Name: a mouse model for the transition of streptococcus pneumoniae from colonizer to pathogen upon viral co-infection recapitulates age-exacerbated illness
Uploaded: 2022-09-28T14:15:00
Duration: 12 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness at JoVE.

ברצוננו להודות לניק לנהרד על הקריאה והעריכה הביקורתית של כתב היד הזה. ברצוננו להודות גם לאנדרו קמילי ואנתוני קמפנארי על זני החיידקים ולברוס דייווידסון על הזנים הנגיפיים. עבודה זו נתמכה על ידי מענק המכון הלאומי לבריאות (R21AG071268-01) ל- J.L. והמכון הלאומי למענקי בריאות (R21AI145370-01A1), (R01AG068568-01A1), (R21AG071268-01) ל- E.N.B.G.

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

רוב המחקרים הניסיוניים הקיימים של S. pneumoniae/IAV מסתמכים על העברת חיידקים לריאות של עכברים שנדבקו מראש ב-IAV. מודלים אלה סייעו לזהות שינויים בסביבת הריאות ובתגובה חיסונית מערכתית שהופכים את המארח לרגיש לזיהום חיידקי משני15,16,17,32,33,34,35,36,37. עם זאת, מודלים אלה לא הצליחו לחקות את המעבר של S. pneumoniae מ colonizer אסימפטומטית לפתוגן המסוגל לגרום לזיהומים ריאתיים וסיסטמיים חמורים. יתר על כן, מודלים אלה אינם מתאימים לחקר הגורמים המארחים ואינטראקציות מארח-פתוגן בדרכי הנשימה העליונות התורמות לרגישות לזיהום. מודל קודם לתנועה של פנאומוקוקים מהלוע לריאה לאחר זיהום IAV הסתמך על זיהום חיידקי של הלוע ואחריו זיהום ויראלי. עם זאת, הוא לא הצליח לשחזר את סימני המחלה החמורים שנצפו בחולים אנושיים21. מודל זיהום מורין שונה המתואר כאן משחזר את המעבר של S. pneumoniae מהובלה אסימפטומטית לפתוגן הגורם למחלה קלינית קשה.
שלב קריטי של מודל זה הוא הקמת זיהום S. pneumoniae ב nasopharynx. Streptococcus pneumoniae יוצרים ביופילמים ומאכלסים את הלוע ביעילות שונה21,38. כדי לבסס זיהום עקבי, נדרשים לפחות 5 × 106 CFU של זני חיידקים שגודלו בביופילם שנבדקו עד כה23. מומלץ לבדוק כל זן חיידקי חדש לזיהום יציב של הלוע לפני הדבקה ויראלית. עבור זיהום משותף ויראלי, מחקרים קודמים מצאו כי זיהום תוך אפי עם IAV נדרש לפיזור החיידקים מן הלוע21,22,23. במחקרים קודמים אלה, 500 PFU של IAV עבור משלוח intranasal שימשו, בעוד במחקר זה, 200 PFU היו מספיקים כדי להגדיל את מספר החיידקים בלוע. זיהום IAV אינו מוגבל לדרכי הנשימה העליונות ויכול להתפשט לריאות39,40, שהוא המפתח להפיכת הסביבה הריאתית למתירנית יותר לזיהום חיידקי15,16,41. משלוח IAV לריאות יכול להיות מושג על ידי משלוח intranasal או התקנה intratracheal של עכברים מורדמים. עבודה קודמת עם עכברי BALB/cByJ מצאה כי העברה תוך אפית גורמת לדלקת ריאות ויראלית21; עם זאת, הגישה של החיסון לריאות לאחר חיסון תוך אפי מוגבלת יותר בעכברי C57BL/6. בעכברי C57BL/6, נדרשת התקנה תוך טרכאלית לאספקה עקבית של הנגיף23. במודל זה, נשאות חיידקים קודמת מאיצה את הצגת תסמיני המחלה לאחר זיהום ויראלי23. מכיוון שזיהום ויראלי כשלעצמו יכול לגרום לתסמיני מחלה עם שונות פוטנציאלית בקינטיקה, מומלץ לבדוק תחילה מגוון מינונים לכל זן נגיפי חדש שנבדק ולבחור מינון החושף קינטיקה מואצת אצל מארחים שנדבקו במשותף.
