de antibacteriële afweer aantasten17. Longitudinale studies bij mensen hebben echter aangetoond dat pneumokokkenvervoer in de nasopharynx, waar de bacteriën asymptomatische biofilms kunnen vormen18, uniform geassocieerd is met invasieve ziekten19,20. Bacteriële isolaten van infecties van het middenoor, de longen en het bloed zijn genetisch identiek aan die in de nasopharynx20. Om de overgang van asymptomatisch vervoer naar invasieve ziekte na IAV-infectie te bestuderen, werd dus een model opgesteld waarin muizen intranasaal biofilmgekweekte pneumokokken kregen toegediend, gevolgd door IAV-infectie van de nasopharynx21,22. Virale infectie van de bovenste luchtwegen leidde tot veranderingen in de gastheeromgeving die leidden tot de verspreiding van pneumokokken uit biofilms en hun verspreiding naar de onderste luchtwegen21. Deze verspreide bacteriën hadden upregulated expressie van virulentiefactoren die belangrijk zijn voor infectie, waardoor ze werden omgezet van kolonisatoren in pathogenen21. Deze observaties benadrukken de complexe interactie tussen het virus, de gastheer en de bacteriën en tonen aan dat de veranderingen in de gastheer veroorzaakt door virale infectie een directe invloed hebben op het pneumokokkengedrag, wat op zijn beurt het verloop van bacteriële infectie verandert. Dit model slaagt er echter niet in om de ernstige tekenen van ziekte die bij mensen worden waargenomen samen te vatten, waarschijnlijk omdat het virus beperkt is tot de neusholte en de systemische effecten van virale infectie op gastheerimmuniteit en longschade niet worden samengevat.
We hebben onlangs een model opgesteld dat de complexe interactie tussen de gastheer en pathogenen omvat, maar ook de ernst van de ziekte die bij mensen wordt waargenomen beter nabootst23. In dit model worden muizen eerst intranasaal geïnfecteerd met biofilmgekweekte pneumokokken om asymptomatisch transport tot stand te brengen, gevolgd door IAV-infectie van zowel de nasopharynx als de longen. Dit resulteerde in bacteriële verspreiding naar de longen, longontsteking en ziekte die zich ontwikkelde tot dodelijkheid bij een fractie van jonge muizen23. Deze eerdere studie toonde aan dat zowel virale als bacteriële infectie de afweer van de gastheer veranderde: virale infectie bevorderde bacteriële verspreiding en eerdere bacteriële kolonisatie verminderde het vermogen van de gastheer om pulmonale IAV-niveaus te beheersen23. Onderzoek van de immuunrespons onthulde dat IAV-infectie de antibacteriële activiteit van neutrofielen verminderde, terwijl bacteriële kolonisatie de type I-interferonrespons die cruciaal is voor antivirale verdediging afstompte23. Belangrijk is dat dit model de gevoeligheid van veroudering reproduceerde. In vergelijking met jonge muizen vertoonden oude muizen eerder tekenen van ziekte, vertoonden ze ernstigere klinische ziekten en bezweken ze vaker aan infectie23. Het werk dat in dit manuscript wordt gepresenteerd, laat zien dat de mate van ziekte ook afhankelijk is van de bacteriestam, omdat invasieve pneumokokkenstammen een efficiëntere verspreiding vertonen bij IAV-infectie, meer openlijke tekenen van longontsteking vertonen en resulteren in versnelde ziektepercentages in vergelijking met niet-invasieve stammen. Dit S. pneumoniae /IAV co-infectiemodel maakt dus het gedetailleerde onderzoek van zowel pathogene als gastheerfactoren mogelijk en is zeer geschikt voor het bestuderen van immuunresponsen op polymicrobiële infecties in de verschillende stadia van ziekteprogressie.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-Aminobenzoic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1267318</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well round bottom plates</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>650101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m Filters</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>07-201-432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC147440250</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avicel</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>501785325</td>
			<td>Microcyrstalline cellulose&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Cytofix Fixation Buffer&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BDB554655</td>
			<td>Fixation Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Fortessa</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Flow cytometer&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Intramedic Polyethylene Tubing&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>427410</td>
			<td>Tubing for nasal lavage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Disposable Syringes with Luer-Lok Tips (1 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-823-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Microtainer Capillary Blood Collector and BD Microgard Closure</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>02-675-185</td>
			<td>Blood collection tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beta-Nicotinamide adenine dinucleotide</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6233703</td>
			<td>Mix IV stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC230090010</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>#000644</td>
			<td>Mice used in this study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride Anhydrous</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>C77-500</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD103 BV 421</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB562771</td>
			<td>Clone: M290 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11b APC</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-112-9622</td>
			<td>Clone: M1/70, DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11c PE</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB565592</td>
			<td>Clone: N418 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 AF 488</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>OB153030</td>
			<td>Clone: 145-2C11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD4 V450</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>BDB560470</td>
			<td>Clone: RM4.5 DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 APC eF-780</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-9642</td>
			<td>Clone: 30-F11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 PE</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-103-70</td>
			<td>Clone: 30-F11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD8&#945; BV 650</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>BDB563234</td>
			<td>Clone: 53-6.7 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Choline chloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC110290500</td>
			<td>Final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Disposable Vacuum Filter/Storage Systems</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>09-761-107</td>
			<td>Filter sterilzation apparatus&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Tissue Culture Treated T-25 Flasks</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>10-126-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;Costar Clear Multiple Well Plates</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>07-201-590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;DMEM With L-Glutamine and 4.5 g/L Glucose; Without Sodium Pyruvate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>MT10017CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanocobalamin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC405925000</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D39</td>
			<td>National Collection of Type Culture (NCTC)</td>
			<td>NCTC 7466</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Alanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1023114</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Calcium pantothenate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC243301000</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>D16-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase&#160;</td>
			<td>Worthington Biochemical&#160;</td>
			<td>LS002147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eagles Minimum Essential Medium</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH4616-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EF3030</td>
			<td>Center for Disease Control and Prevention&#160;</td>
			<td>Available via the isolate bank request</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain, request using strain name</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F480 PE Cy7</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-9713</td>
			<td>Clone: BMB DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 50 mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-432-22</td>
			<td>50 mL round bottom tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Round-Bottom Polypropylene Test Tubes With Cap</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-959-11B</td>
			<td>15 mL round bottom tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Round-Bottom Polystyrene Test Tubes (5 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-959-5</td>
			<td>FACS tubes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ferric Nitrate Nonahydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>I110-100</td>
			<td>Mix III stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Delicate Dissecting Scissors</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-951-5</td>
			<td>Instruments used for harvest</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Disposable Inoculating Loops&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-363-602</td>
