Name: extrahepatic bile duct and gall bladder dissection in nine-day-old mouse neonates
Uploaded: 2022-08-23T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Extrahepatic Bile Duct and Gall Bladder Dissection in Nine-Day-Old Mouse Neonates at JoVE.com

يعترف المؤلفون بجوانا هاجنز ، وبولين شوبرت ، وكلارا فيليبي ، والمحاضر الجامعي الدكتور كريستيان توموشات ، وسفينيا وارنك ، والمحاضر الجامعي الدكتورة ديانا ليندنر ، والأستاذ الدكتور ديرك ويسترمان ، وميريام تومزاك ، ونيكول لودر ، ونادين كورزاوا ، والدكتورة لايا باجيرولز رالوي ، وبيرجيت أبل، وماجدالينا تروشيميوك لمساهماتهم. حصل هانز كريستيان شميدت على دعم مالي من منحة Else Kröner-Fresenius-Stiftung iPRIME الدراسية (2021_EKPK.10) ، UKE ، هامبورغ.

بعد الموافقة الأخلاقية (N045 / 2021) ، تمت ملاحظة ذكور وإناث C57BL / 6 فئران حديثي الولادة حتى عمر 9 أيام. ولدت الحيوانات وقدمت لأغراض تجريبية من قبل مرفق الحيوانات في المركز الطبي الجامعي هامبورغ إيبندورف ، هامبورغ ، ألمانيا. تم إيواء حديثي الولادة في قفص مع حيواناتهم الأم. تم التحكم في الظروف البي?...

<ol>
	<li>Liwinski, T., Schramm, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prim&#228;r+sklerosierende+Cholangitis.">Prim&#228;r sklerosierende Cholangitis.</a> Der Internist. 59 (6), 551-559 (2018).</li><li>Kobayashi, H., Stringer, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia.">Biliary atresia.</a> Seminars in Neonatology. 8 (5), 383-391 (2003).</li><li>Patman, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+tract:+Newly+identified+biliatresone+causes+biliary+atresia.">Biliary tract: Newly identified biliatresone causes biliary atresia.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 12 (7), 369 (2015).</li><li>Mack, C. L., Sokol, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unraveling+the+pathogenesis+and+etiology+of+biliary+atresia.">Unraveling the pathogenesis and etiology of biliary atresia.</a> Pediatric Research. 57 (5), 87-94 (2005).</li><li>Karjoo, S., Wells, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+neonatal+extrahepatic+cholangiocytes.">Isolation of neonatal extrahepatic cholangiocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. (88), e51621 (2014).</li><li>Strazzabosco, M., Fabris, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+anatomy+of+normal+bile+ducts.">Functional anatomy of normal bile ducts.</a> The Anatomical Record: Advances in Integrative Anatomy and Evolutionary Biology. 291 (6), 653-660 (2008).</li><li>Nakanuma, Y., Hoso, M., Sanzen, T., Sasaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microstructure+and+development+of+the+normal+and+pathologic+biliary+tract+in+humans,+including+blood+supply.">Microstructure and development of the normal and pathologic biliary tract in humans, including blood supply.</a> Microscopy Research and Technique. 38 (6), 552-570 (1997).</li><li>Banales, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholangiocyte+pathobiology.">Cholangiocyte pathobiology.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 16 (5), 269-281 (2019).</li><li>de Buy Wenniger, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cholangiocyte+glycocalyx+stabilizes+the+'biliary+HCO3-+umbrella':+an+integrated+line+of+defense+against+toxic+bile+acids.">The cholangiocyte glycocalyx stabilizes the 'biliary HCO3- umbrella': an integrated line of defense against toxic bile acids.</a> Digestive Diseases. 33 (3), 397-407 (2015).</li><li>Pinto, C., Giordano, D. M., Maroni, L., Marzioni, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+inflammation+and+proinflammatory+cytokines+in+cholangiocyte+pathophysiology.">Role of inflammation and proinflammatory cytokines in cholangiocyte pathophysiology.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Basis of Disease. 1864 (4), 1270-1278 (2018).</li><li>Khandekar, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinated+development+of+the+mouse+extrahepatic+bile+duct:+Implications+for+neonatal+susceptibility+to+biliary+injury.">Coordinated development of the mouse extrahepatic bile duct: Implications for neonatal susceptibility to biliary injury.</a> Journal of Hepatology. 72 (1), 135-145 (2020).</li><li>Grundmann, D., Klotz, M., Rabe, H., Glanemann, M., Sch&#228;fer, K. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+high-purity+myenteric+plexus+from+adult+human+and+mouse+gastrointestinal+tract.">Isolation of high-purity myenteric plexus from adult human and mouse gastrointestinal tract.</a> Scientific Reports. 5 (1), 9226 (2015).</li><li>Ishii, M., Vroman, B., LaRusso, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+morphologic+characterization+of+bile+duct+epithelial+cells+from+normal+rat+liver.">Isolation and morphologic characterization of bile duct epithelial cells from normal rat liver.</a> Gastroenterology. 97 (5), 1236-1247 (1989).</li><li>Kumar, U., Jordan, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+biliary+epithelial+cells+from+the+biliary+tract+fraction+of+normal+rats.">Isolation and culture of biliary epithelial cells from the biliary tract fraction of normal rats.</a> Liver. 6 (6), 369-378 (1986).</li><li>Vroman, B., LaRusso, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+polarized+primary+cultures+of+rat+intrahepatic+bile+duct+epithelial+cells.">Development and characterization of polarized primary cultures of rat intrahepatic bile duct epithelial cells.</a> Laboratory Investigation. 74 (1), 303-313 (1996).</li><li>Paradis, K., Sharp, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+duct-like+structure+formation+after+isolation+of+bile+ductular+cells+from+a+murine+model.">In vitro duct-like structure formation after isolation of bile ductular cells from a murine model.</a> Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 113 (6), 689-694 (1989).</li></ol>

