Name: a mouse model for the transition of streptococcus pneumoniae from colonizer to pathogen upon viral co-infection recapitulates age-exacerbated illness
Uploaded: 2022-09-28T14:15:00
Duration: 12 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness at JoVE.

Мы хотели бы поблагодарить Ника Ленхарда за критическое прочтение и редактирование этой рукописи. Мы также хотели бы поблагодарить Эндрю Камилли и Энтони Кампаньяри за бактериальные штаммы и Брюса Дэвидсона за вирусные штаммы. Эта работа была поддержана грантом Национального института здравоохранения (R21AG071268-01) для J.L. и грантами Национального института здравоохранения (R21AI145370-01A1), (R01AG068568-01A1), (R21AG071268-01) для E.N.B.G.

У авторов нет конфликтов интересов, которые необходимо раскрывать.

Большинство существующих экспериментальных исследований коинфекции S. pneumoniae / IAV основаны на доставке бактерий в легкие мышей, предварительно инфицированных IAV. Эти модели помогли выявить изменения в легочной среде и системном иммунном ответе, которые делают хозяина восприимчивым к вторичной бактериальной инфекции 15,16,17,32,33,34,35,36,37. Однако эти модели не смогли имитировать переход S. pneumoniae от бессимптомного колонизатора к патогену, способному вызывать серьезные легочные и системные инфекции. Кроме того, эти модели не подходят для изучения факторов хозяина и взаимодействия хозяина и патогена в верхних дыхательных путях, которые способствуют восприимчивости к инфекции. Предыдущая модель перемещения пневмококков из носоглотки в легкие после инфекции IAV основывалась на бактериальной инфекции носоглотки с последующей вирусной инфекцией. Однако он не смог воспроизвести тяжелые признаки заболевания, наблюдаемые у пациентов21. Модифицированная модель мышиной инфекции, описанная здесь, повторяет переход S. pneumoniae от бессимптомного носительства к патогену, вызывающему тяжелое клиническое заболевание.
Важнейшим этапом этой модели является установление инфекции S. pneumoniae в носоглотке. Streptococcus pneumoniae образуют биопленки и колонизируют носоглотку с разной эффективностью21,38. Для установления последовательной инфекции требуется не менее 5 × 106 КОЕ бактериальных штаммов, выращенных в биопленке, протестированных до сих пор23. Рекомендуется, чтобы любой новый бактериальный штамм был протестирован на стабильную инфекцию носоглотки до вирусной инфекции. Что касается вирусной коинфекции, предыдущие исследования показали, что интраназальная инфекция IAV необходима для дисперсии бактерий из носоглотки21,22,23. В этих предыдущих исследованиях использовалось 500 БОЕ IAV для интраназальной доставки, в то время как в этом исследовании 200 БОЕ было достаточно для увеличения количества бактерий в носоглотке. Инфекция IAV не ограничивается верхними дыхательными путями и может распространяться на легкие39,40, что является ключом к тому, чтобы сделать легочную среду более благоприятной для бактериальной инфекции15,16,41. Доставка IAV в легкие может быть достигнута либо интраназальной доставкой, либо интратрахеальной установкой анестезированных мышей. Предыдущая работа с мышами BALB/cByJ показала, что интраназальная доставка приводит к вирусной пневмонии21; однако доступ инокулята в легкие после интраназальной инокуляции более ограничен у мышей C57BL / 6. У мышей C57BL/6 для последовательной доставки вируса23 требуется интратрахеальная установка. В этой модели предшествующая бактериальная колонизация ускоряет проявление симптомов заболевания после вирусной инфекции23. Поскольку вирусная инфекция сама по себе может вызывать симптомы заболевания с потенциальными изменениями кинетики, рекомендуется сначала протестировать диапазон доз для любого нового тестируемого вирусного штамма и выбрать дозу, которая выявляет ускоренную кинетику у коинфицированных хозяев.
Легкие обеспечивают еще один критический показатель для оценки заболевания в этой модели. Для оценки патогенной нагрузки и притока иммунных клеток можно использовать легкое той же мыши. Однако, поскольку тяжесть инфекции и воспаления может различаться между долями, рекомендуется не брать разные доли одного и того же легкого для различных оценок. Скорее, все доли можно измельчить на мелкие кусочки, хорошо перемешать вместе, а затем одинаково разобрать для разных оценок. Аналогичным образом, носоглотка может быть использована для подсчета бактериальных КОЕ или вирусного КОЕ и иммунного ответа. Однако количество клеток, полученных из промывок и тканей, слишком мало, чтобы выполнить проточную цитометрию без объединения образцов мышей в одной группе. Кроме того, воспаление в носоглотке можно оценить гистологически23.
Важной особенностью этой модели является то, что она повторяет клиническое заболевание, наблюдаемое у пациентов. У людей вторичная пневмококковая пневмония после инфекции IAV часто приводит к очевидным признакам заболевания, включая кашель, одышку, лихорадку и мышечные боли, которые могут привести к госпитализации, дыхательной недостаточности и даже смерти 8,15,42,43. Эта модель повторяет тяжелые признаки клинического заболевания, наблюдаемые у людей, с точки зрения затруднения дыхания (отраженного в оценке дыхания) и общего недомогания (отраженного в оценках осанки и движения), демонстрируемого мышами, а также смерти у некоторых здоровых молодых людей из контрольной группы. Обострение симптомов заболевания у коинфицированных мышей, вероятно, является результатом как бактериальной диссеминации в легкие, так и нарушения вирусного клиренса у мышей с пневмококковым носительством23. Ограничением модели является то, что частота клинического заболевания и распространения бактерий из носоглотки варьируется между мышами и зависит от бактериального штамма, возраста хозяина и генотипа21,22,23. Отражая это, для инвазивных штаммов прогрессирование от локализованной инфекции (без обнаруживаемой бактериемии) до смерти может произойти в течение 24 часов. Поэтому для истинной оценки системного распространения бактериемию следует наблюдать через более короткие промежутки времени (каждые 6-12 ч). Аналогичным образом, оценка заболевания может быстро меняться, особенно в первые 72 часа после коинфекции. Поэтому, чтобы внимательно отслеживать симптомы заболевания, рекомендуется контролировать мышей три раза в день в течение 1-3 дней после заражения IAV.
Таким образом, эта модель воспроизводит перемещение S. pneumoniae от бессимптомного колонизатора носоглотки к патогену, способному вызывать легочные и системные заболевания при инфекции IAV. В этой модели IAV запускает переход S. pneumoniae путем изменения поведения бактерий в носоглотке, увеличения распространения бактерий в легкие и изменения антибактериального иммунитета23. Аналогичным образом, бактериальный носитель притупляет противовирусный иммунный ответ и ухудшает клиренс IAV из легких23. Это делает эту модель идеальной для анализа изменений иммунных реакций при единичных и полимикробных инфекциях. Кроме того, течение заболевания после коинфекции частично зависит от штамма пневмококков, присутствующих в носоглотке. Таким образом, модель подходит для анализа бактериальных факторов, необходимых для бессимптомной колонизации, по сравнению с патогенным переходом S. pneumoniae. Наконец, эта модель воспроизводит восприимчивость старения к коинфекциям, и, хотя это не было проверено здесь, ее можно легко использовать для оценки влияния фона хозяина на течение заболевания. В заключение, разделение носительства и заболевания на отдельные этапы дает возможность проанализировать генетические варианты как патогенов, так и хозяина, что позволяет детально изучить взаимодействия важного патобионта с хозяином на разных фазах прогрессирования заболевания. В дальнейшем эта модель может быть использована для адаптации вариантов лечения уязвимых хозяев.

