Name: a mouse model for the transition of streptococcus pneumoniae from colonizer to pathogen upon viral co-infection recapitulates age-exacerbated illness
Uploaded: 2022-09-28T14:15:00
Duration: 12 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness at JoVE.

Bu yazının eleştirel okuması ve düzenlenmesi için Nick Lenhard'a teşekkür ederiz. Ayrıca bakteri suşları için Andrew Camilli ve Anthony Campagnari'ye ve viral suşlar için Bruce Davidson'a teşekkür ederiz. Bu çalışma, J.L.'ye Ulusal Sağlık Enstitüsü Hibesi (R21AG071268-01) ve Ulusal Sağlık Hibeleri Enstitüsü (R21AI145370-01A1), (R01AG068568-01A1), (R21AG071268-01) tarafından E.N.B.G.'ye desteklenmiştir.

Yazarların açıklayacak çıkar çatışmaları yoktur.

Mevcut S. pneumoniae / IAV ko-enfeksiyon deneysel çalışmalarının çoğu, IAV ile önceden enfekte olmuş farelerin akciğerlerine bakteriyel iletime dayanmaktadır. Bu modeller, konakçıyı sekonder bakteriyel enfeksiyona duyarlı hale getiren pulmoner ortamdaki ve sistemik immün yanıttaki değişikliklerin belirlenmesine yardımcı olmuştur 15,16,17,32,33,34,35,36,37. Bununla birlikte, bu modeller S. pneumoniae'nin asemptomatik bir kolonizatörden ciddi akciğer ve sistemik enfeksiyonlara neden olabilen bir patojene geçişini taklit edememiştir. Ayrıca, bu modeller üst solunum yollarında enfeksiyona duyarlılığa katkıda bulunan konakçı faktörlerini ve konakçı-patojen etkileşimlerini incelemek için uygun değildir. İAv enfeksiyonundan sonra pnömokokların nazofarenksten akciğere hareketi için önceki bir model, nazofarenksin bakteriyel enfeksiyonuna ve ardından viral enfeksiyona dayanıyordu. Bununla birlikte, insan hastalarda gözlenen ciddi hastalık belirtilerini yeniden üretemedi21. Burada tarif edilen modifiye murin enfeksiyonu modeli, S. pneumoniae'nin asemptomatik taşıyıcılıktan ciddi klinik hastalığa neden olan bir patojene geçişini özetlemektedir.
Bu modelin kritik bir adımı, nazofarenkste S. pneumoniae enfeksiyonunun kurulmasıdır. Streptococcus pneumoniae, biyofilmler oluşturur ve nazofarenksi farklı verimliliklerde kolonize eder21,38. Tutarlı enfeksiyon oluşturmak için, şimdiye kadar test edilen biyofilm ile yetiştirilen bakteri suşlarının en az 5 × 106 CFU'su gereklidir23. Herhangi bir yeni bakteri suşunun viral enfeksiyondan önce nazofarenksin stabil enfeksiyonu için test edilmesi önerilir. Viral ko-enfeksiyon için, önceki çalışmalar, bakterilerin nazofarenksten dağılması için IAV ile intranazal enfeksiyonun gerekli olduğunu bulmuştur21,22,23. Önceki çalışmalarda, intranazal doğum için 500 PFU IAV kullanılırken, bu çalışmada nazofarenksteki bakteri sayılarını artırmak için 200 PFU yeterliydi. IAV enfeksiyonu üst solunum yolları ile sınırlı değildir ve akciğerlere yayılabilir39,40, bu da pulmoner ortamı bakteriyel enfeksiyon için daha izin verici hale getirmenin anahtarıdır15,16,41. IAV'nin akciğerlere verilmesi, intranazal doğum veya anestezi uygulanan farelerin intratrakeal yerleştirilmesi ile sağlanabilir. BALB / cByJ fareleri ile yapılan önceki çalışmalar, intranazal doğumun viral pnömoni ile sonuçlandığını bulmuştur21; Bununla birlikte, intranazal aşılamayı takiben inokulumun akciğerlere erişimi C57BL / 6 farelerde daha sınırlıdır. C57BL/6 farelerde, virüs23'ün tutarlı bir şekilde verilmesi için intratrakeal kurulum gereklidir. Bu modelde, önceki bakteriyel kolonizasyon, viral enfeksiyon sonrası hastalık semptomlarının ortaya çıkışını hızlandırmaktadır23. Viral enfeksiyonun kendisi kinetik potansiyel varyasyon ile hastalık semptomlarına neden olabileceğinden, önce test edilen herhangi bir yeni viral suş için bir dizi dozun test edilmesi ve birlikte enfekte konakçılarda hızlandırılmış kinetiği ortaya çıkaran bir doz seçilmesi önerilir.
