Name: a mouse model for the transition of streptococcus pneumoniae from colonizer to pathogen upon viral co-infection recapitulates age-exacerbated illness
Uploaded: 2022-09-28T14:15:00
Duration: 12 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness at JoVE.

Vi vil gjerne takke Nick Lenhard for kritisk lesing og redigering av dette manuskriptet. Vi vil også takke Andrew Camilli og Anthony Campagnari for bakteriestammene og Bruce Davidson for virusstammene. Dette arbeidet ble støttet av National Institute of Health Grant (R21AG071268-01) til JL og National Institute of Health Grants (R21AI145370-01A1), (R01AG068568-01A1), (R21AG071268-01) til E.N.B.G.

Forfatterne har ingen interessekonflikter å opplyse.

De fleste av de eksisterende S. pneumoniae / IAV co-infeksjon eksperimentelle studier stole på bakteriell levering i lungene av mus pre-infisert med IAV. Disse modellene har bidratt til å identifisere endringer i lungemiljøet og systemisk immunrespons som gjør verten utsatt for sekundær bakteriell infeksjon 15,16,17,32,33,34,35,36,37. Imidlertid har disse modellene ikke klart å etterligne overgangen til S. pneumoniae fra en asymptomatisk kolonisator til et patogen som kan forårsake alvorlige lunge- og systemiske infeksjoner. Videre er disse modellene ikke egnet for å studere vertsfaktorer og vertspatogeninteraksjoner i øvre luftveier som bidrar til mottakelighet for infeksjon. En tidligere modell for bevegelse av pneumokokker fra nasofarynks til lunge etter IAV-infeksjon var avhengig av bakteriell infeksjon i nasofarynks etterfulgt av virusinfeksjon. Det klarte imidlertid ikke å reprodusere de alvorlige sykdomstegnene som ble observert hos mennesker21. Den modifiserte murine infeksjonsmodellen beskrevet her rekapitulerer overgangen av S. pneumoniae fra asymptomatisk bærerskap til et patogen som forårsaker alvorlig klinisk sykdom.
Et kritisk skritt i denne modellen er å etablere S. pneumoniae-infeksjon i nasopharynx. Streptococcus pneumoniae danner biofilmer og koloniserer nasopharynx med forskjellige effektiviteter 21,38. For å etablere konsistent infeksjon kreves minst 5 × 106 CFU av de biofilmdyrkede bakteriestammene som er testet så langt23. Det anbefales at enhver ny bakteriestamme testes for stabil infeksjon i nasofarynks før virusinfeksjon. For viral co-infeksjon har tidligere studier funnet at intranasal infeksjon med IAV er nødvendig for spredning av bakteriene fra nasopharynx21,22,23. I de tidligere studiene ble det brukt 500 PFU IAV for intranasal fødsel, mens i denne studien var 200 PFU tilstrekkelig til å øke bakterietall i nasofarynks. IAV-infeksjon er ikke begrenset til de øvre luftveiene og kan spre seg til lungene39,40, noe som er nøkkelen til å gjøre lungemiljøet mer ettergivende for bakteriell infeksjon15,16,41. Levering av IAV til lungene kan oppnås ved enten intranasal levering eller intratrakeal installasjon av bedøvede mus. Tidligere arbeid med BALB / cByJ-mus fant at intranasal levering resulterer i viral lungebetennelse21; Imidlertid er inokulumets tilgang til lungene etter intranasal inokulasjon mer begrenset hos C57BL/6-mus. I C57BL/6-mus er intratrakeal installasjon nødvendig for konsistent levering av viruset23. I denne modellen akselererer tidligere bakteriell kolonisering presentasjonen av sykdomssymptomer etter virusinfeksjon23. Siden virusinfeksjon i seg selv kan forårsake sykdomssymptomer med potensiell variasjon i kinetikk, anbefales det først å teste en rekke doser for enhver ny virusstamme som testes, og velge en dose som avslører akselerert kinetikk hos koinfiserte verter.