הריאות מספקות קריאה קריטית נוספת להערכת מחלות במודל זה. להערכת נטל הפתוגן וזרם תאי החיסון, ניתן להשתמש בריאה מאותו עכבר. עם זאת, מכיוון שזיהום וחומרת דלקת יכולים להיות שונים בין אונות, מומלץ לא לקחת אונות שונות של אותה ריאה להערכות השונות. במקום זאת, ניתן לטחון את כל האונות לחתיכות קטנות, לערבב היטב יחד, ואז לנתח אותן באופן שווה עבור ההערכות השונות. באופן דומה, nasopharynx יכול לשמש לספירה של CFU חיידקי או PFU נגיפי ותגובה חיסונית. עם זאת, מספר התאים המתקבלים מהשטיפות והרקמה נמוך מכדי לבצע ציטומטריית זרימה מבלי לאגד את הדגימות מעכברים באותה קבוצה. לחלופין, דלקת בלוע ניתן להעריך היסטולוגית23.
מאפיין קריטי של מודל זה הוא שהוא משחזר את המחלה הקלינית שנצפתה בחולים. בבני אדם, דלקת ריאות פנאומוקוקית משנית לאחר זיהום IAV גורמת לעתים קרובות לסימנים ברורים של מחלה, כולל שיעול, קוצר נשימה, חום וכאבי שרירים שיכולים להוביל לאשפוזים, כשל נשימתי, ואפילו מוות 8,15,42,43. מודל זה משחזר את הסימנים החמורים של מחלה קלינית שנצפו בבני אדם במונחים של קשיי נשימה (המשתקפים בניקוד הנשימה) וחולשה כללית (המשתקפת בציוני יציבה ותנועה) שהוצגו על ידי העכברים, כמו גם מוות בחלק מקבוצת הביקורת הצעירה והבריאה. תסמיני המחלה המחמירים בעכברים שנדבקו במשותף הם ככל הנראה תוצאה של הפצת חיידקים לריאות ופגיעה בסילוק הנגיפים בעכברים עם נשאה פנאומוקוקית23. מגבלה של המודל היא ששכיחות המחלה הקלינית והפצת החיידקים מהלוע משתנה בין עכברים ומושפעת מזן חיידקי, גיל המאכסן וגנוטיפ21,22,23. המשקף זאת, עבור זנים פולשניים, ההתקדמות מזיהום מקומי (ללא חיידק ניתן לזיהוי) למוות יכולה להתרחש תוך 24 שעות. לכן, להערכה אמיתית של התפשטות מערכתית, יש לעקוב אחר חיידקים בפרקי זמן קצרים יותר (כל 6-12 שעות). באופן דומה, ציון המחלה יכול להשתנות במהירות, במיוחד ב -72 השעות הראשונות לאחר זיהום משותף. לכן, כדי לעקוב מקרוב אחר תסמיני המחלה, מומלץ לעקוב אחר עכברים שלוש פעמים ביום במשך ימים 1-3 לאחר זיהום IAV.
לסיכום, מודל זה משכפל את התנועה של S. pneumoniae ממתיישב אסימפטומטי של הלוע לפתוגן המסוגל לגרום למחלה ריאתית וסיסטמית עם זיהום IAV. במודל זה, IAV מעורר את המעבר של S. pneumoniae באמצעות שינוי ההתנהגות החיידקית בלוע, הגברת התפשטות החיידקים לריאה, ושינוי חסינות אנטיבקטריאלית23. באופן דומה, הובלת חיידקים מקהה את התגובה החיסונית האנטי-ויראלית ופוגעת בסילוק IAV מהריאות23. זה הופך את המודל הזה לאידיאלי לניתוח שינויים בתגובות החיסון בזיהומים חד-מיקרוביאליים לעומת זיהומים רב-מיקרוביאליים. בנוסף, מהלך המחלה לאחר זיהום משותף תלוי, בחלקו, בזן של pneumococci נוכח nasopharynx. לכן, המודל מתאים לנתח את הגורמים החיידקיים הדרושים לנשאות אסימפטומטית לעומת מעבר פתוגני של S. pneumoniae. לבסוף, מודל זה משחזר את רגישות ההזדקנות לזיהומים משותפים, ולמרות שזה לא נבדק כאן, ניתן להשתמש בו בקלות כדי להעריך את ההשפעה של רקע המארח על מהלך המחלה. לסיכום, הפרדת ההובלה והמחלה לשלבים נפרדים מספקת הזדמנות לנתח את הווריאנטים הגנטיים הן של הפתוגנים והן של המאכסן, ומאפשרת בחינה מפורטת של יחסי הגומלין של פתוביונט חשוב עם המארח בשלבים שונים של התקדמות המחלה. בעתיד, מודל זה יכול לשמש להתאמת אפשרויות טיפול עבור מארחים פגיעים.