ذكرت هذه المقالة وناقشت إنشاء والتحقق من صحة نهج جراحي جديد لإزالة EBDS من الفئران حديثي الولادة القتل الرحيم. تكشف النتائج المجهرية والنسيجية أن النهج يكتشف بسرعة EBDs ويشريحها بالقرب من حواف القناة ، حتى في الفئران حديثي الولادة. مطلوب فقط الأدوات الجراحية والمجهر مع تكبير 20x للبروتوكول ال?...

نشأة وتطور اعتلال الأقنية الصفراوية مثل رتق القناة الصفراوية والتهاب الأقنية الصفراوية المصلب الأولي (PSC) والتهاب الأقنية الصفراوية الأولي (PBC) إما غير معروف أو غير مكتمل 1,2. يؤدي الفهم المحدود لأصل هذه الأمراض وتطورها إلى ندرة خيارات العلاج3. أصعب عقبة في دراسة اضطرابات القناة الصفراوية الوليدية هي اكتساب فهم جزيئي للفيزيولوجيا المرضية. أحد المفاتيح الأساسية لفهم أفضل لعلم الأمراض الجزيئي هو أفضل ملاحظة ممكنة للأنسجة المصابة. لتجنب انخفاض قابلية المقارنة والتناقضات بين الأبحاث ، مثل مراقبة المسببات الفيروسية المحتملة لرتق القناة الصفراوية4 ، تنشأ الحاجة إلى أفضل إعداد ممكن ومشاركة تقنيات التشريح التي يتم إجراؤها. يعد التحضير النقي للأنسجة المستهدفة ضروريا لإجراء تحقيقات مجهرية لاحقة أو تربية الثقافات العضوية الخلوية و 3D. ومع ذلك ، في اضطرابات حديثي الولادة الفئران ، تكون عينات الأنسجة نادرة ولا تحدث إلا بكمية صغيرة بسبب صغر حجمها. فيما يتعلق باضطرابات القناة الصفراوية ، تم وصف الصعوبات في التحضير النظيف للقنوات الصفراوية في حديثي الولادة الفئران5. نظرا لمرحلة تطور حديثي الولادة ، فإن تمايز الأنسجة ليس متقدما بشكل مفرط ، مما يعقد التحضير ويزيد من الصعوبة مقارنة بإعداد عينات البالغين. لذلك ، قامت مجموعة العمل التشغيلية بالتحقيق في استراتيجية جديدة لإعداد EBDS في نموذج فأر حديثي الولادة. في هذه الدراسة ، تسمح التقنية بتشريح فعال لكل عينة.
يتم وضع نظام القناة الصفراوية داخل الصفاق في الجزء العلوي الأيمن من البطن ، الناشئة عن الكبد. تقع المرارة تحت السطح الحشوي للفص الأيمن للكبد. القناة الصفراوية ، جنبا إلى جنب مع الوريد البابي والشريان الكبدي ، مضمنة في الرباط الكبدي الاثني عشر. ينضم إلى الكبد والاثني عشر مباشرة ويستنزف السائل الصفراوي في الاثني عشر6. تشريحيا ، تنقسم القناة الصفراوية إلى القنوات الكبدية اليمنى واليسرى ، والقناة الكبدية المشتركة ، والقناة الكيسية ، والقناة الصفراوية ، التي تتشكل من التقاء القناة الكيسية والقناة الكبدية المشتركة7. هذا واحد في نهاية المطاف يفرغ السائل الصفراوي واللعاب من القناة البنكرياسية إلى الاثني عشر عبر أمبولة فاتر.
تبطن الخلايا الصفراوية القناة الصفراوية داخل وخارج الكبد ، وتسكن في مكانة تشريحية معقدة حيث تساعد في إنتاج الصفراء والتوازن8. يمر السائل الصفراوي بهذه الخلايا الطلائية المتخصصة بتركيزات عالية يوميا. على وجه الخصوص ، تعتبر صيانة مظلة HCO3 مهمة جدا للحماية من سمية حمض الصفراء9. الخلايا الصفراوية هي خط الدفاع الأول في نظام الكبد الصفراوي ضد ، على سبيل المثال ، الكائنات الحية الدقيقة اللمعية10. قد تضعف الفعالية الدفاعية للخلايا الصفراوية ضد الاعتداءات السامة بسبب الاستعداد الوراثي. الحمل الزائد السام يسبب الضرر والدمار وبالتالي يمكن أن يؤدي إلى اعتلال القنوات الصفراوية. علاوة على ذلك ، فإن القناة الصفراوية النامية ليست قادرة تماما على جميع آليات الحماية الذاتية ، مما يؤدي إلى زيادة التعرض للسموم البيئية في القنوات الصفراوية الوليدية11.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-Propanol</td>
			<td>CHEMSOLUTE</td>
			<td>11365000</td>
