Name: establishing 3d endometrial organoids from the mouse uterus
Uploaded: 2023-01-06T13:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing 3D Endometrial Organoids from the Mouse Uterus at JoVE.com

Vi takker Dr. Stephanie Pangas og Dr. Martin M. Matzuk (M.M.M.) for kritisk læsning og redigering af vores manuskript. Undersøgelser blev støttet af Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health and Human Development tilskud R00-HD096057 (D.M.), R01-HD105800 (D.M.), R01-HD032067 (M.M.M.) og R01-HD110038 (M.M.M.) og af NCI- P30 Cancer Center Support Grant (NCI-CA125123). Diana Monsivais, Ph.D. har en Next Gen Pregnancy Award fra Burroughs Wellcome Fund.

Musehåndtering og eksperimentelle undersøgelser blev udført i henhold til protokoller godkendt af Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) ved Baylor College of Medicine og retningslinjer fastlagt af NIH Guide for pleje og brug af forsøgsdyr.
1. Isolering af livmoderepitel fra mus ved hjælp af enzymatiske og mekaniske metoder
BEMÆRK: Dette afsnit beskriver de trin, der kræves for at etablere, passage, fryse og optø epitelendometrieo...

Her beskriver vi metoder til at generere endometrieepitelorganoider fra museendometrium og de protokoller, der rutinemæssigt anvendes til deres nedstrømsanalyse. Endometrieorganoider er et kraftfuldt værktøj til at studere de mekanismer, der styrer endometrierelaterede sygdomme, såsom endometriose, endometriecancer og implantationsfejl. Skelsættende undersøgelser offentliggjort i 2017 rapporterede betingelserne for dyrkning af langsigtede og vedvarende kulturer af endometrieorganoider fra mus og humant epitel<sup ...