Akciğerler, bu modelde hastalık değerlendirmesi için başka bir kritik okuma sağlar. Patojen yükünün ve bağışıklık hücresi akışının değerlendirilmesi için, aynı fareden bir akciğer kullanılabilir. Bununla birlikte, enfeksiyon ve inflamasyon şiddeti loblar arasında farklılık gösterebileceğinden, çeşitli değerlendirmeler için aynı akciğerin farklı loblarının alınmaması önerilir. Aksine, tüm loblar küçük parçalara ayrılabilir, birlikte iyice karıştırılabilir ve daha sonra farklı değerlendirmeler için eşit olarak ayrıştırılabilir. Benzer şekilde, nazofarenks, bakteriyel CFU veya viral PFU ve immün yanıtın sayımı için kullanılabilir. Bununla birlikte, yıkamalardan ve dokulardan elde edilen hücre sayısı, aynı gruptaki farelerden alınan örnekleri bir araya getirmeden akış sitometrisi yapmak için çok düşüktür. Alternatif olarak, nazofarenksteki inflamasyon histolojik olarak değerlendirilebilir23.
Bu modelin kritik bir özelliği, hastalarda görülen klinik hastalığı özetlemesidir. İnsanlarda, IAV enfeksiyonunu takiben sekonder pnömokok pnömonisi sıklıkla öksürük, nefes darlığı, ateş ve hastaneye yatışlara, solunum yetmezliğine ve hatta ölüme yol açabilecek kas ağrıları dahil olmak üzere belirgin hastalık belirtileri ile sonuçlanır 8,15,42,43. Bu model, insanlarda gözlenen ciddi klinik hastalık belirtilerini, fareler tarafından görüntülenen nefes almada zorluk (solunum skoruna yansıyan) ve genel halsizlik (duruş ve hareket skorlarına yansıyan) ve bazı sağlıklı genç kontrollerde ölüm açısından özetlemektedir. Birlikte enfekte olmuş farelerde şiddetlenen hastalık semptomları muhtemelen hem akciğerlere bakteriyel yayılımın hem de pnömokok taşıyıcısı23 olan farelerde bozulmuş viral klirensin bir sonucudur. Modelin bir sınırlaması, klinik hastalık insidansının ve nazofarenksten bakteriyel yayılımın fareler arasında değişmesi ve bakteriyel suş, konakçı yaş ve genotip21,22,23'ten etkilenmesidir. Bunu yansıtarak, invaziv suşlar için, lokalize enfeksiyondan (saptanabilir bakteriyemi olmadan) ölüme ilerleme 24 saat içinde gerçekleşebilir. Bu nedenle, sistemik yayılımın gerçek bir değerlendirmesi için, bakteriyemi daha kısa aralıklarla (her 6-12 saatte bir) takip edilmelidir. Benzer şekilde, hastalık skoru, özellikle ko-enfeksiyondan sonraki ilk 72 saat içinde hızla değişebilir. Bu nedenle, hastalık semptomlarını yakından izlemek için, IAV enfeksiyonundan sonraki 1-3 gün boyunca fareleri günde üç kez izlemeniz önerilir.
Özetle, bu model S. pneumoniae'nin nazofarenksin asemptomatik bir kolonizöründen, IAV enfeksiyonu üzerine pulmoner ve sistemik hastalığa neden olabilen bir patojene hareketini çoğaltır. Bu modelde IAV, nazofarenksteki bakteriyel davranışı değiştirerek, akciğere bakteriyel yayılımı artırarak ve antibakteriyel bağışıklığı değiştirerek S. pneumoniae'nin geçişini tetikler23. Benzer şekilde, bakteriyel taşıyıcılık antiviral immün yanıtları köreltir ve akciğerlerden IAV klirensini bozar23. Bu, bu modeli, tek ve polimikrobiyal enfeksiyonlarda bağışıklık yanıtlarındaki değişiklikleri ayrıştırmak için ideal kılar. Ek olarak, ko-enfeksiyonu takiben hastalığın seyri, kısmen, nazofarenkste bulunan pnömokokların suşuna bağlıdır. Bu nedenle, model S. pneumoniae'nin patojenik geçişine karşı asemptomatik kolonizasyon için gerekli bakteriyel faktörlerin diseksiyonu için uygundur. Son olarak, bu model yaşlanmanın ko-enfeksiyonlara duyarlılığını yeniden üretir ve bu burada test edilmemiş olmasına rağmen, konakçı arka planının hastalık seyri üzerindeki etkisini değerlendirmek için kolayca kullanılabilir. Sonuç olarak, taşıma ve hastalığın farklı adımlara ayrılması, hem patojenlerin hem de konakçının genetik varyantlarını analiz etme fırsatı sunarak, önemli bir patobiyonun konakçı ile etkileşimlerinin hastalık progresyonunun farklı aşamalarında ayrıntılı olarak incelenmesine olanak tanır. İleriye dönük olarak, bu model savunmasız konakçılar için tedavi seçeneklerini uyarlamak için kullanılabilir.

