Name: a mouse model for the transition of streptococcus pneumoniae from colonizer to pathogen upon viral co-infection recapitulates age-exacerbated illness
Uploaded: 2022-09-28T14:15:00
Duration: 12 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness at JoVE.

Nos gustaría agradecer a Nick Lenhard por la lectura crítica y edición de este manuscrito. También nos gustaría agradecer a Andrew Camilli y Anthony Campagnari por las cepas bacterianas y a Bruce Davidson por las cepas virales. Este trabajo fue apoyado por la Subvención del Instituto Nacional de Salud (R21AG071268-01) a J.L. y las Subvenciones del Instituto Nacional de Salud (R21AI145370-01A1), (R01AG068568-01A1), (R21AG071268-01) a E.N.B.G.

Los autores no tienen conflictos de intereses que revelar.

La mayoría de los estudios experimentales de coinfección por S. pneumoniae / IAV existentes se basan en la administración bacteriana en los pulmones de ratones preinfectados con IAV. Estos modelos han ayudado a identificar cambios en el ambiente pulmonar y la respuesta inmune sistémica que hacen que el huésped sea susceptible a la infección bacteriana secundaria 15,16,17,32,33,34,35,36,37. Sin embargo, estos modelos no han logrado imitar la transición de S. pneumoniae de un colonizador asintomático a un patógeno capaz de causar infecciones pulmonares y sistémicas graves. Además, estos modelos no son adecuados para estudiar los factores del huésped y las interacciones huésped-patógeno en el tracto respiratorio superior que contribuyen a la susceptibilidad a la infección. Un modelo previo para el movimiento de neumococos de la nasofaringe al pulmón después de la infección por IAV se basó en la infección bacteriana de la nasofaringe seguida de una infección viral. Sin embargo, no logró reproducir los signos graves de enfermedad observados en pacientes humanos21. El modelo modificado de infección murina descrito aquí recapitula la transición de S. pneumoniae de portador asintomático a un patógeno que causa enfermedad clínica grave.
Un paso crítico de este modelo es establecer la infección por S. pneumoniae en la nasofaringe. Streptococcus pneumoniae forma biofilms y coloniza la nasofaringe con diferentes eficiencias21,38. Para establecer una infección consistente, se requieren al menos 5 × 106 UFC de las cepas bacterianas cultivadas en biopelícula probadas hasta ahora23. Se recomienda que cualquier nueva cepa bacteriana sea probada para una infección estable de la nasofaringe antes de la infección viral. Para la coinfección viral, estudios previos han encontrado que la infección intranasal con IAV es necesaria para la dispersión de las bacterias de la nasofaringe21,22,23. En esos estudios previos, se utilizaron 500 PFU de IAV para la administración intranasal, mientras que en este estudio, 200 PFU fueron suficientes para aumentar el número de bacterias en la nasofaringe. La infección por IAV no se limita a las vías aéreas superiores y puede extenderse a los pulmones39,40, lo que es clave para hacer que el ambiente pulmonar sea más permisivo para la infección bacteriana15,16,41. La administración de IAV a los pulmones se puede lograr mediante administración intranasal o instalación intratraqueal de ratones anestesiados. Trabajos previos con ratones BALB/cByJ encontraron que la administración intranasal resulta en neumonía viral21; sin embargo, el acceso del inóculo a los pulmones después de la inoculación intranasal está más restringido en ratones C57BL/6. En ratones C57BL/6, se requiere una instalación intratraqueal para la administración consistente del virus23. En este modelo, la colonización bacteriana previa acelera la presentación de los síntomas de la enfermedad después de la infección viral23. Como la infección viral puede causar síntomas de enfermedad con una posible variación en la cinética, se recomienda probar primero un rango de dosis para cualquier nueva cepa viral probada y elegir una dosis que revele una cinética acelerada en huéspedes coinfectados.
Los pulmones proporcionan otra lectura crítica para la evaluación de la enfermedad en este modelo. Para la evaluación de la carga de patógenos y la afluencia de células inmunes, se puede utilizar un pulmón del mismo ratón. Sin embargo, como la gravedad de la infección y la inflamación pueden diferir entre los lóbulos, se recomienda no tomar diferentes lóbulos del mismo pulmón para las diversas evaluaciones. Más bien, todos los lóbulos se pueden picar en trozos pequeños, mezclarse bien y luego analizarse por igual para las diferentes evaluaciones. Del mismo modo, la nasofaringe se puede utilizar para la enumeración de UFC bacteriana o PFU viral y respuesta inmune. Sin embargo, el número de células obtenidas de los lavados y el tejido es demasiado bajo para realizar la citometría de flujo sin agrupar las muestras de ratones dentro del mismo grupo. Alternativamente, la inflamación en la nasofaringe puede ser evaluada histológicamente23.
Una característica crítica de este modelo es que recapitula la enfermedad clínica observada en los pacientes. En humanos, la neumonía neumocócica secundaria después de la infección por IAV a menudo resulta en signos obvios de enfermedad, incluyendo tos, disnea, fiebre y dolores musculares que pueden conducir a hospitalizaciones, insuficiencia respiratoria e incluso la muerte 8,15,42,43. Este modelo recapitula los signos graves de enfermedad clínica observados en humanos en términos de dificultad para respirar (reflejada en la puntuación respiratoria) y malestar general (reflejado en las puntuaciones de postura y movimiento) mostrados por los ratones, así como la muerte en algunos de los controles jóvenes sanos. Los síntomas exacerbados de la enfermedad en ratones coinfectados son probablemente el resultado tanto de la diseminación bacteriana a los pulmones como de la alteración de la depuración viral en ratones con porte neumocócico23. Una limitación del modelo es que la incidencia de enfermedad clínica y diseminación bacteriana de la nasofaringe varía entre ratones y está influenciada por la cepa bacteriana, la edad del huésped y el genotipo21,22,23. Reflejando esto, para cepas invasivas, la progresión de la infección localizada (sin bacteriemia detectable) a la muerte puede ocurrir dentro de las 24 h. Por lo tanto, para una verdadera evaluación de la propagación sistémica, la bacteriemia debe seguirse durante intervalos más cortos (cada 6-12 h). Del mismo modo, la puntuación de la enfermedad puede cambiar rápidamente, particularmente en las primeras 72 h después de la coinfección. Por lo tanto, para seguir de cerca los síntomas de la enfermedad, es aconsejable controlar a los ratones tres veces al día durante los días 1-3 posteriores a la infección por IAV.
En resumen, este modelo replica el movimiento de S. pneumoniae de un colonizador asintomático de la nasofaringe a un patógeno capaz de causar enfermedad pulmonar y sistémica tras la infección por IAV. En este modelo, el IAV desencadena la transición de S. pneumoniae a través de la modificación del comportamiento bacteriano en la nasofaringe, aumentando la diseminación bacteriana al pulmón y alterando la inmunidad antibacteriana23. Del mismo modo, el transporte bacteriano embota las respuestas inmunes antivirales y perjudica la eliminación del IAV de los pulmones23. Esto hace que este modelo sea ideal para analizar los cambios en las respuestas inmunes en infecciones únicas versus polimicrobianas. Además, el curso de la enfermedad después de la coinfección depende, en parte, de la cepa de neumococos presentes en la nasofaringe. Por lo tanto, el modelo es adecuado para diseccionar los factores bacterianos necesarios para la colonización asintomática versus la transición patógena de S. pneumoniae. Por último, este modelo reproduce la susceptibilidad del envejecimiento a las coinfecciones, y aunque esto no se probó aquí, se puede utilizar fácilmente para evaluar el impacto de los antecedentes del huésped en el curso de la enfermedad. En conclusión, separar el transporte y la enfermedad en distintos pasos brinda la oportunidad de analizar las variantes genéticas tanto de los patógenos como del huésped, lo que permite el examen detallado de las interacciones de un patobiológico importante con el huésped en diferentes fases de la progresión de la enfermedad. En el futuro, este modelo se puede utilizar para adaptar las opciones de tratamiento para los huéspedes vulnerables.