			<td>Inoculating loops&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Dissecting Tissue Forceps</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>13-812-38</td>
			<td>Forceps for harvest</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Premium Microcentrifuge Tubes: 1.5 mL</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>05-408-137</td>
			<td>Micocentrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand&#160;Sterile Syringes for Single Use (10 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-955-459</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Folic Acid</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC216630500</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco RPMI 1640 (ATCC)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A1049101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;DPBS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14190250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;HBSS, calcium, magnesium, no phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14025134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;MEM (Temin&#39;s modification) (2x), no phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>11-935-046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>15-140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Trypan Blue Solution, 0.4%</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>15-250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>25-200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol (Certified ACS)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>G33-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AA3643530</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1202414</td>
			<td>Mix II stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen UltraComp eBeads Compensation Beads</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>50-112-9040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron (II) sulfate heptahydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1517836</td>
			<td>Mix III stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Alanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6027918</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Arginine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1573814</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Asparagine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAB2147322</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Aspartic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1352022</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cysteine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1043518</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cysteine hydrochloride monohydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1038914</td>
			<td>Final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cystine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1376218</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC156211000</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>O2956-100</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Histidine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC166150250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES LIVE/DEAD Fixable Blue Dead Cell Stain Kit, for UV excitation</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-112-1524</td>
			<td>Clone: N/A DF 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Isoleucine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC166170250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Leucine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP385-100</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Lysine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6222514</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Methionine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1031822</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low endotoxin BSA&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A1470-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Phenylalanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1323814</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Proline</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1019922</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Serine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC132660250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Threonine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC138930250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Tryptophan</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1023014</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Valine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1272014</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ly6C BV 605</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB563011</td>
			<td>Clone: AL-21 DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ly6G AF 488&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>NC1102120</td>
			<td>Clone: IA8, DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cells&#160;</td>
			<td>American Type Culture Collection (ATCC)</td>
			<td>CCL-34</td>
			<td>MDCK cell line for PFU analuysis&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate 7-Hydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>60-019-68</td>
			<td>CDM starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manganese Sulfate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>M113-500</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MilQ water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Ultra-pure water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Fc Block</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB553142</td>
			<td>Clone: 2.4G2 DF 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MWI VETERINARY&#160;PURALUBE VET OINTMENT</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC1886507</td>
			<td>Eye lubricant for infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NCI-H292 mucoepidermoid carcinoma cell line&#160;</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1848</td>
			<td>H292 lung epithelial cell line for biofilm growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Niacinamide</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>18-604-792</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NK 1.1 AF 700</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-4692</td>
			<td>Clone: PK136 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxyrase For Broth 50Ml Bottle 1/Pk</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>50-200-5299</td>
			<td>To remove oxygen from liquid cultures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 4% in PBS</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td>J19932-K2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pivetal Isoflurane&#160;</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-893-8440</td>
			<td>Isoflurane for anesthesia during infection&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate Dibasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P288-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P285-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridoxal hydrochloride&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC352710250</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridoxamine dihydrochloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6267906</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Riboflavin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC132350250</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Acetate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>0530-500G</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide&#160;</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP922I-500</td>
			<td>For FACS buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S233-500</td>
			<td>Starter stock and final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Dibasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S374-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S369-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCR APC&#160;</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-8889</td>
			<td>Clone: GL-3 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCR&#946; APC-Cy7</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>BDB560656</td>
			<td>Clone: H57-597 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Blood Agar with Gentamicin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>R01227</td>
			<td>Blood agar plates with the antibiotic gentamicin&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific&#160;Trypsin, TPCK Treated</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>PI20233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiamine hydrochloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC148991000</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TIGR4</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>BAA-334</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uracil</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC157300250</td>
			<td>Mix II stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worthington Biochemical Corporation&#160;Collagenase, Type 2, 1 g</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC9693955</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model for the transition of streptococcus pneumoniae from colonizer to pathogen upon viral co-infection recapitulates age-exacerbated illness

