Name: a mouse model for the transition of streptococcus pneumoniae from colonizer to pathogen upon viral co-infection recapitulates age-exacerbated illness
Uploaded: 2022-09-28T14:15:00
Duration: 12 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness at JoVE.

Vi vill tacka Nick Lenhard för den kritiska läsningen och redigeringen av detta manuskript. Vi vill också tacka Andrew Camilli och Anthony Campagnari för bakteriestammarna och Bruce Davidson för virusstammarna. Detta arbete stöddes av National Institute of Health Grant (R21AG071268-01) till J.L. och National Institute of Health Grants (R21AI145370-01A1), (R01AG068568-01A1), (R21AG071268-01) till E.N.B.G.

Författarna har inga intressekonflikter att avslöja.

De flesta av de befintliga experimentella studierna av S. pneumoniae / IAV-saminfektion är beroende av bakteriell leverans i lungorna hos möss som är preinfekterade med IAV. Dessa modeller har hjälpt till att identifiera förändringar i lungmiljön och systemiskt immunsvar som gör värden mottaglig för sekundär bakteriell infektion 15,16,17,32,33,34,35,36,37. Dessa modeller har emellertid misslyckats med att efterlikna övergången av S. pneumoniae från en asymptomatisk kolonisator till en patogen som kan orsaka allvarliga lung- och systemiska infektioner. Vidare är dessa modeller inte lämpliga för att studera värdfaktorer och värd-patogeninteraktioner i övre luftvägarna som bidrar till mottaglighet för infektion. En tidigare modell för förflyttning av pneumokocker från nasofarynx till lungan efter IAV-infektion förlitade sig på bakteriell infektion i nasofarynx följt av virusinfektion. Det misslyckades dock med att reproducera de allvarliga tecken på sjukdom som observerats hos mänskliga patienter21. Den modifierade murina infektionsmodellen som beskrivs här rekapitulerar övergången av S. pneumoniae från asymptomatisk vagn till en patogen som orsakar allvarlig klinisk sjukdom.
Ett kritiskt steg i denna modell är att etablera S. pneumoniae-infektion i nasofarynxen. Streptococcus pneumoniae bildar biofilmer och koloniserar nasofarynx vid olika effektivitet21,38. För att etablera konsekvent infektion krävs minst 5 × 106 CFU av de biofilmodlade bakteriestammar som hittills testats23. Det rekommenderas att alla nya bakteriestammar testas för stabil infektion i nasofarynx före virusinfektion. För viral saminfektion har tidigare studier funnit att intranasal infektion med IAV krävs för spridning av bakterierna från nasofarynx21,22,23. I dessa tidigare studier användes 500 PFU av IAV för intranasal leverans, medan i denna studie var 200 PFU tillräckliga för att öka bakterieantalet i nasofarynxen. IAV-infektion är inte begränsad till de övre luftvägarna och kan spridas till lungorna39,40, vilket är nyckeln till att göra lungmiljön mer tillåtande för bakteriell infektion15,16,41. Leverans av IAV till lungorna kan uppnås genom antingen intranasal leverans eller intratrakeal installation av bedövade möss. Tidigare arbete med BALB / cByJ-möss fann att intranasal leverans resulterar i viral lunginflammation21; inokulumets tillgång till lungorna efter intranasal inokulering är dock mer begränsad hos C57BL/6-möss. Hos möss med C57BL/6 krävs intratrakeal installation för konsekvent tillförsel av virus23. I denna modell accelererar tidigare bakteriekolonisering presentationen av sjukdomssymtom efter virusinfektion23. Eftersom virusinfektion i sig kan orsaka sjukdomssymtom med potentiell variation i kinetik, rekommenderas att man först testar en rad doser för alla nya virusstammar som testas och väljer en dos som avslöjar accelererad kinetik hos saminfekterade värdar.
Lungorna ger en annan kritisk avläsning för sjukdomsutvärdering i denna modell. För bedömning av patogenbörda och tillströmning av immunceller kan en lunga från samma mus användas. Men eftersom infektionens och inflammationens svårighetsgrad kan skilja sig åt mellan loberna, rekommenderas det att inte ta olika lober av samma lunga för de olika bedömningarna. Snarare kan alla loberna hackas i små bitar, blandas väl ihop och sedan analyseras lika för de olika bedömningarna. På liknande sätt kan nasofarynx användas för räkning av bakteriell CFU eller viral PFU och immunsvar. Antalet celler som erhålls från tvättar och vävnader är dock för lågt för att utföra flödescytometri utan att samla proverna från möss inom samma grupp. Alternativt kan inflammation i nasofarynx bedömas histologiskt23.
Ett kritiskt inslag i denna modell är att den rekapitulerar den kliniska sjukdomen som ses hos patienter. Hos människor resulterar sekundär pneumokockpneumoni efter IAV-infektion ofta i uppenbara tecken på sjukdom, inklusive hosta, dyspné, feber och muskelvärk som kan leda till sjukhusvistelser, andningssvikt och till och med död 8,15,42,43. Denna modell rekapitulerar de allvarliga tecken på klinisk sjukdom som observerats hos människor när det gäller andningssvårigheter (återspeglas i andningspoängen) och övergripande sjukdom (återspeglas i hållning och rörelsepoäng) som visas av mössen, liksom död hos några av de friska unga kontrollerna. De förvärrade sjukdomssymtomen hos saminfekterade möss är sannolikt ett resultat av både bakteriell spridning till lungorna och nedsatt virusclearance hos möss med pneumokock vagn23. En begränsning med modellen är att förekomsten av klinisk sjukdom och bakteriespridning från nasofarynx varierar mellan möss och påverkas av bakteriestam, värdålder och genotyp21,22,23. För invasiva stammar kan progressionen från lokaliserad infektion (utan detekterbar bakteriemi) till döden ske inom 24 timmar. För en sann bedömning av systemisk spridning bör därför bakteriemi följas med kortare intervall (var 6-12 h). På samma sätt kan sjukdomspoängen förändras snabbt, särskilt under de första 72 timmarna efter samtidig infektion. För att noggrant spåra sjukdomssymptomen är det därför lämpligt att övervaka möss tre gånger per dag i dag 1-3 efter IAV-infektion.
Sammanfattningsvis replikerar denna modell rörelsen av S. pneumoniae från en asymptomatisk kolonisator av nasofarynx till en patogen som kan orsaka lung- och systemisk sjukdom vid IAV-infektion. I denna modell utlöser IAV övergången av S. pneumoniae genom att modifiera bakteriebeteendet i nasofarynx, öka bakteriell spridning till lungan och förändra antibakteriell immunitet23. På samma sätt avtrubbar bakteriell vagn de antivirala immunsvaren och försämrar IAV-clearance från lungorna23. Detta gör denna modell idealisk för att analysera förändringar i immunsvar vid enstaka kontra polymikrobiella infektioner. Dessutom är sjukdomsförloppet efter samtidig infektion delvis beroende av stammen av pneumokocker som finns i nasofarynxen. Därför är modellen lämplig för att dissekera de bakteriella faktorer som krävs för asymtomatisk kolonisering kontra patogen övergång av S. pneumoniae. Slutligen reproducerar denna modell mottagligheten av åldrande för saminfektioner, och även om detta inte testades här, kan det enkelt användas för att bedöma effekterna av värdbakgrund på sjukdomsförloppet. Sammanfattningsvis ger separering av vagn och sjukdom i distinkta steg möjlighet att analysera de genetiska varianterna av både patogenerna och värden, vilket möjliggör detaljerad undersökning av interaktionerna mellan en viktig patobiont och värden i olika faser av sjukdomsprogression. Framöver kan denna modell användas för att skräddarsy behandlingsalternativ för utsatta värdar.