Streptococcus pneumoniae (neumococo) son bacterias Gram-positivas que residen asintomáticamente en la nasofaringe de la mayoría de los individuos sanos 1,2. Promovido por factores que no están completamente definidos, los neumococos pueden pasar de colonizadores benignos de la nasofaringe a patógenos que se diseminan a otros órganos, lo que resulta en infecciones graves, como otitis media, neumonía y bacteriemia3. La presentación de la enfermedad neumocócica depende, en parte, de las diferencias específicas de la cepa, incluido el serotipo, que se basa en la composición de los polisacáridos capsulares. Ha habido más de 100 serotipos caracterizados hasta ahora, y algunos están asociados con infecciones más invasivas 4,5. Varios otros factores aumentan el riesgo de enfermedad neumocócica. Uno de estos factores es la infección viral, donde el riesgo de neumonía neumocócica aumenta 100 veces por IAV 6,7. Históricamente, S. pneumoniae es una de las causas más comunes de neumonía bacteriana secundaria después de la influenza y se asocia con peores resultados8. Otro factor de riesgo importante es la edad avanzada. De hecho, S. pneumoniae es la principal causa de neumonía bacteriana adquirida en la comunidad en ancianos mayores de 65 años 9,10. Los ancianos representan la mayoría (>75%) de las muertes por neumonía e influenza, lo que indica que los dos factores de riesgo, el envejecimiento y la infección por IAV, empeoran sinérgicamente la susceptibilidad a la enfermedad11,12,13,14. Sin embargo, los mecanismos por los cuales la infección viral provoca la transición de neumococos de colonizador asintomático a patógeno invasivo y cómo esto es moldeado por los factores del huésped siguen estando mal definidos. Esto se debe en gran parte a la ausencia de un modelo animal pequeño que recapitule la transición de la colonización neumocócica asintomática a la enfermedad clínica crítica.
Los estudios de coinfección se han modelado clásicamente en ratones inoculados con neumococos directamente en los pulmones 7 días después de la infección por influenza15,16. Esto reproduce la susceptibilidad a la neumonía bacteriana secundaria y es ideal para estudiar cómo las respuestas inmunes antivirales perjudican las defensas antibacterianas17. Sin embargo, estudios longitudinales en humanos han demostrado que el transporte neumocócico en la nasofaringe, donde las bacterias pueden formar biofilms asintomáticos18, está uniformemente asociado con enfermedades invasivas 19,20. Los aislados bacterianos de infecciones del oído medio, pulmón y sangre son genéticamente idénticos a los que se encuentran en la nasofaringe20. Así, para estudiar la transición del transporte asintomático a la enfermedad invasiva después de la infección por IAV, se estableció un modelo en el que a los ratones se les administraron neumococos cultivados con biopelícula por vía intranasal seguidos de infección por IAV de la nasofaringe21,22. La infección viral de la vía aérea superior condujo a cambios en el ambiente del huésped que llevaron a la dispersión de neumococos de las biopelículas y su propagación a las vías aéreas inferiores21. Estas bacterias dispersas tenían una expresión regulada al alza de factores de virulencia importantes para la infección, convirtiéndolas de colonizadoras a patógenos21. Estas observaciones resaltan la compleja interacción entre el virus, el huésped y las bacterias y demuestran que los cambios en el huésped desencadenados por la infección viral tienen un impacto directo en el comportamiento neumocócico, que, a su vez, altera el curso de la infección bacteriana. Sin embargo, este modelo no logra recapitular los signos graves de enfermedad observados en humanos, probablemente porque el virus se limita a la cavidad nasal, y los efectos sistémicos de la infección viral sobre la inmunidad del huésped y el daño pulmonar no se recapitulan.
Recientemente establecimos un modelo que incorpora la compleja interacción entre el huésped y los patógenos, pero también imita más de cerca la gravedad de la enfermedad observada en humanos23. En este modelo, los ratones se infectan primero por vía intranasal con neumococos cultivados en biopelícula para establecer un transporte asintomático, seguido de la infección por IAV tanto de la nasofaringe como de los pulmones. Esto resultó en diseminación bacteriana a los pulmones, inflamación pulmonar y enfermedad que progresó a letalidad en una fracción de ratones jóvenes23. Este estudio previo demostró que tanto la infección viral como la bacteriana alteraron la defensa del huésped: la infección viral promovió la diseminación bacteriana, y la colonización bacteriana previa afectó la capacidad del huésped para controlar los niveles pulmonares de IAV23. El examen de la respuesta inmune reveló que la infección por IAV disminuyó la actividad antibacteriana de los neutrófilos, mientras que la colonización bacteriana embotó la respuesta de interferón tipo I crítica para la defensa antiviral23. Es importante destacar que este modelo reprodujo la susceptibilidad del envejecimiento. En comparación con los ratones jóvenes, los ratones viejos mostraron signos de enfermedad antes, mostraron una enfermedad clínica más grave y sucumbieron a la infección con mayor frecuencia23. El trabajo presentado en este manuscrito muestra que el grado de enfermedad también depende de la cepa bacteriana, porque las cepas neumocócicas invasivas muestran una diseminación más eficiente sobre la infección por IAV, muestran signos más evidentes de inflamación pulmonar y dan como resultado tasas aceleradas de enfermedad en comparación con las cepas no invasivas. Por lo tanto, este modelo de coinfección por S. pneumoniae / IAV permite el examen detallado de los factores patógenos y del huésped y es adecuado para estudiar las respuestas inmunes a las infecciones polimicrobianas en las diferentes fases de la progresión de la enfermedad.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>4-Aminobenzoic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1267318</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well round bottom plates</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>650101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m Filters</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>07-201-432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC147440250</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avicel</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>501785325</td>
			<td>Microcyrstalline cellulose&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Cytofix Fixation Buffer&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BDB554655</td>
			<td>Fixation Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Fortessa</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Flow cytometer&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Intramedic Polyethylene Tubing&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>427410</td>
			<td>Tubing for nasal lavage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Disposable Syringes with Luer-Lok Tips (1 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-823-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Microtainer Capillary Blood Collector and BD Microgard Closure</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>02-675-185</td>
