Name: extrahepatic bile duct and gall bladder dissection in nine-day-old mouse neonates
Uploaded: 2022-08-23T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Extrahepatic Bile Duct and Gall Bladder Dissection in Nine-Day-Old Mouse Neonates at JoVE.com

Forfatterne anerkjenner Johanna Hagens, Pauline Schuppert, Clara Philippi, PD Dr. med Christian Tomuschat, Svenja Warnke, PD Dr. Diana Lindner, Prof. Dr. Dirk Westermann, Miriam Tomczak, Nicole Lüder, Nadine Kurzawa, Dr. rer nat. Laia Pagerols Raluy, Birgit Appl og Magdalena Trochimiuk for deres bidrag. Hans Christian Schmidt ble økonomisk støttet av Else Kröner-Fresenius-Stiftung iPRIME Scholarship (2021_EKPK.10), UKE, Hamburg.

Etter etisk godkjenning (N045/2021) ble hann- og hunnmus C57BL/6-mus observert til de var 9 dager gamle. Dyrene ble født og gitt til eksperimentelle formål av dyreanlegget ved University Medical Center Hamburg-Eppendorf, Hamburg, Tyskland. De nyfødte ble plassert i et bur sammen med sine foreldredyr. Miljøforholdene ble kontrollert i temperatur (20-24 ° C), 12:12 timers lys-mørk syklus og relativ fuktighet på 40% -70%.
1. Eksperimentell forberedelse
<ol><li>Forbered d...

<ol>
	<li>Liwinski, T., Schramm, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prim&#228;r+sklerosierende+Cholangitis.">Prim&#228;r sklerosierende Cholangitis.</a> Der Internist. 59 (6), 551-559 (2018).</li><li>Kobayashi, H., Stringer, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia.">Biliary atresia.</a> Seminars in Neonatology. 8 (5), 383-391 (2003).</li><li>Patman, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+tract:+Newly+identified+biliatresone+causes+biliary+atresia.">Biliary tract: Newly identified biliatresone causes biliary atresia.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 12 (7), 369 (2015).</li><li>Mack, C. L., Sokol, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unraveling+the+pathogenesis+and+etiology+of+biliary+atresia.">Unraveling the pathogenesis and etiology of biliary atresia.</a> Pediatric Research. 57 (5), 87-94 (2005).</li><li>Karjoo, S., Wells, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+neonatal+extrahepatic+cholangiocytes.">Isolation of neonatal extrahepatic cholangiocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. (88), e51621 (2014).</li><li>Strazzabosco, M., Fabris, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+anatomy+of+normal+bile+ducts.">Functional anatomy of normal bile ducts.</a> The Anatomical Record: Advances in Integrative Anatomy and Evolutionary Biology. 291 (6), 653-660 (2008).</li><li>Nakanuma, Y., Hoso, M., Sanzen, T., Sasaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microstructure+and+development+of+the+normal+and+pathologic+biliary+tract+in+humans,+including+blood+supply.">Microstructure and development of the normal and pathologic biliary tract in humans, including blood supply.</a> Microscopy Research and Technique. 38 (6), 552-570 (1997).</li><li>Banales, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholangiocyte+pathobiology.">Cholangiocyte pathobiology.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 16 (5), 269-281 (2019).</li><li>de Buy Wenniger, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cholangiocyte+glycocalyx+stabilizes+the+'biliary+HCO3-+umbrella':+an+integrated+line+of+defense+against+toxic+bile+acids.">The cholangiocyte glycocalyx stabilizes the 'biliary HCO3- umbrella': an integrated line of defense against toxic bile acids.</a> Digestive Diseases. 33 (3), 397-407 (2015).</li><li>Pinto, C., Giordano, D. M., Maroni, L., Marzioni, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+inflammation+and+proinflammatory+cytokines+in+cholangiocyte+pathophysiology.">Role of inflammation and proinflammatory cytokines in cholangiocyte pathophysiology.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Basis of Disease. 1864 (4), 1270-1278 (2018).</li><li>Khandekar, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinated+development+of+the+mouse+extrahepatic+bile+duct:+Implications+for+neonatal+susceptibility+to+biliary+injury.">Coordinated development of the mouse extrahepatic bile duct: Implications for neonatal susceptibility to biliary injury.</a> Journal of Hepatology. 72 (1), 135-145 (2020).</li><li>Grundmann, D., Klotz, M., Rabe, H., Glanemann, M., Sch&#228;fer, K. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+high-purity+myenteric+plexus+from+adult+human+and+mouse+gastrointestinal+tract.">Isolation of high-purity myenteric plexus from adult human and mouse gastrointestinal tract.</a> Scientific Reports. 5 (1), 9226 (2015).</li><li>Ishii, M., Vroman, B., LaRusso, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+morphologic+characterization+of+bile+duct+epithelial+cells+from+normal+rat+liver.">Isolation and morphologic characterization of bile duct epithelial cells from normal rat liver.</a> Gastroenterology. 97 (5), 1236-1247 (1989).</li><li>Kumar, U., Jordan, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+biliary+epithelial+cells+from+the+biliary+tract+fraction+of+normal+rats.">Isolation and culture of biliary epithelial cells from the biliary tract fraction of normal rats.</a> Liver. 6 (6), 369-378 (1986).</li><li>Vroman, B., LaRusso, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+polarized+primary+cultures+of+rat+intrahepatic+bile+duct+epithelial+cells.">Development and characterization of polarized primary cultures of rat intrahepatic bile duct epithelial cells.</a> Laboratory Investigation. 74 (1), 303-313 (1996).</li><li>Paradis, K., Sharp, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+duct-like+structure+formation+after+isolation+of+bile+ductular+cells+from+a+murine+model.">In vitro duct-like structure formation after isolation of bile ductular cells from a murine model.</a> Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 113 (6), 689-694 (1989).</li></ol>