Lungene gir en annen kritisk avlesning for sykdomsevaluering i denne modellen. For vurdering av patogenbelastning og immuncelletilstrømning kan en lunge fra samme mus brukes. Men da infeksjons- og betennelsesalvorlighetsgrad kan variere mellom, anbefales det å ikke ta forskjellige av samme lunge for de ulike vurderingene. I stedet kan alle hakkes i små biter, blandes godt sammen, og deretter analyseres likt for de forskjellige vurderingene. På samme måte kan nasopharynx brukes til oppregning av bakteriell CFU eller viral PFU og immunrespons. Imidlertid er antall celler hentet fra vask og vev for lavt til å utføre flowcytometri uten å samle prøvene fra mus i samme gruppe. Alternativt kan inflammasjon i nasofarynks vurderes histologisk23.
Et kritisk trekk ved denne modellen er at den rekapitulerer den kliniske sykdommen sett hos pasienter. Hos mennesker resulterer sekundær pneumokokklungebetennelse etter IAV-infeksjon ofte i åpenbare tegn på sykdom, inkludert hoste, dyspné, feber og muskelsmerter som kan føre til sykehusinnleggelser, respirasjonssvikt og til og med død 8,15,42,43. Denne modellen rekapitulerer de alvorlige tegnene på klinisk sykdom observert hos mennesker når det gjelder pustevansker (reflektert i pustepoengsummen) og generell ulempe (reflektert i holdning og bevegelsespoeng) som vises av musene, samt død hos noen av de friske unge kontrollene. De forverrede sykdomssymptomene hos koinfiserte mus er sannsynligvis et resultat av både bakteriell spredning til lungene og nedsatt virusclearance hos mus med pneumokokkbærervogn23. En begrensning ved modellen er at forekomsten av klinisk sykdom og bakteriell spredning fra nasofarynks varierer mellom mus og påvirkes av bakteriestamme, gisselalder og genotype21,22,23. Reflekterer dette, for invasive stammer, kan progresjonen fra lokalisert infeksjon (uten påviselig bakteriemi) til døden forekomme innen 24 timer. Derfor, for en sann vurdering av systemisk spredning, bør bakteriemi følges over kortere intervaller (hver 6-12 timer). På samme måte kan sykdomspoengsummen endres raskt, spesielt i de første 72 timene etter co-infeksjon. Derfor, for å følge sykdomssymptomene nøye, anbefales det å overvåke mus tre ganger daglig i dagene 1-3 etter IAV-infeksjon.
Oppsummert replikerer denne modellen bevegelsen av S. pneumoniae fra en asymptomatisk kolonisator av nasopharynx til et patogen som kan forårsake lunge- og systemisk sykdom ved IAV-infeksjon. I denne modellen utløser IAV overgangen til S. pneumoniae ved å modifisere bakterieoppførselen i nasopharynx, øke bakteriell spredning til lungen og endre antibakteriell immunitet23. På samme måte sløver bakteriell vogn de antivirale immunresponsene og svekker IAV-clearance fra lungene23. Dette gjør denne modellen ideell for å analysere endringer i immunresponser i enkeltstående versus polymikrobielle infeksjoner. I tillegg er sykdomsforløpet etter koinfeksjon delvis avhengig av belastningen av pneumokokker som er tilstede i nasopharynx. Derfor er modellen egnet til å dissekere bakteriefaktorene som kreves for asymptomatisk kolonisering versus patogen overgang av S. pneumoniae. Til slutt reproduserer denne modellen følsomheten for aldring av koinfeksjoner, og selv om dette ikke ble testet her, kan det lett brukes til å vurdere effekten av vertsbakgrunn på sykdomsforløpet. Avslutningsvis gir separering av vogn og sykdom i forskjellige trinn muligheten til å analysere de genetiske varianter av både patogener og verten, slik at detaljert undersøkelse av samspillet mellom en viktig pathobiont og verten i ulike faser av sykdomsprogresjon. Fremover kan denne modellen brukes til å skreddersy behandlingsalternativer for sårbare verter.