			<td>Blood collection tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beta-Nicotinamide adenine dinucleotide</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6233703</td>
			<td>Mix IV stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC230090010</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>#000644</td>
			<td>Mice used in this study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride Anhydrous</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>C77-500</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD103 BV 421</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB562771</td>
			<td>Clone: M290 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11b APC</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-112-9622</td>
			<td>Clone: M1/70, DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11c PE</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB565592</td>
			<td>Clone: N418 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 AF 488</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>OB153030</td>
			<td>Clone: 145-2C11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD4 V450</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>BDB560470</td>
			<td>Clone: RM4.5 DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 APC eF-780</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-9642</td>
			<td>Clone: 30-F11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 PE</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-103-70</td>
			<td>Clone: 30-F11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD8&#945; BV 650</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>BDB563234</td>
			<td>Clone: 53-6.7 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Choline chloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC110290500</td>
			<td>Final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Disposable Vacuum Filter/Storage Systems</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>09-761-107</td>
			<td>Filter sterilzation apparatus&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Tissue Culture Treated T-25 Flasks</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>10-126-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;Costar Clear Multiple Well Plates</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>07-201-590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;DMEM With L-Glutamine and 4.5 g/L Glucose; Without Sodium Pyruvate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>MT10017CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanocobalamin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC405925000</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D39</td>
			<td>National Collection of Type Culture (NCTC)</td>
			<td>NCTC 7466</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Alanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1023114</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Calcium pantothenate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC243301000</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>D16-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase&#160;</td>
			<td>Worthington Biochemical&#160;</td>
			<td>LS002147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eagles Minimum Essential Medium</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH4616-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EF3030</td>
			<td>Center for Disease Control and Prevention&#160;</td>
			<td>Available via the isolate bank request</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain, request using strain name</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F480 PE Cy7</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-9713</td>
			<td>Clone: BMB DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 50 mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-432-22</td>
			<td>50 mL round bottom tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Round-Bottom Polypropylene Test Tubes With Cap</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-959-11B</td>
			<td>15 mL round bottom tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Round-Bottom Polystyrene Test Tubes (5 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-959-5</td>
			<td>FACS tubes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ferric Nitrate Nonahydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>I110-100</td>
			<td>Mix III stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Delicate Dissecting Scissors</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-951-5</td>
			<td>Instruments used for harvest</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Disposable Inoculating Loops&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-363-602</td>
			<td>Inoculating loops&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Dissecting Tissue Forceps</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>13-812-38</td>
			<td>Forceps for harvest</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Premium Microcentrifuge Tubes: 1.5 mL</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>05-408-137</td>
			<td>Micocentrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand&#160;Sterile Syringes for Single Use (10 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-955-459</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Folic Acid</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC216630500</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco RPMI 1640 (ATCC)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A1049101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;DPBS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14190250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;HBSS, calcium, magnesium, no phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14025134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;MEM (Temin&#39;s modification) (2x), no phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>11-935-046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>15-140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Trypan Blue Solution, 0.4%</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>15-250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>25-200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol (Certified ACS)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>G33-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AA3643530</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1202414</td>
			<td>Mix II stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen UltraComp eBeads Compensation Beads</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>50-112-9040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron (II) sulfate heptahydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1517836</td>
