Name: extrahepatic bile duct and gall bladder dissection in nine-day-old mouse neonates
Uploaded: 2022-08-23T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Extrahepatic Bile Duct and Gall Bladder Dissection in Nine-Day-Old Mouse Neonates at JoVE.com

Författarna erkänner Johanna Hagens, Pauline Schuppert, Clara Philippi, PD Dr. med Christian Tomuschat, Svenja Warnke, PD Dr. Diana Lindner, Prof. Dr. Dirk Westermann, Miriam Tomczak, Nicole Lüder, Nadine Kurzawa, Dr. rer nat. Laia Pagerols Raluy, Birgit Appl och Magdalena Trochimiuk för deras bidrag. Hans Christian Schmidt fick ekonomiskt stöd av Else Kröner-Fresenius-Stiftung iPRIME-stipendiet (2021_EKPK.10), UKE, Hamburg.

Efter etiskt godkännande (N045/2021) observerades nyfödda nyfödda möss av hankön och hona C57BL/6 tills de var 9 dagar gamla. Djuren föddes och tillhandahölls för experimentella ändamål av djuranläggningen vid University Medical Center Hamburg-Eppendorf, Hamburg, Tyskland. Nyföddabarnen inhystes i en bur tillsammans med sina föräldradjur. Miljöförhållandena kontrollerades i temperatur (20-24 ° C), 12:12 h ljus-mörk cykel och relativ luftfuktighet på 40% -70%.
1. Exper...

<ol>
	<li>Liwinski, T., Schramm, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prim&#228;r+sklerosierende+Cholangitis.">Prim&#228;r sklerosierende Cholangitis.</a> Der Internist. 59 (6), 551-559 (2018).</li><li>Kobayashi, H., Stringer, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+atresia.">Biliary atresia.</a> Seminars in Neonatology. 8 (5), 383-391 (2003).</li><li>Patman, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+tract:+Newly+identified+biliatresone+causes+biliary+atresia.">Biliary tract: Newly identified biliatresone causes biliary atresia.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 12 (7), 369 (2015).</li><li>Mack, C. L., Sokol, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unraveling+the+pathogenesis+and+etiology+of+biliary+atresia.">Unraveling the pathogenesis and etiology of biliary atresia.</a> Pediatric Research. 57 (5), 87-94 (2005).</li><li>Karjoo, S., Wells, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+neonatal+extrahepatic+cholangiocytes.">Isolation of neonatal extrahepatic cholangiocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. (88), e51621 (2014).</li><li>Strazzabosco, M., Fabris, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+anatomy+of+normal+bile+ducts.">Functional anatomy of normal bile ducts.</a> The Anatomical Record: Advances in Integrative Anatomy and Evolutionary Biology. 291 (6), 653-660 (2008).</li><li>Nakanuma, Y., Hoso, M., Sanzen, T., Sasaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microstructure+and+development+of+the+normal+and+pathologic+biliary+tract+in+humans,+including+blood+supply.">Microstructure and development of the normal and pathologic biliary tract in humans, including blood supply.</a> Microscopy Research and Technique. 38 (6), 552-570 (1997).</li><li>Banales, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholangiocyte+pathobiology.">Cholangiocyte pathobiology.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 16 (5), 269-281 (2019).</li><li>de Buy Wenniger, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cholangiocyte+glycocalyx+stabilizes+the+'biliary+HCO3-+umbrella':+an+integrated+line+of+defense+against+toxic+bile+acids.">The cholangiocyte glycocalyx stabilizes the 'biliary HCO3- umbrella': an integrated line of defense against toxic bile acids.</a> Digestive Diseases. 33 (3), 397-407 (2015).</li><li>Pinto, C., Giordano, D. M., Maroni, L., Marzioni, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+inflammation+and+proinflammatory+cytokines+in+cholangiocyte+pathophysiology.">Role of inflammation and proinflammatory cytokines in cholangiocyte pathophysiology.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Basis of Disease. 1864 (4), 1270-1278 (2018).</li><li>Khandekar, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinated+development+of+the+mouse+extrahepatic+bile+duct:+Implications+for+neonatal+susceptibility+to+biliary+injury.">Coordinated development of the mouse extrahepatic bile duct: Implications for neonatal susceptibility to biliary injury.</a> Journal of Hepatology. 72 (1), 135-145 (2020).</li><li>Grundmann, D., Klotz, M., Rabe, H., Glanemann, M., Sch&#228;fer, K. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+high-purity+myenteric+plexus+from+adult+human+and+mouse+gastrointestinal+tract.">Isolation of high-purity myenteric plexus from adult human and mouse gastrointestinal tract.</a> Scientific Reports. 5 (1), 9226 (2015).</li><li>Ishii, M., Vroman, B., LaRusso, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+morphologic+characterization+of+bile+duct+epithelial+cells+from+normal+rat+liver.">Isolation and morphologic characterization of bile duct epithelial cells from normal rat liver.</a> Gastroenterology. 97 (5), 1236-1247 (1989).</li><li>Kumar, U., Jordan, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+biliary+epithelial+cells+from+the+biliary+tract+fraction+of+normal+rats.">Isolation and culture of biliary epithelial cells from the biliary tract fraction of normal rats.</a> Liver. 6 (6), 369-378 (1986).</li><li>Vroman, B., LaRusso, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+polarized+primary+cultures+of+rat+intrahepatic+bile+duct+epithelial+cells.">Development and characterization of polarized primary cultures of rat intrahepatic bile duct epithelial cells.</a> Laboratory Investigation. 74 (1), 303-313 (1996).</li><li>Paradis, K., Sharp, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+duct-like+structure+formation+after+isolation+of+bile+ductular+cells+from+a+murine+model.">In vitro duct-like structure formation after isolation of bile ductular cells from a murine model.</a> Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 113 (6), 689-694 (1989).</li></ol>