Streptococcus pneumoniae (pneumokocker) är grampositiva bakterier som asymptomatiskt bor i nasofarynx hos de flesta friska individer 1,2. Främjas av faktorer som inte är helt definierade kan pneumokocker övergå från godartade kolonisatorer av nasofarynx till patogener som sprider sig till andra organ vilket resulterar i allvarliga infektioner, inklusive otitis media, lunginflammation och bakteriemi3. Pneumokocksjukdomspresentationen är delvis beroende av stamspecifika skillnader, inklusive serotypen, som är baserad på sammansättningen av kapselpolysackarider. Det har hittills karakteriserats över 100 serotyper, och vissa är förknippade med mer invasiva infektioner 4,5. Flera andra faktorer ökar risken för pneumokocksjukdom. En sådan faktor är virusinfektion, där risken för pneumokockpneumoni ökar 100-faldigt med IAV 6,7. Historiskt sett är S. pneumoniae en av de vanligaste orsakerna till sekundär bakteriell lunginflammation efter influensa och är förknippad med sämre resultat8. En annan stor riskfaktor är hög ålder. Faktum är att S. pneumoniae är den främsta orsaken till samhällsförvärvad bakteriell lunginflammation hos äldre individer över 65 år 9,10. Äldre individer står för majoriteten (>75%) av dödsfall på grund av lunginflammation och influensa, vilket indikerar att de två riskfaktorerna åldrande och IAV-infektion - synergistiskt förvärrar sjukdomskänsligheten11,12,13,14. De mekanismer genom vilka virusinfektion föranleder övergången av pneumokocker från asymptomatisk kolonisator till invasiv patogen och hur detta formas av värdfaktorer är dock fortfarande dåligt definierade. Detta beror till stor del på frånvaron av en liten djurmodell som rekapitulerar övergången från asymptomatisk pneumokockkolonisering till kritisk klinisk sjukdom.
Saminfektionsstudier har klassiskt modellerats på möss inokulerade med pneumokocker direkt i lungorna 7 dagar efter influensainfektion15,16. Detta reproducerar mottagligheten för sekundär bakteriell lunginflammation och är idealisk för att studera hur antivirala immunsvar försämrar antibakteriella försvar17. Longitudinella studier på människor har dock visat att pneumokocktransport i nasofarynx, där bakterierna kan bilda asymtomatiska biofilmer18, är enhetligt associerad med invasiva sjukdomar19,20. Bakteriella isolat från infektioner i mellanörat, lungan och blodet är genetiskt identiska med de som finns i nasofarynx20. För att studera övergången från asymtomatisk bärare till invasiv sjukdom efter IAV-infektion etablerades en modell där möss administrerades intranasalt biofilmodlade pneumokocker följt av IAV-infektion av nasofarynx21,22. Virusinfektion i de övre luftvägarna ledde till förändringar i värdmiljön som ledde till spridning av pneumokocker från biofilmer och deras spridning till de nedre luftvägarna21. Dessa dispergerade bakterier hade uppreglerat uttrycket av virulensfaktorer som är viktiga för infektion och omvandlat dem från kolonisatorer till patogener21. Dessa observationer belyser den komplexa interaktionen mellan viruset, värden och bakterierna och visar att förändringarna i värden som utlöses av virusinfektion har en direkt inverkan på pneumokockbeteendet, vilket i sin tur förändrar bakterieinfektionens gång. Denna modell misslyckas emellertid med att rekapitulera de allvarliga tecken på sjukdom som observerats hos människor, troligen för att viruset är begränsat till näshålan, och de systemiska effekterna av virusinfektion på värdimmunitet och lungskador rekapituleras inte.
Vi etablerade nyligen en modell som innehåller den komplexa interaktionen mellan värden och patogenerna men också närmare efterliknar sjukdomens svårighetsgrad som observerats hos människor23. I denna modell infekteras möss först intranasalt med biofilmodlade pneumokocker för att etablera asymtomatisk transport, följt av IAV-infektion i både nasofarynx och lungor. Detta resulterade i bakteriell spridning till lungorna, lunginflammation och sjukdom som utvecklades till dödlighet hos en bråkdel av unga möss23. Denna tidigare studie visade att både virus- och bakterieinfektion förändrade värdförsvaret: virusinfektion främjade bakteriell spridning och tidigare bakteriekolonisering försämrade värdens förmåga att kontrollera lung IAV-nivåer23. Undersökning av immunsvaret avslöjade att IAV-infektion minskade den antibakteriella aktiviteten hos neutrofiler, medan bakteriekolonisering avtrubbade typ I-interferonsvaret som är kritiskt för antiviralt försvar23. Det är viktigt att denna modell reproducerade mottagligheten av åldrande. Jämfört med unga möss visade gamla möss tecken på sjukdom tidigare, visade allvarligare klinisk sjukdom och gav efter för infektion oftare23. Arbetet som presenteras i detta manuskript visar att graden av sjukdom också är beroende av bakteriestammen, eftersom invasiva pneumokockstammar visar effektivare spridning vid IAV-infektion, visar mer uppenbara tecken på lunginflammation och resulterar i accelererade sjukdomsfrekvenser jämfört med icke-invasiva stammar. Således möjliggör denna S. pneumoniae / IAV-saminfektionsmodell detaljerad undersökning av både patogen- och värdfaktorer och är väl lämpad för att studera immunsvar mot polymikrobiella infektioner vid de olika faserna av sjukdomsprogression.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-Aminobenzoic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1267318</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well round bottom plates</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>650101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m Filters</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>07-201-432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC147440250</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avicel</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>501785325</td>
			<td>Microcyrstalline cellulose&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Cytofix Fixation Buffer&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BDB554655</td>
			<td>Fixation Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Fortessa</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Flow cytometer&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Intramedic Polyethylene Tubing&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>427410</td>
			<td>Tubing for nasal lavage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Disposable Syringes with Luer-Lok Tips (1 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-823-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Microtainer Capillary Blood Collector and BD Microgard Closure</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>02-675-185</td>
			<td>Blood collection tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beta-Nicotinamide adenine dinucleotide</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6233703</td>
			<td>Mix IV stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC230090010</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>#000644</td>