Streptococcus pneumoniae (pneumokokker) er Gram-positive bakterier som asymptomatisk bor i nasopharynx hos de fleste friske individer 1,2. Fremmet av faktorer som ikke er fullstendig definert, kan pneumokokker overgå fra godartede kolonisatorer av nasopharynx til patogener som sprer seg til andre organer som resulterer i alvorlige infeksjoner, inkludert otitis media, lungebetennelse og bakteriemi3. Pneumokokksykdomspresentasjon er delvis avhengig av belastningsspesifikke forskjeller, inkludert serotypen, som er basert på sammensetningen av kapsulære polysakkarider. Det har vært over 100 serotyper karakterisert så langt, og noen er assosiert med mer invasive infeksjoner 4,5. Flere andre faktorer øker risikoen for pneumokokksykdom. En slik faktor er virusinfeksjon, hvor risikoen for pneumokokkpneumoni økes 100 ganger med IAV 6,7. Historisk sett er S. pneumoniae en av de vanligste årsakene til sekundær bakteriell lungebetennelse etter influensa og er forbundet med verre utfall8. En annen viktig risikofaktor er høy alder. Faktisk er S. pneumoniae den ledende årsaken til samfunnservervet bakteriell lungebetennelse hos eldre personer over 65 år 9,10. Eldre individer står for flertallet (>75%) av dødsfallene på grunn av lungebetennelse og influensa, noe som indikerer at de to risikofaktorene - aldring og IAV-infeksjon - synergistisk forverrer sykdomsfølsomhet11,12,13,14. Imidlertid er mekanismene som virusinfeksjon ber om overgang av pneumokokker fra asymptomatisk kolonisator til invasivt patogen og hvordan dette formes av vertsfaktorer, dårlig definert. Dette skyldes i stor grad fraværet av en liten dyremodell som rekapitulerer overgangen fra asymptomatisk pneumokokkkolonisering til kritisk klinisk sykdom.
Koinfeksjonsstudier har klassisk blitt modellert hos mus inokulert med pneumokokker direkte i lungene 7 dager etter influensainfeksjon15,16. Dette reproduserer følsomheten for sekundær bakteriell lungebetennelse og er ideell for å studere hvordan antivirale immunresponser svekker antibakterielle forsvar17. Longitudinelle studier på mennesker har imidlertid vist at pneumokokkbærerskap i nasofarynks, der bakteriene kan danne asymptomatiske biofilmer18, er jevnt assosiert med invasive sykdommer19,20. Bakterieisolater fra infeksjoner i mellomøret, lungene og blodet er genetisk identiske med de som finnes i nasopharynx20. For å studere overgangen fra asymptomatisk bærerskap til invasiv sykdom etter IAV-infeksjon ble det derfor etablert en modell der mus ble intranasalt administrert biofilmdyrkede pneumokokker etterfulgt av IAV-infeksjon i nasofarynks21,22. Virusinfeksjon i de øvre luftveiene førte til endringer i vertsmiljøet som førte til spredning av pneumokokker fra biofilm og spredning til nedre luftveier21. Disse spredte bakteriene hadde oppregulert uttrykk for virulensfaktorer som er viktige for infeksjon, og konverterte dem fra kolonisatorer til patogener21. Disse observasjonene fremhever det komplekse samspillet mellom viruset, verten og bakteriene og viser at endringene i verten utløst av virusinfeksjon har en direkte innvirkning på pneumokokkoppførselen, noe som igjen endrer løpet av bakteriell infeksjon. Denne modellen klarer imidlertid ikke å rekapitulere de alvorlige tegn på sykdom observert hos mennesker, sannsynligvis fordi viruset er begrenset til nesehulen, og de systemiske effektene av virusinfeksjon på vertsimmunitet og lungeskade blir ikke rekapitulert.
Vi har nylig etablert en modell som inkorporerer det komplekse samspillet mellom verten og patogener, men også nærmere etterligner sykdomsgraden observert hos mennesker23. I denne modellen infiseres mus først intranasalt med biofilmdyrkede pneumokokker for å etablere asymptomatisk bærerskap, etterfulgt av IAV-infeksjon av både nasofarynks og lunger. Dette resulterte i bakteriell spredning til lungene, lungebetennelse og sykdom som utviklet seg til dødelighet hos en brøkdel av unge mus23. Denne tidligere studien viste at både viral og bakteriell infeksjon endret vertsforsvaret: virusinfeksjon fremmet bakteriell spredning, og tidligere bakteriell kolonisering svekket vertens evne til å kontrollere pulmonale IAV-nivåer23. Undersøkelse av immunresponsen viste at IAV-infeksjon reduserte den antibakterielle aktiviteten til nøytrofiler, mens bakteriell kolonisering reduserte type I interferonresponsen kritisk til antiviralt forsvar23. Det er viktig at denne modellen reproduserte følsomheten for aldring. Sammenlignet med unge mus viste gamle mus tegn på sykdom tidligere, viste mer alvorlig klinisk sykdom og bukket under for infeksjon oftere23. Arbeidet som presenteres i dette manuskriptet viser at sykdomsgraden også er avhengig av bakteriestammen, fordi invasive pneumokokkstammer viser mer effektiv spredning ved IAV-infeksjon, viser mer åpenbare tegn på lungebetennelse og resulterer i akselerert sykdomsfrekvens sammenlignet med ikke-invasive stammer. Dermed tillater denne S. pneumoniae/IAV-koinfeksjonsmodellen detaljert undersøkelse av både patogen- og vertsfaktorer og er godt egnet til å studere immunresponser mot polymikrobielle infeksjoner i de forskjellige fasene av sykdomsprogresjon.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-Aminobenzoic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1267318</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well round bottom plates</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>650101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m Filters</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>07-201-432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC147440250</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avicel</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>501785325</td>
			<td>Microcyrstalline cellulose&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Cytofix Fixation Buffer&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BDB554655</td>
			<td>Fixation Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Fortessa</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Flow cytometer&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Intramedic Polyethylene Tubing&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>427410</td>
			<td>Tubing for nasal lavage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Disposable Syringes with Luer-Lok Tips (1 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-823-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Microtainer Capillary Blood Collector and BD Microgard Closure</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>02-675-185</td>
			<td>Blood collection tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beta-Nicotinamide adenine dinucleotide</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6233703</td>
			<td>Mix IV stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC230090010</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>#000644</td>