Denna artikel rapporterade och diskuterade skapandet och valideringen av ett nytt kirurgiskt tillvägagångssätt för att ta bort EBDS av avlivade neonatala möss. Mikroskopiska och histologiska fynd avslöjar att tillvägagångssättet snabbt upptäcker EBD och dissekerar dem nära kanalens marginaler, även hos neonatala möss. Endast kirurgiska instrument och ett mikroskop med 20x förstoring krävs för det beskrivna protokollet. Dessutom möjliggör tillvägagångssättet isolering av hela EBDS. Tekniken är mycket...

Uppkomsten och utvecklingen av kolangiopatier såsom gallatresi, primär skleroserande kolangit (PSC) och primär gallkolangit (PBC) är antingen okända eller ofullständiga 1,2. Den begränsade förståelsen av ursprunget och utvecklingen av dessa sjukdomar leder till brist på behandlingsalternativ3. Det svåraste hindret för att studera neonatala gallgångsstörningar är att få en molekylär förståelse för patofysiologin. En av de viktigaste nycklarna till en bättre förståelse av molekylär patologi är bästa möjliga observation av drabbad vävnad. För att undvika minskad jämförbarhet och skillnader mellan forskning, såsom att observera potentiell viral etiologi av gallatresi4, uppstår behovet av bästa möjliga beredning och delning av de utförda dissektionsteknikerna. En ren beredning av målvävnaden är nödvändig för senare mikroskopiska undersökningar eller avel av cell- och 3D-organoidkulturer. Men vid murina neonatala störningar är vävnadsprover sällsynta och förekommer endast i en liten mängd på grund av den mycket lilla storleken. När det gäller gallgångsstörningar har svårigheter med en ren beredning av gallgångar hos murina nyfödda beskrivits5. På grund av det neonatala utvecklingsstadiet är vävnadsdifferentiering inte alltför avancerad, vilket komplicerar beredningen och ökar svårigheten jämfört med beredningen av vuxna prover. Därför undersökte den operativa arbetsgruppen en ny strategi för att förbereda EBDS i en neonatal musmodell. I den aktuella studien möjliggör tekniken en effektiv dissektion av varje prov.
Gallkanalsystemet är intraperitonealt placerat i höger övre buk, som härrör från levern. Gallblåsan ligger under den viscerala ytan av leverns högra lob. Gallgången, tillsammans med portalvenen och leverartären, är inbäddad i hepatoduodenalt ligament. Det förenar levern och tolvfingertarmen direkt och dränerar gallvätska i tolvfingertarmen6. Anatomiskt är gallgången uppdelad i höger och vänster leverkanal, den gemensamma leverkanalen, den cystiska kanalen och Ductus choledochus, som bildas av sammanflödet av den cystiska kanalen och den gemensamma leverkanalen7. Den här tömmer så småningom gallvätska och saliv från bukspottkörtelkanalen in i tolvfingertarmen via Ampulla of Vater.
Kolangiocyter kantar gallgången intra- och extrahepatiskt och bor i en komplicerad anatomisk nisch där de hjälper till med gallproduktion och homeostas8. Gallvätska passerar dessa specialiserade epitelceller i höga koncentrationer dagligen. I synnerhet är HCO3-paraplyunderhållet mycket viktigt för att skydda mot gallsyratoxicitet9. Kolangiocyter är den första försvarslinjen i hepatobiliärsystemet mot exempelvis luminala mikroorganismer10. Kolangiocyternas försvarseffekt mot giftiga angrepp kan försvagas av genetisk predisposition. En giftig överbelastning orsakar skador och förstörelse och kan därför leda till kolangiopatier. Dessutom är den utvecklande gallgången inte helt kapabel till alla självskyddande mekanismer, vilket leder till en högre känslighet för miljögifter i neonatala gallgångar11.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-Propanol</td>
			<td>CHEMSOLUTE</td>
			<td>11365000</td>
			<td>used as a dehydrating agent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G canula</td>
			<td>B Braun/Sterican, Melsungen Germany</td>
			<td>4656300</td>
			<td>canula for hydration of the sample</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Air vent</td>
			<td>C + P M&#246;belsysteme GmbH &#38; Co. KG, Breidenbach, Germany</td>
			<td>Tec-Ononmic AZ 1200</td>
			<td>the use of an air vent helps to avoid inhalation of formalin-containing fixatives</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aqua ad injectabilia Braun</td>
			<td>B Braun, Melsungen, Germany</td>
			<td>2351744</td>
			<td>saline; Container: Mini-Plasco connect, 20 x 10 mL, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bigger microsurgical Forceps</td>
			<td>DIADUST von Aesculap, Trossingen Deutschland</td>
			<td>FD253R</td>
			<td>straight, 180 mm (7&#34;), platform tip, round handle, width: 0,800 mm, diamond dust coated, non-sterile, reusable optional tool for observation and every step of preparation except very final preparation; Dividing skin of the peritoneum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera &#8220;SmartCAM 5&#8221;&#160;</td>
			<td>Basler and Vision Engineering, Send, United Kingdom</td>
			<td>EVC131A</td>