			<td>Mice used in this study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride Anhydrous</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>C77-500</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD103 BV 421</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB562771</td>
			<td>Clone: M290 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11b APC</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-112-9622</td>
			<td>Clone: M1/70, DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11c PE</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB565592</td>
			<td>Clone: N418 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 AF 488</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>OB153030</td>
			<td>Clone: 145-2C11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD4 V450</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>BDB560470</td>
			<td>Clone: RM4.5 DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 APC eF-780</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-9642</td>
			<td>Clone: 30-F11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 PE</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-103-70</td>
			<td>Clone: 30-F11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD8&#945; BV 650</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>BDB563234</td>
			<td>Clone: 53-6.7 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Choline chloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC110290500</td>
			<td>Final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Disposable Vacuum Filter/Storage Systems</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>09-761-107</td>
			<td>Filter sterilzation apparatus&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Tissue Culture Treated T-25 Flasks</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>10-126-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;Costar Clear Multiple Well Plates</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>07-201-590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;DMEM With L-Glutamine and 4.5 g/L Glucose; Without Sodium Pyruvate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>MT10017CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanocobalamin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC405925000</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D39</td>
			<td>National Collection of Type Culture (NCTC)</td>
			<td>NCTC 7466</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Alanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1023114</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Calcium pantothenate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC243301000</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>D16-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase&#160;</td>
			<td>Worthington Biochemical&#160;</td>
			<td>LS002147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eagles Minimum Essential Medium</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH4616-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EF3030</td>
			<td>Center for Disease Control and Prevention&#160;</td>
			<td>Available via the isolate bank request</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain, request using strain name</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F480 PE Cy7</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-9713</td>
			<td>Clone: BMB DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 50 mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-432-22</td>
			<td>50 mL round bottom tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Round-Bottom Polypropylene Test Tubes With Cap</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-959-11B</td>
			<td>15 mL round bottom tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Round-Bottom Polystyrene Test Tubes (5 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-959-5</td>
			<td>FACS tubes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ferric Nitrate Nonahydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>I110-100</td>
			<td>Mix III stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Delicate Dissecting Scissors</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-951-5</td>
			<td>Instruments used for harvest</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Disposable Inoculating Loops&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-363-602</td>
			<td>Inoculating loops&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Dissecting Tissue Forceps</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>13-812-38</td>
			<td>Forceps for harvest</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Premium Microcentrifuge Tubes: 1.5 mL</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>05-408-137</td>
			<td>Micocentrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand&#160;Sterile Syringes for Single Use (10 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-955-459</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Folic Acid</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC216630500</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco RPMI 1640 (ATCC)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A1049101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;DPBS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14190250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;HBSS, calcium, magnesium, no phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14025134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;MEM (Temin&#39;s modification) (2x), no phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>11-935-046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>15-140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Trypan Blue Solution, 0.4%</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>15-250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>25-200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol (Certified ACS)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>G33-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AA3643530</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1202414</td>
			<td>Mix II stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen UltraComp eBeads Compensation Beads</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>50-112-9040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron (II) sulfate heptahydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1517836</td>
			<td>Mix III stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Alanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6027918</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Arginine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1573814</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Asparagine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAB2147322</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Aspartic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1352022</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cysteine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1043518</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cysteine hydrochloride monohydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1038914</td>