Streptococcus pneumoniae (пневмококк) - это грамположительные бактерии, которые бессимптомно обитают в носоглотке большинства здоровых людей 1,2. Под влиянием факторов, которые полностью не определены, пневмококки могут переходить от доброкачественных колонизаторов носоглотки к патогенам, которые распространяются на другие органы, что приводит к серьезным инфекциям, включая средний отит, пневмонию и бактериемию3. Проявления пневмококковой инфекции частично зависят от штаммоспецифических различий, включая серотип, который основан на составе капсульных полисахаридов. На сегодняшний день охарактеризовано более 100 серотипов, и некоторые из них связаны с более инвазивными инфекциями 4,5. Ряд других факторов увеличивает риск пневмококковой инфекции. Одним из таких факторов является вирусная инфекция, при которой риск пневмококковой пневмонии увеличивается в 100 раз на 6,7 IAV. Исторически сложилось так, что S. pneumoniae является одной из наиболее частых причин вторичной бактериальной пневмонии после гриппа и ассоциируется с худшими исходами8. Еще одним важным фактором риска является пожилой возраст. Фактически, S. pneumoniae является основной причиной внебольничной бактериальной пневмонии у пожилых людей старше 65 лет 9,10. Пожилые люди составляют большинство (>75%) смертей от пневмонии и гриппа, что указывает на то, что два фактора риска - старение и инфекция IAV - синергетически ухудшают восприимчивость к заболеванию11,12,13,14. Однако механизмы, с помощью которых вирусная инфекция вызывает переход пневмококков от бессимптомного колонизатора к инвазивному патогену, и то, как это формируется факторами хозяина, остаются плохо определенными. Во многом это связано с отсутствием модели мелких животных, которая повторяет переход от бессимптомной пневмококковой колонизации к критическому клиническому заболеванию.
Исследования коинфекции классически моделировались на мышах, инокулированных пневмококками непосредственно в легкие через 7 дней после заражения гриппом15,16. Это воспроизводит восприимчивость к вторичной бактериальной пневмонии и идеально подходит для изучения того, как противовирусные иммунные реакции ослабляют антибактериальную защиту17. Однако лонгитюдные исследования на людях показали, что пневмококковое носительство в носоглотке, где бактерии могут образовывать бессимптомные биопленки18, равномерно связано с инвазивными заболеваниями19,20. Бактериальные изоляты от инфекций среднего уха, легких и крови генетически идентичны тем, которые обнаруживаются в носоглотке20. Таким образом, для изучения перехода от бессимптомного носительства к инвазивному заболеванию после инфекции IAV была создана модель, в которой мышам интраназально вводили пневмококки, выращенные в биопленке, с последующей инфекцией IAV носоглотки21,22. Вирусная инфекция верхних дыхательных путей привела к изменениям в среде хозяина, что привело к рассеиванию пневмококков из биопленок и их распространению в нижние дыхательные пути21. Эти дисперсные бактерии повышали экспрессию факторов вирулентности, важных для инфекции, превращая их из колонизаторов в патогены21. Эти наблюдения подчеркивают сложное взаимодействие между вирусом, хозяином и бактериями и демонстрируют, что изменения в организме хозяина, вызванные вирусной инфекцией, оказывают непосредственное влияние на поведение пневмококковой инфекции, что, в свою очередь, изменяет течение бактериальной инфекции. Тем не менее, эта модель не повторяет тяжелые признаки болезни, наблюдаемые у людей, вероятно, потому, что вирус ограничен носовой полостью, а системное воздействие вирусной инфекции на иммунитет хозяина и повреждение легких не повторяется.
Недавно мы создали модель, которая включает в себя сложное взаимодействие между хозяином и патогенами, но также более точно имитирует тяжесть заболевания, наблюдаемую у людей23. В этой модели мышей сначала интраназально интестируют пневмококками, выращенными в биопленке, чтобы установить бессимптомное носительство, а затем инфекцию IAV как носоглотки, так и легких. Это привело к распространению бактерий в легкие, воспалению легких и заболеванию, которое прогрессировало до летального исхода у части молодых мышей23. Это предыдущее исследование продемонстрировало, что как вирусная, так и бактериальная инфекция изменяет защиту хозяина: вирусная инфекция способствовала распространению бактерий, а предшествующая бактериальная колонизация ухудшала способность хозяина контролировать уровень IAVв легких 23. Изучение иммунного ответа показало, что инфекция IAV снижает антибактериальную активность нейтрофилов, в то время как бактериальная колонизация притупляет ответ интерферона I типа, критически важный для противовирусной защиты23. Важно отметить, что эта модель воспроизводила восприимчивость к старению. По сравнению с молодыми мышами, старые мыши проявляли признаки заболевания раньше, проявляли более тяжелое клиническое заболевание и чаще поддавались инфекции23. Работа, представленная в этой рукописи, показывает, что степень заболевания также зависит от бактериального штамма, поскольку инвазивные пневмококковые штаммы демонстрируют более эффективное распространение при инфекции IAV, проявляют более явные признаки воспаления легких и приводят к ускоренным темпам заболевания по сравнению с неинвазивными штаммами. Таким образом, эта модель коинфекции S. pneumoniae/IAV позволяет детально изучить как патогенные факторы, так и факторы хозяина и хорошо подходит для изучения иммунных реакций на полимикробные инфекции на разных фазах прогрессирования заболевания.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-Aminobenzoic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1267318</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well round bottom plates</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>650101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m Filters</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>07-201-432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC147440250</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avicel</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>501785325</td>
			<td>Microcyrstalline cellulose&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Cytofix Fixation Buffer&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BDB554655</td>
			<td>Fixation Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Fortessa</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Flow cytometer&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Intramedic Polyethylene Tubing&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>427410</td>
			<td>Tubing for nasal lavage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Disposable Syringes with Luer-Lok Tips (1 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-823-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Microtainer Capillary Blood Collector and BD Microgard Closure</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>02-675-185</td>
			<td>Blood collection tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beta-Nicotinamide adenine dinucleotide</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6233703</td>