			<td>used as a dehydrating agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G canula</td>
			<td>B Braun/Sterican, Melsungen Germany</td>
			<td>4656300</td>
			<td>canula for hydration of the sample</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Air vent</td>
			<td>C + P M&#246;belsysteme GmbH &#38; Co. KG, Breidenbach, Germany</td>
			<td>Tec-Ononmic AZ 1200</td>
			<td>the use of an air vent helps to avoid inhalation of formalin-containing fixatives</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aqua ad injectabilia Braun</td>
			<td>B Braun, Melsungen, Germany</td>
			<td>2351744</td>
			<td>saline; Container: Mini-Plasco connect, 20 x 10 mL, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bigger microsurgical Forceps</td>
			<td>DIADUST von Aesculap, Trossingen Deutschland</td>
			<td>FD253R</td>
			<td>straight, 180 mm (7&#34;), platform tip, round handle, width: 0,800 mm, diamond dust coated, non-sterile, reusable optional tool for observation and every step of preparation except very final preparation; Dividing skin of the peritoneum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera &#8220;SmartCAM 5&#8221;&#160;</td>
			<td>Basler and Vision Engineering, Send, United Kingdom</td>
			<td>EVC131A</td>
			<td>optional Lynx Exo camera modul: sensortype: CMOS, resolution 2560 x 1920 pixels, sensor size: 1/2&#34;; Used for videoproduction and technical evaluation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydration machine/Citadel 2000 Tissue Processor</td>
			<td>Fisher Scientific GmbH, Schwerte, Germany</td>
			<td>12612613</td>
			<td>used for automatic dehydration, short program (approx. 4.8 h)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydration sponge&#160;</td>
			<td>Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td>TT56.1</td>
			<td>sponge for final dissection step, other sponges/foam pads with a minimum pore size of 60 pores per inch are also suitable, the use of&#160; two foam pads per embedding cassette is recomended to cover the sample from below and above to prevent sliding through the perforation of the embedding cassettes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#180;s Phosphat Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td>Doesn&#180;t contain Calzium or Magnesium, 500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding cassettes</td>
			<td>Engelbrecht GmbH, Ederm&#252;nde, Germany</td>
			<td>17990</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>MEDITE Medical GmbH, Burgdorf, Germany</td>
			<td>41-6660-00</td>
			<td>staining solution, ready to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors CeramaCut</td>
			<td>FST, Heidelberg Germany</td>
			<td>14959-09</td>
			<td>Tips: Sharp-Sharp, Alloy / Material: Ceramic Coated Stainless Steel, Serrated:, Yes; Feature: CeramaCut, Tip Shape: Straight, Cutting Edge: 22 mm, Length: 9 cm; Skin incision, incision of the peritoneal window</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps</td>
			<td>FST, Heidelberg Germany</td>
			<td>11051-10</td>