			<td>Final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cystine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1376218</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC156211000</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>O2956-100</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Histidine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC166150250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES LIVE/DEAD Fixable Blue Dead Cell Stain Kit, for UV excitation</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-112-1524</td>
			<td>Clone: N/A DF 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Isoleucine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC166170250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Leucine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP385-100</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Lysine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6222514</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Methionine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1031822</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low endotoxin BSA&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A1470-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Phenylalanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1323814</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Proline</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1019922</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Serine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC132660250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Threonine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC138930250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Tryptophan</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1023014</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Valine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1272014</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ly6C BV 605</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB563011</td>
			<td>Clone: AL-21 DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ly6G AF 488&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>NC1102120</td>
			<td>Clone: IA8, DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cells&#160;</td>
			<td>American Type Culture Collection (ATCC)</td>
			<td>CCL-34</td>
			<td>MDCK cell line for PFU analuysis&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate 7-Hydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>60-019-68</td>
			<td>CDM starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manganese Sulfate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>M113-500</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MilQ water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Ultra-pure water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Fc Block</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB553142</td>
			<td>Clone: 2.4G2 DF 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MWI VETERINARY&#160;PURALUBE VET OINTMENT</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC1886507</td>
			<td>Eye lubricant for infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NCI-H292 mucoepidermoid carcinoma cell line&#160;</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1848</td>
			<td>H292 lung epithelial cell line for biofilm growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Niacinamide</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>18-604-792</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NK 1.1 AF 700</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-4692</td>
			<td>Clone: PK136 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxyrase For Broth 50Ml Bottle 1/Pk</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>50-200-5299</td>
			<td>To remove oxygen from liquid cultures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 4% in PBS</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td>J19932-K2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pivetal Isoflurane&#160;</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-893-8440</td>
			<td>Isoflurane for anesthesia during infection&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate Dibasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P288-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P285-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridoxal hydrochloride&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC352710250</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridoxamine dihydrochloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6267906</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Riboflavin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC132350250</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Acetate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>0530-500G</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide&#160;</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP922I-500</td>
			<td>For FACS buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S233-500</td>
			<td>Starter stock and final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Dibasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S374-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S369-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCR APC&#160;</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-8889</td>
			<td>Clone: GL-3 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCR&#946; APC-Cy7</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>BDB560656</td>
			<td>Clone: H57-597 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Blood Agar with Gentamicin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>R01227</td>
			<td>Blood agar plates with the antibiotic gentamicin&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific&#160;Trypsin, TPCK Treated</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>PI20233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiamine hydrochloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC148991000</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TIGR4</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>BAA-334</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uracil</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC157300250</td>
			<td>Mix II stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worthington Biochemical Corporation&#160;Collagenase, Type 2, 1 g</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC9693955</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model for the transition of streptococcus pneumoniae from colonizer to pathogen upon viral co-infection recapitulates age-exacerbated illness