			<td>Mix III stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Alanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6027918</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Arginine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1573814</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Asparagine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAB2147322</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Aspartic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1352022</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cysteine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1043518</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cysteine hydrochloride monohydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1038914</td>
			<td>Final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cystine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1376218</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC156211000</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>O2956-100</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Histidine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC166150250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES LIVE/DEAD Fixable Blue Dead Cell Stain Kit, for UV excitation</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-112-1524</td>
			<td>Clone: N/A DF 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Isoleucine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC166170250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Leucine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP385-100</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Lysine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6222514</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Methionine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1031822</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low endotoxin BSA&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A1470-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Phenylalanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1323814</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Proline</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1019922</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Serine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC132660250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Threonine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC138930250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Tryptophan</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1023014</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Valine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1272014</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ly6C BV 605</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB563011</td>
			<td>Clone: AL-21 DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ly6G AF 488&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>NC1102120</td>
			<td>Clone: IA8, DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cells&#160;</td>
			<td>American Type Culture Collection (ATCC)</td>
			<td>CCL-34</td>
			<td>MDCK cell line for PFU analuysis&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate 7-Hydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>60-019-68</td>
			<td>CDM starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manganese Sulfate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>M113-500</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MilQ water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Ultra-pure water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Fc Block</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB553142</td>
			<td>Clone: 2.4G2 DF 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MWI VETERINARY&#160;PURALUBE VET OINTMENT</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC1886507</td>
			<td>Eye lubricant for infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NCI-H292 mucoepidermoid carcinoma cell line&#160;</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1848</td>
			<td>H292 lung epithelial cell line for biofilm growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Niacinamide</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>18-604-792</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NK 1.1 AF 700</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-4692</td>
			<td>Clone: PK136 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxyrase For Broth 50Ml Bottle 1/Pk</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>50-200-5299</td>
			<td>To remove oxygen from liquid cultures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 4% in PBS</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td>J19932-K2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pivetal Isoflurane&#160;</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-893-8440</td>
			<td>Isoflurane for anesthesia during infection&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate Dibasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P288-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P285-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridoxal hydrochloride&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC352710250</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridoxamine dihydrochloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6267906</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Riboflavin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC132350250</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Acetate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>0530-500G</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide&#160;</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP922I-500</td>
			<td>For FACS buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S233-500</td>
			<td>Starter stock and final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Dibasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S374-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S369-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCR APC&#160;</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-8889</td>
			<td>Clone: GL-3 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCR&#946; APC-Cy7</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>BDB560656</td>
			<td>Clone: H57-597 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Blood Agar with Gentamicin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>R01227</td>
			<td>Blood agar plates with the antibiotic gentamicin&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific&#160;Trypsin, TPCK Treated</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>PI20233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiamine hydrochloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC148991000</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TIGR4</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>BAA-334</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uracil</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC157300250</td>
			<td>Mix II stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worthington Biochemical Corporation&#160;Collagenase, Type 2, 1 g</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC9693955</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model for the transition of streptococcus pneumoniae from colonizer to pathogen upon viral co-infection recapitulates age-exacerbated illness