Streptococcus pneumoniae (pneumokokken) is een asymptomatische kolonisator van de nasopharynx bij de meeste individuen, maar kan zich ontwikkelen tot een pulmonale en systemische ziekteverwekker bij influenza A-virus (IAV) infectie. Gevorderde leeftijd verhoogt de gevoeligheid van de gastheer voor secundaire pneumokokkenpneumonie en wordt geassocieerd met verslechterde ziekte-uitkomsten. De gastheerfactoren die deze processen aansturen, zijn niet goed gedefinieerd, deels vanwege een gebrek aan diermodellen die de overgang van asymptomatische kolonisatie naar ernstige klinische ziekte reproduceren. 
Dit artikel beschrijft een nieuw muismodel dat de overgang van pneumokokken van asymptomatisch vervoer naar ziekte na virale infectie nabootst. In dit model worden muizen eerst intranasaal ingeënt met biofilmgekweekte pneumokokken om asymptomatisch vervoer vast te stellen, gevolgd door IAV-infectie van zowel de nasopharynx als de longen. Dit resulteert in bacteriële verspreiding naar de longen, longontsteking en duidelijke tekenen van ziekte die kunnen evolueren naar dodelijkheid. De mate van ziekte is afhankelijk van de bacteriestam en gastheerfactoren. 
Belangrijk is dat dit model de gevoeligheid van veroudering reproduceert, omdat oude muizen in vergelijking met jonge muizen ernstiger klinische ziekten vertonen en vaker aan de ziekte bezwijken. Door transport en ziekte in verschillende stappen te scheiden en de mogelijkheid te bieden om de genetische varianten van zowel de ziekteverwekker als de gastheer te analyseren, maakt dit S. pneumoniae / IAV-co-infectiemodel het mogelijk om de interacties van een belangrijke pathobiont met de gastheer in verschillende stadia van ziekteprogressie gedetailleerd te onderzoeken. Dit model kan ook dienen als een belangrijk hulpmiddel voor het identificeren van potentiële therapeutische doelen tegen secundaire pneumokokkenpneumonie bij gevoelige gastheren.