Streptococcus pneumoniae (pneumokocker) är en asymptomatisk kolonisator av nasofarynx hos de flesta individer men kan utvecklas till en lung- och systemisk patogen vid influensa A-virus (IAV) infektion. Hög ålder ökar värdens mottaglighet för sekundär pneumokockpneumoni och är förknippad med försämrade sjukdomsutfall. Värdfaktorerna som driver dessa processer är inte väldefinierade, delvis på grund av brist på djurmodeller som reproducerar övergången från asymptomatisk kolonisering till svår klinisk sjukdom. 
Denna artikel beskriver en ny musmodell som återskapar övergången av pneumokocker från asymtomatisk bärare till sjukdom vid virusinfektion. I denna modell inokuleras möss först intranasalt med biofilmodlade pneumokocker för att etablera asymtomatisk transport, följt av IAV-infektion i både nasofarynx och lungor. Detta resulterar i bakteriell spridning till lungorna, lunginflammation och uppenbara tecken på sjukdom som kan utvecklas till dödlighet. Graden av sjukdom är beroende av bakteriestammen och värdfaktorerna. 
Det är viktigt att denna modell reproducerar mottagligheten av åldrande, för jämfört med unga möss visar gamla möss allvarligare klinisk sjukdom och ger efter för sjukdom oftare. Genom att separera vagn och sjukdom i distinkta steg och ge möjlighet att analysera de genetiska varianterna av både patogenen och värden, tillåter denna S. pneumoniae / IAV-saminfektionsmodell detaljerad undersökning av interaktionerna mellan en viktig patobiont och värden i olika faser av sjukdomsprogression. Denna modell kan också fungera som ett viktigt verktyg för att identifiera potentiella terapeutiska mål mot sekundär pneumokockpneumoni hos mottagliga värdar.