Streptococcus pneumoniae (neumococo) es un colonizador asintomático de la nasofaringe en la mayoría de los individuos, pero puede progresar a un patógeno pulmonar y sistémico tras la infección por el virus de la influenza A (IAV). La edad avanzada aumenta la susceptibilidad del huésped a la neumonía neumocócica secundaria y se asocia con peores resultados de la enfermedad. Los factores del huésped que impulsan esos procesos no están bien definidos, en parte debido a la falta de modelos animales que reproduzcan la transición de la colonización asintomática a la enfermedad clínica grave. 
Este artículo describe un nuevo modelo de ratón que recrea la transición de los neumococos de transporte asintomático a enfermedad tras una infección viral. En este modelo, los ratones se inoculan primero intranasalmente con neumococos cultivados en biopelícula para establecer un transporte asintomático, seguido de una infección por IAV tanto de la nasofaringe como de los pulmones. Esto resulta en diseminación bacteriana a los pulmones, inflamación pulmonar y signos obvios de enfermedad que pueden progresar a letalidad. El grado de enfermedad depende de la cepa bacteriana y los factores del huésped. 
Es importante destacar que este modelo reproduce la susceptibilidad del envejecimiento, porque en comparación con los ratones jóvenes, los ratones viejos muestran una enfermedad clínica más grave y sucumben a la enfermedad con mayor frecuencia. Al separar el transporte y la enfermedad en distintos pasos y brindar la oportunidad de analizar las variantes genéticas tanto del patógeno como del huésped, este modelo de coinfección por S. pneumoniae / IAV permite el examen detallado de las interacciones de un patobiológico importante con el huésped en diferentes fases de progresión de la enfermedad. Este modelo también puede servir como una herramienta importante para identificar posibles objetivos terapéuticos contra la neumonía neumocócica secundaria en huéspedes susceptibles.