			<td>Mix IV stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC230090010</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>#000644</td>
			<td>Mice used in this study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride Anhydrous</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>C77-500</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD103 BV 421</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB562771</td>
			<td>Clone: M290 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11b APC</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-112-9622</td>
			<td>Clone: M1/70, DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11c PE</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB565592</td>
			<td>Clone: N418 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 AF 488</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>OB153030</td>
			<td>Clone: 145-2C11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD4 V450</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>BDB560470</td>
			<td>Clone: RM4.5 DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 APC eF-780</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-9642</td>
			<td>Clone: 30-F11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 PE</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-103-70</td>
			<td>Clone: 30-F11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD8&#945; BV 650</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>BDB563234</td>
			<td>Clone: 53-6.7 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Choline chloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC110290500</td>
			<td>Final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Disposable Vacuum Filter/Storage Systems</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>09-761-107</td>
			<td>Filter sterilzation apparatus&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Tissue Culture Treated T-25 Flasks</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>10-126-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;Costar Clear Multiple Well Plates</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>07-201-590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;DMEM With L-Glutamine and 4.5 g/L Glucose; Without Sodium Pyruvate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>MT10017CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanocobalamin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC405925000</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D39</td>
			<td>National Collection of Type Culture (NCTC)</td>
			<td>NCTC 7466</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Alanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1023114</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Calcium pantothenate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC243301000</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>D16-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase&#160;</td>
			<td>Worthington Biochemical&#160;</td>
			<td>LS002147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eagles Minimum Essential Medium</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH4616-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EF3030</td>
			<td>Center for Disease Control and Prevention&#160;</td>
			<td>Available via the isolate bank request</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain, request using strain name</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F480 PE Cy7</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-9713</td>
			<td>Clone: BMB DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 50 mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-432-22</td>
			<td>50 mL round bottom tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Round-Bottom Polypropylene Test Tubes With Cap</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-959-11B</td>
			<td>15 mL round bottom tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Round-Bottom Polystyrene Test Tubes (5 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-959-5</td>
			<td>FACS tubes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ferric Nitrate Nonahydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>I110-100</td>
			<td>Mix III stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Delicate Dissecting Scissors</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-951-5</td>
			<td>Instruments used for harvest</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Disposable Inoculating Loops&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-363-602</td>
			<td>Inoculating loops&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Dissecting Tissue Forceps</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>13-812-38</td>
			<td>Forceps for harvest</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Premium Microcentrifuge Tubes: 1.5 mL</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>05-408-137</td>
			<td>Micocentrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand&#160;Sterile Syringes for Single Use (10 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-955-459</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Folic Acid</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC216630500</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco RPMI 1640 (ATCC)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A1049101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;DPBS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14190250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;HBSS, calcium, magnesium, no phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14025134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;MEM (Temin&#39;s modification) (2x), no phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>11-935-046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>15-140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Trypan Blue Solution, 0.4%</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>15-250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>25-200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol (Certified ACS)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>G33-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AA3643530</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1202414</td>
			<td>Mix II stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen UltraComp eBeads Compensation Beads</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>50-112-9040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron (II) sulfate heptahydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1517836</td>
			<td>Mix III stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Alanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6027918</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Arginine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1573814</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Asparagine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAB2147322</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Aspartic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1352022</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cysteine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1043518</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cysteine hydrochloride monohydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1038914</td>