			<td>Mice used in this study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride Anhydrous</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>C77-500</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD103 BV 421</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB562771</td>
			<td>Clone: M290 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11b APC</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-112-9622</td>
			<td>Clone: M1/70, DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11c PE</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB565592</td>
			<td>Clone: N418 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 AF 488</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>OB153030</td>
			<td>Clone: 145-2C11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD4 V450</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>BDB560470</td>
			<td>Clone: RM4.5 DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 APC eF-780</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-9642</td>
			<td>Clone: 30-F11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 PE</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-103-70</td>
			<td>Clone: 30-F11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD8&#945; BV 650</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>BDB563234</td>
			<td>Clone: 53-6.7 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Choline chloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC110290500</td>
			<td>Final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Disposable Vacuum Filter/Storage Systems</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>09-761-107</td>
			<td>Filter sterilzation apparatus&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Tissue Culture Treated T-25 Flasks</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>10-126-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;Costar Clear Multiple Well Plates</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>07-201-590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;DMEM With L-Glutamine and 4.5 g/L Glucose; Without Sodium Pyruvate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>MT10017CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanocobalamin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC405925000</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D39</td>
			<td>National Collection of Type Culture (NCTC)</td>
			<td>NCTC 7466</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Alanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1023114</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Calcium pantothenate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC243301000</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>D16-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase&#160;</td>
			<td>Worthington Biochemical&#160;</td>
			<td>LS002147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eagles Minimum Essential Medium</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH4616-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EF3030</td>
			<td>Center for Disease Control and Prevention&#160;</td>
			<td>Available via the isolate bank request</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain, request using strain name</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F480 PE Cy7</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-9713</td>
			<td>Clone: BMB DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 50 mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-432-22</td>
			<td>50 mL round bottom tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Round-Bottom Polypropylene Test Tubes With Cap</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-959-11B</td>
			<td>15 mL round bottom tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Round-Bottom Polystyrene Test Tubes (5 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-959-5</td>
			<td>FACS tubes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ferric Nitrate Nonahydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>I110-100</td>
			<td>Mix III stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Delicate Dissecting Scissors</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-951-5</td>
			<td>Instruments used for harvest</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Disposable Inoculating Loops&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-363-602</td>
			<td>Inoculating loops&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Dissecting Tissue Forceps</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>13-812-38</td>
			<td>Forceps for harvest</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Premium Microcentrifuge Tubes: 1.5 mL</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>05-408-137</td>
			<td>Micocentrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand&#160;Sterile Syringes for Single Use (10 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-955-459</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Folic Acid</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC216630500</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco RPMI 1640 (ATCC)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A1049101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;DPBS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14190250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;HBSS, calcium, magnesium, no phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14025134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;MEM (Temin&#39;s modification) (2x), no phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>11-935-046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>15-140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Trypan Blue Solution, 0.4%</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>15-250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>25-200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol (Certified ACS)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>G33-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AA3643530</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1202414</td>
			<td>Mix II stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen UltraComp eBeads Compensation Beads</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>50-112-9040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron (II) sulfate heptahydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1517836</td>
			<td>Mix III stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Alanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6027918</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Arginine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1573814</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Asparagine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAB2147322</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Aspartic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1352022</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cysteine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1043518</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cysteine hydrochloride monohydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1038914</td>
