Name: a soluble tetrazolium-based reduction assay to evaluate the effect of antibodies on candida tropicalis biofilms
Uploaded: 2022-09-16T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Soluble Tetrazolium-Based Reduction Assay to Evaluate the Effect of Antibodies on Candida tropicalis Biofilms at JoVE.com

Este trabalho foi apoiado pela bolsa Ramalingaswami DBT-843-BIO (Departamento de Biotecnologia, Governo da Índia) e pelo Prêmio de Pesquisa em Início de Carreira SER-1058-BIO (Conselho de Pesquisa em Ciência e Engenharia, Governo da Índia) para a SR. Os autores reconhecem uma subvenção ICMR-JRF para P.C e DBT-JRF para P.S. Os autores agradecem ao Dr. Ravikant Ranjan pelas sugestões sobre o manuscrito e assistência técnica do Sr. Pradeep Singh Thakur durante o MEV.

Camundongos BALB/c foram alojados no Small Animal Facility no IIT Roorkee. Todos os animais foram mantidos em um ciclo claro:escuro de 12 h:12 h a 25 °C e receberam dieta de pellets e água ad libitum. Todos os procedimentos em animais foram aprovados pelo Comitê Institucional de Ética Animal (IAEC) do IIT Roorkee.
1. Preparação de C. tropicalis
NOTA: O fungo Candida tropicalis pertence aos patógenos do Grupo de Risco ...

As infecções fúngicas causadas por espécies de Candida estão associadas a altas taxas de morbidade e mortalidade em todo o mundo. A crescente ameaça de infecção fúngica invasiva requer o manejo precoce de tais doenças com risco de vida. A maioria das infecções por Candida envolve a formação de biofilmes, que aderem a uma variedade de dispositivos médicos e são responsáveis pela persistência e recorrência de infecções fúngicas em ambientes hospitalares31. Os ...