			<td>Final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cystine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1376218</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC156211000</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>O2956-100</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Histidine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC166150250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES LIVE/DEAD Fixable Blue Dead Cell Stain Kit, for UV excitation</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-112-1524</td>
			<td>Clone: N/A DF 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Isoleucine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC166170250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Leucine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP385-100</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Lysine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6222514</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Methionine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1031822</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low endotoxin BSA&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A1470-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Phenylalanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1323814</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Proline</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1019922</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Serine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC132660250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Threonine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC138930250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Tryptophan</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1023014</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Valine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1272014</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ly6C BV 605</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB563011</td>
			<td>Clone: AL-21 DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ly6G AF 488&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>NC1102120</td>
			<td>Clone: IA8, DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cells&#160;</td>
			<td>American Type Culture Collection (ATCC)</td>
			<td>CCL-34</td>
			<td>MDCK cell line for PFU analuysis&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate 7-Hydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>60-019-68</td>
			<td>CDM starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manganese Sulfate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>M113-500</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MilQ water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Ultra-pure water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Fc Block</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB553142</td>
			<td>Clone: 2.4G2 DF 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MWI VETERINARY&#160;PURALUBE VET OINTMENT</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC1886507</td>
			<td>Eye lubricant for infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NCI-H292 mucoepidermoid carcinoma cell line&#160;</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1848</td>
			<td>H292 lung epithelial cell line for biofilm growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Niacinamide</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>18-604-792</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NK 1.1 AF 700</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-4692</td>
			<td>Clone: PK136 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxyrase For Broth 50Ml Bottle 1/Pk</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>50-200-5299</td>
			<td>To remove oxygen from liquid cultures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 4% in PBS</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td>J19932-K2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pivetal Isoflurane&#160;</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-893-8440</td>
			<td>Isoflurane for anesthesia during infection&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate Dibasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P288-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P285-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridoxal hydrochloride&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC352710250</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridoxamine dihydrochloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6267906</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Riboflavin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC132350250</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Acetate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>0530-500G</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide&#160;</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP922I-500</td>
			<td>For FACS buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S233-500</td>
			<td>Starter stock and final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Dibasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S374-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S369-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCR APC&#160;</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-8889</td>
			<td>Clone: GL-3 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCR&#946; APC-Cy7</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>BDB560656</td>
			<td>Clone: H57-597 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Blood Agar with Gentamicin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>R01227</td>
			<td>Blood agar plates with the antibiotic gentamicin&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific&#160;Trypsin, TPCK Treated</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>PI20233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiamine hydrochloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC148991000</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TIGR4</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>BAA-334</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uracil</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC157300250</td>
			<td>Mix II stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worthington Biochemical Corporation&#160;Collagenase, Type 2, 1 g</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC9693955</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model for the transition of streptococcus pneumoniae from colonizer to pathogen upon viral co-infection recapitulates age-exacerbated illness