Endometrium - det indre slimhindevæv i livmoderhulen - er et unikt og meget dynamisk væv, der spiller kritiske roller i en kvindes reproduktive sundhed. I løbet af den reproduktive levetid har endometrium potentialet til at gennemgå hundredvis af cyklusser med spredning, differentiering og nedbrydning, koordineret af den samordnede virkning af ovariehormonerne - østrogen og progesteron. Undersøgelser af genetisk manipulerede mus har afdækket grundlæggende biologiske mekanismer, der understøtter endometrieresponset på hormoner og kontrol af embryoimplantation, stromalcelledecidualisering og graviditet1. In vitro-studier har imidlertid været begrænsede på grund af vanskeligheder med at opretholde ikke-transformeret primært museendometrievæv i traditionelle 2D-cellekulturer 2,3. Nylige fremskridt inden for kulturen af endometrievæv som 3D-organsystemer eller organoider giver en ny mulighed for at undersøge biologiske veje, der styrer endometriecellegenerering og differentiering. Mus og humane endometrieorganoidsystemer er blevet udviklet fra rent endometrieepitel indkapslet i forskellige matricer4,5, mens humant endometrium er blevet dyrket som stilladsfri epitel/stromale co-kulturer 6,7 og for nylig som kollagenindkapslede epitel-/stromale samlinger8 . Væksten og det regenerative potentiale af epitelorganoidkulturer understøttes af en defineret cocktail af vækstfaktorer og små molekylehæmmere, der er blevet empirisk bestemt til at maksimere vækst og regenerering af organoiderne 4,5,9. Desuden tillader evnen til at fryse og optø endometrieorganoider langsigtet bankning af endometrieorganoider fra mus og mennesker til fremtidige undersøgelser.
Gensplejsede mus har afsløret de komplekse signalveje, der styrer tidlig graviditet og decidualisering, og er blevet brugt som modeller for graviditetstab, endometriecancer og endometriose. Disse genetiske undersøgelser er stort set opnået med cellespecifik deletion af loxP-flankerede alleler ("floxed") ved hjælp af cre-rekombinaser, der er specifikt aktive i kvindeligt reproduktionsvæv. Disse musemodeller omfatter den meget anvendte progesteronreceptor-cre 10, som har stærk rekombinaseaktivitet i endometrieepitel- og stromalvævet, lactoferrin i-cre, som inducerer endometrieepitelrekombination hos voksne mus11 eller Wnt7a-cre, som udløser epitelspecifik deletion i Müllerian-afledte væv12 . Dyrkning af endometrievæv fra genetisk manipulerede musemodeller som 3D-organoider har givet en glimrende mulighed for at undersøge endometriebiologi og lette identifikationen af vækstfaktorer og signalveje, der styrer endometriecellefornyelse og differentiering13,14. Metoder til isolering og dyrkning af museendometrievæv er beskrevet i litteraturen og rapporterer brugen af forskellige enzymatiske strategier til isolering af livmoderepitel til efterfølgende dyrkning af endometrieepitelorganoider4. Mens tidligere litteratur giver en kritisk ramme for endometrieepitelorganoidkulturprotokoller 4,5,6, giver dette papir en klar, omfattende metode til generering, vedligeholdelse, behandling og analyse af disse organoider. Standardisering af disse teknikker er vigtig for at fremskynde fremskridt inden for kvinders reproduktive biologi. Her rapporterer vi en detaljeret metode til enzymatisk og mekanisk oprensning af museendometrieepitelvæv til den efterfølgende kultur af endometrieorganoider i et gelmatrixstillads. Vi beskriver også metoderne til downstream histologiske og molekylære analyser af gelmatrix-indkapslede museendometrieepitelorganoider.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="4">Organoid Media Formulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Final concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix, *LDEV-free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354230</td>
			<td>100%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin from Bovine Pancreas</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T1426-1G</td>
			<td>1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM/F12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12634010</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 supplement</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17502048</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27&#8482; Supplement (50X), minus vitamin A</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12587010</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primocin</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>ant-pm-1</td>
			<td>100 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Acetyl-L-cysteine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9165-5G</td>
			<td>1.25 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25030024</td>
			<td>2 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>N0636-100G</td>
			<td>10 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALK-4, -5, -7 inhibitor, A83-01</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>2939</td>
			<td>500 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human EGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-15</td>
			<td>50 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human Noggin</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-10C</td>
			<td>100 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human Rspondin-1</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-38</td>
			<td>500 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human FGF-10</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-26</td>
			<td>100 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human HGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-39</td>
			<td>50 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WNT3a</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>5036-WN</td>
			<td>200 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Other supplies and reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Final concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase from Clostridium histolyticum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0130-1G</td>
			<td>5 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>DN25-100MG</td>
			<td>2 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14190-250</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14170112</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Polystyrene Microplates (24-Well)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>#08-772-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Polystyrene Microplates (12-Well)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>#0877229</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Cell Strainers, 40 &#181;m</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>#08-771-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Direct-zol RNA MiniPrep (50 &#181;g)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>11-331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizol reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15596026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12, HEPES, no phenol red</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11039021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, Charcoal stripped</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F6765-500ML</td>
			<td>2%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Estratiol (E2)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E1024-1G</td>
			<td>10 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde 16% in aqueous solution, EM Grade</td>
			<td>VWR</td>
			<td>15710</td>
			<td>4%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Cassette 1 Slotted Tissue Cassettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1000961</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Stainless-Steel Embedding Base Molds</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>64-010-15&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 200 proof (100%)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-032-601&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoclear</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-899-90147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permount Mounting Medium</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-277-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Nylon Biopsy Bags</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>6774010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoGel Specimen Processing Gel</td>
			<td>VWR</td>
			<td>83009-992</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin solution Premium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95057-844</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y (yellowish) solution Premium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95057-848</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBS Buffer, 20X, pH 7.4</td>
			<td>GenDEPORT</td>
			<td>T8054</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBST (10X), pH 7.4</td>
			<td>GenDEPORT</td>
			<td>T8056</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0759-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate tribasic dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S4641-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween20</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP337-500&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A2153-100G</td>
			<td>3%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Solution (1 mg/mL)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>62248</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD Antifade Mounting Medium</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear Nail Polish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1849418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Superfrost Plus Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22037246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Micro Cover Glasses</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48393-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperScript VILO Master Mix</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11755050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYBR Green PCR Master Mix</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>4364346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Krt8 Antibody (TROMA-I)&#160;</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>TROMA-I&#160;</td>
			<td>1:50 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimentin Antobody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>5741S</td>
			<td>1:200 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rat IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary 
			Antibody, Alexa Fluor 594</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A-21209</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rabbin IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary 
			Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A-21206</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS Stemi 508 Stereo Microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS Axio Vert.A1 Inverted Routine Microscope with digital camera</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer Sequence</td>
			<td>Forward (5&#39;-3&#39;)</td>
			<td>Reverse (5&#39;-3&#39;)</td>
			<td>_</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipocalin 2 (Lcn2)</td>
			<td>GCAGGTGGTACGTTGTGGG</td>
			<td>CTCTTGTAGCTCATAGATGGTGC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactoferrin (Ltf)</td>
			<td>TGAGGCCCTTGGACTCTGT</td>
			<td>ACCCACTTTTCTCATCTCGTTC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone (Pgr)</td>
			<td>CCCACAGGAGTTTGTCAAGCTC</td>
			<td>TAACTTCAGACATCATTTCCGG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glyceraldehyde 3 phosphate dehydrogenase (Gapdh)</td>
			<td>CAATGTGTCCGTCGTGGATCT</td>
			<td>GCCTGCTTCACCACCTTCTT</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing 3d endometrial organoids from the mouse uterus