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness at JoVE.

A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness

Denna artikel beskriver en ny musmodell för övergången av pneumokocker från en asymptomatisk kolonisator till en sjukdomsframkallande patogen under virusinfektion. Denna modell kan lätt anpassas för att studera polymikrobiella och värd-patogeninteraktioner under de olika faserna av sjukdomsprogression och över olika värdar.

En musmodell för övergången av Streptococcus pneumoniae från kolonisatör till patogen vid viral saminfektion rekapitulerar åldersförvärrad sjukdom

Streptococcus pneumoniae (pneumococcus) is an asymptomatic colonizer of the nasopharynx in most individuals but can progress to a pulmonary and systemic ...

Denna metod beskriver en ny musmodell för att studera övergången av pneumokocker från en asymptomatisk kolonisator till en sjukdomsframkallande patogen under virusinfektion. Det efterliknar närmare vad som händer hos människor. Denna modell kan vara ett viktigt verktyg för att identifiera potentiella terapeutiska mål mot sekundär pneumokockpneumoni hos mottagliga värdar.Denna modell reproducerar mottagligheten av åldrande. Därför kan den användas för att förstå vilka aspekter av värden som blir defekta med åldern och låta oss skräddarsy behandlingsalternativ för sårbara äldre värdar. Att odla pneumokockbiofilm är utmanande eftersom de olika stammarna tar olika lång tid.Mitt råd är att prova att odla biofilmen innan djurstudien genomförs. När H292-cellerna är 100% sammanflytande, tvätta cellerna tre gånger med PBS. Tillsätt sedan 250 mikroliter 4% paraformaldehyd per brunn för att fixera cellerna och inkubera i en timme på is eller över natten vid fyra grader Celsius.Strake streptococcus pneumoniae stam av intresse på blodagarplattan och inkubera över natten vid 37 grader Celsius och 5% koldioxid. Nästa dag inokulera bakterierna från plattan i färska, kemiskt definierade medier eller CDM plus Oxyrase genom att tvätta bakterierna från plattan genom att tillsätta en milliliter CDM plus Oxyras och försiktigt lyfta bakteriekolonierna med sidan av en en milliliter pipettspets, var försiktig så att du inte skrapar agaren. Späd bakteriekulturen i CDM plus oxyras till en utgångs-OD 600 på 0,05.Odla sedan bakterierna i ett löst täckt 50 ml koniskt rör vid 37 grader Celsius och 5% koldioxid tills OD på 0,2 uppnås. Nästa virvel bakteriekulturröret. Frö 0,5 ml av kulturen på de fasta H292-cellerna och tillsätt ytterligare 0,5 ml CDM plus Oxyrase-medium per brunn.Tillsätt CDM plus oxyras i kontrollbrunnarna utan bakterier. Inkubera plattan i 48 timmar vid 34 grader Celsius och 5% koldioxid. Var 12: e timme, efter den första sådden, byt försiktigt ut 0,5 ml av mediet med färsk CDM plus oxyras.Var försiktig så att du inte stör bildandet av biofilm. Kontrollera botten av plattan för biofilm och leta efter ökad grumlighet när tiden går på grund av biofilmtillväxt. Efter 48 timmar, ta bort supernatanten och tvätta biofilmen två gånger med en milliliter PBS.Återsuspendera sedan biofilmen i en milliliter färsk CDM och pipettera kraftigt upp och ner för att lyfta biofilmen. För varje bakteriestam, slå samman kulturen från alla brunnar i ett 50 ml rör. Blanda väl genom att försiktigt luta det tätt täckta röret upp och ner flera gånger.Tillsätt sedan 40% glycerol och CDM vid lika stora volymer för att uppnå en bakteriell suspension med en slutlig koncentration av 20% glycerol. Alikvot en milliliter i ett mikrocentrifugrör, blixtfrys på torris och spara vid minus 80 grader Celsius. Tina biofilmodlade alikvoter på is och snurra vid 1 700 G i fem minuter.Ta försiktigt bort och kassera supernatanten utan att störa pelleten. Tvätta sedan pelleten genom att återsuspendera den i en milliliter PBS och snurra den igen. Ta bort supernatanten och suspendera pelleten igen i den volym som behövs för att nå önskad koncentration.Inokulera C57 svart sex hanmus intranasalt med fem gånger 10 till den sjätte kolonibildande enheten eller CFU genom att pipettera fem mikroliter av det utspädda inokulatet i varje naris. Efter ympning, håll musen ordentligt och stabilisera huvudet tills volymen inandas. När viruset har tinat, späd viruset i PBS till önskad koncentration.Placera oftalmiskt smörjmedel på musens ögon före anestesi. Infektera omedelbart den bedövade musen med 50 mikroliter 20 plackbildande enheter, eller PFU, av influensa A-virus eller IAV intratrakealt genom att använda trubbig pincett för att dra tungan ur munnen och pipettera vätskevolymen