A candidíase sistêmica é a quarta principal causa de infecções nosocomiais, que estão associadas a altas taxas de morbidade e mortalidade em todo o mundo. Globalmente, a candidíase sistêmica afeta aproximadamente 700.000 indivíduos1. Espécies de Candida, a saber, C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. glabrata e C. auris, são a causa mais comum de infecções invasivas por Candida 2. As espécies de Candida são patógenos oportunistas que produzem biofilmes3. Os biofilmes estão predominantemente associados à virulência de Candida, e a Candida pode suportar condições de estresse oxidativo e osmótico induzindo a formação de biofilme4. Os biofilmes modulam ainda mais a expressão de fatores de virulência e componentes da parede celular e formam uma matriz protetora exopolimérica, ajudando a Candida a se adaptar a diferentes nichos de hospedeiros4. Os biofilmes contribuem para a aderência da levedura nos tecidos do hospedeiro e instrumentos médicos5. Como tal, a formação de biofilme está associada a uma vantagem para as leveduras, uma vez que as células de levedura dentro dos biofilmes podem evadir a resposta imune do hospedeiro6. A formação de biofilme também protege as leveduras patogênicas da ação de drogas antifúngicas5. A diminuição da suscetibilidade dos biofilmes de C. albicans à anfotericina B foi demonstrada por Pierce et al.7,8. Além disso, os biofilmes demonstram resistência a medicamentos antifúngicos ao fluconazol, o que prejudica o manejo efetivo da candidíase sistêmica 9,10.
Os micróbios têm uma tendência intrínseca a aderir a várias superfícies bióticas e abióticas, o que resulta na formação de biofilme. Candida albicans, que é um fungo dimórfico, existe nas formas levedura e hifal, e sua formação de biofilme tem sido caracterizada em vários sistemas modelo in vitro e in vivo 11. As etapas da formação do biofilme incluem a adesão das células de Candida ao substrato, a filamentação, a proliferação e a maturação do biofilme11. Inicialmente, a forma de levedura de C. albicans adere a substratos, incluindo dispositivos médicos e tecido humano, seguida de filamentação e proliferação de C. albicans em formas hifais e pseudo-hifais e, finalmente, maturação de biofilmes embutidos na matriz extracelular11. A formação de biofilme contribui em grande parte para os mecanismos de patogênese de C. albicans 12. As espécies de Candida formam biofilmes resistentes a medicamentos, o que torna sua erradicação desafiadora13. Um pequeno subconjunto da população produtora de biofilme de C. albicans tem sido descrito como altamente resistente aos antifúngicos anfotericina B e clorexidina14. Vale ressaltar que as células de levedura em biofilmes apresentam alta resistência à poliquimioterapia em comparação com as células de levedura na fase planctônica e na fase de proliferação14. Tem sido sugerido que as células de levedura existentes em biofilmes são altamente tolerantes a drogas antifúngicas, o que contribui para a sobrevivência de C. albicans em biofilmes14. Essas células existentes foram relatadas como variantes fenotípicas de C. albicans e não mutantes14. Além disso, células de biofilmes de Candida conhecidas como "células persistentes" são tolerantes a altas doses de tratamento com anfotericina B e contribuem para a sobrevivência de Candida, representando assim uma grande carga de infecções sistêmicas recorrentes por Candida em indivíduos de alto risco15.
O aumento da resistência a medicamentos antifúngicos em cepas de Candida requer pesquisa para novos agentes antifúngicos e imunoterapias. Como evidenciado a partir dos estudos acima mencionados, os biofilmes de Candida mostram diminuição da suscetibilidade a drogas antifúngicas. Portanto, há uma necessidade de imunoterapias melhoradas para controlar a formação de biofilme de Candida. Estudos anteriores mostraram que a CAGTA pode fornecer proteção eficaz contra infecções sistêmicas por Candida, inibindo a formação de biofilme de C. albicans in vitro16. Outro estudo relatou que a imunização de camundongos com a proteína rAls3-N de C. albicans induz altos títulos de anticorpos que interferem na formação de biofilme de C. albicans in vitro 17. Os anticorpos anti-Als3-N também exerceram efeito inibitório sobre a dispersão de C. albicans a partir de biofilmes17. A vacina NDV-3A à base de C. albicans está atualmente em fase de ensaio clínico e os soros anti-NDV-3A também reduziram a formação de biofilme de C. auris 18. Um estudo recente identificou a inibição da formação de biofilme por anticorpos Sap2 como mecanismo de proteção em um modelo murino de candidíase sistêmica19.
Este trabalho descreve um protocolo in vitro detalhado para avaliar o efeito de anticorpos antígeno-específicos presentes no soro policlonal obtidos de diferentes grupos de camundongos vacinados com Sap2 em biofilmes pré-formados de Candida tropicalis . Para isso, um método baseado em um ensaio de redução de XTT foi otimizado e desenvolvido em laboratório, que pode medir a viabilidade do biofilme de forma rápida, sensível e de alto rendimento, na presença ou ausência de anticorpos.
O ensaio XTT é utilizado para medir a atividade metabólica celular como indicador de viabilidade celular, proliferação celular e citotoxicidade20. Este ensaio colorimétrico baseia-se na redução de um sal de tetrazólio amarelo, sódio 3'-[1-(fenilaminocarbonil)-3,4-tetrazólio]-bis (4-metoxi-6-nitro) benzeno sulfônico hidratado (XTT) para um corante formazan laranja por células metabolicamente ativas. Como apenas células viáveis podem reduzir o XTT, a quantidade de XTT formazan reduzido é proporcional à intensidade da cor e à viabilidade celular. O corante formazan formado é solúvel em água e é diretamente quantificado usando um leitor de placas. Devido à sua natureza solúvel em água, o ensaio XTT permite o estudo de biofilmes intactos, bem como o exame da suscetibilidade a fármacos bioplápticos, sem interrupção da estrutura do biofilme21. Além disso, esse método é implementado nas avaliações de viabilidade fúngica de Candida devido à sua facilidade de uso, velocidade, precisão, alto rendimento e alto grau de reprodutibilidade 7,22.
Além do ensaio de redução de XTT, inúmeras técnicas alternativas também foram identificadas para a medição da quantidade de biofilme. Alguns deles incluem o uso do ensaio de redução de MTT, coloração violeta cristalina, quantificação de DNA, PCR quantitativa, quantificação de proteínas, medição do peso das células secas e contagem viável de colônias. Esses procedimentos variam muito em termos de seus requisitos de tempo e custo. Taff et al. realizaram uma análise comparativa de sete diferentes ensaios de quantificação de biofilme de Candida e descobriram que o ensaio de XTT forneceu o método mais reprodutível, preciso e eficiente para a estimativa quantitativa de biofilmes de C. albicans 23. Técnicas de coloração como o violeta cristal têm certas limitações; o teste de violeta cristal determina indiretamente a quantidade de biofilme medindo a densidade óptica da matriz e das células de biofilme coradas com violeta cristal. Embora o ensaio de violeta cristal forneça uma boa medida de massa de biofilme, ele não fornece uma medida de viabilidade do biofilme, pois cora tanto as células microbianas quanto a matriz extracelular24. Dhale et al. relataram ainda que o ensaio de redução de XTT foi o método mais sensível, reprodutível, preciso, eficiente e específico para detectar a produção de biofilme em comparação com o ensaio violeta cristal25. Relatos da literatura têm mostrado que o ensaio de XTT se correlaciona bem com o parâmetro UFC/mL no método de contagem de UFC. No entanto, em comparação com o ensaio XTT, o método CFU é trabalhoso e lento26. Além disso, a fração de células vivas destacadas pode não ser representativa da população inicial de biofilme27. Embora o ensaio de redução de XTT pareça a melhor opção disponível para quantificar a viabilidade, existem algumas limitações dessa técnica. Embora o método XTT seja útil para comparações envolvendo uma cepa fúngica, seu uso pode ser limitado ao comparar diferentes cepas e espécies de fungos. Comparações entre cepas podem ser difíceis na ausência de padronização detalhada, uma vez que diferentes cepas metabolizam substratos com diferentes capacidades21.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 mL conical centrifuge tubes</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>546021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x PBS</td>
			<td>-</td>
			<td>Prepared in lab</td>
			<td>NaCl : 4 g 
			KCl : 0.1 g 
			Na2HPO4:&#160; 0.72 g 
			KH2PO4 : 0.12 g 
			Water 500 mL. Adjust pH to 7.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical centrifuge tubes</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>546041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well microtiter plates</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>442404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>Generic</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Menadione</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M5625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtiter Plate Reader</td>
			<td>Generic</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multichannel pipette and tips</td>
			<td>Generic</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Tarson</td>
			<td>460090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ringers Lactate</td>
			<td>-</td>
			<td>Prepared in lab</td>
			<td>sodium chloride 0.6 g sodium lactate 0.312 g potassium chloride 0.035 g calcium chloride 0.027 g Water 100 mL. Adjust to pH 7.0&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 MOPS</td>
			<td>Himedia</td>
			<td>AT180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sabouraud dextrose Agar</td>
			<td>SRL</td>
			<td>24613</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sabouraud dextrose Broth</td>
			<td>SRL</td>
			<td>24835</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XTT&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>X6493</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a soluble tetrazolium-based reduction assay to evaluate the effect of antibodies on candida tropicalis biofilms

