Name: establishing 3d endometrial organoids from the mouse uterus
Uploaded: 2023-01-06T13:10:00
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스테파니 팡가스 박사와 마틴 M. 마추크 박사(M.M.M.)에게 우리 원고를 비판적으로 읽고 편집해 주신 데 대해 감사드립니다. 연구는 유니스 케네디 슈라이버 국립 아동 건강 및 인간 발달 연구소 보조금 R00-HD096057 (DM), R01-HD105800 (DM), R01-HD032067 (M.M.M.) 및 R01-HD110038 (M.M.M.) 및 NCI-P30 암 센터 지원 보조금 (NCI-CA125123). Diana Monsivais, Ph.D. Burroughs Wellcome Fund에서 차세대 임신 상을 수상했습니다.

마우스 취급 및 실험 연구는 Baylor College of Medicine의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에서 승인 한 프로토콜과 실험실 동물의 관리 및 사용을위한 NIH 가이드에서 수립 한 지침에 따라 수행되었습니다.
1. 효소 및 기계적 방법을 사용한 마우스에서 자궁 상피 분리
참고: 이 섹션에서는 겔 매트릭스 스캐폴드를 사용하여 마우스로부터 상피 자궁...

여기에서는 마우스 자궁내막에서 자궁내막 상피 오가노이드를 생성하는 방법과 다운스트림 분석에 일상적으로 사용되는 프로토콜에 대해 설명합니다. 자궁내막 오가노이드는 자궁내막증, 자궁내막암 및 착상 실패와 같은 자궁내막 관련 질병을 제어하는 메커니즘을 연구하는 강력한 도구입니다. 2017년에 발표된 획기적인 연구에서는 마우스와 인간 상피 4,5<sup class="xref"...

자궁강의 내부 안감 점막 조직인 자궁내막은 여성의 생식 건강에 중요한 역할을 하는 독특하고 매우 역동적인 조직입니다. 생식 수명 동안 자궁 내막은 난소 호르몬 인 에스트로겐과 프로게스테론의 공동 작용에 의해 조정 된 수백 번의 증식, 분화 및 분해주기를 겪을 가능성이 있습니다. 유전자 조작 마우스에 대한 연구는 호르몬에 대한 자궁 내막 반응과 배아 이식, 기질 세포 탈락 및 임신 조절을 뒷받침하는 기본적인 생물학적 메커니즘을 밝혀 냈습니다1. 그러나 시험관 내 연구는 전통적인 2D 세포 배양 2,3에서 형질전환되지 않은 일차 마우스 자궁내막 조직을 유지하는 데 어려움이 있기 때문에 제한적이었습니다. 최근 3D 장기 시스템 또는 오가노이드와 같은 자궁내막 조직 배양의 발전은 자궁내막 세포 재생 및 분화를 제어하는 생물학적 경로를 조사할 수 있는 새로운 기회를 제공합니다. 마우스 및 인간 자궁내막 오가노이드 시스템은 다양한 매트릭스4,5에 캡슐화된 순수한 자궁내막 상피로부터 개발되었으며, 인간 자궁내막은 스캐폴드가 없는 상피/기질 공동 배양6,7로, 보다 최근에는 콜라겐 캡슐화된 상피/기질 집합체8로 배양되었습니다. . 상피 오가노이드 배양의 성장 및 재생 잠재력은 오가노이드 4,5,9의 성장 및 재생을 최대화하기 위해 경험적으로 결정된 성장 인자 및 소분자 억제제의 정의된 칵테일에 의해 뒷받침됩니다. 또한, 자궁내막 오가노이드를 동결 및 해동하는 능력은 향후 연구를 위해 생쥐와 인간의 자궁내막 오가노이드의 장기 뱅킹을 허용합니다.
유전자 조작 마우스는 임신 초기와 탈락을 제어하는 복잡한 신호 전달 경로를 밝혀 냈으며 임신 손실, 자궁 내막 암 및 자궁 내막증의 모델로 사용되었습니다. 이러한 유전 연구는 여성 생식 조직에서 특이적으로 활성인 cre 재조합 효소를 사용하여 loxP 측면 대립 유전자 ( "플록스")의 세포 특이 적 결실로 크게 달성되었습니다. 이러한 마우스 모델에는 자궁 내막 상피 및 기질 조직에서 강력한 재조합 효소 활성을 갖는 널리 사용되는 프로게스테론 수용체 -cre10, 성인 마우스에서 자궁 내막 상피 재조합을 유도하는 락토페린 i-cre11 또는 뮐러 유래 조직에서 상피 특이 적 결실을 유발하는 Wnt7a-cre 12가 포함됩니다. . 유전자 조작 마우스 모델에서 자궁내막 조직을 3D 오가노이드로 배양하는 것은 자궁내막 생물학을 조사하고 자궁내막 세포 재생 및 분화를 제어하는 성장 인자 및 신호 전달 경로의 식별을 용이하게 할 수 있는 훌륭한 기회를 제공했습니다13,14. 마우스 자궁 내막 조직의 분리 및 배양 방법은 문헌에 기재되어 있으며 자궁 내막 상피 유기체의 후속 배양을위한 자궁 상피의 분리를위한 다양한 효소 전략의 사용을보고한다4. 이전 문헌이 자궁내막 상 피 오가노이드 배양 프로토콜 4,5,6에 대한 중요한 프레임워크를 제공했지만, 이 백서는 이러한 오가노이드를 생성, 유지, 처리 및 분석하기 위한 명확하고 포괄적인 방법을 제공합니다. 이러한 기술의 표준화는 여성 생식 생물학 분야의 발전을 가속화하는 데 중요합니다. 여기에서, 우리는 겔 매트릭스 스캐폴드에서 자궁내막 오가노이드의 후속 배양을 위한 마우스 자궁내막 상피 조직의 효소적 및 기계적 정제를 위한 상세한 방법론을 보고한다. 또한 겔 매트릭스 캡슐화 마우스 자궁내막 상피 오가노이드의 다운스트림 조직학적 및 분자 분석을 위한 방법론을 설명합니다.