Streptococcus pneumoniae (pnömokok), çoğu sağlıklı bireyin nazofarenksinde asemptomatik olarak bulunan Gram-pozitif bakterilerdir 1,2. Tamamen tanımlanmamış faktörler tarafından teşvik edilen pnömokoklar, nazofarenksin iyi huylu kolonizatörlerinden, diğer organlara yayılan patojenlere geçebilir ve bu da otitis media, pnömoni ve bakteriyemi3 dahil olmak üzere ciddi enfeksiyonlara neden olabilir. Pnömokok hastalığı prezentasyonu, kısmen, kapsüler polisakkaritlerin bileşimine dayanan serotip de dahil olmak üzere suşa özgü farklılıklara bağlıdır. Şimdiye kadar karakterize edilen 100'den fazla serotip vardır ve bazıları daha invaziv enfeksiyonlarla ilişkilidir 4,5. Diğer bazı faktörler pnömokok hastalığı riskini arttırır. Böyle bir faktör, pnömokok pnömonisi riskinin IAV 6,7 ile 100 kat arttığı viral enfeksiyondur. Tarihsel olarak, S. pneumoniae, influenza sonrası sekonder bakteriyel pnömoninin en yaygın nedenlerinden biridir ve daha kötü sonuçlarla ilişkilidir8. Bir diğer önemli risk faktörü ileri yaştır. Aslında, S. pneumoniae, 65 yaşın üzerindeki yaşlı bireylerde toplum kökenli bakteriyel pnömoninin önde gelen nedenidir 9,10. Yaşlı bireyler, pnömoni ve influenzaya bağlı ölümlerin çoğunluğunu (% >75) oluşturmaktadır, bu da iki risk faktörünün - yaşlanma ve IAV enfeksiyonu - sinerjik olarak hastalık duyarlılığını kötüleştirdiğini göstermektedir11,12,13,14. Bununla birlikte, viral enfeksiyonun pnömokokların asemptomatik kolonizatörden invaziv patojene geçişini tetiklediği mekanizmalar ve bunun konakçı faktörler tarafından nasıl şekillendirildiği tam olarak tanımlanmamıştır. Bu, büyük ölçüde, asemptomatik pnömokok kolonizasyonundan kritik klinik hastalığa geçişi özetleyen küçük bir hayvan modelinin yokluğundan kaynaklanmaktadır.
Ko-enfeksiyon çalışmaları klasik olarak, influenza enfeksiyonundan 7 gün sonra doğrudan akciğerlere pnömokoklarla aşılanmış farelerde modellenmiştir15,16. Bu, sekonder bakteriyel pnömoniye duyarlılığı yeniden üretir ve antiviral bağışıklık tepkilerinin antibakteriyel savunmayı nasıl bozduğunu incelemek için idealdir17. Bununla birlikte, insanlarda yapılan uzunlamasına çalışmalar, bakterilerin asemptomatik biyofilmler oluşturabildiği nazofarenkste pnömokok taşıyıcılığının18, invaziv hastalıklarla eşit şekilde ilişkili olduğunu göstermiştir19,20. Orta kulak, akciğer ve kan enfeksiyonlarından kaynaklanan bakteriyel izolatlar, nazofarenks20'de bulunanlarla genetik olarak aynıdır. Bu nedenle, IAV enfeksiyonunu takiben asemptomatik taşıyıcılıktan invaziv hastalığa geçişi incelemek için, farelere intranazal olarak biyofilm ile yetiştirilen pnömokokların uygulandığı ve ardından nazofarenksin IAV enfeksiyonunun uygulandığı bir model oluşturulmuştur21,22. Üst solunum yolunun viral enfeksiyonu, konakçı ortamda, pnömokokların biyofilmlerden dağılmasına ve alt solunum yollarına yayılmasına yol açan değişikliklere yol açmıştır21. Bu dağınık bakteriler, enfeksiyon için önemli olan virülans faktörlerinin ekspresyonunu yukarı regüle etmiş, onları kolonizatörlerden patojenlere dönüştürmüştür21. Bu gözlemler, virüs, konakçı ve bakteriler arasındaki karmaşık etkileşimi vurgulamakta ve viral enfeksiyon tarafından tetiklenen konakçıdaki değişikliklerin pnömokok davranışı üzerinde doğrudan bir etkiye sahip olduğunu ve bunun da bakteriyel enfeksiyonun seyrini değiştirdiğini göstermektedir. Bununla birlikte, bu model insanlarda gözlenen ciddi hastalık belirtilerini özetlemekte başarısız olur, çünkü muhtemelen virüs burun boşluğu ile sınırlıdır ve viral enfeksiyonun konakçı bağışıklığı ve akciğer hasarı üzerindeki sistemik etkileri özetlenmemiştir.
Son zamanlarda, konakçı ve patojenler arasındaki karmaşık etkileşimi içeren, aynı zamanda insanlarda gözlenen hastalık şiddetini daha yakından taklit eden bir model oluşturduk23. Bu modelde, fareler ilk önce asemptomatik taşıyıcılık oluşturmak için biyofilm ile yetiştirilen pnömokoklar ile intranazal olarak enfekte edilir, ardından hem nazofarenks hem de akciğerlerin IAV enfeksiyonu izlenir. Bu, akciğerlere bakteriyel yayılım, akciğer iltihabı ve genç farelerin bir kısmında ölümcüllüğe ilerleyen hastalıklarla sonuçlandı23. Bu önceki çalışma, hem viral hem de bakteriyel enfeksiyonun konak savunmasını değiştirdiğini göstermiştir: viral enfeksiyon bakteriyel yayılımı teşvik etti ve önceki bakteriyel kolonizasyon, konağın pulmoner IAV seviyelerini kontrol etme yeteneğini bozdu23. İmmün yanıtın incelenmesi, IAV enfeksiyonunun nötrofillerin antibakteriyel aktivitesini azalttığını, bakteriyel kolonizasyonun ise antiviral savunma için kritik olan tip I interferon yanıtını körelttiğini ortaya koymuştur23. Daha da önemlisi, bu model yaşlanmanın duyarlılığını yeniden üretti. Genç farelerle karşılaştırıldığında, yaşlı fareler daha erken hastalık belirtileri gösterdi, daha ciddi klinik hastalık gösterdi ve enfeksiyona daha sık yenik düştü23. Bu makalede sunulan çalışma, hastalığın derecesinin bakteriyel suşa da bağlı olduğunu göstermektedir, çünkü invaziv pnömokok suşları IAV enfeksiyonu üzerinde daha etkili yayılım gösterir, pulmoner inflamasyonun daha açık belirtilerini gösterir ve invaziv olmayan suşlara kıyasla daha hızlı hastalık oranlarına neden olur. Bu nedenle, bu S. pneumoniae / IAV ko-enfeksiyon modeli, hem patojen hem de konakçı faktörlerin ayrıntılı olarak incelenmesine izin verir ve hastalık progresyonunun farklı aşamalarında polimikrobiyal enfeksiyonlara karşı bağışıklık tepkilerini incelemek için çok uygundur.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-Aminobenzoic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1267318</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well round bottom plates</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>650101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m Filters</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>07-201-432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC147440250</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avicel</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>501785325</td>
			<td>Microcyrstalline cellulose&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Cytofix Fixation Buffer&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BDB554655</td>
			<td>Fixation Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Fortessa</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Flow cytometer&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Intramedic Polyethylene Tubing&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>427410</td>
			<td>Tubing for nasal lavage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Disposable Syringes with Luer-Lok Tips (1 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-823-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD&#160;Microtainer Capillary Blood Collector and BD Microgard Closure</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>02-675-185</td>
			<td>Blood collection tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beta-Nicotinamide adenine dinucleotide</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6233703</td>
			<td>Mix IV stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC230090010</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>#000644</td>
			<td>Mice used in this study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride Anhydrous</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>C77-500</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD103 BV 421</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB562771</td>
			<td>Clone: M290 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11b APC</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-112-9622</td>
			<td>Clone: M1/70, DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11c PE</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB565592</td>
			<td>Clone: N418 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 AF 488</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>OB153030</td>
			<td>Clone: 145-2C11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD4 V450</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>BDB560470</td>
			<td>Clone: RM4.5 DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 APC eF-780</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-9642</td>
			<td>Clone: 30-F11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 PE</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-103-70</td>
			<td>Clone: 30-F11 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD8&#945; BV 650</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>BDB563234</td>
			<td>Clone: 53-6.7 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Choline chloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC110290500</td>
			<td>Final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Disposable Vacuum Filter/Storage Systems</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>09-761-107</td>
			<td>Filter sterilzation apparatus&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Tissue Culture Treated T-25 Flasks</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>10-126-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;Costar Clear Multiple Well Plates</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>07-201-590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#160;DMEM With L-Glutamine and 4.5 g/L Glucose; Without Sodium Pyruvate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>MT10017CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanocobalamin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC405925000</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D39</td>
			<td>National Collection of Type Culture (NCTC)</td>
			<td>NCTC 7466</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Alanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1023114</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Calcium pantothenate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC243301000</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextrose</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>D16-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dnase&#160;</td>
			<td>Worthington Biochemical&#160;</td>
			<td>LS002147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eagles Minimum Essential Medium</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH4616-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EF3030</td>
			<td>Center for Disease Control and Prevention&#160;</td>
			<td>Available via the isolate bank request</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain, request using strain name</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F480 PE Cy7</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-9713</td>
			<td>Clone: BMB DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 50 mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-432-22</td>