Streptococcus pneumoniae (pneumococcus) הם חיידקים גראם-חיוביים השוכנים באופן אסימפטומטי בלוע של רוב האנשים הבריאים 1,2. מקודם על ידי גורמים שאינם מוגדרים לחלוטין, pneumococci יכול לעבור ממתיישבים שפירים של nasopharynx לפתוגנים המתפשטים לאיברים אחרים וכתוצאה מכך זיהומים חמורים, כולל דלקת האוזן התיכונה, דלקת ריאות, חיידקים, חיידקי3. הצגת מחלת הפנאומוקוק תלויה בחלקה בהבדלים ספציפיים לזן, כולל הסרוטיפ, המבוסס על הרכב פוליסכרידים קפסולריים. עד כה אופיינו מעל 100 סרוטיפים, וחלקם קשורים לזיהומים פולשניים יותר 4,5. מספר גורמים נוספים מגבירים את הסיכון למחלת פנאומוקוק. גורם אחד כזה הוא זיהום ויראלי, שבו הסיכון לדלקת ריאות פנאומוקוקית גדל פי 100 על ידי IAV 6,7. מבחינה היסטורית, S. pneumoniae הוא אחד הגורמים השכיחים ביותר לדלקת ריאות חיידקית משנית לאחר שפעת והוא קשור לתוצאות גרועות יותר8. גורם סיכון מרכזי נוסף הוא הגיל המתקדם. למעשה, S. pneumoniae הוא הגורם המוביל לדלקת ריאות חיידקית שנרכשה בקהילה בקרב קשישים מעל גיל65 9,10. קשישים מהווים את רוב (>75%) ממקרי המוות כתוצאה מדלקת ריאות ושפעת, מה שמצביע על כך ששני גורמי הסיכון - הזדקנות וזיהום IAV - מחמירים באופן סינרגטי את הרגישות למחלות11,12,13,14. עם זאת, המנגנונים שבאמצעותם זיהום ויראלי גורם למעבר של פנאומוקוקים ממתיישב אסימפטומטי לפתוגן פולשני וכיצד זה מעוצב על ידי גורמים מארחים נותרו מוגדרים בצורה גרועה. זה נובע בעיקר מהיעדר מודל של בעלי חיים קטנים המשחזר את המעבר מנשאות פנאומוקוק אסימפטומטית למחלה קלינית קריטית.
מחקרי זיהום משותף מודלו באופן קלאסי בעכברים שחוסנו בפנאומוקוקים ישירות לריאות 7 ימים לאחר זיהום שפעת15,16. זה משחזר את הרגישות לדלקת ריאות חיידקית משנית והוא אידיאלי לחקר האופן שבו תגובות חיסוניות אנטי-ויראליות פוגעות בהגנות אנטיבקטריאליות17. עם זאת, מחקרי אורך בבני אדם הוכיחו כי נשיאת פנאומוקוק בלוע, שם החיידקים יכולים ליצור ביופילמים אסימפטומטיים18, קשורה באופן אחיד למחלות פולשניות 19,20. חיידקים מבודדים מזיהומים של האוזן התיכונה, הריאה והדם זהים גנטית לאלה הנמצאים בלוע20. לכן, כדי לחקור את המעבר מהובלה א-סימפטומטית למחלה פולשנית בעקבות זיהום IAV, הוקם מודל שבו עכברים קיבלו פנאומוקוקים שגודלו בביופילם תוך אפי ואחריו זיהום IAV של הלוע21,22. זיהום ויראלי של דרכי הנשימה העליונות הוביל לשינויים בסביבה המארחת שהובילו לפיזור הפנאומוקוקים מהביופילמים והתפשטותם לדרכי הנשימה התחתונות21. חיידקים מפוזרים אלה היו בעלי ביטוי מוגבר של גורמי אלימות החשובים לזיהום, והפכו אותם ממתיישבים לפתוגנים21. תצפיות אלה מדגישות את האינטראקציה המורכבת בין הנגיף, המאכסן והחיידק ומראות כי לשינויים במארח הנגרמים על ידי זיהום ויראלי יש השפעה ישירה על התנהגות הפנאומוקוק, אשר, בתורו, משנה את מהלך הזיהום החיידקי. עם זאת, מודל זה אינו מצליח לשחזר את סימני המחלה החמורים שנצפו בבני אדם, ככל הנראה משום שהנגיף מוגבל לחלל האף, וההשפעות המערכתיות של זיהום ויראלי על חסינות המאכסן ונזק לריאות אינן משוחזרות.
לאחרונה ביססנו מודל המשלב את האינטראקציה המורכבת בין המאכסן לפתוגנים, אך גם מחקה באופן הדוק יותר את חומרת המחלה שנצפתה בבני אדם23 . במודל זה, עכברים נדבקים תחילה תוך אפית בפנאומוקוקים שגודלו בביופילם כדי ליצור הובלה א-סימפטומטית, ולאחר מכן זיהום IAV הן בלוע והן בריאות. זה הביא להפצת חיידקים לריאות, דלקת ריאות ומחלות שהתקדמו לקטלניות אצל חלק קטן מהעכברים הצעירים23. מחקר קודם זה הראה כי הן זיהום ויראלי והן זיהום חיידקי שינו את הגנת המאכסן: זיהום נגיפי קידם הפצת חיידקים, והתיישבות חיידקים קודמת פגעה ביכולתו של המארח לשלוט ברמות IAV ריאתי23. בחינת התגובה החיסונית גילתה כי זיהום IAV הפחית את הפעילות האנטיבקטריאלית של נויטרופילים, בעוד שהתיישבות חיידקים הקהתה את תגובת אינטרפרון מסוג I הקריטית להגנה אנטי-ויראלית23. חשוב לציין, מודל זה שיחזר את הרגישות של ההזדקנות. בהשוואה לעכברים צעירים, עכברים זקנים הראו סימני מחלה מוקדם יותר, הראו מחלה קלינית חמורה יותר, ונכנעו לזיהום בתדירות גבוהה יותר23. העבודה המוצגת בכתב יד זה מראה כי מידת המחלה תלויה גם בזן החיידקי, משום שזנים פולשניים של פנאומוקוק מפגינים הפצה יעילה יותר על זיהום IAV, מראים סימנים גלויים יותר של דלקת ריאות, וגורמים לשיעורי תחלואה מואצים בהשוואה לזנים לא פולשניים. לפיכך, מודל זה של S. pneumoniae/IAV מאפשר בחינה מפורטת של גורמים פתוגניים ומארחים כאחד, והוא מתאים היטב לחקר תגובות חיסוניות לזיהומים רב-מיקרוביאליים בשלבים השונים של התקדמות המחלה.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-Aminobenzoic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1267318</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well round bottom plates</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>650101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m Filters</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>07-201-432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC147440250</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avicel</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>501785325</td>
			<td>Microcyrstalline cellulose&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Cytofix Fixation Buffer&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BDB554655</td>
			<td>Fixation Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Fortessa</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Flow cytometer&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Intramedic Polyethylene Tubing&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>427410</td>
			<td>Tubing for nasal lavage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Disposable Syringes with Luer-Lok Tips (1 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-823-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Microtainer Capillary Blood Collector and BD Microgard Closure</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>02-675-185</td>
			<td>Blood collection tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beta-Nicotinamide adenine dinucleotide</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6233703</td>
			<td>Mix IV stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC230090010</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>#000644</td>
			<td>Mice used in this study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride Anhydrous</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>C77-500</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD103 BV 421</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB562771</td>
			<td>Clone: M290 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11b APC</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-112-9622</td>
			<td>Clone: M1/70, DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11c PE</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB565592</td>
			<td>Clone: N418 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 AF 488</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>OB153030</td>
			<td>Clone: 145-2C11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD4 V450</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>BDB560470</td>
			<td>Clone: RM4.5 DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 APC eF-780</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-9642</td>
			<td>Clone: 30-F11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 PE</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-103-70</td>
			<td>Clone: 30-F11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD8&#945; BV 650</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>BDB563234</td>
			<td>Clone: 53-6.7 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Choline chloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC110290500</td>
			<td>Final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Disposable Vacuum Filter/Storage Systems</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>09-761-107</td>
			<td>Filter sterilzation apparatus&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Tissue Culture Treated T-25 Flasks</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>10-126-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;Costar Clear Multiple Well Plates</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>07-201-590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;DMEM With L-Glutamine and 4.5 g/L Glucose; Without Sodium Pyruvate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>MT10017CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanocobalamin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC405925000</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D39</td>
			<td>National Collection of Type Culture (NCTC)</td>
			<td>NCTC 7466</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Alanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1023114</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Calcium pantothenate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC243301000</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>D16-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase&#160;</td>
			<td>Worthington Biochemical&#160;</td>
			<td>LS002147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eagles Minimum Essential Medium</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH4616-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EF3030</td>
			<td>Center for Disease Control and Prevention&#160;</td>
			<td>Available via the isolate bank request</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain, request using strain name</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F480 PE Cy7</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-9713</td>
			<td>Clone: BMB DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 50 mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-432-22</td>
			<td>50 mL round bottom tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Round-Bottom Polypropylene Test Tubes With Cap</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-959-11B</td>
			<td>15 mL round bottom tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Round-Bottom Polystyrene Test Tubes (5 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-959-5</td>
			<td>FACS tubes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ferric Nitrate Nonahydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>I110-100</td>