Denne artikkelen rapporterte og diskuterte opprettelsen og valideringen av en ny kirurgisk tilnærming for å fjerne EBDS av euthaniserte neonatale mus. Mikroskopiske og histologiske funn avslører at tilnærmingen raskt oppdager EBD og dissekerer dem nær kanalens marginer, selv hos nyfødte mus. Bare kirurgiske instrumenter og et mikroskop med 20x forstørrelse er nødvendig for den beskrevne protokollen. Videre tillater tilnærmingen isolering av hele EBDS. Teknikken er svært effektiv, grei og enkel å replikere....

Opprinnelsen og progresjonen av kolangiopatier som biliær atresi, primær skleroserende kolangitt (PSC) og primær biliær kolangitt (PBC) er enten ukjent eller ufullstendig 1,2. Den begrensede forståelsen av opprinnelsen og progresjonen av disse sykdommene fører til mangel på behandlingsalternativer3. Det vanskeligste hinderet for å studere neonatale gallegangsforstyrrelser er å få en molekylær forståelse av patofysiologien. En av de viktigste nøklene til en bedre forståelse av molekylær patologi er best mulig observasjon av berørt vev. For å unngå redusert sammenlignbarhet og avvik mellom forskning, for eksempel å observere potensiell viral etiologi av biliær atresi4, oppstår behovet for best mulig forberedelse og deling av de utførte disseksjonsteknikkene. En ren fremstilling av målvevet er nødvendig for senere mikroskopiske undersøkelser eller avl av celle- og 3D-organoidkulturer. Men i murine neonatale lidelser er vevsprøver sjeldne og forekommer bare i liten mengde på grunn av den svært små størrelsen. Når det gjelder gallegangsforstyrrelser, er det beskrevet vanskeligheter med rent preparat av gallekanaler hos murine nyfødte5. På grunn av det neonatale utviklingsstadiet er vevsdifferensiering ikke altfor avansert, noe som kompliserer forberedelsen og øker vanskeligheten sammenlignet med utarbeidelsen av voksenprøver. Derfor undersøkte operasjonsarbeidsgruppen en ny strategi for å forberede EBDS i en neonatal musemodell. I denne studien tillater teknikken en effektivdisseksjon av hver prøve.
Gallekanalsystemet er intraperitonealt plassert i høyre øvre del av magen, som oppstår fra leveren. Galleblæren ligger under den viscerale overflaten av leverens høyre lobe. Gallekanalen, sammen med portalvenen og leverarterien, er innebygd i hepatoduodenal ligament. Den forbinder leveren og tolvfingertarmen direkte og drenerer gallevæske inn i tolvfingertarmen6. Anatomisk er gallekanalen delt inn i høyre og venstre leverkanaler, den vanlige leverkanalen, den cystiske kanalen og Ductus choledochus, som dannes ved sammenløpet av den cystiske kanalen og den vanlige leverkanalen7. Denne tømmer til slutt gallevæske og spytt fra bukspyttkjertelen inn i tolvfingertarmen via Ampulla of Vater.
Kolangiocytter strekker gallekanalen intra- og ekstrahepatisk, og bor i en komplisert anatomisk nisje hvor de bistår i galleproduksjon og homeostase8. Gallevæske passerer disse spesialiserte epitelceller i høye konsentrasjoner daglig. Spesielt er HCO3-paraplyvedlikeholdet svært viktig for å beskytte mot gallesyretoksisitet9. Kolangiocytter er den første forsvarslinjen i hepatobiliærsystemet mot for eksempel luminale mikroorganismer10. Kolangiocyttenes forsvarseffekt mot toksiske overgrep kan svekkes av genetisk disposisjon. En giftig overbelastning forårsaker skade og ødeleggelse og kan derfor føre til kolangiopatier. Videre er den utviklende gallekanalen ikke helt i stand til alle selvbeskyttende mekanismer, noe som fører til høyere følsomhet for miljøgifter i neonatale gallekanaler11.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-Propanol</td>
			<td>CHEMSOLUTE</td>
			<td>11365000</td>
			<td>used as a dehydrating agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G canula</td>
			<td>B Braun/Sterican, Melsungen Germany</td>
			<td>4656300</td>
			<td>canula for hydration of the sample</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Air vent</td>
			<td>C + P M&#246;belsysteme GmbH &#38; Co. KG, Breidenbach, Germany</td>
			<td>Tec-Ononmic AZ 1200</td>
			<td>the use of an air vent helps to avoid inhalation of formalin-containing fixatives</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aqua ad injectabilia Braun</td>
			<td>B Braun, Melsungen, Germany</td>
			<td>2351744</td>
			<td>saline; Container: Mini-Plasco connect, 20 x 10 mL, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bigger microsurgical Forceps</td>
			<td>DIADUST von Aesculap, Trossingen Deutschland</td>
			<td>FD253R</td>
			<td>straight, 180 mm (7&#34;), platform tip, round handle, width: 0,800 mm, diamond dust coated, non-sterile, reusable optional tool for observation and every step of preparation except very final preparation; Dividing skin of the peritoneum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera &#8220;SmartCAM 5&#8221;&#160;</td>
			<td>Basler and Vision Engineering, Send, United Kingdom</td>
			<td>EVC131A</td>