			<td>50 mL round bottom tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Round-Bottom Polypropylene Test Tubes With Cap</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-959-11B</td>
			<td>15 mL round bottom tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Round-Bottom Polystyrene Test Tubes (5 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-959-5</td>
			<td>FACS tubes&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ferric Nitrate Nonahydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>I110-100</td>
			<td>Mix III stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Delicate Dissecting Scissors</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-951-5</td>
			<td>Instruments used for harvest</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Disposable Inoculating Loops&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-363-602</td>
			<td>Inoculating loops&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Dissecting Tissue Forceps</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>13-812-38</td>
			<td>Forceps for harvest</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Premium Microcentrifuge Tubes: 1.5 mL</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>05-408-137</td>
			<td>Micocentrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand&#160;Sterile Syringes for Single Use (10 mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-955-459</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Folic Acid</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC216630500</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco RPMI 1640 (ATCC)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A1049101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;DPBS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14190250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;HBSS, calcium, magnesium, no phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14025134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;MEM (Temin&#39;s modification) (2x), no phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>11-935-046</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>15-140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Trypan Blue Solution, 0.4%</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>15-250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco&#160;Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>25-200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol (Certified ACS)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>G33-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AA3643530</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1202414</td>
			<td>Mix II stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen UltraComp eBeads Compensation Beads</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>50-112-9040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron (II) sulfate heptahydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1517836</td>
			<td>Mix III stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Alanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6027918</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Arginine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1573814</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Asparagine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAB2147322</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Aspartic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1352022</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cysteine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1043518</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cysteine hydrochloride monohydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1038914</td>
			<td>Final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cystine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1376218</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamic acid&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC156211000</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>O2956-100</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Histidine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC166150250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIFE TECHNOLOGIES LIVE/DEAD Fixable Blue Dead Cell Stain Kit, for UV excitation</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>50-112-1524</td>
			<td>Clone: N/A DF 1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Isoleucine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC166170250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Leucine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP385-100</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Lysine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6222514</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Methionine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1031822</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low endotoxin BSA&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A1470-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Phenylalanine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1323814</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Proline</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1019922</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Serine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC132660250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Threonine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC138930250</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Tryptophan</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1023014</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Valine</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAA1272014</td>
			<td>Amino acid stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ly6C BV 605</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB563011</td>
			<td>Clone: AL-21 DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ly6G AF 488&#160;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>NC1102120</td>
			<td>Clone: IA8, DF 1:300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cells&#160;</td>
			<td>American Type Culture Collection (ATCC)</td>
			<td>CCL-34</td>
			<td>MDCK cell line for PFU analuysis&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate 7-Hydrate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>60-019-68</td>
			<td>CDM starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manganese Sulfate</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>M113-500</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MilQ water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Ultra-pure water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Fc Block</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>BDB553142</td>
			<td>Clone: 2.4G2 DF 1:100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MWI VETERINARY&#160;PURALUBE VET OINTMENT</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC1886507</td>
			<td>Eye lubricant for infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NCI-H292 mucoepidermoid carcinoma cell line&#160;</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1848</td>
			<td>H292 lung epithelial cell line for biofilm growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Niacinamide</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>18-604-792</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NK 1.1 AF 700</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-4692</td>
			<td>Clone: PK136 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxyrase For Broth 50Ml Bottle 1/Pk</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>50-200-5299</td>
			<td>To remove oxygen from liquid cultures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 4% in PBS</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td>J19932-K2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pivetal Isoflurane&#160;</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-893-8440</td>
			<td>Isoflurane for anesthesia during infection&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate Dibasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P288-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>P285-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridoxal hydrochloride&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC352710250</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridoxamine dihydrochloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AAJ6267906</td>
			<td>Mix I stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Riboflavin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC132350250</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Acetate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>0530-500G</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide&#160;</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP922I-500</td>
			<td>For FACS buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S233-500</td>
			<td>Starter stock and final supplement to CDM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Dibasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S374-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S369-500</td>
			<td>Starter stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCR APC&#160;</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>50-112-8889</td>
			<td>Clone: GL-3 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TCR&#946; APC-Cy7</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>BDB560656</td>
			<td>Clone: H57-597 DF 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Blood Agar with Gentamicin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>R01227</td>
			<td>Blood agar plates with the antibiotic gentamicin&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific&#160;Trypsin, TPCK Treated</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>PI20233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiamine hydrochloride</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC148991000</td>
			<td>Vitamin stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TIGR4</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>BAA-334</td>
			<td>Streptococcus pneumoniae strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uracil</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>AC157300250</td>
			<td>Mix II stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worthington Biochemical Corporation&#160;Collagenase, Type 2, 1 g</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC9693955</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model for the transition of streptococcus pneumoniae from colonizer to pathogen upon viral co-infection recapitulates age-exacerbated illness