			<td>Mix III stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Delicate Dissecting Scissors</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-951-5</td>
			<td>Instruments used for harvest</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Disposable Inoculating Loops&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-363-602</td>
			<td>Inoculating loops&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Dissecting Tissue Forceps</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>13-812-38</td>
			<td>Forceps for harvest</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Premium Microcentrifuge Tubes: 1.5 mL</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>05-408-137</td>
			<td>Micocentrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand&#160;Sterile Syringes for Single Use (10 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-955-459</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Folic Acid</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC216630500</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco RPMI 1640 (ATCC)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A1049101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;DPBS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14190250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;HBSS, calcium, magnesium, no phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14025134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;MEM (Temin&#39;s modification) (2x), no phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>11-935-046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>15-140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Trypan Blue Solution, 0.4%</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>15-250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>25-200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol (Certified ACS)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>G33-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AA3643530</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1202414</td>
			<td>Mix II stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen UltraComp eBeads Compensation Beads</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>50-112-9040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron (II) sulfate heptahydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1517836</td>
			<td>Mix III stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Alanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6027918</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Arginine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1573814</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Asparagine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAB2147322</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Aspartic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1352022</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cysteine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1043518</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cysteine hydrochloride monohydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1038914</td>
			<td>Final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cystine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1376218</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC156211000</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>O2956-100</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Histidine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC166150250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES LIVE/DEAD Fixable Blue Dead Cell Stain Kit, for UV excitation</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-112-1524</td>
			<td>Clone: N/A DF 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Isoleucine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC166170250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Leucine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP385-100</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Lysine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6222514</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Methionine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1031822</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low endotoxin BSA&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A1470-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Phenylalanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1323814</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Proline</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1019922</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Serine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC132660250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Threonine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC138930250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Tryptophan</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1023014</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Valine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1272014</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ly6C BV 605</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB563011</td>
			<td>Clone: AL-21 DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ly6G AF 488&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>NC1102120</td>
			<td>Clone: IA8, DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cells&#160;</td>
			<td>American Type Culture Collection (ATCC)</td>
			<td>CCL-34</td>
			<td>MDCK cell line for PFU analuysis&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate 7-Hydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>60-019-68</td>
			<td>CDM starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manganese Sulfate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>M113-500</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MilQ water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Ultra-pure water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Fc Block</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB553142</td>
			<td>Clone: 2.4G2 DF 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MWI VETERINARY&#160;PURALUBE VET OINTMENT</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC1886507</td>
			<td>Eye lubricant for infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NCI-H292 mucoepidermoid carcinoma cell line&#160;</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1848</td>
			<td>H292 lung epithelial cell line for biofilm growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Niacinamide</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>18-604-792</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NK 1.1 AF 700</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-4692</td>
			<td>Clone: PK136 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxyrase For Broth 50Ml Bottle 1/Pk</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>50-200-5299</td>
			<td>To remove oxygen from liquid cultures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 4% in PBS</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td>J19932-K2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pivetal Isoflurane&#160;</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-893-8440</td>
			<td>Isoflurane for anesthesia during infection&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate Dibasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P288-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P285-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridoxal hydrochloride&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC352710250</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridoxamine dihydrochloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6267906</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Riboflavin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC132350250</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Acetate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>0530-500G</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide&#160;</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP922I-500</td>
			<td>For FACS buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S233-500</td>
			<td>Starter stock and final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Dibasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S374-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S369-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCR APC&#160;</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-8889</td>
			<td>Clone: GL-3 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCR&#946; APC-Cy7</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>BDB560656</td>
			<td>Clone: H57-597 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Blood Agar with Gentamicin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>R01227</td>
			<td>Blood agar plates with the antibiotic gentamicin&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific&#160;Trypsin, TPCK Treated</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>PI20233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiamine hydrochloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC148991000</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TIGR4</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>BAA-334</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uracil</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC157300250</td>
			<td>Mix II stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worthington Biochemical Corporation&#160;Collagenase, Type 2, 1 g</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC9693955</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model for the transition of streptococcus pneumoniae from colonizer to pathogen upon viral co-infection recapitulates age-exacerbated illness