			<td>optional Lynx Exo camera modul: sensortype: CMOS, resolution 2560 x 1920 pixels, sensor size: 1/2&#34;; Used for videoproduction and technical evaluation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydration machine/Citadel 2000 Tissue Processor</td>
			<td>Fisher Scientific GmbH, Schwerte, Germany</td>
			<td>12612613</td>
			<td>used for automatic dehydration, short program (approx. 4.8 h)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydration sponge&#160;</td>
			<td>Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td>TT56.1</td>
			<td>sponge for final dissection step, other sponges/foam pads with a minimum pore size of 60 pores per inch are also suitable, the use of&#160; two foam pads per embedding cassette is recomended to cover the sample from below and above to prevent sliding through the perforation of the embedding cassettes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#180;s Phosphat Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td>Doesn&#180;t contain Calzium or Magnesium, 500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding cassettes</td>
			<td>Engelbrecht GmbH, Ederm&#252;nde, Germany</td>
			<td>17990</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>MEDITE Medical GmbH, Burgdorf, Germany</td>
			<td>41-6660-00</td>
			<td>staining solution, ready to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors CeramaCut</td>
			<td>FST, Heidelberg Germany</td>
			<td>14959-09</td>
			<td>Tips: Sharp-Sharp, Alloy / Material: Ceramic Coated Stainless Steel, Serrated:, Yes; Feature: CeramaCut, Tip Shape: Straight, Cutting Edge: 22 mm, Length: 9 cm; Skin incision, incision of the peritoneal window</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps</td>
			<td>FST, Heidelberg Germany</td>
			<td>11051-10</td>
			<td>Length: 10 cm, Tip Shape: curved, serrated, Tip width: 0.8 mm, Tip Dimensions: 0.8 x 0.7 mm, Alloy /Material: Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>MEDITE Medical GmbH, Burgdorf, Germany</td>
			<td>41-5130-00</td>
			<td>staining solution, ready to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Highresolotion microscope</td>
			<td>Vision Engineering, Send United Kingdom</td>
			<td>EVO503&#160;</td>
			<td>Capable of enlargement up to 60x magnification, only 6x to 20x magnification were used&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus Optical CO, Ltd., Hamburg, Germany</td>
			<td>BX60F5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Cover Glases</td>
			<td>Marienfeld, Lauda-K&#246;nigshofen, Germany</td>
			<td>101244</td>
			<td>60 mm broad, made of SCHOTT D 263 glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>R. Langenbrinck GmbH, Emmendingen, Germany</td>
			<td>03-0060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica, Nu&#223;loch, Germany</td>
			<td>SM2010R</td>
			<td>Tool for sectioning (2 &#181;m-slices)&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Omnifix-F 1 mL syringe</td>
			<td>B Braun, Melsungen, Germany</td>
			<td>9161406V</td>
			<td>syringe without canula</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin</td>
			<td>Sakura Finetec, Torrance, USA</td>
			<td>4511</td>
			<td>Tissue-Tek Paraffin Wax Tek III, without DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin embedding machine</td>
			<td>MEDITE Medical GmbH, Burgdorf, Germany</td>
			<td>TES 99</td>
			<td>The embedding machine used in this study contained the following three individual modules: TES 99.420, TES 99.250, TES 99.600. The sample should be embedded in Paraffin directly after the dehydration, no interim storage in a fridge should be performed due to possible shrinking and moisture in the fridge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Morphisto</td>
			<td>1176201000</td>
			<td>Prepare 1 mL Aliquots in 2 mL Eppendorf conical Tubes for liver samples and 0.5 mL Aliquots in 1 mL Eppendorf conical Tubes for extrahepatic bile duct samples, 4% in PBS ph 7.4&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Microsurgical Forceps&#160;</td>
			<td>EPM (Erich Pfitzer Medizintechnik), B&#252;tthard, Bayern, Germany</td>
			<td>(00)165</td>
			<td>Round handle, straight, 0.3 mm tip, tool for observation and every step of preparation, especially useful in final preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Ruler</td>
			<td>Agntho&#39;s AB, Liding&#246;, Sweden</td>
			<td>30085-15</td>
			<td>150mm With Metric &#38; Inch Graduations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors &#8211; Sharp-blunt for decapitation</td>
			<td>FST, Heidelberg Germany</td>
			<td>14001-14</td>
			<td>Device for decapitation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming cabinet</td>
			<td>Haraeus, Hanau, Germany</td>
			<td>T 6060</td>
			<td>the sliced samples should be kept in the warming cabinet to ensure the attachement of the sample on the microscope slides</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