			<td>Length: 10 cm, Tip Shape: curved, serrated, Tip width: 0.8 mm, Tip Dimensions: 0.8 x 0.7 mm, Alloy /Material: Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>MEDITE Medical GmbH, Burgdorf, Germany</td>
			<td>41-5130-00</td>
			<td>staining solution, ready to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Highresolotion microscope</td>
			<td>Vision Engineering, Send United Kingdom</td>
			<td>EVO503&#160;</td>
			<td>Capable of enlargement up to 60x magnification, only 6x to 20x magnification were used&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus Optical CO, Ltd., Hamburg, Germany</td>
			<td>BX60F5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Cover Glases</td>
			<td>Marienfeld, Lauda-K&#246;nigshofen, Germany</td>
			<td>101244</td>
			<td>60 mm broad, made of SCHOTT D 263 glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>R. Langenbrinck GmbH, Emmendingen, Germany</td>
			<td>03-0060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica, Nu&#223;loch, Germany</td>
			<td>SM2010R</td>
			<td>Tool for sectioning (2 &#181;m-slices)&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Omnifix-F 1 mL syringe</td>
			<td>B Braun, Melsungen, Germany</td>
			<td>9161406V</td>
			<td>syringe without canula</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin</td>
			<td>Sakura Finetec, Torrance, USA</td>
			<td>4511</td>
			<td>Tissue-Tek Paraffin Wax Tek III, without DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin embedding machine</td>
			<td>MEDITE Medical GmbH, Burgdorf, Germany</td>
			<td>TES 99</td>
			<td>The embedding machine used in this study contained the following three individual modules: TES 99.420, TES 99.250, TES 99.600. The sample should be embedded in Paraffin directly after the dehydration, no interim storage in a fridge should be performed due to possible shrinking and moisture in the fridge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Morphisto</td>
			<td>1176201000</td>
			<td>Prepare 1 mL Aliquots in 2 mL Eppendorf conical Tubes for liver samples and 0.5 mL Aliquots in 1 mL Eppendorf conical Tubes for extrahepatic bile duct samples, 4% in PBS ph 7.4&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Microsurgical Forceps&#160;</td>
			<td>EPM (Erich Pfitzer Medizintechnik), B&#252;tthard, Bayern, Germany</td>
			<td>(00)165</td>
			<td>Round handle, straight, 0.3 mm tip, tool for observation and every step of preparation, especially useful in final preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Ruler</td>
			<td>Agntho&#39;s AB, Liding&#246;, Sweden</td>
			<td>30085-15</td>
			<td>150mm With Metric &#38; Inch Graduations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors &#8211; Sharp-blunt for decapitation</td>
			<td>FST, Heidelberg Germany</td>
			<td>14001-14</td>
			<td>Device for decapitation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming cabinet</td>
			<td>Haraeus, Hanau, Germany</td>
			<td>T 6060</td>
			<td>the sliced samples should be kept in the warming cabinet to ensure the attachement of the sample on the microscope slides</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