סטרפטוקוקוס פנאומוניה (Streptococcus pneumoniae ) הוא מתיישב אסימפטומטי של הלוע אצל רוב האנשים, אך יכול להתקדם לפתוגן ריאתי ומערכתי בזיהום בנגיף שפעת A (IAV). גיל מתקדם משפר את רגישות המארח לדלקת ריאות פנאומוקוקית משנית וקשור להחמרת תוצאות המחלה. הגורמים המארחים המניעים תהליכים אלה אינם מוגדרים היטב, בין השאר בשל מחסור במודלים של בעלי חיים המשחזרים את המעבר מנשאות א-סימפטומטית למחלה קלינית קשה. 
מאמר זה מתאר מודל עכבר חדשני המשחזר את המעבר של פנאומוקוקים מהובלה אסימפטומטית למחלה עם זיהום ויראלי. במודל זה, עכברים מחוסנים תחילה תוך אפית בפנאומוקוקים שגודלו בביופילם כדי ליצור הובלה א-סימפטומטית, ולאחר מכן זיהום IAV הן בלוע והן בריאות. התוצאה היא הפצת חיידקים לריאות, דלקת ריאות וסימני מחלה ברורים שיכולים להתקדם לקטלניות. מידת המחלה תלויה בזן החיידק ובגורמים המאכסן. 
חשוב לציין כי מודל זה משחזר את רגישות ההזדקנות, מכיוון שבהשוואה לעכברים צעירים, עכברים זקנים מפגינים מחלה קלינית קשה יותר ונכנעים למחלות בתדירות גבוהה יותר. על ידי הפרדת ההובלה והמחלה לשלבים נפרדים ומתן הזדמנות לנתח את הווריאנטים הגנטיים הן של הפתוגן והן של המאכסן, מודל זה של S. pneumoniae/IAV מאפשר בחינה מפורטת של יחסי הגומלין של פתוביונט חשוב עם המארח בשלבים שונים של התקדמות המחלה. מודל זה יכול לשמש גם ככלי חשוב לזיהוי מטרות טיפוליות פוטנציאליות נגד דלקת ריאות פנאומוקוקית משנית בפונדקאים רגישים.