As espécies de Candida são a quarta causa mais comum de infecções nosocomiais sistêmicas. A candidíase sistêmica ou invasiva frequentemente envolve a formação de biofilme em dispositivos implantados ou cateteres, o que está associado ao aumento da virulência e mortalidade. Biofilmes produzidos por diferentes espécies de Candida exibem maior resistência contra várias drogas antifúngicas. Portanto, há uma necessidade de desenvolver imunoterapias eficazes ou tratamentos adjuvantes contra biofilmes de Candida. Embora o papel da imunidade celular esteja bem estabelecido na proteção anti-Candida, o papel da imunidade humoral tem sido estudado menos.
Foi levantada a hipótese de que a inibição da formação e maturação de biofilme é uma das principais funções dos anticorpos protetores, e os anticorpos do tubo germinativo de Candida albicans (CAGTA) demonstraram suprimir o crescimento in vitro e a formação de biofilme de C. albicans mais cedo. Este artigo descreve um protocolo detalhado para avaliar o papel de anticorpos em biofilmes formados por C. tropicalis. A metodologia para este protocolo envolve a formação de biofilme de C. tropicalis em placas de microtitulação de 96 poços, que foram então incubadas na presença ou ausência de anticorpos antígeno-específicos, seguidas por um ensaio de 2,3-bis(2-metoxi-4-nitro-5-sulfofenil)-5-carboxanilide-2H-tetrazólio (XTT) para medir a atividade metabólica de células fúngicas no biofilme.
A especificidade foi confirmada pelo uso de controles séricos apropriados, incluindo soro depletado de anticorpos específicos de Sap2. Os resultados demonstram que os anticorpos presentes no soro de animais imunizados podem inibir a maturação in vitro do biofilme de Candida. Em resumo, este artigo fornece informações importantes sobre o potencial dos anticorpos no desenvolvimento de novas imunoterapias e tratamentos sinérgicos ou adjuvantes contra biofilmes durante a candidíase invasiva. Este protocolo in vitro pode ser usado para verificar o efeito de potenciais novos compostos antifúngicos sobre a atividade metabólica de células de espécies de Candida em biofilmes.