			<td>optional Lynx Exo camera modul: sensortype: CMOS, resolution 2560 x 1920 pixels, sensor size: 1/2&#34;; Used for videoproduction and technical evaluation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydration machine/Citadel 2000 Tissue Processor</td>
			<td>Fisher Scientific GmbH, Schwerte, Germany</td>
			<td>12612613</td>
			<td>used for automatic dehydration, short program (approx. 4.8 h)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dehydration sponge&#160;</td>
			<td>Carl Roth, Karlsruhe, Germany</td>
			<td>TT56.1</td>
			<td>sponge for final dissection step, other sponges/foam pads with a minimum pore size of 60 pores per inch are also suitable, the use of&#160; two foam pads per embedding cassette is recomended to cover the sample from below and above to prevent sliding through the perforation of the embedding cassettes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#180;s Phosphat Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td>Doesn&#180;t contain Calzium or Magnesium, 500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding cassettes</td>
			<td>Engelbrecht GmbH, Ederm&#252;nde, Germany</td>
			<td>17990</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>MEDITE Medical GmbH, Burgdorf, Germany</td>
			<td>41-6660-00</td>
			<td>staining solution, ready to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors CeramaCut</td>
			<td>FST, Heidelberg Germany</td>
			<td>14959-09</td>
			<td>Tips: Sharp-Sharp, Alloy / Material: Ceramic Coated Stainless Steel, Serrated:, Yes; Feature: CeramaCut, Tip Shape: Straight, Cutting Edge: 22 mm, Length: 9 cm; Skin incision, incision of the peritoneal window</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps</td>
			<td>FST, Heidelberg Germany</td>
			<td>11051-10</td>
			<td>Length: 10 cm, Tip Shape: curved, serrated, Tip width: 0.8 mm, Tip Dimensions: 0.8 x 0.7 mm, Alloy /Material: Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>MEDITE Medical GmbH, Burgdorf, Germany</td>
			<td>41-5130-00</td>
			<td>staining solution, ready to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Highresolotion microscope</td>
			<td>Vision Engineering, Send United Kingdom</td>
			<td>EVO503&#160;</td>
			<td>Capable of enlargement up to 60x magnification, only 6x to 20x magnification were used&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus Optical CO, Ltd., Hamburg, Germany</td>
			<td>BX60F5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Cover Glases</td>
			<td>Marienfeld, Lauda-K&#246;nigshofen, Germany</td>
			<td>101244</td>
			<td>60 mm broad, made of SCHOTT D 263 glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>R. Langenbrinck GmbH, Emmendingen, Germany</td>
			<td>03-0060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica, Nu&#223;loch, Germany</td>
			<td>SM2010R</td>
			<td>Tool for sectioning (2 &#181;m-slices)&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Omnifix-F 1 mL syringe</td>
			<td>B Braun, Melsungen, Germany</td>
			<td>9161406V</td>
			<td>syringe without canula</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin</td>
			<td>Sakura Finetec, Torrance, USA</td>
			<td>4511</td>
			<td>Tissue-Tek Paraffin Wax Tek III, without DMSO</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin embedding machine</td>
			<td>MEDITE Medical GmbH, Burgdorf, Germany</td>
			<td>TES 99</td>
			<td>The embedding machine used in this study contained the following three individual modules: TES 99.420, TES 99.250, TES 99.600. The sample should be embedded in Paraffin directly after the dehydration, no interim storage in a fridge should be performed due to possible shrinking and moisture in the fridge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Morphisto</td>
			<td>1176201000</td>
			<td>Prepare 1 mL Aliquots in 2 mL Eppendorf conical Tubes for liver samples and 0.5 mL Aliquots in 1 mL Eppendorf conical Tubes for extrahepatic bile duct samples, 4% in PBS ph 7.4&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Microsurgical Forceps&#160;</td>
			<td>EPM (Erich Pfitzer Medizintechnik), B&#252;tthard, Bayern, Germany</td>
			<td>(00)165</td>
			<td>Round handle, straight, 0.3 mm tip, tool for observation and every step of preparation, especially useful in final preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Ruler</td>
			<td>Agntho&#39;s AB, Liding&#246;, Sweden</td>
			<td>30085-15</td>
			<td>150mm With Metric &#38; Inch Graduations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors &#8211; Sharp-blunt for decapitation</td>
			<td>FST, Heidelberg Germany</td>
			<td>14001-14</td>
			<td>Device for decapitation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming cabinet</td>
			<td>Haraeus, Hanau, Germany</td>
			<td>T 6060</td>
			<td>the sliced samples should be kept in the warming cabinet to ensure the attachement of the sample on the microscope slides</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