ner i luftstrupen. Efter återvinning inokuleras intranasalt 10 mikroliter 200 PFU av IAV med den inokuleringsmetod som beskrivits tidigare.För lunguppsamling, använd dissektionssax, klipp sidorna på den exponerade bröstkorgen och dra försiktigt revbenen upp mot musens huvud för att exponera hjärtat. Sätt in en 25 gauge nål fäst vid en 10 ml spruta förfylld med PBS i höger kammare och börja långsamt perfusera. Leta efter blekning av lungorna som en indikator på framgångsrik perfusion.Spola långsamt för att undvika att bryta lungvävnaden. Lyft hjärtat med pincett och gör ett snitt för att separera lungorna och hjärtat. När du har separerat, plocka upp alla lunglober med pincett och skölj i en skål med steril PBS för att avlägsna eventuellt kvarvarande blod.I en petriskål, hacka lungan i små bitar och blanda väl. Ta bort hälften av lungblandningen för att bestämma bakteriell CFU eller viral PFU och placera den i ett runt botten 15 ml rör förfyllt med 0,5 ml PBS för homogenisering. Ta bort den andra halvan av lungan för flödescytometri och placera den i en icke-vävnadskulturbehandlad 24-brunnsplatta med varje brunn förfylld med 0,5 ml RP10.Låt stå i rumstemperatur tills bearbetning. För att homogenisera den uppsamlade vävnaden, rengör homogenisatorsonden genom att lägga den i 70% etanol och slå på homogenisatorn vid 60% effekt i 30 sekunder. Upprepa detta steg i sterilt vatten i 10 sekunder.Homogenisera varje vävnad i en minut. För räkning av bakterieantal, platta serieutspädningar på blodagarplattor. För att beräkna den totala CFU, använd 10 mikroliter till plattan och notera den slutliga volymen i milliliter för varje prov.Platta nasofarynxproverna på blodagarplattor kompletterade med tre mikrogram per milliliter gentamycin för att välja tillväxten av S pneumoniae samtidigt som tillväxten av andra mikroorganismer hämmas. Inkubera över natten vid 37 grader Celsius och 5% koldioxid. För flödescytometri, tillsätt 500 mikroliter digestionsbuffert till varje brunn på en 24-brunnsplatta innehållande ett lungprov.Inkubera plattan i 45 minuter till en timme. Använd sedan en P-1000 mikropipett, flytta de smälta lungorna och placera dem på filtret. Använd sedan kolven på en tre milliliter spruta för att mosa provet.Biofilmtillväxt S.pneumoniae-inokulum resulterar i konsekvent pneumokocktransport begränsad till nasofarynx samtidigt som systematisk spridning undviks. Sjukdomspresentationen hos S pneumoniae IAV-infekterade möss var beroende av bakteriestammen. Även om det inte fanns någon signifikant skillnad i bakterieantal av nasofarynx bland någon av stammarna, spreds S pneumoniae, TIGR4 och D39, men inte EF3030, till lungorna 48 timmar efter IAV-infektion.40% av mössen infekterade med S pneumoniae TIGR4 visade bakteriell spridning till lungorna och av dem blev hälften bakteriemiska. Möss infekterade med S pneumoniae D39 visade 100% spridning till lungorna och hälften av det upplevde bakteriemi. Vid spårning av den totala överlevnaden, oavsett bakteriestammen, var överlevnadsgraden för saminfekterade möss signifikant lägre än mössen som ensam utmanades med S pneumoniae.Denna modell användes också för att bedöma förekomsten av olika immunceller i lungorna efter IAV-infektion. Bakteriestammarna D39 och TIGR4 framkallade en signifikant ökning över baslinjen i inflödet av inflammatoriska immunceller från cirkulationen, såsom neutrofiler och monocyter, medan EF3030 inte gjorde det. Enbart IAV-infektion framkallade en signifikant ökning över baslinjen i inflödet av immunceller såsom NK-celler och gamma delta T-celler.Dessa antivirala svar trubbades signifikant av hos möss intranasalt infekterade med S pneumoniae före viral utmaning. Hos enstaka infekterade möss varierade inte virustitrarna mellan de unga och åldrade kohorterna. Gamla möss visade tidigare och betydligt allvarligare tecken på sjukdom och dog snabbare, inom 24 timmar, medan de unga kontrollerna överlevde infektionen bättre.Genom att separera vagn och sjukdom i distinkta steg kan vi undersöka både immunsvaret och de bakteriella och eller virala faktorer som är viktiga i olika faser av sjukdomsprogression. Vi hoppas att denna modell kommer att anpassas av andra laboratorier för att studera andra polymikrobiella interaktioner och värdpatogeninteraktioner under olika faser av sjukdomsprogression och över de olika värdarna.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Använda Bioluminescent Imaging för att undersöka synergi mellan Streptococcus pneumoniae Och influensa A-virus i modersmjölksersättning Möss