extrahepatic bile duct and gall bladder dissection in nine-day-old mouse neonates

Disseksjonen av murine neonatale gallekanaler har blitt beskrevet som vanskelig. Hovedmålet med den beskrevne standard operasjonsprosedyren er isolering av den ekstrahepatiske gallekanalen (EBD) hos musenyfødte uten å skade gallekanalen under tilberedning. På grunn av sin eksepsjonelt tette forberedelse sammenlignet med kolangiocyttcellelinjen og høsting av hele ekstrahepatisk gallekanalsystem (EBDS), er den beskrevne tilnærmingen ekstremt nyttig ved forskning på dyremodeller av nyfødte gallekanalforstyrrelser, som galde atresi. Etter eutanasi ble bukhulen tilgjengelig, og gallekanalsystemet, tolvfingertarmen og leveren ble ekstrahert med den unike En-bloc-Resection (EbR). Den ekstraherte prøven plasseres på en skummatte, og EBD dissekeres fra forurensende celler atraumatisk uten nødvendig berøring. Disseksjonen av hele EBDS er en betydelig fordel ved denne metoden. Forsiktighet må utvises på grunn av den lille størrelsen og mengden gallekanalvev. Ved hjelp av den beskrevne teknikken er det ingen skade på kolangiocytter. Videre er renheten av teknikken reproduserbar (n = 10). Derfor kan optimalt sammenlignbare prøver høstes. Videre er ingen gallekanalvev skadet, fordi enhver kontakt med gallekanalsystemet kan unngås under tilberedning, og etterlater gallevæsken inne i galleblæren. Viktigst, mens du utfører den endelige galleblæren og gallegangsdisseksjonen, ble atraumatiske mikroinstrumenter bare brukt litt lateral av gallekanalen uten å klemme den. Dette er nøkkelen til en ren og intakt prøve, og avgjørende for videre histologisk undersøkelse eller isolering av kolangiocytter. For å oppsummere, gjør den beskrevne innovative disseksjonsteknikken det mulig for spesielt uerfarne operatører med nødvendig utstyr å isolere EBDS så rent som mulig.