extrahepatic bile duct and gall bladder dissection in nine-day-old mouse neonates

Dissektion av murina neonatala gallgångar har beskrivits som svår. Huvudsyftet med det beskrivna standardoperationsförfarandet är isoleringen av den extrahepatiska gallgången (EBD) hos musnyfödda utan att skada gallgången under beredningen. På grund av dess exceptionellt nära förberedelse jämfört med kolangiocyternas cellinje och skörd av hela det extrahepatiska gallgångssystemet (EBDS) är det beskrivna tillvägagångssättet extremt användbart vid forskning av djurmodeller av nyfödda gallgångsstörningar, såsom gallatresi. Efter eutanasi nåddes bukhålan och gallgångssystemet, tolvfingertarmen och levern extraherades med den unika En-bloc-Resection (EbR). Det extraherade provet placeras på en skummatta och EBD dissekeras från förorenande celler atraumatiskt utan nödvändig beröring. Dissektion av hela EBDS är en betydande fördel med denna metod. Försiktighet måste vidtas på grund av den lilla storleken och mängden gallgångsvävnad. Med hjälp av den beskrivna tekniken finns det ingen skada på kolangiocyterna. Vidare är teknikens renhet reproducerbar (n = 10). Därför kan optimalt jämförbara prover skördas. Dessutom skadas ingen gallgångsvävnad, eftersom all kontakt med gallgångssystemet kan undvikas under beredningen och lämnar gallvätskan inuti gallblåsan. Viktigast av allt, medan man utförde den slutliga gallblåsan och gallgångsdissektionen, användes atraumatiska mikroinstrument endast något i sidled av gallgången utan att klämma på den. Detta är nyckeln till ett rent och intakt prov och viktigt för ytterligare histologisk undersökning eller isolering av kolangiocyter. Sammanfattningsvis gör den beskrivna innovativa dissektionstekniken det möjligt för särskilt oerfarna operatörer med nödvändig utrustning att isolera EBDS så rent som möjligt.