Os biofilmes de Candida tropicalis foram cultivados em placas de microtitulação de 96 poços e fotografados a 40x utilizando microscópio invertido (Figura 1A). O biofilme foi ainda corado com cristal violeta e observado a 40x com microscópio invertido (Figura 1B). A microscopia eletrônica de varredura mostra uma imagem representativa do biofilme de C. tropicalis (Figura 1C). Para a realização do ensaio de in...

Watch this Scientific Journal Video about A Soluble Tetrazolium-Based Reduction Assay to Evaluate the Effect of Antibodies on Candida tropicalis Biofilms at JoVE.com

A Soluble Tetrazolium-Based Reduction Assay to Evaluate the Effect of Antibodies on Candida tropicalis Biofilms

Um protocolo baseado em placa de microtitulação de 96 poços usando um ensaio de redução de 2,3-bis(2-metoxi-4-nitro-5-sulfofenil)-5-carboxanilidade-2H-tetrazólio (XTT) é descrito neste documento, para estudar os efeitos de anticorpos em biofilmes formados por C. tropicalis. Este protocolo in vitro pode ser usado para verificar o efeito de potenciais novos compostos antifúngicos sobre a atividade metabólica de células de espécies de Candida em biofilmes.

Um ensaio de redução solúvel à base de tetrazólio para avaliar o efeito de anticorpos em biofilmes de Candida tropicalis

Candida species are the fourth-most common cause of systemic nosocomial infections. Systemic or invasive candidiasis frequently involves biofilm formation ...