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness at JoVE.

A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness

Dit artikel beschrijft een nieuw muismodel voor de overgang van pneumokokken van een asymptomatische kolonisator naar een ziekteverwekkende ziekteverwekker tijdens virale infectie. Dit model kan gemakkelijk worden aangepast om polymicrobiële en gastheer-pathogeen interacties te bestuderen tijdens de verschillende fasen van ziekteprogressie en tussen verschillende gastheren.

Een muismodel voor de overgang van Streptococcus pneumoniae van kolonisator naar pathogeen bij virale co-infectie vat leeftijdsverergerde ziekte samen

Streptococcus pneumoniae (pneumococcus) is an asymptomatic colonizer of the nasopharynx in most individuals but can progress to a pulmonary and systemic ...

Deze methode beschrijft een nieuw muismodel voor het bestuderen van de overgang van pneumokokken van een asymptomatische kolonisator naar een ziekteverwekkende ziekteverwekker tijdens virale infectie. Het bootst beter na wat er bij mensen gebeurt. Dit model kan een belangrijk hulpmiddel zijn voor het identificeren van potentiële therapeutische doelen tegen de secundaire pneumokokkenpneumonie bij gevoelige gastheren.Dit model reproduceert de gevoeligheid van veroudering. Daarom kan het worden gebruikt om te begrijpen welke aspecten van de gastheer defect raken met de leeftijd en ons in staat stellen om behandelingsopties op maat te maken voor kwetsbare oudere gastheren. Het kweken van pneumokokkenbiofilm is een uitdaging omdat de verschillende stammen verschillende hoeveelheden tijd in beslag nemen.Mijn advies is om te proberen de biofilm te kweken voordat je de dierstudie uitvoert. Zodra de H292-cellen 100% confluent zijn, wast u de cellen driemaal met PBS. Voeg vervolgens 250 microliter 4% paraformaldehyde per put toe om de cellen te fixeren en incuber gedurende een uur op ijs of 's nachts bij vier graden Celsius.Strake streptococcus pneumoniae stam van belang op bloed agar plaat en incubeer 's nachts bij 37 graden Celsius en 5% koolstofdioxide. De volgende dag ent u de bacteriën van de plaat in verse, chemisch gedefinieerde media of CDM plus Oxyrase door de bacteriën van de plaat te wassen door een milliliter van het CDM plus Oxyrase toe te voegen en de bacteriekolonies voorzichtig op te tillen met behulp van de zijkant van een pipetpunt van één milliliter, waarbij u voorzichtig bent om de agar niet te schrapen. Verdun de bacteriecultuur in CDM plus Oxyrase tot een start-OD 600 van 0,05.Laat de bacteriën vervolgens groeien in een losjes afgedekte conische buis van 50 milliliter bij 37 graden Celsius en 5% koolstofdioxide totdat OD van 0,2 is bereikt. Vervolgens vortex de bacteriële kweekbuis. Zaai 0,5 milliliter van de cultuur op de vaste H292-cellen en voeg nog eens 0,5 milliliter CDM plus Oxyrase-medium per put toe.Voeg CDM plus Oxyrase toe aan de controleputten zonder bacteriën. Incubeer de plaat gedurende 48 uur bij 34 graden Celsius en 5% koolstofdioxide. Vervang elke 12 uur, na het eerste zaaien, voorzichtig de 0,5 milliliter van het medium door vers CDM plus Oxyrase.Pas op dat u de vorming van biofilm niet verstoort. Controleer de onderkant van de plaat op biofilm en zoek naar toenemende bewolking naarmate de tijd vordert als gevolg van biofilmgroei. Verwijder na 48 uur het supernatant en was de biofilm tweemaal met één milliliter PBS.Suspendeerde vervolgens de biofilm in één milliliter vers CDM en pipet krachtig op en neer om de biofilm op te tillen. Voeg voor elke bacteriestam de cultuur uit alle putten samen in een buis van 50 milliliter. Meng goed door de strak afgedekte buis een paar keer voorzichtig op en neer te kantelen.Voeg vervolgens 40% glycerol en CDM toe bij gelijke volumes om een bacteriële suspensie te bereiken met een eindconcentratie van 20% glycerol. Aliquot een milliliter in een microcentrifugebuis, flash bevriest op droogijs en bespaart bij min 80 graden Celsius. Ontdooi de biofilm gekweekte aliquots op ijs en draai op 1.700 G gedurende vijf minuten.Verwijder het supernatant voorzichtig en gooi het weg zonder de pellet te verstoren. Was de pellet vervolgens door deze opnieuw te laten zweven in één milliliter PBS en draai hem opnieuw. Verwijder het supernatant en resuspensie van de pellet in het volume dat nodig is om de gewenste concentratie te bereiken.Ent de C57 zwarte zes mannelijke muis intranasaal met vijf maal 10 tot de zesde kolonievormende eenheden of CFU door vijf microliter van het verdunde entmateriaal in elke naris te pipetteren. Houd de muis na inenting stevig vast en stabiliseer het hoofd totdat het volume wordt ingeademd. Zodra het virus is ontdooid, verdunt u het virus in PBS tot de gewenste concentratie.Plaats oftalmisch glijmiddel op de ogen van de muis voorafgaand aan de anesthesie. Infecteer de verdoofde muis onmiddellijk met 50 microliter van 20 plaquevormende eenheden, of PFU, van influenza A-virus of IAV intratracheaal door een stomp pincet te gebruiken om de tong uit de mond te trekken en