Figur 1A visar EBDS för en murin nyfödd, som dissekerades med den beskrivna tekniken. Mikroskopiskt är ingen ytterligare levervävnad synlig. Levervävnaden har avlägsnats under protokollets sista isoleringssteg och kan lätt särskiljas från gallgångsvävnad avseende färg och konsistens. Figur 1B visar det isolerade provet jämfört med en millimeterskala. EBD: s längd (mätt från gallblåsan till duodenal papilla) är mindre än 10 mm. Diametern på d...

Watch this Scientific Journal Video about Extrahepatic Bile Duct and Gall Bladder Dissection in Nine-Day-Old Mouse Neonates at JoVE.com

Extrahepatic Bile Duct and Gall Bladder Dissection in Nine-Day-Old Mouse Neonates

För observation av murina neonatala gallgångsstörningar krävs en intakt gallgång och effektiv förberedelse. Därför utvecklades ett nytt tillvägagångssätt för att isolera hela det extrahepatiska gallkanalsystemet i murina nyfödda framgångsrikt samtidigt som gallgångens integritet bibehölls.

Extrahepatisk gallgång och gallblåsedissektion hos nio dagar gamla musnyfödda

The dissection of murine neonatal bile ducts has been described as difficult. The main aim of the described standard operating procedure is the isolation ...

Många rapporter som bedömde det extrahepatiska gallsystemet rapporterade att de fick proverna men inte hur de fick dem, vilket väckte frågor om jämförbarhet. Den största fördelen med denna teknik är att hela det extrahepatiska gallsystemet kan dissekeras och förorenande celler kan avlägsnas atraumatiskt. Vårt dissektionsprotokoll kan generellt tillämpas på experimentella tillvägagångssätt som arbetar med murina neonatala gallgångsstörningar, som syftar till dissektion av det extrahepatiska gallsystemet.Vissa funktioner i protokollet, till exempel att lämna magen fäst vid tolvfingertarmen, kan vara användbara vid forskning av duodenal atresi för att möjliggöra korrekt orientering av den delvis smälta mjölken uttryckt av magen. I början kan tekniken kräva lite tid för träning. Att öva och följa steg-för-steg-metoden kommer att öka hastigheten och resultatet.För att börja, placera de desinficerade och autoklaverade instrumenten på en steril yta bredvid operationsbordet. Efter att ha gjort ett snitt i bukhinnan, expandera snittet till platsen för halshuggningen, följ den vänstra främre axillära linjen. Ta bort huden från vänster till höger sida med atraumatiska pincett.Under ett mikroskop, håll bukhinnan som omger mjälten. Lyft försiktigt upp den tills bukhinnan liknar en tältliknande struktur och skär ett en millimeter hål i mitten. Vänta tills bukhinnan fylls med luft.Skär av bukhinnan i ett fönster inramat av de nedre revbenen, både laterala bukregioner och nedre blåsområdet. Se till att du har full tillgång till levern, gallgångssystemet, magen, tunntarmen och tjocktarmen. Undersök gallblåsan och gallgångarna genom att försiktigt dra xiphoidprocessen i ett kranialt ventralt läge.Undvik rivning av det falciforma ligamentet som kan leda till rivning av gallblåsan från gallgångssystemet. Släpp sedan dragningen av xiphoid-processen. Dra försiktigt ner tolvfingertarmen för att frigöra gallgångssystemet.Utför sedan den nedre En-bloc-mobiliseringen genom att identifiera duodenal papilla, som förbinder gallkanalsystemet med tolvfingertarmen. Skär genom tolvfingertarmen cirka två centimeter till papillens högra sida. Skär sedan genom det pyloriska området.Se till att innehållet i magen är närvarande i det pyloriska området mellan skärplatsen och duodenalpapillen. För att utföra den övre En-bloc-mobiliseringen, dra försiktigt xiphoid-processen och få tillgång till det falciforma ligamentet. Gör en centimeter skär genom det falciforma ligamentet mellan gallblåsan och nära xiphoidprocessen.Skär genom anslutningsstrukturerna mellan levern och bröstkorgen, såsom matstrupen, underlägsen vena cava, bröstkorgsaorta och alla ligament som omger det nakna området i levern. Skär också alla dorsalt kvarvarande vävnadsanslutningar. Under 20 gånger mikroskopisk förstoring, placera En-bloc-provet på en skumkudde.Montera provet genom att omorganisera det i rätt anatomisk position. Använd mild rörelse, platta den orala och aborala delen av tolvfingertarmen. Använd atraumatiska pincett, starta utplattningsrörelsen vid duodenal papilla och fortsätt till skärkanterna.Släta sedan ut det vita massainnehållet i magen i den orala delen av tolvfingertarmen. Identifiera den orala och den aborala delen av tolvfingertarmen för att utesluta sannolik gallgångsrotation. Skär bort stora rester av levervävnad innan du dissekerar gallgången.Efter några skraprörelser, överför provet till ett renare läge på skummattan. Använd den mindre pressade levervävnaden i bakgrunden för att optimera vyn för differentiering mellan EBDS och oönskade celler. Bearbeta hepatoduodenalt ligament tills den isolerade EBDS kvarstår.Observera leverartären och portalvenen som uppstår som vit och mycket känslig filament, ungefär tre till fem millimeter oralt från duodenalpapillen. Ta försiktigt bort detta känsliga filament med ett försiktigt drag till vänster sidosida. Se till att skraprörelserna börjar från gallgångssystemet och leder till levergränserna.Med hjälp av detta protokoll dissekerades EBDS från nio dagar gamla murina nyfödda. Längden på den isolerade EBDS från gallblåsan till duodenal papilla var mindre än 10 millimeter, och diametern på den känsliga ductus choledochus varierade från 0, 05 till 0, 2 millimeter. Hematoxylin eosinfärgning utfördes på den längsgående delen av EBDS med en öppen lumen.Kolangiocyterna identifierades kring lumen som ett monolager och färgades mörkare. Forskare bör dela och standardisera driftstekniker som dissektions- och injektionsprotokoll för att förbättra jämförbarheten och snabb användbarhet av sina studier och resultat. Föregående dissektion kommer att vara fördelaktigt för histologiska och encelliga tillvägagångssätt, såsom isolering av intra- och extraperi-kolangiocyter, eftersom det resulterar i minskning av cellodlingskontaminering.