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Levande cell imaging av Bacillus subtilis Och Streptococcus pneumoniae Med hjälp av automatiserade Time-lapse Mikroskopi

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

Användning av EpiAirway modell för att karakterisera Långfristiga Värd-patogen interaktioner

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Den<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Mus Modell: Studera patogen och värd Bidrag till infektiös kolit

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Karakterisering av inflammatoriska svar under intranasal kolonisering med Streptococcus pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Övervaknings Förändringar i Membrane polaritet, Membrane Integritet och intracellulära jonkoncentrationer i<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Med hjälp av fluorescerande färger

Membrane depolarization and ion fluxes are events that have been studied extensively in biological systems due to their ability to profoundly impact ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Capsular Serotypningen av<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Använda Quellung Reaction

There are over 90 different capsular serotypes of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). As well as being a tool for understanding pneumococcal ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

En musmodell för patogen-inducerad Kronisk inflammation vid lokala och system webbplatser

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Kapselkontraktur Serotypningen av<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Av latexagglutination

Latex agglutination reagents are widely used in microbial diagnosis, identification and serotyping. Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) is a major ...

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

En<em&gt; In Vitro</em&gt; Modell för mätning av immunsvar mot malaria som led av HIV-infektion

Malaria and HIV co-infection is a growing health priority. However, most research on malaria or HIV currently focuses on each infection individually. ...