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness at JoVE.

A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness

מאמר זה מתאר מודל עכברי חדשני למעבר של פנאומוקוק ממתיישב אסימפטומטי לפתוגן הגורם למחלה במהלך זיהום ויראלי. מודל זה יכול להיות מותאם בקלות לחקר אינטראקציות מיקרוביאליות ומארח-פתוגן במהלך השלבים השונים של התקדמות המחלה ועל פני מארחים שונים.

מודל עכברי למעבר של דלקת ריאות סטרפטוקוקוס מקולונייזר לפתוגן עם זיהום משותף ויראלי מחזיר מחלה המחמירה בגיל

Streptococcus pneumoniae (pneumococcus) is an asymptomatic colonizer of the nasopharynx in most individuals but can progress to a pulmonary and systemic ...

שיטה זו מתארת מודל עכברי חדש לחקר המעבר של פנאומוקוק ממתיישב אסימפטומטי לפתוגן גורם מחלה במהלך זיהום ויראלי. הוא מחקה בצורה קרובה יותר את מה שקורה אצל בני אדם. מודל זה יכול להיות כלי חשוב לזיהוי מטרות טיפוליות פוטנציאליות נגד דלקת ריאות פנאומוקוקית משנית אצל מארחים רגישים.מודל זה משחזר את רגישות ההזדקנות. לכן, ניתן להשתמש בו כדי להבין אילו היבטים של המארח הופכים פגומים עם הגיל ולאפשר לנו להתאים אפשרויות טיפול למארחים קשישים פגיעים. גידול ביופילם פנאומוקוקי הוא מאתגר מכיוון שהזנים השונים לוקחים פרקי זמן שונים.העצה שלי היא לנסות לגדל את הביופילם לפני ביצוע המחקר בבעלי חיים. ברגע שתאי H292 נפגשים ב-100%, שטפו את התאים שלוש פעמים עם PBS. לאחר מכן להוסיף 250 מיקרוליטר של 4% paraformaldehyde לכל באר כדי לתקן את התאים לדגור במשך שעה אחת על קרח או לילה בארבע מעלות צלזיוס.סטרק סטרפטוקוקוס דלקת ריאות זן של עניין על צלחת אגר הדם לדגור במשך הלילה ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני. למחרת לחסן את החיידקים מהצלחת לתוך מדיה טרייה, מוגדרת כימית או CDM בתוספת אוקסיראז על ידי שטיפת החיידקים מהצלחת על ידי הוספת מיליליטר אחד של CDM בתוספת אוקסיראז ובעדינות להרים את מושבות החיידקים באמצעות הצד של קצה פיפטה של מיליליטר אחד, נזהר לא לגרד את האגר. לדלל את תרבית החיידקים ב- CDM בתוספת אוקסיראז ל- OD 600 התחלתי של 0.05.לאחר מכן לגדל את החיידקים בצינור חרוטי 50 מיליליטר מכוסה באופן רופף ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני עד OD של 0.2 הוא הגיע. לאחר מכן מערבלים את צינור תרבית החיידקים. זרעו 0.5 מיליליטר של התרבית על תאי H292 קבועים והוסיפו עוד 0.5 מיליליטר CDM בתוספת מדיום אוקסיאז לכל באר.הוסף CDM בתוספת אוקסיראז לבארות הבקרה ללא חיידקים. דוגרים על הצלחת במשך 48 שעות בטמפרטורה של 34 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני. כל 12 שעות, לאחר הזריעה הראשונית, להחליף בעדינות את 0.5 מיליליטר של המדיום עם CDM טרי בתוספת Oxyrase.היזהר לא לשבש את היווצרות של biofilm. בדוק את החלק התחתון של הצלחת עבור biofilm ולחפש עננות גוברת ככל שהזמן עובר עקב צמיחת biofilm. לאחר 48 שעות, להסיר את supernatant ולשטוף את biofilm פעמיים עם מיליליטר אחד של PBS.לאחר מכן השהה מחדש את הביופילם במיליליטר אחד של CDM טרי ופיפטה מעלה ומטה במרץ כדי להרים את הביופילם. עבור כל זן חיידקי, אגרו את התרבית מכל הבארות לצינור של 50 מיליליטר. יש לערבב היטב על ידי הטייה עדינה של הצינור הסגור היטב מעלה ומטה מספר פעמים.לאחר מכן, הוסף 40% גליצרול ו- CDM בנפחים שווים כדי להשיג תרחיף חיידקי עם ריכוז סופי של 20% גליצרול. יש להכניס מיליליטר אחד לתוך צינור מיקרו צנטריפוגה, להקפיא במהירות הבזק על קרח יבש ולחסוך במינוס 80 מעלות צלזיוס. הפשירו את הביופילם שגדל על קרח והסתובבו ב -1, 700 גרם במשך חמש דקות.בזהירות להסיר ולהשליך את supernatant מבלי להפריע את הכדור. לאחר מכן שטפו את הגלולה על ידי השעייתה מחדש במיליליטר אחד של PBS וסובבו אותה שוב. מוציאים את הסופרנאטנט ומשהים מחדש את הגלולה בנפח הדרוש כדי להגיע לריכוז הרצוי.יש לחסן את עכבר ששת הזכרים השחור C57 תוך אפי עם חמש פעמים 10 למושבה השישית או CFU על ידי הזרמת חמישה מיקרוליטרים של האינוקולום המדולל לכל נריס. לאחר החיסון, להחזיק את העכבר בחוזקה, לייצב את הראש עד עוצמת הקול נשאף. לאחר הפשרת הנגיף, יש לדלל את הנגיף ב-PBS לריכוז הרצוי.