Research

JoVE Journal

Medicine

Mouse Bladder Wall Injection

Mus blåsväggen Injection

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. ...

Cannulation of the Mouse Submandibular Salivary Gland via the Wharton's Duct

Kanylering av Mouse submandibular spottkörteln via Whartons Duct

Severe salivary gland hypofunction is frequently found in patients with Sj&ouml;gren's syndrome and those who receiving therapeutic 
irradiation in their ...

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

3-dimensionell hartsgjutdel och avbildning av mus portvenen eller Intrahepatisk Bile Duct System

In  organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is  indispensable for proper physiological function, and the formation and  ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

Urinblåsa Dilatation Evoked Visceromotor svar som en modell för smärtor i urinblåsan hos möss

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

State of the Art Cranial Ultrasound Imaging in Neonates

State of the Art Cranial Ultraljud Imaging i Nyfödda

Cranial ultrasound (CUS) is a reputable tool for brain imaging in critically ill neonates. It is safe, relatively cheap and easy to use, even when a ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

Bile Duct Tion hos möss: Induktion av inflammatoriska leverskada och fibros av obstruktiv Kolestas

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Surgical Injury to the Mouse Pancreas through Ligation of the Pancreatic Duct as a Model for Endocrine and Exocrine Reprogramming and Proliferation

Kirurgisk Skada på mus bukspottkörteln genom Ligering av bukspottkörtelgången som en modell för Endocrine och Exocrine omprogrammering och spridning

Expansion of pancreatic beta cells in vivo or ex vivo, or generation of beta cells by differentiation from an embryonic or adult stem cell, can provide ...

Transcutaneous Microcirculatory Imaging in Preterm Neonates

Transkutan mikrocirkulatoriska Imaging i prematura nyfödda barn

Microcirculatory imaging (MI) is a relatively new research tool mainly used in the intensive care setting. MI provides a clear view of the smallest ...

Isolation and Profiling of MicroRNA-containing Exosomes from Human Bile

Isolering och profilering av MicroRNA innehåller exosomes från Human Bile

Exosome research in the last three years has greatly extended the scope towards identification and characterization of biomarkers and their therapeutic ...