extrahepatic bile duct and gall bladder dissection in nine-day-old mouse neonates

تم وصف تشريح القنوات الصفراوية لحديثي الولادة في الفئران بأنه صعب. الهدف الرئيسي من إجراء التشغيل القياسي الموصوف هو عزل القناة الصفراوية خارج الكبد (EBD) في حديثي الولادة في الفئران دون الإضرار بالقناة الصفراوية أثناء التحضير. نظرا لإعداده الوثيق بشكل استثنائي مقارنة بخط خلايا الخلايا الصفراوية وحصاد نظام القناة الصفراوية خارج الكبد بأكمله (EBDS) ، فإن النهج الموصوف مفيد للغاية في البحث عن النماذج الحيوانية لاضطرابات القناة الصفراوية لحديثي الولادة ، مثل رتق القناة الصفراوية. بعد القتل الرحيم ، تم الوصول إلى التجويف البريتوني ، وتم استخراج نظام القناة الصفراوية والاثني عشر والكبد باستخدام استئصال En-bloc-Resection الفريد (EbR). يتم وضع العينة المستخرجة على حصيرة رغوية ، ويتم تشريح EBD من الخلايا الملوثة بشكل غير مؤلم دون اللمس اللازم. يعد تشريح EBDS بالكامل ميزة مهمة لهذه الطريقة. يجب توخي الحذر بسبب صغر حجم وكمية أنسجة القناة الصفراوية. باستخدام التقنية الموصوفة ، لا يوجد أي ضرر للخلايا الصفراوية. علاوة على ذلك ، فإن نقاء التقنية قابل للتكرار (n = 10). لذلك ، يمكن حصاد عينات قابلة للمقارنة على النحو الأمثل. علاوة على ذلك ، لا تتضرر أنسجة القناة الصفراوية ، لأنه يمكن تجنب أي اتصال مع نظام القناة الصفراوية أثناء التحضير ، وترك السائل الصفراوي داخل المرارة. الأهم من ذلك ، أثناء إجراء تشريح المرارة والقناة الصفراوية النهائي ، تم استخدام الأدوات الدقيقة غير الرضحية فقط بشكل جانبي قليلا من القناة الصفراوية دون الضغط عليها. هذا هو المفتاح لعينة نظيفة وسليمة ، وضروري لمزيد من التحقيق النسيجي أو عزل الخلايا الصفراوية. للتلخيص ، تمكن تقنية التشريح المبتكرة الموصوفة المشغلين عديمي الخبرة بشكل خاص من المعدات اللازمة لعزل EBDS بشكل نظيف قدر الإمكان.

يوضح الشكل 1A EBDS لحديث الولادة الفئران ، والذي تم تشريحه باستخدام التقنية الموصوفة. مجهريا ، لا يوجد مزيد من الأنسجة الكبدية مرئية. تمت إزالة الأنسجة الكبدية خلال خطوات العزل النهائية للبروتوكول ويمكن تمييزها بسهولة عن أنسجة القناة الصفراوية فيما يتعلق باللون والاتساق. يع...

Watch this Scientific Journal Video about Extrahepatic Bile Duct and Gall Bladder Dissection in Nine-Day-Old Mouse Neonates at JoVE.com

Extrahepatic Bile Duct and Gall Bladder Dissection in Nine-Day-Old Mouse Neonates

لمراقبة اضطرابات القناة الصفراوية الوليدية للفئران ، يلزم وجود قناة صفراوية سليمة وإعداد فعال. لذلك ، تم تطوير نهج جديد لعزل نظام القناة الصفراوية خارج الكبد بالكامل في حديثي الولادة الفئران بنجاح مع الحفاظ على سلامة القناة الصفراوية.

القناة الصفراوية خارج الكبد وتسلخ المرارة في حديثي الولادة في الفأر البالغ من العمر تسعة أيام

The dissection of murine neonatal bile ducts has been described as difficult. The main aim of the described standard operating procedure is the isolation ...