יש להניח חומר סיכה אופתלמי על עיני העכבר לפני ההרדמה. הדביקו מיד את העכבר המורדם ב-50 מיקרוליטר של 20 יחידות יוצרות פלאק, או PFU, של נגיף שפעת A או IAV תוך קנה הנשימה באמצעות פינצטה קהה כדי למשוך את הלשון מהפה ולהעביר את נפח הנוזל במורד קנה הנשימה. לאחר ההחלמה, יש לחסן תוך אפית 10 מיקרוליטר של 200 PFU של IAV בשיטת החיסון שתוארה קודם לכן.לאיסוף ריאות, באמצעות מספריים דיסקציה, לחתוך את הצדדים של כלוב הצלעות החשוף ולמשוך בעדינות את הצלעות כלפי מעלה לכיוון ראש העכבר כדי לחשוף את הלב. הכנס מחט 25 מד המחוברת למזרק 10 מיליליטר ממולא מראש עם PBS לחדר הימני והתחל לבלבל לאט. חפש הלבנה של הריאות כאינדיקטור של זילוח מוצלח.יש לשטוף באיטיות כדי למנוע שבירת רקמת הריאה. להרים את הלב עם מלקחיים ולעשות חתך כדי להפריד את הריאות ואת הלב. לאחר ההפרדה, להרים את כל האונות של הריאה עם מלקחיים ולשטוף בצלחת עם PBS סטרילי כדי להסיר כל שאריות דם.בצלחת פטרי, טוחנים את הריאה לחתיכות קטנות ומערבבים היטב. הסר מחצית מתערובת הריאות כדי לקבוע את ה- CFU החיידקי או ה- PFU הנגיפי והניחו אותו בצינור תחתון עגול של 15 מיליליטר ממולא מראש ב- 0.5 מיליליטר PBS לצורך הומוגניזציה. הסר את החצי השני של הריאה עבור ציטומטריית זרימה ומקם אותו בתרבית שאינה רקמה מטופלת צלחת 24 באר עם כל באר מלאה מראש עם 0.5 מיליליטר של RP10.יש להשאיר בטמפרטורת החדר עד לעיבוד. כדי ליצור הומוגניזציה של הרקמה שנאספה נקו את בדיקת ההומוגנייזר על ידי הכנסתו לאתנול 70% והפעלת ההומוגנייזר בעוצמה של 60% למשך 30 שניות. חזור על שלב זה במים סטריליים למשך 10 שניות.הומוגניזציה של כל רקמה למשך דקה אחת. לספירת מספרי חיידקים, דילול סדרתי של צלחות על צלחות אגר דם. כדי לחשב את סך CFU להשתמש 10 מיקרוליטר כדי צלחת ולציין את נפח הסופי מיליליטר עבור כל דגימה.צלחת דגימות nasopharynx על צלחות אגר דם בתוספת שלושה מיקרוגרם למיליליטר gentamycin כדי לבחור את הצמיחה של דלקת ריאות S תוך עיכוב הצמיחה של מיקרואורגניזמים אחרים. יש לדגור למשך הלילה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני. עבור ציטומטריית זרימה, הוסף 500 מיקרוליטר של חיץ עיכול לכל באר של צלחת 24 בארות המכילה דגימת ריאה.דוגרים על הצלחת במשך 45 דקות עד שעה. לאחר מכן, באמצעות פיפטה מיקרו P-1000, להזיז את הריאות מעוכלות ולהניח אותם על המסנן. לאחר מכן השתמש בבוכנה של מזרק שלושה מיליליטר כדי לרסק את המדגם.צמיחת ביופילם S.pneumoniae inoculum גורמת להובלה עקבית של פנאומוקוק המוגבלת לאף ולוע תוך הימנעות מהתפשטות שיטתית. הצגת המחלה בעכברים נגועים ב- S pneumoniae IAV הייתה תלויה בזן החיידקי. אמנם לא היה הבדל משמעותי במספר החיידקים של הלוע בין אף אחד מהזנים, S pneumoniae, TIGR4 ו-D39, אך לא EF3030 הופצו לריאות עד 48 שעות לאחר ההדבקה ב-IAV.40% מהעכברים שנדבקו בדלקת ריאות מסוג S TIGR4 הראו הפצת חיידקים לריאות ומתוכם מחצית הפכו לחיידקים. עכברים שנדבקו בדלקת ריאות מסוג S D39 הראו תפוצה של 100% לריאות ומחצית מהחיידק שחווה. במעקב אחר ההישרדות הכוללת, ללא קשר לזן החיידקי, שיעור ההישרדות של עכברים נגועים היה נמוך משמעותית מהעכברים שאותגרו עם דלקת ריאות S.מודל זה שימש גם להערכת נוכחותם של תאי חיסון שונים בריאות לאחר זיהום IAV. זני החיידקים D39 ו-TIGR4 גרמו לעלייה משמעותית מעבר לקו הבסיס בזרם תאי מערכת החיסון הדלקתיים ממחזור הדם, כגון נויטרופילים ומונוציטים, בעוד ש-EF3030 לא. זיהום IAV לבדו גרם לעלייה משמעותית מעבר לקו הבסיס בזרם תאי החיסון כגון תאי NK ותאי T מסוג גמא דלתא.תגובות אנטי-ויראליות אלה הופחתו באופן משמעותי בעכברים שנדבקו בדלקת ריאות מסוג S לפני האתגר הנגיפי. בעכברים שנדבקו ביחידות, הטיטרים הנגיפיים לא השתנו בין הקבוצות הצעירות והמבוגרות. עכברים זקנים הראו סימני מחלה מוקדמים יותר וחמורים יותר באופן משמעותי ומתו מהר יותר, תוך 24 שעות, בעוד שקבוצת הביקורת הצעירה שרדה את הזיהום טוב יותר.הפרדת ההובלה והמחלה לשלבים נפרדים מאפשרת לנו לבחון הן את התגובה החיסונית והן את הגורמים החיידקיים או הנגיפיים החשובים בשלבים שונים של התקדמות המחלה. אנו מקווים שמודל זה יותאם על ידי מעבדות אחרות לחקר אינטראקציות פולימיקרוביאליות אחרות ואינטראקציות פתוגן של מארח במהלך שלבים שונים של התקדמות המחלה ועל פני המארחים השונים.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