Endometrievæv linjer livmoderens indre hulrum og er under cyklisk kontrol af østrogen og progesteron. Det er et væv, der består af luminalt og kirtelepitel, et stromalt rum, et vaskulært netværk og en kompleks immuncellepopulation. Musemodeller har været et kraftfuldt værktøj til at studere endometrium og afsløre kritiske mekanismer, der styrer implantation, placentation og kræft. Den seneste udvikling af 3D endometrieorganoidkulturer præsenterer en state-of-the-art model til at dissekere de signalveje, der ligger til grund for endometriebiologi. Etablering af endometrieorganoider fra genetisk manipulerede musemodeller, analyse af deres transkriptomer og visualisering af deres morfologi ved en enkeltcelleopløsning er afgørende værktøjer til undersøgelse af endometriesygdomme. Dette papir skitserer metoder til at etablere 3D-kulturer af endometrieepitel fra mus og beskriver teknikker til kvantificering af genekspression og analyse af organoidernes histologi. Målet er at tilvejebringe en ressource, der kan bruges til at etablere, dyrke og studere genekspression og morfologiske egenskaber ved endometrieepitelorganoider.

Fasekontrastbilleder af museendometrieorganoider Vi etablerede organoider fra WT-museendometrieepitel, som beskrevet i vedlagte protokol (se diagram i figur 1). Efter enzymatisk dissociation af museendometriepitelet blev epitelarkene mekanisk adskilt fra livmoderstromale celler og yderligere dissocieret med kollagenase for at generere en enkeltcellesuspension. Hvis denne metode til epitel- og stromalcelleseparation udføres korrekt, bør den give prøver med en kontaminer...

Watch this Scientific Journal Video about Establishing 3D Endometrial Organoids from the Mouse Uterus at JoVE.com

Establishing 3D Endometrial Organoids from the Mouse Uterus

Denne protokol beskriver metoder til etablering af museendometrieepitelorganoider til genekspression og histologiske analyser.

Etablering af 3D endometrieorganoider fra musens livmoder

Endometrial tissue lines the inner cavity of the uterus and is under the cyclical control of estrogen and progesterone. It is a tissue that is composed of ...