			<td>Final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cystine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1376218</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC156211000</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>O2956-100</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Histidine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC166150250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES LIVE/DEAD Fixable Blue Dead Cell Stain Kit, for UV excitation</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-112-1524</td>
			<td>Clone: N/A DF 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Isoleucine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC166170250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Leucine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP385-100</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Lysine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6222514</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Methionine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1031822</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low endotoxin BSA&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A1470-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Phenylalanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1323814</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Proline</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1019922</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Serine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC132660250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Threonine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC138930250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Tryptophan</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1023014</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Valine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1272014</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ly6C BV 605</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB563011</td>
			<td>Clone: AL-21 DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ly6G AF 488&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>NC1102120</td>
			<td>Clone: IA8, DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cells&#160;</td>
			<td>American Type Culture Collection (ATCC)</td>
			<td>CCL-34</td>
			<td>MDCK cell line for PFU analuysis&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate 7-Hydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>60-019-68</td>
			<td>CDM starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manganese Sulfate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>M113-500</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MilQ water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Ultra-pure water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Fc Block</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB553142</td>
			<td>Clone: 2.4G2 DF 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MWI VETERINARY&#160;PURALUBE VET OINTMENT</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC1886507</td>
			<td>Eye lubricant for infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NCI-H292 mucoepidermoid carcinoma cell line&#160;</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1848</td>
			<td>H292 lung epithelial cell line for biofilm growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Niacinamide</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>18-604-792</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NK 1.1 AF 700</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-4692</td>
			<td>Clone: PK136 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxyrase For Broth 50Ml Bottle 1/Pk</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>50-200-5299</td>
			<td>To remove oxygen from liquid cultures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 4% in PBS</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td>J19932-K2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pivetal Isoflurane&#160;</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-893-8440</td>
			<td>Isoflurane for anesthesia during infection&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate Dibasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P288-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P285-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridoxal hydrochloride&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC352710250</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridoxamine dihydrochloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6267906</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Riboflavin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC132350250</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Acetate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>0530-500G</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide&#160;</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP922I-500</td>
			<td>For FACS buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S233-500</td>
			<td>Starter stock and final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Dibasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S374-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S369-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCR APC&#160;</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-8889</td>
			<td>Clone: GL-3 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCR&#946; APC-Cy7</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>BDB560656</td>
			<td>Clone: H57-597 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Blood Agar with Gentamicin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>R01227</td>
			<td>Blood agar plates with the antibiotic gentamicin&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific&#160;Trypsin, TPCK Treated</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>PI20233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiamine hydrochloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC148991000</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TIGR4</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>BAA-334</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uracil</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC157300250</td>
			<td>Mix II stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worthington Biochemical Corporation&#160;Collagenase, Type 2, 1 g</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC9693955</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model for the transition of streptococcus pneumoniae from colonizer to pathogen upon viral co-infection recapitulates age-exacerbated illness