באמצעות הדמיה Bioluminescent לחקור סינרגיזם בין Streptococcus pneumoniae ו שפעת וירוס עכברים תינוקות

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

תא הדמיה חיה של Bacillus subtilis ו Streptococcus pneumoniae באמצעות מיקרוסקופית אוטומטי זמן לשגות

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

שימוש במודל EpiAirway לאפיון לטווח ארוך מארח הפתוגן אינטראקציות

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; דגם עכבר: תרומות הפתוגן ומארח לומדים קוליטיס המדבק

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

אפיון של תגובות דלקתיות במהלך קולוניזציה תוך-אפית עם דלקת ריאות סטרפטוקוקוס

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

ניטור שינויים בממברנה קוטביות, ממברנה יושרה, וריכוזי יון תאיים ב<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; שימוש צבעי ניאון

Membrane depolarization and ion fluxes are events that have been studied extensively in biological systems due to their ability to profoundly impact ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

קופסית Serotyping של<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; שימוש תגובת Quellung

There are over 90 different capsular serotypes of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). As well as being a tool for understanding pneumococcal ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

מודל של עכברים של דלקת כרונית הנגרם על ידי פתוגן באתרים מקומיים ומערכתיים

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

קופסית Serotyping של<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; על ידי לאטקס התלכדות

Latex agglutination reagents are widely used in microbial diagnosis, identification and serotyping. Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) is a major ...

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

<em&gt; במבחנה</em&gt; מודל למדידה של מערכת חיסונית למלריה בהקשר של HIV Co-זיהום

Malaria and HIV co-infection is a growing health priority. However, most research on malaria or HIV currently focuses on each infection individually. ...