het volume vloeistof door de luchtpijp te pipetteren. Na herstel intranasaal 10 microliter 200 PFU IAV intranasaal enten met behulp van de eerder beschreven inentingsmethode.Voor het verzamelen van longen, met behulp van een dissectieschaar, knipt u de zijkanten van de blootgestelde ribbenkast en trekt u de ribben voorzichtig omhoog naar de kop van de muis om het hart bloot te leggen. Steek een naald van 25 gauge bevestigd aan een 10 milliliter spuit voorgevuld met PBS in de rechter ventrikel en begin langzaam te persen. Zoek naar bleken van de longen als een indicator van succesvolle perfusie.Spoel langzaam om te voorkomen dat het longweefsel breekt. Til het hart op met een tang en maak een snee om de longen en het hart te scheiden. Eenmaal gescheiden, pak alle lobben van de long op met een tang en spoel in een schaal met steriele PBS om eventueel achtergebleven bloed te verwijderen.Hak in een petrischaaltje de long in kleine stukjes en meng goed. Verwijder de helft van het longmengsel om de bacteriële CFU of virale PFU te bepalen en plaats deze in een ronde bodembuis van 15 milliliter voorgevuld met 0,5 milliliter PBS voor homogenisatie. Verwijder de andere helft van de long voor flowcytometrie en plaats deze in een niet-weefselkweek behandelde 24-well plaat met elke put voorgevuld met 0,5 milliliter RP10.Laat op kamertemperatuur staan tot de verwerking. Om het verzamelde weefsel te homogeniseren, reinigt u de homogenisatorsonde door deze in 70% ethanol te plaatsen en de homogenisator gedurende 30 seconden op 60% vermogen in te schakelen. Herhaal deze stap gedurende 10 seconden in steriel water.Homogeniseer elk weefsel gedurende één minuut. Voor het opsommen van bacteriële nummers, plaat seriële verdunningen op bloed agar platen. Om de totale CFU te berekenen, gebruikt u 10 microliter om te platen en noteer u het uiteindelijke volume in milliliter voor elk monster.Plaats de nasopharynxmonsters op bloedagarplaten aangevuld met drie microgram per milliliter gentamycine om de groei van S pneumoniae te selecteren en tegelijkertijd de groei van andere micro-organismen te remmen. Incubeer 's nachts bij 37 graden Celsius en 5% koolstofdioxide. Voeg voor flowcytometrie 500 microliter verteringsbuffer toe aan elke put van een 24-putplaat met een longmonster.Incubeer de plaat gedurende 45 minuten tot een uur. Beweeg vervolgens met behulp van een P-1000 micropipet de verteerde longen en plaats ze op het filter. Gebruik vervolgens de zuiger van een spuit van drie milliliter om het monster te pureren.Biofilmgroei S.pneumoniae inoculum resulteert in een consistente pneumokokkenwagen beperkt tot de nasopharynx terwijl systematische verspreiding wordt vermeden. De ziektepresentatie bij S pneumoniae IAV co-geïnfecteerde muizen was afhankelijk van de bacteriestam. Hoewel er geen significant verschil was in bacteriële aantallen van de nasopharynx tussen een van de stammen, verspreidden S pneumoniae, TIGR4 en D39, maar niet EF3030 zich 48 uur na IAV-infectie naar de longen.40% van de muizen geïnfecteerd met S pneumoniae TIGR4 vertoonde bacteriële verspreiding naar de longen en daarvan werd de helft bacteremic. Muizen geïnfecteerd met S pneumoniae D39 vertoonden 100% verspreiding naar de longen en de helft daarvan ervoer bacteriëmie. Bij het volgen van de totale overleving, ongeacht de bacteriestam, was de overlevingskans van mede-geïnfecteerde muizen significant lager dan de muizen die afzonderlijk werden uitgedaagd met S pneumoniae.Dit model werd ook gebruikt om de aanwezigheid van verschillende immuuncellen in de longen na IAV-infectie te beoordelen. De bacteriestammen D39 en TIGR4 veroorzaakten een significante toename boven de uitgangswaarde in de instroom van inflammatoire immuuncellen uit de circulatie, zoals neutrofielen en monocyten, terwijl EF3030 dat niet deed. IAV-infectie alleen veroorzaakte een significante toename boven de uitgangswaarde in de instroom van immuuncellen zoals NK-cellen en gammadelta T-cellen.Deze antivirale reacties waren significant afgestompt bij muizen intranasaal geïnfecteerd met S pneumoniae voorafgaand aan virale challenge. Bij enkelvoudig geïnfecteerde muizen varieerden de virale titers niet tussen de jonge en oudere cohorten. Oude muizen vertoonden eerdere en aanzienlijk ernstigere ziekteverschijnselen en stierven sneller, binnen 24 uur, terwijl de jonge controles de infectie beter overleefden.Door transport en ziekte in verschillende stappen te scheiden, kunnen we zowel de immuunrespons als de bacteriële en of virale factoren onderzoeken die belangrijk zijn in verschillende fasen van ziekteprogressie. We hopen dat dit model door andere laboratoria zal worden aangepast om andere polymicrobiële interacties en interacties met gastheerpathogenen te bestuderen tijdens verschillende fasen van ziekteprogressie en tussen de verschillende gastheren.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Met behulp van Bioluminescent Imaging naar Synergie Onderzoek Between Streptococcus pneumoniae En influenza A-virus bij jonge muizen