Streptococcus pneumoniae (pneumokokker ) er en asymptomatisk kolonisator av nasopharynx hos de fleste individer, men kan utvikle seg til et lunge- og systemisk patogen ved influensa A-virus (IAV) infeksjon. Høy alder øker vertsfølsomheten for sekundær pneumokokklungebetennelse og er forbundet med forverrede sykdomsutfall. Vertsfaktorene som driver disse prosessene er ikke godt definert, delvis på grunn av mangel på dyremodeller som reproduserer overgangen fra asymptomatisk kolonisering til alvorlig klinisk sykdom. 
Denne artikkelen beskriver en ny musemodell som gjenskaper overgangen av pneumokokker fra asymptomatisk bærerskap til sykdom ved virusinfeksjon. I denne modellen blir mus først intranasalt inokulert med biofilmdyrkede pneumokokker for å etablere asymptomatisk bærerskap, etterfulgt av IAV-infeksjon av både nasopharynx og lunger. Dette resulterer i bakteriell spredning til lungene, lungebetennelse og åpenbare tegn på sykdom som kan utvikle seg til dødelighet. Graden av sykdom er avhengig av bakteriestammen og vertsfaktorene. 
Det er viktig at denne modellen reproduserer følsomheten for aldring, fordi sammenlignet med unge mus, viser gamle mus mer alvorlig klinisk sykdom og bukker under for sykdom oftere. Ved å separere transport og sykdom i forskjellige trinn og gi muligheten til å analysere de genetiske variantene av både patogenet og verten, tillater denne S. pneumoniae / IAV-koinfeksjonsmodellen detaljert undersøkelse av interaksjonene til en viktig pathobiont med verten i forskjellige faser av sykdomsprogresjon. Denne modellen kan også tjene som et viktig verktøy for å identifisere potensielle terapeutiske mål mot sekundær pneumokokklungebetennelse hos følsomme verter.