أفادت العديد من التقارير التي تقيم النظام الصفراوي خارج الكبد أنهم حصلوا على العينات ولكن ليس كيف حصلوا عليها ، مما أثار قضايا تتعلق بالمقارنة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنه يمكن تشريح الجهاز الصفراوي خارج الكبد بأكمله ويمكن إزالة الخلايا الملوثة بشكل غير مؤلم. يمكن تطبيق بروتوكول التشريح الخاص بنا بشكل عام على الأساليب التجريبية التي تعمل على اضطرابات القناة الصفراوية الوليدية للفئران ، بهدف تشريح الجهاز الصفراوي خارج الكبد.قد تكون بعض ميزات البروتوكول ، على سبيل المثال ، ترك المعدة متصلة بالاثني عشر ، مفيدة في البحث عن رتق الاثني عشر للسماح بالتوجيه الصحيح للحليب المهضوم جزئيا الذي تعبر عنه المعدة. في البداية ، قد تتطلب التقنية بعض الوقت للتدريب. ستؤدي ممارسة واتباع النهج التدريجي إلى زيادة السرعة والنتيجة.للبدء ، ضع الأدوات المطهرة والمعقمة على سطح معقم بجوار طاولة العمليات. بعد إجراء قطع في الصفاق ، قم بتوسيع القطع إلى موقع قطع الرأس ، باتباع الخط الإبطي الأمامي الأيسر. إزالة الجلد من اليسار إلى الجانب الأيمن مع ملقط غير مؤلم.تحت المجهر ، أمسك الصفاق المحيط بالطحال. ارفعه برفق حتى يشبه الصفاق هيكلا يشبه الخيمة ، واقطع ثقبا بحجم ملليمتر واحد في الوسط. انتظر حتى تمتلئ الخيمة البريتونية بالهواء.قطع الصفاق في نافذة مؤطرة من الأضلاع السفلية ، كل من مناطق البطن الجانبية ، ومنطقة المثانة السفلية. ضمان الوصول الكامل إلى الكبد ونظام القناة الصفراوية والمعدة والأمعاء الدقيقة والقولون. فحص المرارة والقنوات الصفراوية عن طريق سحب عملية الخنجري بعناية في وضع بطني الجمجمة.تجنب تمزق الرباط المنجلي الذي يمكن أن يؤدي إلى تمزق المرارة من نظام القناة الصفراوية. ثم حرر سحب عملية الخنجري. اسحب الاثني عشر برفق لتحرير نظام القناة الصفراوية.بعد ذلك ، قم بإجراء تعبئة En-bloc السفلية عن طريق تحديد حليمة الاثني عشر ، التي تربط نظام القناة الصفراوية بالاثني عشر. قطع من خلال الاثني عشر حوالي سنتيمترين إلى الجانب الجانبي الأيمن من الحليمة. ثم ، قطع من خلال منطقة البواب.تأكد من وجود محتويات المعدة في منطقة البواب بين موقع القطع وحليمة الاثني عشر. لأداء تعبئة En-bloc العلوية ، اسحب عملية الخنجري برفق واحصل على إمكانية الوصول إلى الرباط المنجلي. قم بعمل قطع سنتيمتر واحد من خلال الرباط المنجلي بين المرارة وعلى مقربة من عملية الخنجري.قطع الهياكل التي تربط بين الكبد والصدر ، مثل المريء ، والوريد الأجوف السفلي ، والشريان الأورطي الصدري ، وجميع الأربطة التي تحيط بالمنطقة العارية من الكبد. أيضا ، قطع جميع وصلات الأنسجة المتبقية ظهريا. تحت التكبير المجهري 20 مرة ، ضع عينة En-bloc على وسادة رغوية.قم بتجميع العينة عن طريق إعادة تنظيمها في الموضع التشريحي الصحيح. باستخدام حركة لطيفة ، قم بتسطيح الجزء الفموي والفموي من الاثني عشر. باستخدام ملقط غير رضحي ، ابدأ حركة التسطيح في حليمة الاثني عشر واستمر في حواف القطع.ثم ، قم بتنعيم محتويات اللب الأبيض للمعدة في الجزء الفموي من الاثني عشر. تحديد الجزء الفموي والجزء الفموي من الاثني عشر لاستبعاد دوران القناة الصفراوية المحتمل. قطع بقايا كبيرة من الأنسجة الكبدية قبل تشريح القناة الصفراوية.بعد بضع حركات كشط ، انقل العينة إلى وضع أنظف على حصيرة الرغوة. استخدم أنسجة الكبد الأقل ضغطا في الخلفية لتحسين عرض التمايز بين EBDS والخلايا غير المرغوب فيها. قم بمعالجة الرباط الكبدي الاثني عشر حتى يبقى EBDS المعزول.راقب الشريان الكبدي والوريد البابي الناشئين كخيوط بيضاء وحساسة للغاية ، على بعد حوالي ثلاثة إلى خمسة ملليمترات عن طريق الفم من حليمة الاثني عشر. بعناية ، قم بإزالة هذا الخيط الرقيق باستخدام سحب لطيف إلى الجانب الجانبي الأيسر. تأكد من أن حركات الكشط تبدأ من نظام القناة الصفراوية وتؤدي إلى حدود الكبد.باستخدام هذا البروتوكول ، تم تشريح EBDS من حديثي الولادة الفئران البالغة من العمر تسعة أيام. كان طول EBDS المعزول من المرارة إلى حليمة الاثني عشر أقل من 10 ملليمترات ، وتراوح قطر القناة الصفراوية الحساسة من 0.05 إلى 0.2 ملم. تم إجراء تلطيخ الهيماتوكسيلين يوزين على القسم الطولي من EBDS مع تجويف مفتوح.تم تحديد الخلايا الصفراوية المحيطة بالتجويف كطبقة أحادية وكانت مصبوغة باللون الداكن. يجب على الباحثين مشاركة وتوحيد تقنيات التشغيل مثل بروتوكولات التشريح والحقن لتحسين قابلية المقارنة وسهولة الاستخدام السريع لدراساتهم ونتائجهم. سيكون التشريح السابق مفيدا للنهج النسيجية والخلية الواحدة ، مثل عزل الخلايا الصفراوية داخل وخارج شبه النهر ، لأنه يؤدي إلى الحد من تلوث ثقافة الخلية.