Streptococcus pneumoniae (pnömokok), çoğu bireyde nazofarenksin asemptomatik bir kolonizatörüdür, ancak influenza A virüsü (IAV) enfeksiyonu üzerine pulmoner ve sistemik bir patojene ilerleyebilir. İleri yaş, konakçının sekonder pnömokok pnömonisine duyarlılığını arttırır ve kötüleşen hastalık sonuçları ile ilişkilidir. Bu süreçleri yönlendiren konakçı faktörler, kısmen asemptomatik kolonizasyondan ciddi klinik hastalığa geçişi yeniden üreten hayvan modellerinin eksikliği nedeniyle iyi tanımlanmamıştır. 
Bu yazıda, viral enfeksiyon üzerine pnömokokların asemptomatik taşıyıcılıktan hastalığa geçişini yeniden yaratan yeni bir fare modeli anlatılmaktadır. Bu modelde, fareler ilk önce asemptomatik taşıyıcılığı sağlamak için biyofilm ile yetiştirilen pnömokoklar ile intranazal olarak aşılanır, ardından hem nazofarenks hem de akciğerlerin IAV enfeksiyonu izlenir. Bu, akciğerlere bakteriyel yayılım, akciğer iltihabı ve ölümcüllüğe ilerleyebilecek belirgin hastalık belirtileri ile sonuçlanır. Hastalığın derecesi bakteri suşu ve konakçı faktörlere bağlıdır. 
Önemli olarak, bu model yaşlanmanın duyarlılığını yeniden üretir, çünkü genç farelere kıyasla, yaşlı fareler daha ciddi klinik hastalık gösterir ve hastalığa daha sık yenik düşer. Taşıma ve hastalığı farklı adımlara ayırarak ve hem patojenin hem de konakçının genetik varyantlarını analiz etme fırsatı sağlayarak, bu S. pneumoniae / IAV ko-enfeksiyon modeli, önemli bir patobiyontun konakçı ile etkileşimlerinin hastalık progresyonunun farklı aşamalarında ayrıntılı olarak incelenmesine izin verir. Bu model aynı zamanda duyarlı konakçılarda sekonder pnömokok pnömonisine karşı potansiyel terapötik hedefleri belirlemek için önemli bir araç olarak da hizmet edebilir.