Streptococcus pneumoniae (пневмококк) является бессимптомным колонизатором носоглотки у большинства людей, но может прогрессировать до легочного и системного патогена при инфекции вирусом гриппа А (IAV). Пожилой возраст повышает восприимчивость хозяина к вторичной пневмококковой пневмонии и связан с ухудшением исходов заболевания. Факторы-хозяева, управляющие этими процессами, четко не определены, отчасти из-за отсутствия животных моделей, которые воспроизводят переход от бессимптомной колонизации к тяжелому клиническому заболеванию. 
В этой статье описывается новая модель мыши, которая воссоздает переход пневмококков от бессимптомного носительства к заболеванию при вирусной инфекции. В этой модели мышей сначала интраназально инокулируют выращенные в биопленке пневмококки для установления бессимптомного носительства, а затем инфекцию IAV как носоглотки, так и легких. Это приводит к распространению бактерий в легкие, воспалению легких и очевидным признакам болезни, которые могут прогрессировать до летального исхода. Степень заболевания зависит от бактериального штамма и факторов хозяина. 
Важно отметить, что эта модель воспроизводит восприимчивость к старению, потому что по сравнению с молодыми мышами старые мыши проявляют более тяжелое клиническое заболевание и чаще умирают от болезней. Разделяя носительство и заболевание на отдельные этапы и предоставляя возможность анализировать генетические варианты как патогена, так и хозяина, эта модель коинфекции S. pneumoniae/IAV позволяет детально изучить взаимодействие важного патобионта с хозяином на разных этапах прогрессирования заболевания. Эта модель также может служить важным инструментом для выявления потенциальных терапевтических мишеней против вторичной пневмококковой пневмонии у восприимчивых хозяев.