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A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness

Este artículo describe un nuevo modelo de ratón para la transición del neumococo de un colonizador asintomático a un patógeno causante de enfermedades durante la infección viral. Este modelo se puede adaptar fácilmente para estudiar las interacciones polimicrobianas y huésped-patógeno durante las diferentes fases de la progresión de la enfermedad y entre varios huéspedes.

Un modelo de ratón para la transición de Streptococcus pneumoniae de colonizador a patógeno tras la coinfección viral recapitula la enfermedad exacerbada por la edad

Streptococcus pneumoniae (pneumococcus) is an asymptomatic colonizer of the nasopharynx in most individuals but can progress to a pulmonary and systemic ...

Este método describe un nuevo modelo de ratón para estudiar la transición del neumococo de un colonizador asintomático a un patógeno causante de enfermedades durante la infección viral. Imita más de cerca lo que sucede en los humanos. Este modelo puede ser una herramienta importante para identificar posibles objetivos terapéuticos contra la neumonía neumocócica secundaria en huéspedes susceptibles.Este modelo reproduce la susceptibilidad del envejecimiento. Por lo tanto, se puede utilizar para comprender qué aspectos del huésped se vuelven defectuosos con la edad y nos permite adaptar las opciones de tratamiento para los huéspedes ancianos vulnerables. El cultivo de biopelícula neumocócica es un desafío ya que las diferentes cepas toman diferentes cantidades de tiempo.Mi consejo es intentar cultivar la biopelícula antes de ejecutar el estudio en animales. Una vez que las células H292 sean 100% confluentes, lave las células tres veces con PBS. Luego agregue 250 microlitros de paraformaldehído al 4% por pocillo para fijar las células e incubar durante una hora en hielo o durante la noche a cuatro grados centígrados.Strake streptococcus pneumoniae cepa de interés en la placa de agar sangre e incubar durante la noche a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono. Al día siguiente, inocular las bacterias de la placa en medios frescos químicamente definidos o CDM más oxirasa lavando las bacterias de la placa agregando un mililitro de CDM más oxirasa y levantando suavemente las colonias bacterianas usando el lado de una punta de pipeta de un mililitro, teniendo cuidado de no raspar el agar. Diluir el cultivo bacteriano en CDM más oxirasa a un OD inicial 600 de 0.05.Luego cultive las bacterias en un tubo cónico de 50 mililitros con tapa suelta a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono hasta que se alcance un OD de 0.2. A continuación, vortex el tubo de cultivo bacteriano. Siembre 0,5 mililitros del cultivo en las células H292 fijas y agregue otros 0,5 mililitros de CDM más medio de oxirasa por pocillo.Agregue CDM más oxirasa a los pocillos de control sin bacterias. Incubar la placa durante 48 horas a 34 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono. Cada 12 horas, después de la siembra inicial, reemplace suavemente los 0,5 mililitros del medio con CDM fresco más oxirasa.Tenga cuidado de no interrumpir la formación de biopelículas. Revise la parte inferior de la placa en busca de biopelícula y busque un aumento de la nubosidad a medida que pasa el tiempo debido al crecimiento de la biopelícula. Después de 48 horas, retire el sobrenadante y lave la biopelícula dos veces con un mililitro de PBS.A continuación, vuelva a suspender el biofilm en un mililitro de CDM fresco y pipetear hacia arriba y hacia abajo vigorosamente para levantar el biofilm. Para cada cepa bacteriana, agrupe el cultivo de todos los pocillos en un tubo de 50 mililitros. Mezcle bien inclinando suavemente el tubo bien tapado hacia arriba y hacia abajo varias veces.A continuación, agregue 40% de glicerol y CDM en volúmenes iguales para lograr una suspensión bacteriana con una concentración final de 20% de glicerol. Alícuota un mililitro en un tubo de microcentrífuga, congele rápidamente en hielo seco y ahorre a menos 80 grados centígrados. Descongele las alícuotas cultivadas en biofilm en hielo y gire a 1.700 G durante cinco minutos.Retire y deseche con cuidado el sobrenadante sin interrumpir el pellet. Luego lave el pellet resuspendiéndolo en un mililitro de PBS y gírelo nuevamente. Retire el sobrenadante y vuelva a suspender el pellet en el volumen necesario para alcanzar la concentración deseada.Inocular el C57 negro seis machos de ratón por vía intranasal con cinco veces 10 a la sexta colonia formando unidades o UFC pipeteando cinco microlitros del inóculo diluido en cada naris. Después de la inoculación, sostenga al ratón firmemente, estabilizando la cabeza hasta que se inhale el volumen. Una vez que el virus se haya descongelado, diluya el virus en PBS a la concentración deseada.Coloque lubricante oftálmico en los ojos del ratón antes de la anestesia. Infecte inmediatamente al ratón anestesiado con 50 microlitros de 20 unidades formadoras de placa, o PFU, del virus de la influenza A o IAV por vía intratraqueal mediante el uso de pinzas romas para sacar la lengua de la boca y pipetear el volumen de líquido por la tráquea. Después de la recuperación, inocular