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness at JoVE.

A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness

Bu yazıda, viral enfeksiyon sırasında pnömokokların asemptomatik bir kolonizatörden hastalığa neden olan bir patojene geçişi için yeni bir fare modeli açıklanmaktadır. Bu model, hastalık progresyonunun farklı aşamalarında ve çeşitli konakçılarda polimikrobiyal ve konakçı-patojen etkileşimlerini incelemek için kolayca uyarlanabilir.

Streptococcus pneumoniae'nin Viral Ko-Enfeksiyon Üzerine Kolonizatörden Patojene Geçişi İçin Bir Fare Modeli, Yaşın Şiddetlendirdiği Hastalıkları Özetler

Streptococcus pneumoniae (pneumococcus) is an asymptomatic colonizer of the nasopharynx in most individuals but can progress to a pulmonary and systemic ...

Bu yöntem, viral enfeksiyon sırasında pnömokokların asemptomatik bir kolonizörden hastalığa neden olan bir patojene geçişini incelemek için yeni bir fare modelini açıklamaktadır. İnsanlarda olanları daha yakından taklit eder. Bu model, duyarlı konakçılarda sekonder pnömokok pnömonisine karşı potansiyel terapötik hedefleri belirlemek için önemli bir araç olabilir.Bu model yaşlanmanın duyarlılığını yeniden üretir. Bu nedenle, konakçının hangi yönlerinin yaşla birlikte kusurlu hale geldiğini anlamak ve savunmasız yaşlı konakçılar için tedavi seçeneklerini uyarlamamıza izin vermek için kullanılabilir. Büyüyen pnömokok biyofilmi zordur, çünkü farklı suşlar farklı miktarlarda zaman alır.Benim tavsiyem, hayvan çalışmasını yürütmeden önce biyofilmi büyütmeyi denemektir. H292 hücreleri% 100 birleştiğinde, hücreleri PBS ile üç kez yıkayın. Daha sonra hücreleri sabitlemek için kuyucuk başına 250 mikrolitre% 4 paraformaldehit ekleyin ve buz üzerinde bir saat veya gece boyunca dört santigrat derecede inkübe edin.Strake streptococcus pneumoniae, kan agar plakasına ilgi duşu ve gece boyunca 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte inkübe edilir. Ertesi gün, bir mililitre CDM artı Oxyrase ekleyerek bakterileri plakadan yıkayarak ve bir mililitrelik pipet ucunun kenarını kullanarak bakteri kolonilerini yavaşça kaldırarak, agar'ı kazımamaya dikkat ederek, bakterileri plakadan taze, kimyasal olarak tanımlanmış ortama veya CDM artı Oxyrase'ye aşılayın. CDM artı Oksiraz'daki bakteri kültürünü 0.05'lik bir başlangıç OD 600'üne seyreltin.Daha sonra bakterileri, 0.2 OD'ye ulaşana kadar 37 santigrat derecede gevşek bir şekilde kapatılmış 50 mililitrelik konik tüpte ve% 5 karbondioksitte büyütün. Daha sonra bakteri kültürü tüpünü vorteks. Sabit H292 hücrelerine 0.5 mililitre kültür tohumlayın ve kuyucuk başına 0.5 mililitre CDM artı Oksiraz ortamı ekleyin.Bakteri içermeyen kontrol kuyularına CDM artı Oxyrase ekleyin. Plakayı 34 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte 48 saat boyunca inkübe edin. Her 12 saatte bir, ilk tohumlamayı takiben, ortamın 0.5 mililitresini taze CDM artı Oksiraz ile yavaşça değiştirin.Biyofilm oluşumunu bozmamaya dikkat edin. Biyofilm için plakanın altını kontrol edin ve biyofilm büyümesi nedeniyle zaman geçtikçe artan bulanıklığa bakın. 48 saat sonra, süpernatantı çıkarın ve biyofilmi bir mililitre PBS ile iki kez yıkayın.Daha sonra biyofilmi bir mililitre taze CDM içinde yeniden askıya alın ve biyofilmi kaldırmak için pipeti kuvvetlice yukarı ve aşağı doğru çekin. Her bakteri suşu için, kültürü tüm kuyucuklardan 50 mililitrelik bir tüpe toplayın. Sıkıca kapatılmış tüpü birkaç kez yukarı ve aşağı doğru hafifçe eğerek iyice karıştırın.Daha sonra,% 20 gliserol nihai konsantrasyonuna sahip bir bakteri süspansiyonu elde etmek için eşit hacimlerde% 40 gliserol ve CDM ekleyin. Bir mililitreyi bir mikro santrifüj tüpüne alın, kuru buzda dondurun ve eksi 80 santigrat derecede tasarruf edin. Yetiştirilen biyofilmi buz üzerinde çözün ve beş dakika boyunca 1.700 G'de döndürün.Pelet bozmadan süpernatantı dikkatlice çıkarın ve atın. Daha sonra peleti bir mililitre PBS'de tekrar askıya alarak yıkayın ve tekrar döndürün. Süpernatantı çıkarın ve peleti istenen konsantrasyona ulaşmak için gereken hacimde yeniden askıya alın.C57 siyah altı erkek fareyi, seyreltilmiş inokulumun beş mikrolitresini her bir narisin içine pipetleyerek beş kez 10 ila altıncı koloni oluşturan birimler veya CFU ile intranazal olarak aşılayın. Aşılamadan sonra, fareyi sıkıca tutun ve ses solunana kadar kafayı stabilize edin. Virüs çözüldükten sonra, PBS'deki virüsü istenen konsantrasyona seyreltin.Anesteziden önce oftalmik kayganlaştırıcıyı farenin gözlerine yerleştirin. Anestezi uygulanan fareye, dili ağızdan çıkarmak için künt cımbız kullanarak ve sıvı hacmini trakeadan aşağı pipetlemek suretiyle intratrakeal olarak 50 mikrolitre 20 plak oluşturan ünite veya PFU, influenza A virüsü veya IAV ile hemen enfekte edin. İyileşmeyi