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness at JoVE.

A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness

В этой статье описана новая мышиная модель перехода пневмококка от бессимптомного колонизатора к болезнетворному патогену во время вирусной инфекции. Эта модель может быть легко адаптирована для изучения полимикробных взаимодействий и взаимодействий хозяина с патогеном на разных этапах прогрессирования заболевания и у разных хозяев.

Мышиная модель перехода Streptococcus pneumoniae от колонизатора к патогену при вирусной коинфекции повторяет возрастное заболевание

Streptococcus pneumoniae (pneumococcus) is an asymptomatic colonizer of the nasopharynx in most individuals but can progress to a pulmonary and systemic ...

Этот метод описывает новую мышиную модель для изучения перехода пневмококка от бессимптомного колонизатора к болезнетворному патогену при вирусной инфекции. Он более точно имитирует то, что происходит у людей. Эта модель может быть важным инструментом для выявления потенциальных терапевтических мишеней против вторичной пневмококковой пневмонии у восприимчивых хозяев.Эта модель воспроизводит восприимчивость к старению. Таким образом, его можно использовать, чтобы понять, какие аспекты хозяина становятся дефектными с возрастом, и позволить нам адаптировать варианты лечения для уязвимых пожилых хозяев. Выращивание пневмококковой биопленки является сложной задачей, поскольку разные штаммы занимают разное количество времени.Я советую попробовать вырастить биопленку перед проведением исследования на животных. Как только ячейки H292 будут на 100% сливаться, трижды промойте клетки PBS. Затем добавьте 250 микролитров 4% параформальдегида на лунку, чтобы зафиксировать клетки, и инкубируйте в течение одного часа на льду или на ночь при четырех градусах Цельсия.Штамм Streptococcus pneumoniae представляет интерес для анализа на пластине с кровяным агаром и инкубируется в течение ночи при температуре 37 градусов по Цельсию и 5% углекислого газа. На следующий день инокулируйте бактерии с тарелки в свежую, химически определенную среду или CDM плюс оксиразу, смывая бактерии с тарелки, добавляя один миллилитр CDM плюс оксиразу и осторожно поднимая бактериальные колонии, используя сторону наконечника пипетки объемом в один миллилитр, стараясь не соскребать агар. Разбавьте бактериальную культуру в CDM плюс оксиразу до начального OD 600 0,05.Затем выращивайте бактерии в неплотно закрытой конической трубке объемом 50 миллилитров при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа до тех пор, пока не будет достигнут OD 0,2. Затем вихревая бактериальная культуральная трубка. Засейте 0,5 миллилитра культуры на закрепленные клетки H292 и добавьте еще 0,5 миллилитра CDM плюс оксиразную среду на лунку.Добавьте CDM плюс оксиразу в контрольные лунки без бактерий. Инкубируйте тарелку в течение 48 часов при температуре 34 градуса Цельсия и 5% углекислого газа. Каждые 12 часов, после первоначального посева, аккуратно заменяйте 0,5 миллилитра среды свежим CDM плюс оксиразой.Будьте осторожны, чтобы не нарушить образование биопленки. Проверьте нижнюю часть пластины на наличие биопленки и обратите внимание на увеличение помутнения с течением времени из-за роста биопленки. Через 48 часов удалите надосадочную жидкость и дважды промойте биопленку одним миллилитром PBS.Затем ресуспендируйте биопленку в одном миллилитре свежего CDM и энергично пипеткой вверх и вниз, чтобы поднять биопленку. Для каждого бактериального штамма соберите культуру из всех лунок в 50-миллилитровую пробирку. Хорошо перемешайте, осторожно наклонив плотно закрытую трубку вверх и вниз несколько раз.Затем добавьте 40% глицерина и CDM в равных объемах для получения бактериальной суспензии с конечной концентрацией 20% глицерина. Залейте один миллилитр в микроцентрифужную пробирку, мгновенно заморозьте на сухом льду и сэкономьте при температуре минус 80 градусов по Цельсию. Биопленку, выращенную аликвоты, разморозить на льду и отжимать при температуре 1 700 г в течение пяти минут.Осторожно удалите и выбросьте надосадочную жидкость, не нарушая гранулы. Затем вымойте гранулу, ресуспендировав ее в одном миллилитре PBS, и снова открутите. Удалите надосадочную жидкость и ресуспендируйте гранулу в объеме, необходимом для достижения желаемой концентрации.Интраназально инокулируйте мышь-самца C57 от 10 до шестой колониеобразующих единиц или КОЕ путем пипетки пяти микролитров разбавленного инокулята в каждый нарис. После прививки крепко держите мышь, стабилизируя голову до тех пор, пока объем не вдохнет. Как только вирус оттает, разбавьте вирус в PBS до желаемой концентрации.Нанесите офтальмологическую смазку на глаза мыши перед анестезией. Немедленно заразите анестезированную мышь 50 микролитрами 20 бляшеобразующих единиц или БОЕ вируса гриппа А или IAV интратрахеально, используя тупой пинцет, чтобы вытащить язык изо рта и пипетировать объем жидкости вниз по трахее. После выздоровления интраназально инокулируют 10 микролитров 200 БОЕ IAV с использованием метода инокуляции, описанного ранее.