Figur 1A viser EBDS hos en murine nyfødt, som ble dissekert med den beskrevne teknikken. Mikroskopisk er ikke ytterligere levervev synlig. Levervevet er fjernet i løpet av de siste isolasjonstrinnene i protokollen og kan lett skilles fra gallegangsvev med hensyn til farge og konsistens. Figur 1B viser den isolerte prøven sammenlignet med en millimeterskala. EBDs lengde (målt fra galleblære til duodenal papilla) er mindre enn 10 mm. Diameteren på den meget ...

Watch this Scientific Journal Video about Extrahepatic Bile Duct and Gall Bladder Dissection in Nine-Day-Old Mouse Neonates at JoVE.com

Extrahepatic Bile Duct and Gall Bladder Dissection in Nine-Day-Old Mouse Neonates

For observasjon av murine neonatale gallekanalforstyrrelser, er det nødvendig med en intakt gallekanal og effektiv forberedelse. Derfor ble en ny tilnærming for å isolere hele det ekstrahepatiske gallekanalsystemet i murine nyfødte vellykket utviklet samtidig som gallekanalens integritet ble opprettholdt.

Ekstrahepatisk gallegang og galleblæredisseksjon hos ni dager gamle mus nyfødte

The dissection of murine neonatal bile ducts has been described as difficult. The main aim of the described standard operating procedure is the isolation ...

Mange rapporter som vurderte det ekstrahepatiske gallesystemet, rapporterte at de fikk prøvene, men ikke hvordan de fikk dem, noe som reiste spørsmål om sammenlignbarhet. Den største fordelen med denne teknikken er at hele det ekstrahepatiske galdesystemet kan dissekeres og forurensende celler kan fjernes atraumatisk. Vår disseksjonsprotokoll kan generelt brukes på eksperimentelle tilnærminger som arbeider med murine neonatale gallekanalforstyrrelser, med sikte på disseksjon av det ekstrahepatiske galdesystemet.Noen funksjoner i protokollen, for eksempel å forlate magen festet til tolvfingertarmen, kan være nyttig i forskning av duodenal atresi for å tillate riktig orientering av delvis fordøyd melk uttrykt av magen. I begynnelsen kan teknikken kreve litt tid til trening. Å øve og følge trinnvis tilnærming vil øke hastigheten og resultatet.For å begynne, plasser de desinfiserte og autoklaverte instrumentene på en steril overflate ved siden av operasjonsbordet. Etter å ha kuttet i bukhinnen, utvider du kuttet til stedet for halshuggingen, etter venstre frontale aksillære linje. Fjern huden fra venstre til høyre side med atraumatisk tang.Under et mikroskop, hold bukhinnen rundt milten. Løft den forsiktig opp til bukhinnen ligner en teltlignende struktur, og kutt et en millimeter hull i midten. Vent til bukteltet er fylt med luft.Klipp av bukhinnen i et vindu innrammet av de nedre ribbeina, begge laterale bukregioner og det nedre blæreområdet. Sørg for full tilgang til leveren, gallegangssystemet, magen, tynntarmen og tykktarmen. Undersøk galleblæren og gallekanalene ved å trekke xiphoidprosessen forsiktig i en kranial ventral stilling.Unngå å rive av falciform ligament som kan føre til rive av galleblæren fra gallekanalsystemet. Slipp deretter trekket av xiphoid-prosessen. Trekk forsiktig ned tolvfingertarmen for å frigjøre gallekanalsystemet.Utfør deretter den nedre En-bloc-mobiliseringen ved å identifisere duodenal papilla, som forbinder gallekanalsystemet til tolvfingertarmen. Skjær gjennom tolvfingertarmen omtrent to centimeter til høyre sideside av papillen. Skjær deretter gjennom pylorisk område.Sørg for at innholdet i magen er tilstede i pylorisk område mellom skjærestedet og duodenal papilla. For å utføre den øvre En-bloc-mobiliseringen, trekk forsiktig xiphoidprosessen og få tilgang til falciform ligament. Lag en centimeter kutt gjennom falciform ligament mellom galleblæren og nær xiphoidprosessen.Skjær gjennom forbindelsesstrukturene mellom leveren og thoraxen, som spiserøret, dårligere vena cava, thorax aorta og alle leddbånd som omgir det nakne området av leveren. Kutt også alle dorsalt gjenværende vevforbindelser. Under 20 ganger mikroskopisk forstørrelse, plasser En-bloc-prøven på en skumpute.Monter prøven ved å omorganisere den i riktig anatomisk posisjon. Bruk forsiktig bevegelse, flat den orale og aborale delen av tolvfingertarmen. Bruk atraumatisk tang, start flattningsbevegelsen ved duodenal papilla og fortsett til kantene.Deretter glatter du ut det hvite masseinnholdet i magen i den orale delen av tolvfingertarmen. Identifiser den orale og aborale delen av tolvfingertarmen for å utelukke sannsynlig gallekanalrotasjon. Klipp bort store rester av levervev før du dissekerer galdekanalen.Etter noen skrapebevegelser, overfør prøven til en renere posisjon på skummatten. Bruk det mindre pressede levervevet i bakgrunnen for å optimalisere visningen for differensiering mellom EBDS og uønskede celler. Behandle hepatoduodenal ligament til den isolerte EBDS forblir.Vær oppmerksom på leverarterien og portalvenen som oppstår som hvitt og veldig delikat filament, omtrent tre til fem millimeter oralt utenfor duodenal papilla. Fjern forsiktig dette delikate filamentet med et forsiktig trekk til venstre side. Sørg for at skrapebevegelsene starter fra gallekanalsystemet og fører til levergrensene.Ved hjelp av denne protokollen ble EBDS dissekert fra ni dager gamle murine nyfødte. Lengden på den isolerte EBDS fra galleblæren til duodenal papilla var mindre enn 10 millimeter, og diameteren på den delikate ductus choledochus varierte fra 0, 05 til 0, 2 millimeter. Hematoksylineosinfarging ble utført på den langsgående delen av EBDS med et åpent lumen.Kolangiocyttene ble identifisert rundt lumen som et monolag og ble farget mørkere. Forskere bør dele og standardisere driftsteknikker som disseksjons- og injeksjonsprotokoller for å forbedre sammenlignbarheten og rask brukbarhet av studiene og resultatene. Foregående disseksjon vil være fordelaktig for histologiske og encellede tilnærminger, for eksempel isolering av intra- og ekstraperi-kolangiocytter, fordi det resulterer i reduksjon av cellekulturforurensning.