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness at JoVE.

A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness

Dette papiret beskriver en ny musemodell for overgangen av pneumokokker fra en asymptomatisk kolonisator til et sykdomsfremkallende patogen under virusinfeksjon. Denne modellen kan lett tilpasses for å studere polymikrobielle og vertspatogene interaksjoner i de forskjellige faser av sykdomsprogresjon og på tvers av ulike verter.

En musemodell for overgangen av Streptococcus pneumoniae fra kolonisator til patogen ved viral co-infeksjon rekapitulerer aldersforverret sykdom

Streptococcus pneumoniae (pneumococcus) is an asymptomatic colonizer of the nasopharynx in most individuals but can progress to a pulmonary and systemic ...

Denne metoden beskriver en ny musemodell for å studere overgangen til pneumokokker fra en asymptomatisk kolonisator til et sykdomsfremkallende patogen under virusinfeksjon. Det etterligner nærmere hva som skjer hos mennesker. Denne modellen kan være et viktig verktøy for å identifisere potensielle terapeutiske mål mot sekundær pneumokokklungebetennelse hos følsomme verter.Denne modellen reproduserer følsomheten for aldring. Derfor kan den brukes til å forstå hvilke aspekter av verten som blir defekte med alderen og tillate oss å skreddersy behandlingsalternativer for sårbare eldre verter. Voksende pneumokokkbiofilm er utfordrende siden de forskjellige stammene tar forskjellige mengder tid.Mitt råd er å prøve å dyrke biofilmen før du utfører dyrestudien. Når H292-cellene er 100% konfluerende, vask cellene tre ganger med PBS. Deretter tilsettes 250 mikroliter 4% paraformaldehyd per brønn for å fikse cellene og inkubere i en time på is eller over natten ved fire grader Celsius.Strake streptokokker pneumoniae stamme av interesse på blod agar plate og inkubere over natten ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid. Neste dag inokulerer bakteriene fra platen til friske, kjemisk definerte medier eller CDM pluss Oxyrase ved å vaske bakteriene av platen ved å legge til en milliliter CDM pluss Oxyrase og forsiktig løfte bakteriekoloniene ved hjelp av siden av en milliliter pipettespiss, vær forsiktig så du ikke skraper agar. Fortynn bakteriekulturen i CDM pluss Oxyrase til en start-OD 600 på 0,05.Deretter vokser bakteriene i et løst avkortet 50 milliliter konisk rør ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid til OD på 0,2 er nådd. Neste virvel bakteriekulturrøret. Frø 0,5 milliliter av kulturen på de faste H292-cellene og tilsett ytterligere 0,5 milliliter CDM pluss Oxyrase-medium per brønn.Legg CDM pluss Oxyrase til kontrollbrønnene uten bakterier. Inkuber platen i 48 timer ved 34 grader Celsius og 5% karbondioksid. Hver 12. time, etter den første såingen, erstatt forsiktig 0,5 milliliter av mediet med fersk CDM pluss Oxyrase.Vær forsiktig så du ikke forstyrrer dannelsen av biofilm. Sjekk bunnen av platen for biofilm og se etter økende skyighet etter hvert som tiden går på grunn av biofilmvekst. Etter 48 timer, fjern supernatanten og vask biofilmen to ganger med en milliliter PBS.Deretter resuspenderes biofilmen i en milliliter fersk CDM og pipette kraftig opp og ned for å løfte biofilmen. For hver bakteriestamme, basseng kulturen fra alle brønnene i et 50 milliliter rør. Bland godt ved å vippe det tette røret forsiktig opp og ned flere ganger.Deretter tilsettes 40% glyserol og CDM ved like volumer for å oppnå en bakteriell suspensjon med en endelig konsentrasjon på 20% glyserol. Aliquot en milliliter i et mikrosentrifugerør, flashfrys på tørris, og spar ved minus 80 grader Celsius. Tine biofilmen vokst alikoter på is og spinn ved 1.700 G i fem minutter.Fjern og kast supernatanten forsiktig uten å forstyrre pelleten. Vask deretter pelleten ved å resuspendere den i en milliliter PBS og spinn den igjen. Fjern supernatanten og resuspender pelleten i volumet som trengs for å nå ønsket konsentrasjon.Inokuler C57 svart seks hannmus intranasalt med fem ganger 10 til den sjette kolonidannende enheten, eller CFU, ved å pipette fem mikroliter av det fortynnede inokulumet inn i hver naris. Etter inokulering, hold musen fast og stabiliser hodet til volumet inhaleres. Når viruset har tint, fortynn viruset i PBS til ønsket konsentrasjon.Plasser oftalmisk smøremiddel på øynene til musen før anestesi. Infiser umiddelbart den bedøvede musen med 50 mikroliter av 20 plakkdannende enheter, eller PFU, av influensa A-virus eller IAV intratrakealt ved å bruke stump pinsett for å trekke tungen ut av munnen og pipettere volumet av væske ned i luftrøret. Etter utvinning, intranasalt inokulere 10 mikroliter av 200 PFU av IAV ved hjelp av inokulasjonsmetoden beskrevet tidligere.For lungeoppsamling, ved hjelp av disseksjonssaks, kutt sidene av det eksponerte ribbeholderen og trekk ribbeina forsiktig opp mot musens hode for å avsløre hjertet. Sett en 25 gauge nål festet til en 10 ml sprøyte ferdigfylt med PBS inn i høyre ventrikkel og begynne sakte parfymering. Se etter bleking av lungene som en indikator på vellykket perfusjon.Skyll sakte for å unngå å bryte lungevevet. Løft hjertet med tang og gjør et kutt for å skille lungene og hjertet. Når de er separert, plukk opp alle lungelapper med tang og skyll i en tallerken med steril PBS for å fjerne gjenværende blod.I en petriskål, hakk lungen i små biter og