Este protocolo in vitro, baseado em placas de 96 poços, pode ser usado para testar o efeito inibitório de anticorpos em novos agentes antifúngicos na atividade metabólica de células fúngicas em biofilmes de Candida. Em comparação com outros métodos, esta é uma técnica altamente sensível, precisa, de alto rendimento, reprodutível, fácil de usar e econômica para avaliar o efeito de anticorpos ou antifúngicos no desenvolvimento de biofilmes de Candida. Este ensaio pode ser usado para avaliar a eficácia de novas terapias baseadas em medicamentos ou anticorpos, bem como candidatas a vacinas contra biofilmes de Candida, que estão associados à gravidade da candidíase invasiva.Este método pode ser aplicado para testar o efeito de novos agentes antifúngicos ou anticorpos durante a formação ou maturação do biofilme em diferentes contextos usando diferentes cepas fúngicas ou fontes de anticorpos. Demonstrando esse procedimento estará o Sr. Pankaj Chandley, um pesquisador de doutorado que trabalha em meu laboratório. Para começar, adicione 100 microlitros de cultura de Candida tropicalis a uma placa de microtitulação de 96 poços.Usando uma pipeta multicanal, preencha as duas últimas colunas com 100 microlitros de RPMI 1640 MOPS médios sozinhos. Cubra a placa de microtitulação com uma tampa e folha de alumínio e incube a placa por 24 horas a 37 graus Celsius em condições estacionárias. No dia seguinte, aspirar o meio cuidadosamente usando uma pipeta multicanal.Inverta a placa suavemente sobre as folhas de blotting e toque para remover qualquer meio residual. Lave a placa com 200 microlitros de PBS 1X usando uma pipeta multicanal. Aspirar o PBS cuidadosamente usando uma pipeta multicanal e lavar duas vezes com PBS.Para remover o excesso de PBS, seque a placa ao ar por 30 minutos à temperatura ambiente dentro de um gabinete de segurança biológica. Preparar diluições em série de amostras de soro inativadas pelo calor em meio estéril RPMI 1640 MOPS. Adicionar 100 microlitros da diluição sérica selecionada a cada poço da placa de microtitulação de 96 poços.Na coluna 10, adicione apenas o meio RPMI 1640 MOPS para o controle positivo somente de fungos. Adicionar uma diluição de um a 50 do soro a todos os poços na coluna 11 para servir como o controle negativo do não-fungo mais soro. Depois de cobrir a placa com uma tampa e papel alumínio, incube a placa por 24 horas a 37 graus Celsius.No dia seguinte, depois de aspirar o soro cuidadosamente usando uma pipeta multicanal, toque suavemente na placa invertida para remover qualquer soro residual. Repita a lavagem do PBS três vezes e seque a placa ao ar livre por 30 minutos à temperatura ambiente dentro de um gabinete de segurança biológica para secar qualquer excesso de PBS. Em seguida, dissolva 25 miligramas de XTT em 50 mililitros de lactato de Ringer esterilizado por filtro.Alíquota 10 mililitros em tubos separados. Cubra-o com papel alumínio e armazene-o a menos 80 graus Celsius. Em seguida, dissolva 8,6 miligramas de menadiona em cinco mililitros de acetona.E depois de distribuir 50 microlitros em 100 microtubos separados, armazene as alíquotas a menos 80 graus Celsius. Tome 10 mililitros de XTT e adicione um microlitro de menadiona para obter uma solução de trabalho micromolar. Adicionar 100 microlitros da solução de menadiona XTT por poço da placa de microtitulação de 96 poços.Em seguida, depois de cobrir a placa com uma tampa e papel alumínio, incube a placa por duas horas a 37 graus Celsius no escuro. Finalmente, transfira 80 microlitros do sobrenadante colorido de cada poço para uma nova placa de 96 poços e leia a placa a 490 nanômetros. O soro de camundongos imunizados com Sap2-parapsilose poderia prevenir a maturação de biofilmes pré-formados de Candida tropicalis em 65%, em comparação com 45% no soro de Sap2-albicans e 55% em camundongos imunizados com Sap2-tropicalis.Em geral, a inibição do biofilme pelo soro imune Sap2 foi significativamente maior do que pelo soro imune simulado, que é de 16% e 13% no soro pré-imune. A inibição do biofilme foi quase insignificante no uso de PBS e sem controle sérico. Deve-se tomar o máximo cuidado ao realizar as etapas de lavagem para evitar a interrupção dos biofilmes.A solução de XTT deve ser preparada imediatamente antes da utilização e adicionada à placa imediatamente. Após este procedimento, os usuários podem avaliar o efeito de novos agentes antifúngicos, candidatos a vacina ou anticorpos durante a formação e maturação do biofilme de Candida em diferentes ambientes de pesquisa usando diferentes cepas fúngicas.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Soluble Tetrazolium-Based Reduction Assay to Evaluate the Effect of Antibodies on Candida tropicalis Biofilms

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Co-cultura de Modelos Pseudomonas aeruginosa Biofilmes Grown no Live Células Airway Humanos

Bacterial biofilms have been associated with a number of different human diseases, but biofilm development has generally been studied on non-living ...