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	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="4">Organoid Media Formulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Final concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix, *LDEV-free</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354230</td>
			<td>100%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin from Bovine Pancreas</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T1426-1G</td>
			<td>1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM/F12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12634010</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 supplement</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17502048</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27&#8482; Supplement (50X), minus vitamin A</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12587010</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primocin</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>ant-pm-1</td>
			<td>100 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Acetyl-L-cysteine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A9165-5G</td>
			<td>1.25 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25030024</td>
			<td>2 mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>N0636-100G</td>
			<td>10 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALK-4, -5, -7 inhibitor, A83-01</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>2939</td>
			<td>500 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human EGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-15</td>
			<td>50 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human Noggin</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-10C</td>
			<td>100 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human Rspondin-1</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>120-38</td>
			<td>500 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human FGF-10</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-26</td>
			<td>100 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human HGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>100-39</td>
			<td>50 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WNT3a</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>5036-WN</td>
			<td>200 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Other supplies and reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Final concentration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase from Clostridium histolyticum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0130-1G</td>
			<td>5 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>DN25-100MG</td>
			<td>2 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14190-250</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>14170112</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Polystyrene Microplates (24-Well)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>#08-772-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#160;Polystyrene Microplates (12-Well)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>#0877229</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon Cell Strainers, 40 &#181;m</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>#08-771-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Direct-zol RNA MiniPrep (50 &#181;g)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>11-331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizol reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15596026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12, HEPES, no phenol red</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11039021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, Charcoal stripped</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F6765-500ML</td>
			<td>2%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Estratiol (E2)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E1024-1G</td>
			<td>10 nM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formaldehyde 16% in aqueous solution, EM Grade</td>
			<td>VWR</td>
			<td>15710</td>
			<td>4%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Cassette 1 Slotted Tissue Cassettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>1000961</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Stainless-Steel Embedding Base Molds</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>64-010-15&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, 200 proof (100%)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-032-601&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoclear</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-899-90147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permount Mounting Medium</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-277-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epredia Nylon Biopsy Bags</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>6774010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoGel Specimen Processing Gel</td>
			<td>VWR</td>
			<td>83009-992</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin solution Premium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95057-844</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y (yellowish) solution Premium</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95057-848</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBS Buffer, 20X, pH 7.4</td>
			<td>GenDEPORT</td>
			<td>T8054</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TBST (10X), pH 7.4</td>
			<td>GenDEPORT</td>
			<td>T8056</td>
			<td>1X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid&#160;</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C0759-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate tribasic dihydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S4641-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween20</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP337-500&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A2153-100G</td>
			<td>3%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Solution (1 mg/mL)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>62248</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VECTASHIELD Antifade Mounting Medium</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>H-1000-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear Nail Polish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1849418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Superfrost Plus Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22037246</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Micro Cover Glasses</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48393-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperScript VILO Master Mix</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11755050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYBR Green PCR Master Mix</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>4364346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Krt8 Antibody (TROMA-I)&#160;</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>TROMA-I&#160;</td>
			<td>1:50 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimentin Antobody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>5741S</td>
			<td>1:200 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rat IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary 
			Antibody, Alexa Fluor 594</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A-21209</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Rabbin IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary 
			Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A-21206</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS Stemi 508 Stereo Microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEISS Axio Vert.A1 Inverted Routine Microscope with digital camera</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer Sequence</td>
			<td>Forward (5&#39;-3&#39;)</td>
			<td>Reverse (5&#39;-3&#39;)</td>
			<td>_</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipocalin 2 (Lcn2)</td>
			<td>GCAGGTGGTACGTTGTGGG</td>
			<td>CTCTTGTAGCTCATAGATGGTGC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lactoferrin (Ltf)</td>
			<td>TGAGGCCCTTGGACTCTGT</td>
			<td>ACCCACTTTTCTCATCTCGTTC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Progesterone (Pgr)</td>
			<td>CCCACAGGAGTTTGTCAAGCTC</td>
			<td>TAACTTCAGACATCATTTCCGG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glyceraldehyde 3 phosphate dehydrogenase (Gapdh)</td>
			<td>CAATGTGTCCGTCGTGGATCT</td>
			<td>GCCTGCTTCACCACCTTCTT</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing 3d endometrial organoids from the mouse uterus