Research

JoVE Journal

Medicine

Mouse Bladder Wall Injection

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. ...

Cannulation of the Mouse Submandibular Salivary Gland via the Wharton's Duct

Severe salivary gland hypofunction is frequently found in patients with Sj&ouml;gren's syndrome and those who receiving therapeutic 
irradiation in their ...

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

3-dimensjonale Resin Casting og bildebehandling av Mouse Portal Vein eller intrahepatiske kanalsystem

In  organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is  indispensable for proper physiological function, and the formation and  ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

Urinblæren Stinnhet fremkalt Visceromotor Responses som en modell for blære Smerter i Mus

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

State of the Art Cranial Ultrasound Imaging in Neonates

State of the Art Cranial ultralydsavbilding i Nyfødte

Cranial ultrasound (CUS) is a reputable tool for brain imaging in critically ill neonates. It is safe, relatively cheap and easy to use, even when a ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

Gallegang Ligation i Mus: Induksjon av inflammatorisk Leverskade og fibrose av obstruktiv Kolestase

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Surgical Injury to the Mouse Pancreas through Ligation of the Pancreatic Duct as a Model for Endocrine and Exocrine Reprogramming and Proliferation

Kirurgisk Skade på Mouse Pancreas gjennom Ligering av bukspyttkjertelen duct som en modell for Endocrine og Exocrine Omprogrammering og spredning

Expansion of pancreatic beta cells in vivo or ex vivo, or generation of beta cells by differentiation from an embryonic or adult stem cell, can provide ...

Transcutaneous Microcirculatory Imaging in Preterm Neonates

Transkutan microcirculatory Imaging in Premature Nyfødte

Microcirculatory imaging (MI) is a relatively new research tool mainly used in the intensive care setting. MI provides a clear view of the smallest ...

Isolation and Profiling of MicroRNA-containing Exosomes from Human Bile

Isolasjon og profilering av mikroRNA holdig Exosomes fra Menneskelig Bile

Exosome research in the last three years has greatly extended the scope towards identification and characterization of biomarkers and their therapeutic ...