Imunologia e Infecção

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

A 96 Bem microtitulação Método da Placa com base para a Formação Monitoramento e Teste de susceptibilidade antifúngica de Candida albicans Biofilmes

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third ...

A Cell Free Assay System Estimating the Neutralizing Capacity of GM-CSF Antibody using Recombinant Soluble GM-CSF Receptor

A célula do sistema de Ensaio grátis Estimar a capacidade de neutralização de GM-CSF recombinante usando anticorpo receptor GM-CSF Solúvel

BACKGROUNDS: Previously, we demonstrated that neutralizing capacity but not the concentration of GM-CSF autoantibody was correlated with the disease ...

The Synergistic Effect of Visible Light and Gentamycin on Pseudomona aeruginosa Microorganisms

The Synergistic Effect of Visible Light and Gentamycin on Pseudomona aeruginosa Microorganisms

O efeito sinérgico da luz visível e no Gentamicina<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Microorganismos

Recently there were several publications on the  bactericidal effect of visible light, most of them claiming that blue part of  the spectrum (400 nm-500 ...

Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis

Usando Click Chemistry medir o efeito da infecção viral sobre a síntese de RNA do Host-Cell

Many RNA viruses have evolved the ability to inhibit host cell transcription as a means to circumvent cellular defenses. For the study of these viruses, ...

In Vitro Assay to Evaluate the Impact of Immunoregulatory Pathways on HIV-specific CD4 T Cell Effector Function

In Vitro Assay to Evaluate the Impact of Immunoregulatory Pathways on HIV-specific CD4 T Cell Effector Function

In Vitro Ensaio para avaliar o impacto da imunorreguladora Pathways on específica para o HIV CD4 T efetoras celular Função

T cell exhaustion is a major factor in failed pathogen clearance during chronic viral infections. Immunoregulatory pathways, such as PD-1 and IL-10, are ...

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate Fc&#947; Receptor-mediated Phagocytosis

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate FcÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³ Receptor-mediated Phagocytosis

Uso de um monócito monocamada Ensaio para Avaliar a fagocitose mediada pelo receptor Fcy

Although originally developed for predicting transfusion outcomes of serologically incompatible blood, the monocyte monolayer assay (MMA) is a highly ...

A High-throughput Compatible Assay to Evaluate Drug Efficacy against Macrophage Passaged Mycobacterium tuberculosis

A High-throughput Compatible Assay to Evaluate Drug Efficacy against Macrophage Passaged Mycobacterium tuberculosis

Um ensaio Compatível de alta capacidade para avaliar droga Eficácia contra macrófagos passadas<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em

The early drug development process for anti-tuberculosis drugs is hindered by the inefficient translation of compounds with in vitro activity to ...

Fluorescence-based Neuraminidase Inhibition Assay to Assess the Susceptibility of Influenza Viruses to The Neuraminidase Inhibitor Class of Antivirals

-Fluorescência baseado Neuraminidase Ensaio de Inibição Para avaliar a susceptibilidade do vírus influenza A de neuraminidase Inibidor de Classe Antivirais

The neuraminidase (NA) inhibitors are the only class of antivirals approved for the treatment and prophylaxis of influenza that are effective against ...

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

A Novel In Vitro Wound Healing Assay to Evaluate Cell Migration

Um romance em Vitro ferida cura ensaio para avaliar a migração celular

The aim of this work is to show a novel method to evaluate the ability of some immunomodulatory molecules, such as antimicrobial peptides (AMPs), to ...