자궁 내막 조직은 자궁의 내강을 따라 늘어서 있으며 에스트로겐과 프로게스테론의 주기적 통제하에 있습니다. 그것은 내강 및 선 상피, 간질 구획, 혈관 네트워크 및 복잡한 면역 세포 집단으로 구성된 조직입니다. 마우스 모델은 자궁 내막을 연구하는 강력한 도구였으며 이식, 태반 및 암을 제어하는 중요한 메커니즘을 밝혀 냈습니다. 최근 3D 자궁내막 오가노이드 배양의 개발은 자궁내막 생물학의 기초가 되는 신호 전달 경로를 해부하는 최첨단 모델을 제시합니다. 유전자 조작 마우스 모델에서 자궁내막 오가노이드를 확립하고, 전사체를 분석하고, 단일 세포 분해능으로 형태를 시각화하는 것은 자궁내막 질환 연구에 중요한 도구입니다. 이 논문은 마우스에서 자궁 내막 상피의 3D 배양을 확립하는 방법을 설명하고 유전자 발현을 정량화하고 오가노이드의 조직학을 분석하는 기술을 설명합니다. 목표는 자궁내막 상피 오가노이드의 유전자 발현 및 형태학적 특성을 확립, 배양 및 연구하는 데 사용할 수 있는 리소스를 제공하는 것입니다.

마우스 자궁내막 오가노이드의 위상차 이미지 첨부된 프로토콜에 설명된 대로 WT 마우스 자궁내막 상피에서 오가노이드를 확립했습니다( 그림 1의 다이어그램 참조). 마우스 자궁 내막 상피의 효소 해리에 이어, 상피 시트를 자궁 기질 세포로부터 기계적으로 분리하고 콜라게나제로 더 해리시켜 단일 세포 현탁액을 생성시켰다. 올바르게 수행되면 이 상피 및 ...

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Establishing 3D Endometrial Organoids from the Mouse Uterus

이 프로토콜은 유전자 발현 및 조직학적 분석을 위한 마우스 자궁내막 상피 오가노이드를 확립하는 방법론을 설명합니다.

마우스 자궁에서 3D 자궁 내막 오가노이드 확립

Endometrial tissue lines the inner cavity of the uterus and is under the cyclical control of estrogen and progesterone. It is a tissue that is composed of ...