Research

JoVE Journal

Medicine

Mouse Bladder Wall Injection

حقن المثانة الماوس الجدار

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. ...

Cannulation of the Mouse Submandibular Salivary Gland via the Wharton's Duct

إقناء ؛ إدخال القنية من الغدة اللعابية تحت الفك السفلي الماوس عبر مجاري الهواء في وارتون

Severe salivary gland hypofunction is frequently found in patients with Sj&ouml;gren's syndrome and those who receiving therapeutic 
irradiation in their ...

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

الأبعاد 3-صب الراتنج والتصوير من الوريد البابي داخل الكبد أو ماوس نظام القناة الصفراوية

In  organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is  indispensable for proper physiological function, and the formation and  ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

الردود المثانة البولية انتفاخ مستدعى الحشوي الحركي نموذجا لألم المثانة في الفئران

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

State of the Art Cranial Ultrasound Imaging in Neonates

حالة من الفن الجمجمة التصوير بالموجات فوق الصوتية في حديثي الولادة

Cranial ultrasound (CUS) is a reputable tool for brain imaging in critically ill neonates. It is safe, relatively cheap and easy to use, even when a ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

القناة الصفراوية ربط في الفئران: تحريض التهاب الكبد والتليف الإصابات التي كتبها الانسدادي ركود صفراوي

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Surgical Injury to the Mouse Pancreas through Ligation of the Pancreatic Duct as a Model for Endocrine and Exocrine Reprogramming and Proliferation

الإصابات الجراحية للماوس البنكرياس من خلال من ربط والبنكرياس القناة نموذجا للالغدد الصماء وخارجية الإفراز إعادة برمجة وانتشار

Expansion of pancreatic beta cells in vivo or ex vivo, or generation of beta cells by differentiation from an embryonic or adult stem cell, can provide ...

Transcutaneous Microcirculatory Imaging in Preterm Neonates

عبر الجلد الأوعية الدقيقة التصوير في الخدج حديثي الولادة

Microcirculatory imaging (MI) is a relatively new research tool mainly used in the intensive care setting. MI provides a clear view of the smallest ...

Isolation and Profiling of MicroRNA-containing Exosomes from Human Bile

العزلة ومن التنميط Exosomes من الصفراء الإنسان التي تحتوي على الرنا الميكروي

Exosome research in the last three years has greatly extended the scope towards identification and characterization of biomarkers and their therapeutic ...