intranasales 10 microlitros de 200 PFU de IAV utilizando el método de inoculación descrito anteriormente.Para la recolección de pulmón, usando tijeras de disección, corte los lados de la caja torácica expuesta y tire suavemente de las costillas hacia la cabeza del ratón para exponer el corazón. Inserte una aguja de calibre 25 conectada a una jeringa de 10 mililitros precargada con PBS en el ventrículo derecho y comience a perfundir lentamente. Busque el blanqueamiento de los pulmones como un indicador de perfusión exitosa.Enjuague lentamente para evitar romper el tejido pulmonar. Levante el corazón con fórceps y haga un corte para separar los pulmones y el corazón. Una vez separados, recoger todos los lóbulos del pulmón con fórceps y enjuagar en un plato con PBS estéril para eliminar cualquier sangre residual.En una placa de Petri, picar el pulmón en trozos pequeños y mezclar bien. Retire la mitad de la mezcla pulmonar para determinar la UFC bacteriana o la UFP viral y colóquela en un tubo redondo de fondo de 15 mililitros precargado con 0,5 mililitros de PBS para homogeneización. Retire la otra mitad del pulmón para citometría de flujo y colóquelo en una placa de 24 pocillos tratada con cultivo no tisular con cada pocillo precargado con 0,5 mililitros de RP10.Dejar a temperatura ambiente hasta el procesamiento. Para homogeneizar el tejido recolectado, limpie la sonda homogeneizadora poniéndola en etanol al 70% y encendiendo el homogeneizador al 60% de potencia durante 30 segundos. Repita este paso en agua estéril durante 10 segundos.Homogeneiza cada tejido durante un minuto. Para la enumeración de números bacterianos, diluciones en serie de placas en placas de agar sangre. Para calcular la UFC total, use 10 microlitros para platear y anotar el volumen final en mililitros para cada muestra.Coloque las muestras de nasofaringe en placas de agar sangre suplementadas con tres microgramos por mililitro de gentamicina para seleccionar el crecimiento de S. pneumoniae mientras inhibe el crecimiento de otros microorganismos. Incubar durante la noche a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono. Para la citometría de flujo, agregue 500 microlitros de tampón de digestión a cada pocillo de una placa de 24 pocillos que contenga una muestra de pulmón.Incubar el plato durante 45 minutos a una hora. A continuación, utilizando una micropipeta P-1000, mueva los pulmones digeridos y colóquelos en el filtro. Luego use el émbolo de una jeringa de tres mililitros para triturar la muestra.El inóculo de S.pneumoniae de crecimiento de biofilm da como resultado un transporte neumocócico consistente restringido a la nasofaringe al tiempo que evita la propagación sistemática. La presentación de la enfermedad en ratones coinfectados con S pneumoniae IAV dependió de la cepa bacteriana. Si bien no hubo diferencias significativas en el número bacteriano de la nasofaringe entre ninguna de las cepas, S pneumoniae, TIGR4 y D39, pero no EF3030 se diseminaron a los pulmones 48 horas después de la infección por IAV.El 40% de los ratones infectados con S. pneumoniae TIGR4 mostraron diseminación bacteriana a los pulmones y de ellos, la mitad de ellos se volvieron bacterémicos. Los ratones infectados con S. pneumoniae D39 mostraron una diseminación del 100% a los pulmones y la mitad de eso experimentó bacteriemia. En el seguimiento de la supervivencia general, independientemente de la cepa bacteriana, la tasa de supervivencia de los ratones coinfectados fue significativamente menor que la de los ratones desafiados individualmente con S pneumoniae.Este modelo también se utilizó para evaluar la presencia de varias células inmunes en los pulmones después de la infección por IAV. Las cepas bacterianas D39 y TIGR4 provocaron un aumento significativo por encima de la línea de base en la afluencia de células inmunes inflamatorias de la circulación, como neutrófilos y monocitos, mientras que EF3030 no lo hizo. La infección por IAV sola provocó un aumento significativo por encima de la línea de base en la afluencia de células inmunes como las células NK y las células T gamma delta.Estas respuestas antivirales se atenuaron significativamente en ratones infectados intranasalmente con S. pneumoniae antes del desafío viral. En ratones infectados individualmente, los títulos virales no variaron entre las cohortes jóvenes y envejecidas. Los ratones viejos mostraron signos de enfermedad más tempranos y significativamente más graves y murieron más rápido, dentro de las 24 horas, mientras que los controles jóvenes sobrevivieron mejor a la infección.Separar el transporte y la enfermedad en distintos pasos nos permite examinar tanto la respuesta inmune como los factores bacterianos y/o virales importantes en las diferentes fases de la progresión de la enfermedad. Esperamos que este modelo sea adaptado por otros laboratorios para estudiar otras interacciones polimicrobianas e interacciones del patógeno del huésped durante diferentes fases de la progresión de la enfermedad y en los diversos huéspedes.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Utilizando imágenes bioluminiscentes encargado de investigar la sinergia entre Streptococcus pneumoniae Y el Virus de la Influenza en ratones lactantes