Denne protokol er signifikant, da den viser en trinvis metode til isolering af meget rent livmoderepitel fra muselivmoderen til dyrkning af endometrieorganoider. Denne metode udnytter effektivt enzymatisk og mekanisk dissociation til at isolere livmoderepitel. Teknikkerne blev strømlinet til at etablere, behandle og analysere endometrieepitelorganoider afledt af det isolerede epitel.Begynd med at optø gelmatrixen på is i cirka en til to timer før brug. Derefter dissekeres den aflivede mus ved at lave et midterlinjesnit på maven ved hjælp af en saks og forsigtigt skrælle huden tilbage for at udsætte det underliggende peritoneale lag. Find livmoderhornene ved forsigtigt at flytte mavefedtpuderne til side og hold livmoderhornene ved livmoderhalskrydset, før du skærer dem langs mesenterialfedtet.Efter dissektion af musens livmoder skal du grundigt fjerne fedtvæv fra livmoderhornet med en lille saks. Når du er færdig, skal du skære hvert livmoderhorn i små fragmenter, der hver måler cirka fire til fem millimeter. Placer alle livmoderfragmenterne fra en livmoder i en brønd i en 24 brøndplade indeholdende 0,5 ml 1% trypsin.Derefter inkuberes 24 brøndpladen i en 37 grader Celsius befugtet vævskulturinkubator i ca. en time for enzymatisk adskillelse af endometrieepitelet fra det underliggende stroma. Efter inkubationen overføres livmoderfragmenterne til en 35 millimeter vævskulturplade indeholdende en milliliter Dulbeccos fosfatbufferopløsning eller DPBS. Derefter adskilles livmoderepitelet fra livmoderrøret under et dissektionsmikroskop ved at holde den ene ende af et livmoderfragment med tangen og forsigtigt køre pipettespidsen i længderetningen over fragmentet og klemme epitelet ud af den anden ende af livmoderrøret.Derefter observeres de adskilte epitelark fra livmoderfragmentet under dissektionsmikroskopet. Overfør derefter forsigtigt alle epitelpladerne til det samme 1,5 ml rør ved hjælp af en milliliter pipette. Og pellet de dissocierede epitelplader ved centrifugering ved 375 x g i fem minutter.Supernatanten fjernes forsigtigt uden at forstyrre cellepelleten, og cellepelletsen resuspenderes i 0,5 ml 2,5 milligram pr. milliliter kollagenase plus to milligram pr. ml DNA-opløsning. Pipette pipetteres op og ned ca. 10 gange, eller indtil der opnås en enkelt cellesuspension. Derefter tilsættes 0,5 ml DMEM F / 12 plus 10% føtalt bovint serum eller FBS plus antibiotika og centrifugeres cellerne i fem minutter ved 375 x g.Supernatanten fjernes, cellerne resuspenderes i en milliliter DMEM/F12 plus 10% FBS plus antibiotika, og cellerne centrifugeres. Placer gelmatrixen på is, indtil den er klar. Derefter fjernes supernatanten fra centrifugecellerne, og cellepelletsen resuspenderes med 20 gange gelmatrixens volumen uden at indføre boblerne.Lad gelmatrixcellesuspensionen bundfælde sig ved stuetemperatur i ca. 10 minutter. Når gelmatrixcellesuspensionen bliver en halvfast gel, skal du bruge en P200-mikropipette med en bred boring på 200 mikroliter spids og forsigtigt aspirere 25 mikroliter af gelmatrixcellesuspensionen. Dispenser tre separate 25 mikroliter kupler pr. Brønd i en 12 brøndplade og lad gelmatrixen hærde i 15 minutter og en 37 grader Celsius befugtet vævskulturinkubator.Efter at gelmatrixen er hærdet, tilsættes 750 mikroliter organoidmedium til hver brønd, der indeholder gelmatrixkuppel, og inkubator ved 37 grader Celsius i en befugtet vævskulturinkubator. Fasekontrastbilleder af museendometrieorganoider viste, at epitel- og stromalcelleseparation gav prøver med højst 10% til 15% kontaminering af den modsatte celletype. Endometrieepitelcellerne blev samlet i organoider inden for tre til fire dage.De sektionerede formalinfaste paraffinindlejrede endometrieorganoider blev visualiseret af hæmatoxylin- og eosinpletter, som viste det enkelte lag af epitel og hule centre, organoidernes lumen. Fluorescensmikroskopbilleddannelsen viste, at alle cellerne i organoiderne var cytokeratin 8-positive og indeholdt DAPI, hvilket indikerer, at fiksering, indlejring og behandling af endometrieorganoiderne er kompatibel med antistofbaseret immunfarvning. Den kvantitative PCR i realtid viste, at stimuleringen med 10 nanomolær østradiol øgede ekspressionen af lipocalin 2, lactoferrin og progesteronreceptor i epitelorganoiderne, hvilket indikerer, at endometrieepitelorganoider med succes kan anvendes til at måle genekspressionsændringerne som reaktion på østradiol.Det er vigtigt at sikre, at klar adskillelse af endometriepitelet opnås under det mekaniske dissociationstrin. Man skal være i stand til at observere epitel, der kommer ud af livmoderrøret. Andre metoder indbefatter etablering af epitelorganoiderne ved indkapsling i en gelmatrix.Hvis det ønskes, kan stromalrummet fordøjes yderligere for at skabe 3D epitelial stromale co-kulturer. Metoden kan hjælpe med at besvare spørgsmål om de signaler, der styrer fornyelsen af endometrium. Det kan hjælpe med at behandle sygdom hos kvinder, såsom endometriose, graviditetstab og kræft.