Для сбора легких с помощью ножниц для рассечения разрежьте боковые стороны обнаженной грудной клетки и осторожно потяните ребра вверх к голове мыши, чтобы обнажить сердце. Вставьте иглу 25 калибра, прикрепленную к 10-миллилитровому шприцу, предварительно заполненному PBS, в правый желудочек и начните медленно перфузировать. Ищите отбеливание легких как показатель успешной перфузии.Медленно промывайте, чтобы не повредить легочную ткань. Приподнимите сердце щипцами и сделайте разрез, чтобы отделить легкие и сердце. После отделения соберите все доли легкого щипцами и промойте в посуде со стерильным PBS, чтобы удалить остатки крови.В чашке Петри нарежьте легкое небольшими кусочками и хорошо перемешайте. Удалите половину легочной смеси, чтобы определить бактериальный КОЕ или вирусный БОЕ, и поместите его в 15-миллилитровую пробирку с круглым дном, предварительно заполненную 0,5 миллилитрами PBS для гомогенизации. Удалите другую половину легкого для проточной цитометрии и поместите ее в 24-луночную пластину, обработанную нетканевой культурой, с предварительным заполнением каждой лунки 0,5 миллилитра RP10.Оставить при комнатной температуре до обработки. Чтобы гомогенизировать собранную ткань, очистите зонд гомогенизатора, поместив его в 70% этанол и включив гомогенизатор на 60% мощности на 30 секунд. Повторите этот шаг в стерильной воде в течение 10 секунд.Гомогенизируйте каждую ткань в течение одной минуты. Для перебора бактериальных номеров пластинчатые серийные разведения на пластинах с кровяным агаром. Чтобы рассчитать общее количество КОЕ, используйте 10 микролитров для пластины и запишите окончательный объем в миллилитрах для каждого образца.Нанесите образцы носоглотки на пластины с кровяным агаром, дополненные тремя микрограммами на миллилитр гентамицина, чтобы выбрать рост S. pneumoniae при одновременном ингибировании роста других микроорганизмов. Инкубировать в течение ночи при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа. Для проточной цитометрии добавьте 500 микролитров буфера для разложения в каждую лунку 24-луночной пластины, содержащей образец легкого.Выдерживают тарелку от 45 минут до одного часа. Далее с помощью микропипетки-1000 перемещают переваренные легкие и помещают их на фильтр. Затем используйте поршень трехмиллилитрового шприца, чтобы размять образец.Рост биопленки Инокулят S.pneumoniae приводит к постоянному пневмококковому носительству, ограниченному носоглоткой, избегая при этом систематического распространения. Проявление заболевания у коинфицированных мышей S. pneumoniae IAV зависело от бактериального штамма. Хотя не было существенной разницы в количестве бактерий в носоглотке ни у одного из штаммов, S. pneumoniae, TIGR4 и D39, но не EF3030, распространились в легкие через 48 часов после заражения IAV.У 40% мышей, инфицированных S. pneumoniae TIGR4, наблюдалась бактериальная диссеминация в легкие, и половина из них стала бактериемической. Мыши, инфицированные S. pneumoniae D39, показали 100% диссеминацию в легкие, и половина из них испытала бактериемию. При отслеживании общей выживаемости, независимо от бактериального штамма, выживаемость коинфицированных мышей была значительно ниже, чем у мышей, в одиночку зараженных S. pneumoniae.Эта модель также использовалась для оценки наличия различных иммунных клеток в легких после инфекции IAV. Бактериальные штаммы D39 и TIGR4 вызвали значительное увеличение по сравнению с исходным уровнем притока воспалительных иммунных клеток из кровообращения, таких как нейтрофилы и моноциты, в то время как EF3030 этого не сделало. Одна только инфекция IAV вызвала значительное увеличение по сравнению с исходным уровнем притока иммунных клеток, таких как NK-клетки и гамма-дельта-Т-клетки.Эти противовирусные реакции были значительно притуплены у мышей, интраназально инфицированных S. pneumoniae до вирусного заражения. У одноинфицированных мышей титры вируса не варьировались между молодыми и возрастными когортами. Старые мыши проявляли более ранние и значительно более серьезные признаки заболевания и умирали быстрее, в течение 24 часов, тогда как молодые контрольные группы лучше пережили инфекцию.Разделение носительства и заболевания на отдельные этапы позволяет нам изучить как иммунный ответ, так и бактериальные и/или вирусные факторы, важные на разных этапах прогрессирования заболевания. Мы надеемся, что эта модель будет адаптирована другими лабораториями для изучения других полимикробных взаимодействий и взаимодействий патогенов хозяина на разных этапах прогрессирования заболевания и у различных хозяев.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Использование изображений Биолюминесцентный по расследованию синергизм между Пневмококк И вируса гриппа А в младенческой Мыши