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Live cell imaging van Bacillus subtilis En Streptococcus pneumoniae Met Automatisch Time-lapse Microscopie

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

Gebruik van de EpiAirway Model voor het karakteriseren van op lange termijn gastheer-pathogeen interacties

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

De<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Muis Model: Studeren pathogeen en gastheer Bijdragen aan infectieuze colitis

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Karakterisering van inflammatoire reacties tijdens intranasale kolonisatie met Streptococcus pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Monitoring Veranderingen in Membrane Polariteit, Membraan Integriteit, en intracellulaire Ion concentraties in<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Het gebruik van fluorescente kleurstoffen

Membrane depolarization and ion fluxes are events that have been studied extensively in biological systems due to their ability to profoundly impact ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Capsulaire Serotypering van<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; De Queliung Reaction

There are over 90 different capsular serotypes of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). As well as being a tool for understanding pneumococcal ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Een muismodel voor pathogenen geïnduceerde Chronische ontsteking op lokale en systemische sites

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Capsulaire Serotypering van<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Door Latex Agglutinatie

Latex agglutination reagents are widely used in microbial diagnosis, identification and serotyping. Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) is a major ...

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

Een<em&gt; In Vitro</em&gt; Model voor het meten van immuunrespons op Malaria in de context van HIV Co-infectie

Malaria and HIV co-infection is a growing health priority. However, most research on malaria or HIV currently focuses on each infection individually. ...