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Investigación

Inmunología e Infección

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Imágenes de células vivas de Bacillus subtilis Y Streptococcus pneumoniae Automatizada utilizando Time-lapse microscopía

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

Utilización del modelo de EpiAirway para la caracterización de largo plazo Interacciones Huésped-Patógeno

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

La<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Mouse Modelo: Estudiar Contribuciones patógeno y del huésped a la colitis infecciosa

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Caracterización De Las Respuestas Inflamatorias Durante La Colonización Intranasal Con Streptococcus pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Vigilar los cambios en la polaridad de la membrana, membrana Integridad, e intracelular de iones concentraciones en<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Uso de tintes fluorescentes

Membrane depolarization and ion fluxes are events that have been studied extensively in biological systems due to their ability to profoundly impact ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Capsular serotipificación de<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Uso de la Reacción Quellung

There are over 90 different capsular serotypes of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). As well as being a tool for understanding pneumococcal ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Un modelo de ratón para Patógenos inducida inflamación crónica en los sitios locales y sistémicos

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Capsular Serotipificación de<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Por partículas de látex

Latex agglutination reagents are widely used in microbial diagnosis, identification and serotyping. Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) is a major ...

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

Un<em&gt; In Vitro</em&gt; Modelo para medir la respuesta inmune a la malaria en el contexto del VIH Co-infección

Malaria and HIV co-infection is a growing health priority. However, most research on malaria or HIV currently focuses on each infection individually. ...