Research

JoVE Journal

Biology

Intravitreous Injection for Establishing Ocular Diseases Model

Intravitreous injection is a widely used technique in visual sciences research. It can be used to establish animal models with ocular diseases or as ...

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generering af mus afledt fra induceret pluripotente stamceller

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

RNA Isolation from Mouse Pancreas: A Ribonuclease-rich Tissue

RNA Isolation fra Mouse Pancreas: en ribonuklease-rige væv

Isolation of high-quality RNA from ribonuclease-rich tissue such as mouse pancreas presents a challenge.  As a primary function of the pancreas is to aid ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

Trans-indre celle masse injektion af stamceller fra embryoner fører til højere kimærisme

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

Ex Vivo Method for Assessing the Mouse Reproductive Tract Spontaneous Motility and a MATLAB-based Uterus Motion Tracking Algorithm for Data Analysis

Ex vivo metode til vurdering af musens reproduktive kanal spontan motilitet og en MATLAB-baseret uterus motion tracking algoritme til data analyse

Dysmenorrhea, or painful cramping, is the most common symptom associated with menses in females and its severity can hinder women&#39;s everyday lives. ...

3D Culturing of Organoids from the Intestinal Villi Epithelium Undergoing Dedifferentiation

3D Dyrkning af organoider fra Intestinal Villi Epithelium under dedifferentiation

Clonogenicity of organoids from the intestinal epithelium is attributed to the presence of stem cells therein. The mouse small intestinal epithelium is ...

Establishing Stable Binary Cultures of Symbiotic Saccharibacteria from the Oral Cavity

Etablering af stabile binære kulturer symbiotiske saccharibakterier fra mundhulen

Many bacterial species cannot be cultured in the laboratory using standard methods, posing a significant barrier to studying the majority of microbial ...

Multiplexed Fluorescent Immunohistochemical Staining of Four Endometrial Immune Cell Types in Recurrent Miscarriage

Multiplexed fluorescerende immunohistokemisk farvning af fire endometrie immuncelletyper i tilbagevendende abort

Immunohistochemistry is the most commonly used method for the identification and visualization of tissue antigens in biological research and clinical ...

Establishing Human Lung Organoids and Proximal Differentiation to Generate Mature Airway Organoids

Etablering af humane lungeorganoider og proksimal differentiering for at generere modne luftvejsorganoider

The lack of a robust in vitro model of the human respiratory epithelium hinders the understanding of the biology and pathology of the respiratory system. ...