takiben, daha önce tarif edilen aşılama yöntemini kullanarak intranazal olarak 10 mikrolitre 200 PFU IAV aşılayın.Akciğer toplanması için, diseksiyon makası kullanarak, açıkta kalan göğüs kafesinin kenarlarını kesin ve kalbi açığa çıkarmak için kaburgaları yavaşça farenin başına doğru çekin. PBS ile önceden doldurulmuş 10 mililitrelik bir şırıngaya tutturulmuş 25 gauge iğneyi sağ ventriküle yerleştirin ve yavaşça karıştırmaya başlayın. Başarılı perfüzyonun bir göstergesi olarak akciğerlerin ağartılmasını arayın.Akciğer dokusunun kırılmasını önlemek için yavaşça yıkayın. Kalbi forseps ile kaldırın ve akciğerleri ve kalbi ayırmak için bir kesim yapın. Ayrıldıktan sonra, akciğerin tüm loblarını forseps ile toplayın ve kalan kanı çıkarmak için steril PBS'li bir tabakta durulayın.Bir Petri kabında, akciğeri küçük parçalara ayırın ve iyice karıştırın. Bakteriyel CFU veya viral PFU'yu belirlemek için akciğer karışımının yarısını çıkarın ve homojenizasyon için 0,5 mililitre PBS ile önceden doldurulmuş yuvarlak tabanlı 15 mililitrelik bir tüpe yerleştirin. Akciğerin diğer yarısını akış sitometrisi için çıkarın ve her biri 0.5 mililitre RP10 ile önceden doldurulmuş 24 delikli doku kültürü olmayan bir plakaya yerleştirin.İşleme girene kadar oda sıcaklığında bırakın. Toplanan dokuyu homojenize etmek için, homojenizatör probunu %70 etanol içine koyarak ve homojenizatörü %60 güçte 30 saniye boyunca açarak temizleyin. Bu adımı steril suda 10 saniye boyunca tekrarlayın.Her dokuyu bir dakika boyunca homojenize edin. Bakteri sayılarının sayımı için, kan agar plakalarındaki plaka seri seyreltmeleri. Toplam CFU'yu hesaplamak için, plaka için 10 mikrolitre kullanın ve her numune için mililitre cinsinden son hacmi not edin.Nazofarenks örneklerini, diğer mikroorganizmaların büyümesini inhibe ederken S pneumoniae'nin büyümesini seçmek için mililitre gentamisin başına üç mikrogram ile desteklenmiş kan agar plakaları üzerine plakalayın. Gece boyunca 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte inkübe edin. Akış sitometrisi için, bir akciğer örneği içeren 24 delikli bir plakanın her bir kuyucuğuna 500 mikrolitre sindirim tamponu ekleyin.Plakayı 45 dakika ila bir saat arasında inkübe edin. Daha sonra, bir P-1000 mikro pipet kullanarak, sindirilmiş akciğerleri hareket ettirin ve filtreye yerleştirin. Ardından, numuneyi ezmek için üç mililitrelik bir şırınganın pistonunu kullanın.Biyofilm büyümesi S.pneumoniae inoculum, sistematik yayılmayı önlerken nazofarenks ile sınırlı tutarlı pnömokok taşıyıcılığı ile sonuçlanır. S pneumoniae IAV koinfenfekte farelerde hastalık prezentasyonu bakteri suşuna bağlıydı. Herhangi bir suş arasında nazofarenksin bakteri sayılarında anlamlı bir fark bulunmamakla birlikte, S pneumoniae, TIGR4 ve D39, ancak EF3030, IAV enfeksiyonundan 48 saat sonra akciğerlere yayılmamıştır.S pneumoniae TIGR4 ile enfekte olan farelerin% 40'ı akciğerlere bakteriyel yayılım gösterdi ve bunların yarısı bakterisemik hale geldi. S pneumoniae D39 ile enfekte olmuş fareler, akciğerlere% 100 yayılma gösterdi ve bu bakteriyeminin yarısı yaşandı. Genel sağkalımın izlenmesinde, bakteri suşundan bağımsız olarak, koenfekte olmuş farelerin hayatta kalma oranı, S pnömonisi ile tek başına meydan okuyan farelerden önemli ölçüde daha düşüktü.Bu model aynı zamanda IAV enfeksiyonunu takiben akciğerlerde çeşitli bağışıklık hücrelerinin varlığını değerlendirmek için de kullanılmıştır. Bakteri suşları D39 ve TIGR4, nötrofiller ve monositler gibi dolaşımdan enflamatuar bağışıklık hücrelerinin akışında taban çizgisinin üzerinde önemli bir artış sağlarken, EF3030 bunu yapmadı. IAV enfeksiyonu tek başına, NK hücreleri ve gama delta T-hücreleri gibi bağışıklık hücrelerinin akışında taban çizgisinin üzerinde önemli bir artışa neden oldu.Bu antiviral yanıtlar, viral meydan okumadan önce intranazal olarak S pneumoniae ile enfekte olmuş farelerde önemli ölçüde körelmiştir. Tek başına enfekte olmuş farelerde, viral titreler genç ve yaşlı kohortlar arasında değişmedi. Yaşlı fareler daha erken ve önemli ölçüde daha şiddetli hastalık belirtileri gösterdi ve 24 saat içinde daha hızlı öldü, oysa genç kontroller enfeksiyondan daha iyi kurtuldu.Taşıma ve hastalığı farklı adımlara ayırmak, hem bağışıklık tepkisini hem de hastalığın ilerlemesinin farklı aşamalarında önemli olan bakteriyel ve veya viral faktörleri incelememizi sağlar. Bu modelin, hastalığın ilerlemesinin farklı aşamalarında ve çeşitli konakçılarda diğer polimikrobiyal etkileşimleri ve konakçı patojen etkileşimlerini incelemek için diğer laboratuvarlar tarafından uyarlanacağını umuyoruz.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Yılları arasında sinerjistik Araştırma Bioluminescent Görüntüleme kullanma Streptococcus pneumoniae Bebek Fare ve İnfluenza A Virüsü