bland godt. Fjern halvparten av lungeblandingen for å bestemme bakteriell CFU eller viral PFU og legg den i et rundt bunn 15 milliliter rør forhåndsfylt med 0,5 ml PBS for homogenisering. Fjern den andre halvdelen av lungen for flowcytometri og plasser den i en ikke-vevskultur behandlet 24-brønns plate med hver brønn forhåndsfylt med 0,5 ml RP10.La stå i romtemperatur til behandling. For å homogenisere det oppsamlede vevet, rengjør homogeniseringssonden ved å sette den i 70% etanol og slå på homogenisatoren ved 60% strøm i 30 sekunder. Gjenta dette trinnet i sterilt vann i 10 sekunder.Homogeniser hvert vev i ett minutt. For telling av bakterietall, plate seriefortynninger på blodagarplater. For å beregne total CFU, bruk 10 mikroliter til plate og noter det endelige volumet i milliliter for hver prøve.Plate nasopharynx-prøvene på blodagarplater supplert med tre mikrogram per milliliter gentamycin for å velge veksten av S pneumoniae mens du hemmer veksten av andre mikroorganismer. Inkuber over natten ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid. For flowcytometri, tilsett 500 mikroliter fordøyelsesbuffer til hver brønn i en 24-brønnplate som inneholder en lungeprøve.Inkuber platen i 45 minutter til en time. Deretter flytter du de fordøyede lungene ved hjelp av en P-1000 mikropipette og plasserer dem på filteret. Bruk deretter stempelet på en tre milliliter sprøyte til å mose prøven.Biofilmvekst S.pneumoniae inoculum resulterer i konsistent pneumokokkbærerskap begrenset til nasofarynks, samtidig som systematisk spredning unngås. Sykdomspresentasjonen hos S pneumoniae IAV-koinfiserte mus var avhengig av bakteriestammen. Mens det ikke var noen signifikant forskjell i bakterieantall i nasofarynks blant noen av stammene, spredte S pneumoniae, TIGR4 og D39, men ikke EF3030, seg til lungene innen 48 timer etter IAV-infeksjon.40% av musene infisert med S pneumoniae TIGR4 viste bakteriell spredning til lungene, og av disse ble halvparten bakteriemiske. Mus infisert med S pneumoniae D39 viste 100% spredning til lungene og halvparten av disse opplevde bakteriemi. Ved sporing av total overlevelse, uavhengig av bakteriestammen, var overlevelsesraten for coinfected mus signifikant lavere enn musene som enkelt ble utfordret med S pneumoniae.Denne modellen ble også brukt til å vurdere tilstedeværelse av ulike immunceller i lungene etter IAV-infeksjon. Bakteriestammene D39 og TIGR4 fremkalte en signifikant økning over baseline i tilstrømningen av inflammatoriske immunceller fra sirkulasjonen, som nøytrofiler og monocytter, mens EF3030 ikke gjorde det. IAV-infeksjon alene fremkalte en signifikant økning over baseline i tilstrømningen av immunceller som NK-celler og gamma delta T-celler.Disse antivirale responsene ble signifikant avstumpet hos mus intranasalt infisert med S pneumoniae før viral utfordring. Hos enkeltinfiserte mus varierte ikke virustiterne mellom de unge og eldre kohortene. Gamle mus viste tidligere og betydelig mer alvorlige tegn på sykdom og døde raskere, innen 24 timer, mens de unge kontrollene overlevde infeksjonen bedre.Ved å skille vogn og sykdom i forskjellige trinn kan vi undersøke både immunresponsen og bakterielle og/eller virale faktorer som er viktige i ulike faser av sykdomsprogresjon. Vi håper at denne modellen vil bli tilpasset av andre laboratorier for å studere andre polymikrobielle interaksjoner og vertspatogeninteraksjoner i ulike faser av sykdomsprogresjon og på tvers av de forskjellige vertene.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Den<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Mus Modell: Studerer patogen og Host Bidrag til infeksiøs kolitt

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Karakterisering av inflammatoriske responser under intranasal kolonisering med streptokokker lungebetennelse

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Overvåking Endringer i Membrane polaritet, Membran Integrity, og intracellulær ionekonsentrasjoner i<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Ved hjelp av fluorescerende fargestoffer

Membrane depolarization and ion fluxes are events that have been studied extensively in biological systems due to their ability to profoundly impact ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Innkapsling Serotypebestemmelse av<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Bruke Quellung Reaction

There are over 90 different capsular serotypes of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). As well as being a tool for understanding pneumococcal ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

A Mouse Modell for Patogen Utløst kronisk betennelse på lokale og systemiske nettsteder

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Capsular Serotypebestemmelse av<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Av Latex Agglutinasjon

Latex agglutination reagents are widely used in microbial diagnosis, identification and serotyping. Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) is a major ...

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

En<em&gt; In Vitro</em&gt; Modell for måling av immunresponser mot Malaria i sammenheng med HIV Samtidig infeksjon

Malaria and HIV co-infection is a growing health priority. However, most research on malaria or HIV currently focuses on each infection individually. ...