이 프로토콜은 자궁 내막 오가노이드 배양을 위해 마우스 자궁에서 고순도 자궁 상피를 분리하는 단계별 방법론을 보여주기 때문에 중요합니다. 이 방법은 효소 및 기계적 해리를 효율적으로 활용하여 자궁 상피를 분리합니다. 이 기술은 분리된 상피에서 파생된 자궁내막 상피 오가노이드를 확립, 치료 및 분석하기 위해 간소화되었습니다.사용하기 전에 약 1-2 시간 동안 얼음에서 젤 매트릭스를 해동하여 시작하십시오. 그런 다음 안락사 된 마우스를 가위로 복부에 정중선 절개를하고 피부를 부드럽게 벗겨 밑에있는 복막층을 노출시켜 해부합니다. 복부 지방 패드를 부드럽게 옆으로 움직여 자궁 뿔을 찾고 자궁 경부 접합부에서 자궁 뿔을 잡고 장간막 지방을 따라 절단하십시오.마우스 자궁을 해부 한 후 작은 가위로 자궁 뿔에서 지방 조직을 철저히 제거하십시오. 완료되면 각 자궁 뿔을 각각 약 4-5mm 크기의 작은 조각으로 자릅니다. 한 자궁의 모든 자궁 조각을 0.5 밀리리터의 1 % 트립신이 들어있는 24 웰 플레이트의 한 우물에 넣습니다.그런 다음 24웰 플레이트를 섭씨 37도의 가습 조직 배양 인큐베이터에서 약 1시간 동안 배양하여 밑에 있는 기질에서 자궁내막 상피를 효소적으로 분리합니다. 배양 후, 자궁 단편을 Dulbecco의 인산염 완충 용액 또는 DPBS 1 밀리리터를 함유하는 35 밀리미터 조직 배양 플레이트로 옮깁니다. 다음으로, 자궁 단편의 한쪽 끝을 집게로 잡고 피펫 끝을 단편을 가로질러 세로로 부드럽게 움직여 자궁관의 다른 쪽 끝에서 상피를 짜내어 해부 현미경으로 자궁 상피를 분리합니다.그런 다음 해부 현미경으로 자궁 조각에서 분리 된 상피 시트를 관찰하십시오. 다음으로, 1 밀리리터 피펫을 사용하여 모든 상피 시트를 동일한 1.5 밀리리터 튜브로 부드럽게 옮깁니다. 해리된 상피 시트를 375 x g에서 5분 동안 원심분리하여 펠렛화한다.세포 펠릿을 방해하지 않고 상청액을 조심스럽게 제거하고 세포 펠릿을 밀리리터 콜라게나제 0.5밀리리터에 DNA 용액 밀리리터당 2밀리그램을 더한 2밀리리터에 재현탁시킵니다. 약 10회 위아래로 또는 단일 세포 현탁액이 달성될 때까지 피펫팅합니다. 다음으로 DMEM F/12 0.5ml와 소 태아 혈청 10% 또는 FBS와 항생제를 넣고 375 x g에서 5분 동안 세포를 원심분리합니다.상청액을 제거하고 1 밀리리터 DMEM / F12와 10 % FBS와 항생제에 세포를 재현 탁시키고 세포를 원심 분리합니다. 준비가 될 때까지 젤 매트릭스를 얼음 위에 놓습니다. 다음으로, 원심분리기로부터 상층액을 세포로부터 제거하고, 기포를 도입하지 않고 겔 매트릭스의 20배 부피를 사용하여 세포 펠렛을 재현탁시킨다.겔 매트릭스 세포 현탁액을 실온에서 약 10분 동안 침전시킵니다. 겔 매트릭스 셀 현탁액이 반고체 겔이 되면 넓은 구멍의 200마이크로리터 팁이 있는 P200 마이크로피펫을 사용하고 25마이크로리터의 겔 매트릭스 세포 현탁액을 부드럽게 흡입합니다. 12웰 플레이트의 웰당 3개의 개별 25마이크로리터 돔을 분주하고 겔 매트릭스가 15분 동안 경화되도록 하고 섭씨 37도의 가습 조직 배양 인큐베이터를 사용합니다.겔 매트릭스가 경화된 후, 겔 매트릭스 돔을 포함하는 각 웰에 750마이크로리터의 오가노이드 배지를 첨가하고, 가습된 조직 배양 인큐베이터에서 섭씨 37도의 인큐베이터를 첨가한다. 마우스 자궁내막 오가노이드의 위상차 이미지는 상피 및 기질 세포 분리가 반대 세포 유형의 10%에서 15% 이하의 오염을 가진 샘플을 산출한다는 것을 보여주었습니다. 자궁내막 상피 세포는 3 내지 4일 이내에 오가노이드로 조립되었다.절편된 포르말린 고정 파라핀 포매 자궁내막 오가노이드는 헤마톡실린 및 에오신 염색에 의해 시각화되었으며, 이는 오가노이드의 내강인 상피 및 중공 중심의 단일 층을 표시했습니다. 형광 현미경 이미징은 오가노이드의 모든 세포가 사이토케라틴 8 양성이고 DAPI를 함유하고 있음을 보여주었으며, 이는 자궁내막 오가노이드의 고정, 삽입 및 처리가 항체 기반 면역염색과 호환됨을 나타냅니다. 실시간 정량 PCR은 10 나노 몰 에스트라 디올로 자극하면 상피 오가노이드에서 리포칼린 2, 락토페린 및 프로게스테론 수용체의 발현이 증가한다는 것을 보여 주었으며, 이는 자궁 내막 상피 오가노이드가 에스트라 디올에 반응하는 유전자 발현 변화를 측정하는 데 성공적으로 사용될 수 있음을 나타냅니다.기계적 해리 단계에서 자궁내막 상피의 명확한 분리가 이루어지도록 하는 것이 중요합니다. 자궁관에서 나오는 상피를 관찰 할 수 있어야합니다. 다른 방법은 겔 매트릭스로 캡슐화함으로써 상피 오가노이드를 확립하는 것을 포함한다.원하는 경우, 기질 구획을 추가로 분해하여 3D 상피 기질 공동 배양을 생성할 수 있습니다. 이 방법은 자궁 내막의 재생을 제어하는 신호에 대한 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 자궁 내막증, 임신 손실 및 암과 같은 여성의 질병을 치료하는 데 도움이 될 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Biology

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연구

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