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Canlı Hücre Görüntüleme Bacillus subtilis Ve Streptococcus pneumoniae Otomatik Zaman atlamalı Mikroskopi

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

Uzun vadeli Host-patojen Etkileşimleri karakterize EpiAirway Model kullanın.

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Mouse Model: Bulaşıcı Kolit için çalışılması Patojen ve Host Katılımlar

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Streptococcus pneumoniae ile İntranazal Kolonizasyon Sırasında İnflamatuar Yanıtların Karakterizasyonu

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Membran Kutup, Membran Dürüstlük ve Hücre içi İyon Konsantrasyonlarında İzleme değişiklikler<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Floresan boyalar kullanarak

Membrane depolarization and ion fluxes are events that have been studied extensively in biological systems due to their ability to profoundly impact ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Of kapsül Serotipleme<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Kapsül şişme deneyi kullanarak Reaksiyon

There are over 90 different capsular serotypes of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). As well as being a tool for understanding pneumococcal ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Lokal ve sistemik Yer de patojen kaynaklı kronik enflamasyon Fare Modeli

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Kapsüler Serotipleme<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Lateks Aglutinasyon tarafından

Latex agglutination reagents are widely used in microbial diagnosis, identification and serotyping. Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) is a major ...

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

An In Vitro Model for Measuring Immune Responses to Malaria in the Context of HIV Co-infection

Bir<em&gt; İn Vitro</em&gt; HIV Co-enfeksiyon Bağlamında Sıtma için Bağışıklık Yanıtları Ölçüm Modeli

Malaria and HIV co-infection is a growing health priority. However, most research on malaria or HIV currently focuses on each infection individually. ...