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Живая изображений Ячейка Сенная Bacillus И Пневмококк С использованием средства аварийного Покадровый микроскопии

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

Использование EpiAirway модель Характеризуя Долгосрочные хост-возбудителя Взаимодействия

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Mouse Model: изучение патогенности и Хост Взносы в инфекционным колитом

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Характеристика воспалительных реакций во время интраназальной колонизации стрептококковой пневмонией

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Мониторинг изменения мембранного полярность, мембраны целостности и внутриклеточных концентрации ионов в<em&gt; Пневмококк</em&gt; Использование флуоресцентных красителей

Membrane depolarization and ion fluxes are events that have been studied extensively in biological systems due to their ability to profoundly impact ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Капсульная серотипирования<em&gt; Пневмококк</em&gt; Использование реакции реакция набухания капсулы

There are over 90 different capsular serotypes of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). As well as being a tool for understanding pneumococcal ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Мышь Модель для патогенных микроорганизмов, вызванной хроническим воспалением на локальном и системном сайтов

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Капсульная серотипирования<em&gt; Пневмококк</em&gt; По латексной агглютинации

Latex agglutination reagents are widely used in microbial diagnosis, identification and serotyping. Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) is a major ...

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

<em&gt; In Vitro</em&gt; Модель для измерения иммунных ответов на малярией в контексте ВИЧ-инфекцией

Malaria and HIV co-infection is a growing health priority. However, most research on malaria or HIV currently focuses on each infection individually. ...